专利名称：含羟基二十碳四烯酸衍生物的组合物和用于治疗干眼病的方法
技术领域：
本发明涉及含羟基二十碳四烯酸衍生物和乙醇的改进组合物和它们用于治疗干眼病(dry eye)的方法。
虽然干眼病似乎可以由许多不相关的致病原因导致，但所有该并发症的表现形式都具有一共同现象，即眼前泪膜的毁坏，这导致了暴露的外表面的失水和以上列举的许多症状(Lemp，Report of the National EyeInstitute/Industry Workshop on Clinical Trials in Dry Eyes，The CLAOJournal，第21卷，第4期，第221-231页(1995))。
医生已经采取了几种方法来治疗干眼病。一种普通的方法是使用所谓的人工眼泪(artificial tears)整天滴注来补充和稳定眼睛泪膜。其它方法包括使用提供眼泪代替物的眼插件或刺激内源性眼泪产生。
眼泪替代方法的实例包括使用含有水溶性聚合物使得溶液更粘稠和因此不大易于由眼睛流出的缓冲的等渗盐水溶液。还通过提供泪膜的一种或多种组分如磷脂和油尝试了眼泪的重新构成。磷脂组合物已经表明可用于治疗干眼病；例如参阅McCulley和Shine，泪膜结构和干眼病，Contactologia，第20(4)卷，第145-49页(1998)；以及Shine和McCulley，Keratoconjunctivitis sicca associated with meibomian secretion polar lipidabnormality，Archives of Ophthalmology，第116(7)卷，第849-52页(1998)。用于治疗干眼病的磷脂组合物的实例公开在美国专利4,131,651(Shah等人)，4,370,325(Packman)，4,409,205(Shively)，4,744,980和4,883,658(Holly)，4,914,088(Glonek)，5,075,104(Gressel等人)，5,278,151(Korb等人)，5,294,607(Glonek等人)，5,371,108(Korb等人)和5,578,586(Glonek等人)中。美国专利5,174,988(Mautone等人)公开了包括磷脂、推进剂和活性物质的磷脂给药体系。
美国专利3,991,759(Urquhart)公开了眼插件在干眼病治疗中的用途。其它半固体治疗包括使用角叉菜胶(美国专利5,403,841，Lang)，其在与天然形成的泪膜接触时胶凝。
另一方法涉及提供润滑物质代替人工眼泪。例如，美国专利4,818,537(Guo)公开了润滑性脂质体基组合物的用途，以及美国专利5,800,807(Hu等人)公开了含有甘油和丙二醇的组合物用于治疗干眼病。
除了主要针对减轻与干眼病有关的症状的上述努力以外，还探寻了针对治疗干眼病状况的方法和组合物。例如，美国专利5,041,434(Lubkin)公开了性类固醇，如缀合雌激素用于治疗绝经后妇女干眼病状况的用途；美国专利5,290,572(MacKeen)公开了细碎钙离子组合物用于刺激眼前泪膜产生的用途；和美国专利4,966,773(Gressel等人)公开了一种或多种视黄醛衍生物的微细颗粒用于眼组织正常化的用途。
虽然这些方法已经获得了一些成功，然而在干眼病治疗中的问题依然存在。使用眼泪代替物，虽然暂时有效，但一般需要在病人觉醒的时间内重复应用。通常需要病人在一天的过程中施用人工眼泪溶液10-20次。这种做法是不仅是麻烦和耗时的，而且也可能是非常昂贵的。已经报道了与屈光外科手术相关的一过性干眼病症状在一些情况下在手术后可持续6周至6个月或者更长时间。
眼插件的使用也是成问题的。除了成本以外，它们常常是难以处理和不舒适的。此外，作为在眼睛中引入的外来物体，它们可能是导致感染的污染源。在其中该插件本身不产生和输送泪膜的情况下，仍然必需按规律和频繁给予人工眼泪。
鉴于前面所述，明显需要能够减轻症状以及治疗干眼病的潜在身体和生理缺陷的有效且方便的干眼病治疗方法。
