一种用于降低烟草萃取液中nat和nab含量的试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及烟草资源再利用技术领域，特别是设及一种用于降低烟草萃取液中 NAT和NAB含量的试剂盒。
【背景技术】
[0002] 烟叶和烟梗除了用作卷烟的主要原料，还有许多其它的用途。可将过剩的或残次 的烟叶烟梗进行资源再利用，经水溶液浸泡处理，可用于再造烟叶生产，如经过提取分离， 可得到烟草中有效成分的单体或混合物，用于卷烟加香、生产电子烟烟油、W及用作化工中 间体及食品添加剂。然而，烟草萃取液中含有多种难W清除的烟草有害成分，在利用烟草萃 取液的过程中，运些难W清除的有害成分容易造成环境污染并会一起进入卷烟，危害人体 健康。 阳00引 烟草中普遍含有NAT(N-亚硝基新烟草碱，CASNo. 71267-22-6)和NAB(N-亚硝基 假木贼碱，CASNo. 1133-64-8)，国际癌症研究所将NAT和NAB定义为3类致癌物，它在人体 中代谢速度慢，半衰期长，对人体健康危害性极大。NAT和NAB主要生成于烟草的调制阶段， NAT和NAB-旦生成，便能稳定地存在于烟草中。NAT和NAB易溶于水，在烟草萃取液中普 遍存化给烟草资源的再利用带来不便。NAT和NAB分子结构简单，化学活泼性低，导致降低 运种化合物比较困难。
[0004] 目前，存在可降低烟草中的NAT和NAB的方法，但运些手段在降低NAT和NAB的同 时，也降低了烟草中其它有益成分。酶是一种具有生物催化功能的高分子物质，它具有高度 的专一性，只催化特定的反应或产生特定的构型，对其它物质无催化作用。但是，目前尚未 有降低烟草萃取液中有害成分NAT和NAB的生物酶。
【发明内容】
阳0化]鉴于W上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种用于降低烟草萃取液 中NAT和NAB含量的试剂盒，用于解决现有技术中的问题。
[0006] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种用于降低烟草萃取液 中NAT和NAB含量的试剂盒，包括CYP2B6酶、NADPNaz、氯化儀和缓冲体系。
[0007] 具体的，CYP2B6酶（切toe虹omeP4502B6，NP_000758)为细胞色素P450重要成员 之一。
[0008] 优选的，所述CYP2B6酶为含有活性成分CYP2B6酶的试剂，其中，CYP2B6酶的浓度 范围为0. 5-5皿〇1/1，更优选为0. 8-1. 2nmol/L。
[0009] 更优选的，所述CYP2B6酶为人同源的重组蛋白酶，通过酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)的细胞色素还原酶表达体系制备获得，通过酿酒酵母的细胞色素还原酶共表 达体系制备获得。
[0010] 具体的，NADPNaz为烟酷胺腺嚷岭二核巧憐酸二钢，所述NADP化2是NADPH的氧化 形式，即NADPH失去了个电子而带上一个正电荷形成钢盐，所述NADPH为烟酷胺腺嚷岭二核 巧憐酸，它是光合作用中重要的一种辅酶。
[0011] 优选的，所述试剂盒使用时，CYP2B6酶、NADPNaz、氯化儀添加量的重量比为1 : 100-200 ：60-120〇
[0012] 更优选的，所述试剂盒使用时，将CYP2B6酶产品、NADPNaz、氯化儀和缓冲体系添加 于烟草萃取液中，添加量（CYP2B6酶、NADP化2、氯化儀和缓冲体系添加量的总和）为烟草 萃取液重量的1-2%，更优选为1. 3-1. 4%，添加时烟草萃取液中NAT和NAB的浓度分别为 1-10ymol/L和 1-10ymol/L。
[0013] 优选的，所述缓冲体系用于降低抑的变动幅度，并使烟草缓冲液的抑值在 4. 4-7. 6的范围内。
[0014] 更优选的，所述缓冲体系为巧樣酸盐，在本发明一优选实施例中，所述缓冲体系为 巧樣酸立钢。
[0015] 进一步优选的，所述试剂盒使用时，CYP2B6酶、NADPNaz、氯化儀和巧樣酸盐的重量 比为 1 :100-200 :60-120 :1200-2400。
[0016] 本发明所提供的用于降低烟草萃取液中NAT和NAB含量的试剂盒提供了一种 CYP2B6酶体系，所述试剂盒使用时可直接添加于烟草萃取液中。
