专利名称：牛、羊、猪口蹄疫多毒株通用灭活疫苗的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种牛、羊、猪口蹄疫多毒株通用灭活疫苗。
口蹄疫是偶蹄动物牛、羊、猪等多种家畜烈性传染病。因为其流行往往给畜牧业和国民经济带来重大损失，称为“政治经济病”，被国际兽疫局列为A类传染病第一号。各国政府都十分重视本病的防治工作。
注射疫苗是防治本病的重要手段之一。我国现行口蹄疫灭活疫苗，分牛、羊用和猪用两类。分别用单一毒株制苗，其抗原的代表性不足，且抗原量少，免疫效力较低。且通用性较差，对牛、羊、猪共发的口蹄疫病的预防性较差。
本发明的目的是为了提供一种利用牛、羊、猪多个毒株混合制苗，提高了抗原含量，混合制苗的抗原性好、免疫效力高，可适于牛、羊、猪通用的多毒株灭活疫苗。
本发明的目的可通过如下措施来实现一种牛、羊、猪口蹄疫多毒株通用灭活疫苗是由至少三种口蹄疫病毒的O型毒株经常规疫苗配制工艺配制而制成，它由下述重量百分含量的原料制成口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OA5820-30％口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OMII20-30％口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OY-80 20-30％乳化剂3-8％药用白油22-32％。所述的乳化剂为吐温-80，司本-80。
上述口蹄疫病毒OA58、OMⅡ、OY-80均由农业部指定的兰州兽医研究所提供。OA58的商品代号为AV97，是从新疆阿克苏黄牛58年口蹄疫病毒中分离出的；OMⅡ的商品代号为AV100，是口蹄疫的鼠化毒；OY-80本身就是商品代号，是从广西融水猪口蹄疫病毒分离出来的。OA58和OMⅡ在中国兽药监查所、中国微生物保藏管理委员会兽医微生物中心编写1992年出版的《中国兽医菌种目录》的141、142页上公开其名称和成份。OY-80在农业部兽医生物制品质量标准公开的《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》第20页公开其名称和成份。
本发明的种毒培养是将三种毒株分别用BHK-21传代细胞进行传代培养，其传代培养过程如下1、种细胞生产用BHK-21传代细胞，中国兽药监察所70年代由国外引入。种细胞保存于液氯中。细胞化冻复苏后悬浮于营养液中。
细胞营养液E-MEM培养基0.5％水解乳蛋白欧氏液(以上两种溶液等量混合)小牛血清5-10％7.5％碳酸氢钠调 PH7.4细胞浓度每毫升10万个，36-37℃培养48小时长成致密单层备用。
2、细胞扩大细胞经数次扩大培养，最后用15立升园瓶旋转培养进行工业化生产。
3、病毒接种将已生长良好细胞弃去营养液分别接种含有不同毒株病毒的维持液继续培养，维持液为0.5％E-LH溶液，不含MEM和牛血清，PH7.6，经10-20小时细胞产生病变、脱落，即可收获。病毒接种于BHK21细胞单层，连续继代培养12代以上，第六代开始用乳鼠法测定收获液毒价均在8.0以上，其中第八代起达LD608.25-9.0。
4、病毒灭活病毒用BEI灭活，经用乳鼠和动物测定灭活完全后用于配苗。
本发明相比现有技术具有如下优点1、本发明利用牛、羊、猪的多个毒株混合制苗，提高了抗原含量，抗原性好、免疫效力高。
本发明的免疫原性测定将接种病毒的细胞收获液制苗，免疫黄牛进行攻毒试验，攻毒用流行毒株10000个发病量，试验三批各5头牛，总保护15/15。未免疫对照牛3/3发病。
本发明的疫苗性能测定最小免疫量测定疫苗3批(9901,9902,9903)按用量1/3即1.0毫升免疫牛，30天用10000全数发病量强毒进行攻击，三批分别保护4/5,4/5,4/5，对照3/3发病，说明1/3剂量即可达到农业部部颁质量标准。
疫苗效力检验按规定效检20批，每批免疫牛5头，免疫量3毫升，攻毒量2.0毫升含10000全数发病量，免疫牛全部保护，对照牛全部发病，即规定攻毒量可保护100％。
对猪效力试验疫苗9901批、9905批、9919批分别免疫猪5头，免疫后28天用猪源强毒OY80进行攻击，均5/5保护，说明对猪保护力良好。
免疫牛血清抗体测定
据资料介绍PD50达1∶128以上即可100％抗击强毒攻击。从上述结果可看出，疫苗有良好免疫效果。
2、本发明的疫苗无毒、安全。
本发明还将结合实施例作进一步详述实施例1一种牛、羊、猪口蹄疫多毒株通用灭活疫苗由下述重量百分含量的原料经常规疫苗配制工艺配制而成口蹄疫病毒OA58 20％、口蹄疫病毒OMⅡ20％、口蹄疫病毒OY-880 30％、吐温-80 6％、药用白油24％。
实施例2一种牛、羊、猪口蹄疫多毒株通用灭活疫苗由下述重量百分含量的原料经常规疫苗配制工艺配制而成口蹄疫病毒OA58 25％、口蹄疫病毒OMⅡ25％、口蹄疫病毒OY-80 20％、司本-80 3％、药用白油27％。
实施例3一种牛、羊、猪口蹄疫多毒株通用灭活疫苗由下述重量百分含量的原料经常规疫苗配制工艺配制而成口蹄疫病毒OA58 30％、口蹄疫病毒OMⅡ20％、口蹄疫病毒OY-80 25％、司本-80 3％、药用白油22％。
权利要求
1.一种牛、羊、猪口蹄疫多毒株通用灭活疫苗，其特征在于该疫苗是由至少三种口蹄疫病毒的O型毒株经常规疫苗配制工艺配制而成，它由下述重量百分含最的原料制成口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OA5820-30％口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OMⅡ20-30％口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OY-80 20-30％乳化剂3-8％药用白油22-32％。
全文摘要
本发明涉及一种牛、羊、猪口蹄疫多毒株通用灭活疫苗,该疫苗是由至少三种口蹄疫病毒的O型毒株和乳化剂和药用白油经常规疫苗配制工艺配制而成;本发明利用牛、羊、猪多个毒株混合制苗,提高了抗原含量,混合制苗的抗原性好、免疫效力高。
文档编号A61K39/135GK1321516SQ0011380
公开日2001年11月14日 申请日期2000年4月28日 优先权日2000年4月28日
发明者田连信, 吕红 申请人:中牧实业股份有限公司兰州生物药厂