粘蛋白是用葡糖胺基结构部分大量糖基化的蛋白。粘蛋白为上皮细胞，尤其粘膜上皮细胞提供了保护和润滑作用。已经表明，粘蛋白由囊泡分泌，在人眼结膜上皮的表面上排出(Greiner等人，在接触透镜配戴者的结膜上皮细胞中的粘液分泌囊泡，Archives of Ophthalmology，第98卷，第1843-1846页(1980)；和Dilly等人，Surface Changes in the AnaestheticConjunctiva in Man，with Special Reference to the Production of Mucousfrom a Non-Goblet-Cell Source，British Journal of Opthalmology，第65卷，第833-842页(1981))。已经发现和克隆了存在于顶端和近顶端角膜上皮的许多人来源的粘蛋白(Watanabe等人，Human Corneal andconjunctival Epithelia Produce a Mucin-Like Glycoprotein for the ApicalSurface，Investigative Ophthalmology and Visual Science，第36卷，第2期，第337-344页(1995))。最近，Watanabe发现了由人眼的角膜顶端和近顶端细胞以及结膜上皮分泌的新粘蛋白(Watanabe等人，IOVS，第36卷，第2期，第337-344页(1995))。这些粘蛋白提供了润滑作用，并另外吸引和保持用于润滑和光的角膜屈光的水分和皮脂物质。
在包括肺气道通道的人体其它部分，和更尤其来自散布在气管/支气管上皮细胞之间的杯状细胞也产生和分泌粘蛋白。某些花生四烯酸代谢产物已经表明可刺激这些细胞中的粘蛋白产生。Yanni报道了用羟基二十碳四烯酸(“HETE”)衍生物增加大鼠肺的粘膜糖蛋白的分泌(Yanni等人，Effect of Intravenously Administered Lipoxygenase Metabolites on RatTracheal Mucous Gel Layer Thickness，International Archives of Allergyand Applied Immunology，第90卷，第307-309页(1989))。类似地，Marom报道了用HETE衍生物在人肺中产生粘膜糖蛋白(Marom等人，HumanAirway Monohydroxy-eicosatetraenoic Acid Generation and MucousRelease，Journal of Clinical Investigation，第72卷，第122-127页(1983))。
宣称用于增加眼粘蛋白和/或眼泪产生的药剂包括血管活性肠肽(Dartt等人，Vasoactive intestinal peptide-stimulated glycoconjugate secretionfrom coniunctival goblet cells，Experimental Eye Research，第63卷，第27-34页(1996))，金合欢乙酸香叶醇酯(Nakmura等人，Gefarnate stimulatessecretion of mucin-like glycoproteins by corneal epithelium in vitro andprotects corneal epithelium from dessication in vivo，Experimental EyeResearch，第65卷，第569-574页(1997))，脂质体(美国专利4,818,537)，雄激素(美国专利5,620,921)，促黑激素(美国专利4,868,154)，磷酸二酯酶抑制剂(美国专利4,753,945)，和视黄醛衍生物(美国专利5,455,265)。然而，这些化合物或治疗方法中的许多缺乏特异性，效力和效能，这些试剂没有一个已经上市作为用于治疗干眼病和相关眼表面疾病的治疗有效产品。
美国专利5,696,166(Yanni等人)公开了含有HETE的组合物，以及用于治疗干眼病的方法。Yanni等人发现，当给药于病人时，包括HETE的组合物增加了眼粘蛋白分泌，并因此可用于治疗干眼病。本发明的发明人通过发明与在5,696,166专利中公开的那些相比具有改进效力的HETE衍生物组合物，从而改进了这种组合物和方法。
组合物优选局部给药于眼睛。
在优选的实施方案中，HETE衍生物用人工眼泪组分或磷脂配制，以获得干眼病或需要润湿眼睛的其它疾病的即时和长期缓解。
图2是说明包括15(S)-HETE和浓度变化的乙醇的组合物与不含15(S)-HETE的组合物在体内干眼病模型中具有改进的干眼病疗效的图。
本发明的详细描述现在已经发现，包括有效量的乙醇的含HETE衍生物的组合物治疗干眼病类疾病比相应的不含乙醇的组合物更有效。这里所使用的“HETE衍生物”是指在眼局部给药后刺激眼睛粘蛋白形成和/或分泌的任何羟基二十碳四烯酸类衍生物，并且具有下式(I)、(II)或(III) 和 其中X是OR或NHR；R是H，取代或未取代的烷基，环烷基，(环烷基)烷基，芳基，芳烷基，其中取代基是选自以下的结构部分烷基，卤素，羟基和官能化改性羟基；和Y是 或 其中R”是H或OR”是官能化改性羟基。