[0017] 所述试剂盒中，CYP2B6酶（CYP2B6酶产品）、NADPNa2、氯化儀和缓冲体系的制备方 法均为现有技术。
[0018] 本发明第二方面提供CYP2B6酶在降低烟草萃取液中NAT和NAB含量的用途。
[0019] 优选的，所述CYP2B6酶为CYP2B6酶体系，所述用途具体为，通过在烟草萃取液中 添加CYP2B6酶体系，W降低烟草萃取液中NAT和NAB含量。
[0020] 更优选的，所述酶体系为所述用于降低烟草萃取液中NAT和NAB含量的试剂盒。
[0021] 本发明第S发面提供一种降低烟草萃取液中NAT和NAB的方法，使用所述试剂盒， 包括如下步骤：将CYP2B6酶、NADPNaz、氯化儀和缓冲体系加入烟草萃取液中，揽拌均匀，进 行反应。
[0022] 本领域技术人员可根据烟草萃取液的实际情况，调整烟草萃取液的浓度，W保证 反应在适当的浓度下进行。 阳02引优选的，添加CYP2B6酶、NADPNaz、氯化儀和缓冲体系时，烟草萃取液中NAT和NAB的浓度分别为1-10ymol/L和1-10ymol/L。
[0024] 优选的，所述CYP2B6酶、NADPNaz、氯化儀和缓冲体系添加量的总和相对于烟草 萃取液的重量为1-2%，优选为1.3-1. 4%，所述试剂盒加入烟草萃取液时，CYP2B6酶、 NADPNaz、氯化儀和缓冲体系的重量比为1 :100-200 :60-120 :1200-2400。
[0025] 本领域技术人员可根据烟草萃取液的实际情况，调整缓冲体系的用量，使烟草缓 冲液的抑值在4. 4-7. 6的范围内。
[0026] 优选的，所述用于降低烟草萃取液中NAT和NAB的试剂盒施加于烟草萃取液中的 反应时间>lOh。
[0027] 更优选的，所述用于降低烟草萃取液中NAT和NAB的试剂盒施加于烟草萃取液中 的反应时间为1〇-2地。
[0028] 优选的，所述烟草萃取液的溫度《40°C。烟草萃取液的溫度过高，会降低酶的活 力。
[0029] 更优选的，所述烟草萃取液的溫度为35-39°C，在此范围内，反应效率更高。
[0030] 如上所述，针对现有烟草资源再利用过程中有害成分难W清除等问题，本发明提 供一种用于降低烟草萃取液中NAT和NAB的试剂盒（组合物），所述试剂盒中各组分添加于 烟草萃取液中，可同时降低NAT和NAB含量，经过酶处理过的烟草萃取液，NAT和NAB得到 相应的下降。本发明所提供的用于降低烟草萃取液中NAT和NAB的试剂盒对烟草萃取液其 它成分无影响，且无毒无害，是一种环境友好型烟草减害剂。与现有技术相比，其具有W下 有益效果：
[0031] (1)本发明提供的CYP2B6酶体系具有专一选择性，仅针对NAT和NAB，对其它烟草 成分无影响。
[0032] (2)本发明提供的CYP2B6酶体系为水溶性物质，可广泛适用于烟草生产中。
[003引 做本发明提供的CYP2B6酶体系为安全试剂，是一种环境友好型烟草减害剂，对 人体和环境均无不良影响。
[0034] (4)本发明提供的CYP2B6酶体系生产成本低廉，易于生产与应用。
【具体实施方式】
[0035]W下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书 所掲露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可W通过另外不同的具体实 施方式加W实施或应用，本说明书中的各项细节也可W基于不同观点与应用，在没有背离 本发明的精神下进行各种修饰或改变。
[0036] 须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或 装置。
[0037] 此外应理解，本发明中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后 还可W存在其他方法步骤或在运些明确提到的步骤之间还可W插入其他方法步骤，除非另 有说明；还应理解，本发明中提到的一个或多个设备/装置之间的组合连接关系并不排斥 在所述组合设备/装置前后还可W存在其他设备/装置或在运些明确提到的两个设备/装 置之间还可W插入其他设备/装置，除非另有说明。而且，除非另有说明，各方法步骤的编 号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实 施的范围，其相对关系的改变或调