本发明化合物的单一对映体以及它们的外消旋和非外消旋混合物包括在本发明范围内。单一对映体能够从适当的对映体纯或富含对映体的起始原料通过如下所述那些的方式来对映选择性合成。另外，它们可以从外消旋/非外消旋或非手性起始原料来进行对映选择性合成。(AsymmetricSynthesis；J.D.Morrison和J.W.Scott，Eds.；Academic Press Publishers纽约，1983-1985，第1-5卷；Principles of Asymmetric Synthesis；R.E.Gawley和J.Aube，Eds.；Elsevier Publishers阿姆斯特丹，1996)。它们还可以通过许多已知方法，例如通过用手性HPLC纯化样品(A PracticalGuide to Chiral Separations by HPLC；G.Subramanian，Ed.；VCHPublishers纽约，1994；Chiral Separations by HPLC；A.M.Krstulovic，Ed.；Ellis Horwood Ltd.Publishers，1989)，或者通过用酶对映选择性水解羧酸酯样品(Ohno，M.；Otsuka，M.Organic Reactions，第37卷，第1页(1989))来从外消旋和非外消旋混合物中分离。本领域熟练技术人员清楚，外消旋和非外消旋混合物可以通过几种方式获得，不带限制地包括非对映选择性合成，部分拆分，乃至混合具有不同对映体比率的样品。在不偏离本发明的原则和不牺牲其优点情况下，可以在附带权利要求书的范围内从这些细节做出变更。还包括在本发明范围内的是基本不含它们各自的对映体的单一异构体。
术语“游离羟基”是指OH。术语“官能化改性羟基”是指已经被官能化形成以下基团的OH醚，其中烷基、芳基、环烷基、杂环烷基、链烯基、环烯基、杂环烯基、炔基或杂芳基取代了氢；酯，其中酰基取代了氢；氨基甲酸酯，其中氨基羰基取代了氢；或者碳酸酯，其中芳氧基-、杂芳氧基-、烷氧基-、环烷氧基-、杂环烷氧基-、链烯氧基-、环烯基氧基-、杂环烯基氧基-、或炔氧基-羰基取代了氢。优选的结构部分包括OH，OCH2C(O)CH3，OCH2C(O)C2H5，OCH3，OCH2CH3，OC(O)CH3和OC(O)C2H5。
术语“酰基”表示用具有连接于氧原子的双键和连接于另一碳原子的单键的碳原子连接的基团。
术语“烷基”包括饱和的和具有1-15个碳原子的直链或支链脂族烃基。烷基可以被其它基团，如卤素、羟基或烷氧基取代。优选的直链或支化烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和叔丁基。
术语“环烷基”包括连接成一个或多个环的直链或支链、饱和或不饱和脂族烃基，环可以是稠合或孤立的。这些环可以被其它基团，如卤素、羟基、烷氧基或低级烷基取代。优选的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
术语“链烯基”包括具有1-15个碳原子和至少一个碳碳双键的直链或支链烃基。链中的氢可以被其它基团，如卤素所取代。优选的直链或支化链烯基包括烯丙基，1-丁烯基，1-甲基-2-丙烯基和4-戊烯基。
术语“环烯基”包括连接成一个或多个含碳-碳双键的非芳族环的直链或支链、饱和或不饱和脂族烃基，所述环可以是稠合或孤立的。这些环可以被其它基团，如卤素、羟基、烷氧基或低级烷基所取代。优选的环烯基包括环戊烯基和环己烯基。
术语“烷氧基”表示通过氧连接基连接的烷基。
术语“羰基”表示双键连接于氧原子的碳原子，其中该碳原子具有两个游离价键。
术语“烷氧基羰基”表示由其氧原子键接于羰基的碳的烷氧基，羰基本身通过其碳原子键接于另一原子。
术语“氨基羰基”表示由其氮原子键接于羰基的碳原子的氨基，羰基本身通过其碳原子键接于另一原子。
术语“低级烷基”表示含1-6个碳原子(C1-C6)的烷基。
术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。
术语“芳基”是指呈芳香性的碳型环。环可以是孤立的，如苯基，或稠合的，如萘基。环中的氢可以被其它基团，如低级烷基或卤素取代。
术语“杂芳基”是指在环中含有至少一个杂原子如O、S和N的芳族烃环。杂芳基环可以是孤立的，具有5-6个环原子，或稠合的，具有8-10个原子。杂芳基环的氢或具有开放价键的杂原子可以被其它基团，如低级烷基或卤素所取代。杂芳基的实例包括咪唑，吡啶，吲哚，喹啉，呋喃，噻吩，吡咯，四氢喹啉，二氢苯并呋喃和二氢苯并吲哚。
术语“杂环烷基”是指在环结构内含至少一个杂原子，如N、O或S的环烷基环。杂环烷基环的实例包括四氢吡喃，吡咯烷，哌啶，哌嗪，四氢噻吩，和吗啉。
术语“杂环烯基”是指在环结构内含至少一个杂原子，如N、O或S的环烯基环。杂环烯基环的实例包括二氢吡喃，吡咯啉和吡啶酮。
本发明的HETE衍生物一般从花生四烯酸获得。某些HETE衍生物在本领域中是已知的，而且在活体外已被分离以及以生物合成和合成方式来制备。一些HETE衍生物通过脂肪氧化酶或其它酶的作用和随后通过内源性过氧化物酶的作用还原以内源方式制备。已知存在有几种脂肪氧化酶，并根据它们氧化的碳位来命名。这些酶包括5-脂肪氧化酶，12-脂肪氧化酶和15-脂肪氧化酶。已经发现其它酶如细胞色素P-450催化“R-型”HETE氧化产物。各脂肪氧化酶催化在各自碳上的氢过氧基的加成。在氢过氧化(形成诸如5-氢过氧基二十碳四烯酸(“5-HPETE”)，12-HPETE和15-HPETE之类的分子)之后，花生四烯酸酯衍生物通过各种过氧化物酶还原成所得的醇。所得分子包括5-HETE，12-HETE和15-HETE。
HETES能够通过生物合成，体外合成来获得。这些方法包括使用各自的脂肪氧化酶，O2，花生四烯酸和适合的还原剂(参阅，Graff等人，Activation of Soluble Splenic Cell Guanylate Cyclase by ProstaglandinEndoperoxides and Fatty Acid Hydroperoxides，Journal of BiologicalChemistry，第253卷，第7662-7676页(1978)和Graff，制备15-L-氢过氧基-5，8，11，13-二十碳四烯酸(15-HPETE)，Methods in Enzymology，第86卷，第386-392页(1982))。HETE还可以通过如在Corey等人，12-羟基-5，8，14-(Z)-10-(E)-二十碳四烯酸(12-HETE)，The Logic of ChemicalSynthesis，John Wiley and Sons，第12.9和12.11节(1989)中所述的有机合成路线来合成。最后，HETE可从包括Sigma Chemical Co.(St.Louis，Missouri)和Cayman Chemical(Ann Arbor.Michigan)的各种来源商购。在用于制备本发明的药物制剂的HETE衍生物原料中过氧化物的水平可能会对HETE衍生物的生物活性具有影响。虽然还没有确定精确的关系，但优选使用过氧化物水平不高于大约0.3ppm的HETE衍生物原料供料。测定过氧化物水平的方法在本领域中是已知的(例如，EuropeanPharmacopoeia 1997 3rdEd.，Method 2.5.5-Peroxide Value)。
据信，在组合物的制备中使用HETE衍生物的乙醇储备溶液限制了降解产物在最终组合物中的存在量。
本发明的优选化合物包括 12-羟基-[12S-(5Z，8Z，10E，14Z)]-5，8，10，14-二十碳四烯酸(“12(S)-HETE”)； 15-羟基-[15S-(5Z，8Z，11Z，13E)]-5，8，11，13-二十碳四烯酸(“15(S)-HETE”)； 本发明的组合物包括当给药于眼睛时使眼中粘蛋白分泌和因此消除或改进干眼病状况的有效量的一种或多种HETE衍生物。这里所使用的术语“药物有效量”是指改进哺乳动物干眼病状况的一种或多种HETE衍生物的量。一般而言，HETE衍生物以0.00001-大约1％重量/体积(“％w/v”)，和优选0.00001-大约0.1％w/v的浓度范围含于本发明的组合物中。包含浓度约0.00001-0.0001％w/v的15(S)-HETE的组合物是最优选的。
如上所述，本发明的组合物还包括有效浓度的乙醇。本发明的发明人出人意料地发现，当给药于眼睛时，乙醇在HETE衍生物组合物中的存在提高了HETE衍生物的生物效力。这里有关乙醇的“足以提高HETE衍生物的效力的量”是指当局部给药于眼睛时，提高HETE衍生物组合物的生物效力的乙醇浓度。一般而言，增强HETE衍生物效力所必需的乙醇浓度据信在某种程度上与HETE衍生物给药的浓度成正比。如果给予相对高浓度的HETE衍生物，例如在0.01％w/v以上，乙醇在这种组合物中的浓度可以按比例低于含有较低浓度的HETE衍生物的类似组合物。然而，一般来说，在本发明的组合物中含有的乙醇浓度是在大约0.001-2％w/v的范围内。含有浓度大约0.00001-0.01％w/v的HETE衍生物的组合物优选含有浓度大约0.005-0.2％w/v，最优选大约0.02-0.10％w/v的乙醇。
HETE衍生物组合物作为溶液、悬浮液和用于局部给药的其它剂型配制。根据配制的容易性、生物相容性(尤其就所要治疗的疾病，例如干眼病类疾病来说)以及患者通过在被感染眼中滴注1-2滴溶液易于给入这种组合物的能力来讲，水溶液一般是优选的。然而，HETE衍生物组合物还可以是悬浮液，粘稠或半粘稠凝胶，或其它类型的固体或半固体组合物。悬浮液对于不太溶于水中的HETE衍生物来说是优选的。
优选的是，本发明组合物还将含有表面活性剂。可以使用用于局部眼用制剂的各种表面活性剂。表面活性剂可以提供HETE衍生物的附加化学稳定作用和可以进一步提供化合物的物理稳定作用。换句话说，表面活性剂可以有助于防止HETE衍生物的化学降解和还可以防止化合物粘结于包装其组合物的容器。这里所使用的“有效浓度的表面活性剂”是指增强HETE衍生物的化学和物理稳定性的浓度。表面活性剂的实例包括但不限于CremophorEL，聚烃氧基20鲸蜡基硬脂基醚，聚烃氧基40氢化蓖麻油，聚烃氧基23月桂基醚和聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物(poloxamer)407，它们可以用于本发明的组合物中。优选的表面活性剂是聚烃氧基40硬脂酸酯。表面活性剂的浓度将根据包含在制剂中的HETE衍生物和乙醇的浓度来变化。然而，表面活性剂浓度一般是大约0.001-2.0％w/v。本发明的优选药物组合物含有大约0.1％w/v的聚烃氧基40硬脂酸酯。
本发明的药物组合物还可以包括各种其它成分，如渗透压调节剂(tonicity agent)，缓冲剂，防腐剂，助溶剂和抗氧化剂。
可以使用各种渗透压调节剂来调节药物组合物的渗透压(tonicity)，优选调节至天然眼泪(natural tears)的渗透压。例如，可以将氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙和/或甘露糖醇加入到组合物中，达到接近生理渗透压。这种渗透压调节剂的量将根据所加入的特定试剂来变化。然而，组合物一般具有浓度为大约0.1-1.5％w/v的渗透压调节剂。优选的药物组合物将含有大约0.75％w/v的氯化钠。
可以加入适宜的缓冲体系(例如，磷酸钠，乙酸钠，柠檬酸钠，硼酸钠或硼酸)，以防止pH在储存条件下偏移。具体浓度将根据所用试剂来变化。然而，这种浓度一般是在大约0.02-2.0％w/v的范围内。优选的组合物将含有大约0.25％w/v的硼酸。
局部眼用产品一般包装成多剂量形式。因此需要防腐剂以防止在使用过程中微生物的污染。适宜的防腐剂包括洁尔灭，三氯叔丁醇，溴化苄基十二烷基二甲基铵，羟苯甲酸甲酯，羟苯甲酸丙酯，苯乙醇，乙二胺四乙酸二钠，山梨酸，聚季盐(polyquaternium)-1，或本领域中那些熟练人员已知的其它试剂。这些防腐剂一般以0.001-1.0％w/v的水平使用。本发明的单位剂量组合物应是无菌的，但一般是未防腐的。因此，这些组合物一般不含有防腐剂。
可以将抗氧化剂加入到本发明组合物中，以保护HETE盐在储存过程中不被氧化。这些抗氧化剂的实例包括但不限于维生素E及其类似物，抗坏血酸和衍生物，以及丁基化羟基茴香醚(BHA)。
在优选的实施方案中，本发明的药物组合物包括一种或多种人工眼泪或磷脂组分以提供即时缓解，同时HETE盐刺激天然眼泪产生。在该实施方案中，本发明的组合物提供了治疗干眼病的一石二鸟之方法。组合物的人工眼泪或磷脂组分通过润滑和润湿眼睛提供了干眼病的即时、短暂的缓解，以及组合物的HETE衍生物组分通过刺激眼部粘蛋白的分泌来刺激病人天然眼泪的重建以提供药物治疗。根据该实施方案(同时提供了即时、暂时缓解以及长期干眼病缓解)的组合物的优点是它们不需以高频率给药，而这是非治疗性磷脂组合物的典型特征。替而代之，本发明的组合物可以少至每日给药1-2次到多至每日仅给药大约8-10次，根据干眼病情的严重程度。
含有HETE盐和人工眼泪或磷脂组分的组合物的另一优点是组合物提供了用单独一种治疗组合物的使用方便性。为了使得病人甚至试图获得短期和长期干眼病缓解，病人需要巧妙处理两种单独组合物的给药方案。在这两种组合物给药方案的情况下，使用者会因处理两种单独的组合物和按照不同的给药方案而受到拖累。另外，由于可能给药重叠，两种单独体系的使用者可能会粗心地过量用一种组合物或另一组合物，或通过两种组合物的伴随给药而实际上过度稀释一种组合物或另一种组合物。本发明通过提供单一的多疗法组合物用于治疗干眼病类疾病和障碍而解决了这些问题。
这里所使用的“一种或多种人工眼泪或磷脂组分”是指具有以下特征的那些组分(i)在眼部给药时，润滑，“润湿”，接近内源性眼泪的稠度，或另外提供干眼病症状和病情的暂时缓解；(ii)是安全的；和(iii)提供了用于有效量的一种或多种HETE衍生物的局部给药的合适输送载体。这里所使用的“有效量的一种或多种人工眼泪或磷脂组分”是指在眼部给药时，润滑，“润湿”，接近内源性眼泪的稠度，或另外提供干眼病症状和病情的暂时缓解的量。一般而言，人工眼泪或磷脂组分在本发明组合物中的浓度是在大约0.01-大约1.0％w/v(磷脂组分)或2.0％w/v(非磷脂组分)的范围内。优选量是在大约0.05-大约0.1％w/v(磷脂组分)和0.1-0.5％w/v(非磷脂组分)的范围内。
可用于本发明组合物中的磷脂组分是包括甘油-磷酸酯或神经鞘磷脂骨架的任何天然或合成磷脂化合物。本发明的磷脂的实例具有结构式(IV) 其中，X21和X22是相同或不同的，并且是O，NH(C＝O)，O(C＝O)，或直接键；R22是H或CH＝CH(CH2)12CH3；X21-R1是OH，或R1是C12-26取代的或未取代的烷基或链烯基；R2是C12-26取代的或未取代的烷基或链烯基；和R3是OH，OCH2CH(NH3+)COO-，OCH2CH2NH3+，OCH2CH2N+(CH3)3，OCH2CH(OH)CH2OH和O-肌醇。
磷脂可以作为外消旋或非外消旋化合物存在。优选的磷脂是其中X21-R1和/或X22-R2包括脂肪酸酯或酰胺的那些。天然脂肪酸是饱和的、单不饱和的或多不饱和的。脂肪酸残基的实例包括但不限于月桂酸酯，肉豆蔻酸酯，棕榈酸酯，棕榈油酸酯，硬脂酸酯，油酸酯，亚油酸酯，亚麻酸酯，二十烷酸酯，二十二烷酸酯，和二十四烷酸酯。优选的磷脂类型是磷脂酰乙醇胺，磷脂酰胆碱，磷脂酰丝氨酸，磷脂酰肌醇和神经鞘磷脂。具体磷脂的实例包括1，2-二棕榈酰基磷脂酰胆碱(“DPPC”)，1，2-二棕榈基磷脂酰甘油(“DPPG”)，N-硬脂基神经鞘磷脂，N-棕榈基神经鞘磷脂，N-油基神经鞘磷脂，1，2-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(“DSPE”)，1，2-二硬脂酰基磷脂酰肌醇(“DSPI”)，1-硬脂酰基-2-棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(“SPPE”)，1-硬脂酰基-2-棕榈酰基磷脂酰胆碱(“SPPC”)，1，2-二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(“DPPE”)，1，2-二油酰基磷脂酰乙醇胺(“DOPE”)，1，2-二油酰基磷脂酰丝氨酸(“DOPS”)，和1，2-二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸(“DPPS”)。最优选的磷脂载体是磷脂酰乙醇胺和神经鞘磷脂。磷脂可以从各种天然来源获得，也可以通过本领域中已知的方法合成；例如参阅，Tsai等人，Biochemistry，第27卷，第4619页(1988)；和Dennis等人，Biochemistry，第32卷，第10185页(1993)。
各种非磷脂人工眼泪组分是已知的，并且在眼部给药时用于提供润滑，“润湿”，接近内源性眼泪的稠度，或另外提供干眼病症状和病情的暂时缓解。这些化合物可以提高组合物的粘度，包括但不限于单体多元醇，如甘油，丙二醇，乙二醇，聚合多元醇如聚乙二醇，羟丙基甲基纤维素(“HMPC”)，羧甲基纤维素钠，和羟丙基纤维素(“HPC”)；透明质酸；硫酸软骨素；葡聚糖，如葡聚糖70；水溶性蛋白，如明胶；和乙烯基聚合物，如聚乙烯醇，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙烯吡咯酮和聚羧乙烯(carbomer)，如聚羧乙烯934P，聚羧乙烯941，聚羧乙烯940，聚羧乙烯974P。一般而言，组合物表现出1-400厘泊(“cps”)的粘度。优选的组合物显示出大约25cps的粘度。
本发明的优选组合物意欲用于给药于患有干眼病或干眼病症状的哺乳动物。优选的是，本发明的HETE衍生物局部给药。一般而言，用于上述目的的剂量可以变化，但应以有效减轻干眼病症状，增加眼中粘蛋白产生和因此消除或改进干眼病情的量。这里所使用的术语“治疗有效量”是指当给药于哺乳动物时，改进哺乳动物干眼病情的本发明组合物的量。通常，根据各种因素如HETE衍生物在组合物中的浓度，特定HETE衍生物的效能，以及所要治疗的干眼病或障碍的严重程度，本发明的组合物每日给药1-10次，每次1-2滴。优选组合物每日给药1-4次，每次1-2滴。
这里所使用的术语“可药用载体”是指安全的，并且提供有效量的本发明至少一种HETE衍生物和有效量的乙醇的适当输送的任何配制料。
以下实施例1-19描述了本发明的优选组合物。例如，还可以通过用式(I)或(II)的HETE衍生物代替式(III)的化合物，改变HETE衍生物的浓度至大约0.00001-1％w/v之间，改变所存在的其它组分的浓度，和改变pH(例如在大约6-8之间)来制备示例组合物的变型。
实施例1
通过以下方法制备以上组合物。称量批量的聚烃氧基40硬脂酸酯，硼酸，氯化钠，乙二胺四乙酸二钠，和聚季盐-1，并通过搅拌使其溶解在90％批量的净化水中。用NaOH和/或HCl将pH调至7.5±0.1。在黄光或降低的照明下，测定和加入作为在乙醇中的储备溶液的批量的选定式(III)化合物和用于该批料所必需的附加量的乙醇。加入净化水，足量至100％。混合物搅拌5分钟以匀化，然后用无菌过滤膜过滤到无菌容器中。
优选的是，以上方法使用玻璃、塑料或其它非金属容器或衬有这些材料的容器进行。
实施例2
可以通过类似于实施例1中所述方法的方法来制备以上制剂。
实施例3
可以通过类似于实施例1中所述方法的方法来制备以上制剂。
实施例4本发明的组合物(实施例1，其中式(III)的化合物是15(S)-HETE)分别与没有乙醇的类似组合物，没有15(S)-HETE的类似组合物，和具有约一半、十分之一和两倍量乙醇的类似组合物在干眼病的体内干燥模型中进行比较。
简单地说，通过首先用氯胺酮/赛拉嗪/葡萄糖吡咯麻醉动物来进行检测。左(O.S.)眼用Dura Tear润滑和在整个实验过程中用胶带封闭。右(O.D.)眼然后给予50μL试验组合物(实施例1)或50μL没有乙醇的相同组合物，眼睛再用胶带封闭10分钟。然后除去胶带，打开眼睑，将张开器插入眼中，该眼用张开器保持打开4小时。在这期间，动物每15分钟监控一次，并根据保持麻醉的需要，补充注射氯胺酮/赛拉嗪(每次注射初始剂量的一半)。在这4小时期间的最后，在上眼睑中缝入2根缝线，在下眼睑中缝入1根缝线。通过使用缝线往上抬高眼睑形成角膜/结膜袋，缝线再系于支架上。1mL亚甲蓝(1％水溶液)加入到结膜袋中，角膜用该溶液染色5分钟。该眼然后用200mL平衡盐溶液洗涤。通过非侵入式厚度测量法测定角膜厚度。各动物记录三次读数。通过用裂隙灯目测角膜和测定染有亚甲蓝的角膜的百分数来获得角膜染色评分。使用裂隙灯机器进行拍照。然后通过静脉内注射Sleepway溶液立即处死兔子，再切除眼睛。分离角膜，再收集角膜中心的8mm冲孔。将该角膜冲孔放入含2mL丙酮/饱和硫酸钠(7∶3，vol/vol)的小玻璃瓶中。用分光光度计在660nm处测量提取溶液的吸光率。
用氯胺酮/赛拉嗪/葡萄糖吡咯麻醉幼龄对照动物，润滑左眼，并用胶带封闭。立即将缝线缝入右眼眼睑。如上述那样形成角膜袋，角膜用亚甲蓝染色，用平衡盐溶液洗涤和收集。通过从1中减去试样吸光率除以对照样品吸光率的平均值的商，再乘以100来将该数据转化为“保护百分数”。结果在表1中提供，并且在
图1和图2中图解说明。
表1
*p＜0.05，与对照相比。注1μM相当于0.000034％w/v。
以上结果证明了乙醇与HETE衍生物结合使用对由干眼病状况诱发的角膜损伤具有保护效果。
以下实施例5-10(磷脂组合物)和11-19(非磷脂人工眼泪组分组合物)说明了本发明的特殊组合物。
实施例5
通过以下方法制备以上组合物。称量批量的DPPC、DPPG、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、乙二胺四乙酸二钠、聚季盐-1，并通过搅拌使其溶解在90％批量的净化水中。用NaOH和/或HCl将pH调至7.5±0.1。在黄光或降低的照明下，测定和加入作为在乙醇中的储备溶液的批量的选定式(III)化合物和用于该批料所必需的附加量的乙醇。加入净化水，足量至100％。混合物搅拌5分钟以匀化，然后用无菌过滤膜过滤到无菌容器中。
优选的是，以上方法使用玻璃、塑料或其它非金属容器或衬有这些材料的容器进行。
实施例6-10的制剂可以通过类似于实施例5中所述方法的方法来制备。
实施例6
实施例7
实施例8
实施例9
实施例10
实施例11
通过以下方法制备以上组合物。称量批量的HPMC、葡聚糖70、洁尔灭、氯化钠、氯化钾和乙二胺四乙酸二钠，并通过搅拌使其溶解在90％批量的净化水中。用NaOH和/或HCl将pH调至7.5±0.1。在黄光或降低的照明下，测定和加入作为在乙醇中的储备溶液的批量的选定式(III)化合物和用于该批料所必需的附加量的乙醇。加入净化水，足量至100％。混合物搅拌5分钟以匀化，然后用无菌过滤膜过滤到无菌容器中。
优选的是，以上方法使用玻璃、塑料或其它非金属容器或衬有这些材料的容器进行。
实施例12-19的制剂可以通过类似于实施例11中所述方法的方法来制备。
实施例12
实施例13
实施例14
实施例15
实施例16
实施例17
实施例18
实施例19
本发明不限于上述具体细节，而是在更宽的范围中。在不偏离本发明原则和牺牲其优点的情况下，在所附权利要求书的范围内从这些细节可以做出许多变更。
权利要求
1.一种用于治疗干眼病和需要润湿眼睛的其它疾病的组合物，包括可药用载体，药物有效量的根据式(I)、(II)或(III)的一种或多种HETE衍生物，以及足以增强HETE衍生物效力的量的乙醇 和 其中X是OR或NHR；R是H，取代或未取代的烷基，环烷基，(环烷基)烷基，芳基，芳烷基，其中取代基是选自以下的结构部分烷基，卤素，羟基和官能化改性羟基；和Y是 或 其中R”是H或OR”是官能化改性羟基。
2.权利要求1的组合物，其中HETE衍生物选自5(S)-HETE，5(R)-HETE，12(S)-HETE，12(R)-HETE，15(S)-HETE，15(R)-HETE以及它们的外消旋和非外消旋混合物。
3.权利要求1的组合物，其中HETE衍生物是15(S)-HETE。
4.权利要求3的组合物，其中HETE衍生物以0.00001-0.01％w/v之间的浓度含于组合物中。
5.权利要求1的组合物，其中组合物进一步包括表面活性剂。
6.权利要求1的组合物，其中乙醇浓度是在0.001-2％w/v之间。
7.权利要求4的组合物，其中乙醇浓度是在0.005-0.20％w/v之间。
8.权利要求1的组合物，进一步包括一种或多种人工眼泪或磷脂组分。
9.权利要求8的组合物，其中组合物包括选自磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇和神经鞘磷脂中的磷脂。
10.权利要求8的组合物，其中组合物包括下式的磷脂 其中，X21和X22是相同或不同的，并且是O，NH(C＝O)，O(C＝O)，或直接键；R22是H或CH＝CH(CH2)12CH3；X21-R1是OH，或R1是C12-26取代的或未取代的烷基或链烯基；R2是C12-26取代的或未取代的烷基或链烯基；和R3是OH，OCH2CH(NH3+)COO-，OCH2CH2NH3+，OCH2CH2N+(CH3)3，OCH2CH(OH)CH2OH和O-肌醇。
11.权利要求10的组合物，其中磷脂选自DPPC，DPPG，DSPI，SPPC，DPPE，DOPS，DSPE，SPPE，DOPE，DPPS，N-硬脂基神经鞘磷脂，N-棕榈基神经鞘磷脂和N-油基神经鞘磷脂。
12.权利要求8的组合物，其中组合物包括选自单体多元醇；聚合多元醇；透明质酸；硫酸软骨素；葡聚糖；水溶性蛋白；和乙烯基聚合物中的人工眼泪组分。
13.权利要求12的组合物，其中人工眼泪组分选自甘油；丙二醇；乙二醇；聚乙二醇；羟丙基甲基纤维素；羧甲基纤维素钠；羟丙基纤维素；透明质酸；硫酸软骨素；葡聚糖70；明胶；聚乙烯醇；聚乙烯基吡咯烷酮；聚乙烯吡咯酮；聚羧乙烯934P；聚羧乙烯941；聚羧乙烯940；和聚羧乙烯974P。
14.权利要求1的组合物，其中组合物进一步包括选自表面活性剂、渗透压调节剂、缓冲剂、防腐剂、助溶剂和抗氧化剂中的一种或多种成分。
15.一种用于治疗干眼病和需要润湿眼睛的其它疾病的方法，包括将含有药物有效量的根据式(I)、(II)或(III)的一种或多种HETE衍生物，以及足以增强HETE衍生物效力的量的乙醇的组合物给药于哺乳动物 和 其中X是OR或NHR；R是H，取代或未取代的烷基，环烷基，(环烷基)烷基，芳基，芳烷基，其中取代基是选自以下的结构部分烷基，卤素，羟基和官能化改性羟基；和Y是 或 其中R”是H或OR”是官能化改性羟基。
16.权利要求15的方法，其中HETE衍生物选自5(S)-HETE，5(R)-HETE，12(S)-HETE，12(R)-HETE，15(S)-HETE，15(R)-HETE以及它们的外消旋和非外消旋混合物。
17.权利要求16的方法，其中HETE衍生物是15(S)-HETE。
18.权利要求15的方法，其中HETE衍生物以0.00001-0.01％w/v之间的浓度含于组合物中。
19.权利要求15的方法，其中组合物进一步包括表面活性剂。
20.权利要求15的方法，其中乙醇在组合物中的浓度是在0.001-2％w/v之间。
21.权利要求20的方法，其中乙醇在组合物中的浓度是在0.005-0.20％w/v之间。
22.权利要求15的方法，其中干眼病和需要润湿眼睛的其它疾病是与屈光外科手术相关的干眼病症状。
全文摘要
公开了含有一种或多种HETE衍生物和有效浓度的乙醇的组合物以及用于治疗干眼病的方法。
文档编号A61K47/42GK1387505SQ00815337
公开日2002年12月25日 申请日期2000年10月23日 优先权日1999年11月9日
发明者L·W·施内德尔, D·A·盖玛彻, L·K·威莫尔, T·L·克斯勒尔, 魏忠友, T·帕斯奎恩, J·M·亚恩, H·G·巴哈盖特 申请人:爱尔康公司