专利名称：具有抗心肌纤维化作用的黄芪皂甙甲的制作方法
技术领域：
本发明属中药技术领域。具体涉及一种具有抗心肌纤维化作用的黄芪皂甙甲。
尽管黄芪对心血管的作用是肯定的，但就目前的研究而言，黄芪对心血管效应方面的药效物质是不清楚的。因此，有必要在现有的研究基础上进行深入的研究，阐明黄芪在心血管疾病治疗方面的药效物质基础和作用机制。
本发明提供了一种具有抗心肌纤维化作用的黄芪皂甙甲。
具有下列结构式 黄芪皂甙甲(Astragaloside IV)MW＝802本发明的黄芪皂甙甲的HPLC图谱见
图11。
本发明的黄芪皂甙甲的抗心肌纤维化作用的研究结果如下实验对象为Sprague-Dawley种大鼠，应用0.6mm直径的银夹狭窄腹主动脉，造成负荷过载的心肌肥厚模型。造模后1个半月后，开始给药，时间1个半月，实验周期3个月。实验分为对照组(假手术组)、模型组、西药(雷米普利，Ramipril)对照组(口服雷米普利，1mg/Kg，0.33mg/ml)、黄芪皂甙甲(Astragaloside IV，AS-IV)组(口服和腹腔注射0.3mg/Kg，0.1mg/ml)。实验指标为血液动力学、左室重量指数、心肌形态学(电镜和光镜)和循环内分泌(内皮素、血管紧张素II、cAMP)。结果见表1-表6。
表1.AS-IV对心肌肥厚大鼠心肌重量指数的影响(x±s)组别 n 心肌重量指数(mg/100g)假手术组122.01±0.08**模型组 262.79±0.12AS-IV口服组 202.43±0.15*AS-IV腹腔注射组 152.34±0.09**雷米普利组 122.14±0.09**与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01
表2.AS-IV对心肌肥厚大鼠外周动脉血压的影响(x±s)动脉血压(mmHg)组别n收缩压舒张压假手术组 12145±11.8 97±12.9模型组26171±18.9 121±17.9AS-IV口服组 20146±14.8*87±18.5**AS-IV腹腔注射组 15161±26.8 107±22.3雷米普利组12129±17.4**85±15.0**与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01表3.AS-IV对心肌肥厚大鼠心脏血流动力学的影响(x±s)心室内压 左室舒张末压心室内压微分心率组别 n (mmHg) (mmHg) (mmHg/s) (BPM)LVSP LVDEP+dp/dtmax-dp/dtminHR假手术组 12173±16.6 2.8±1.03 6780±15114180±873 380±31.7模型组 26175±19.0 1.5±0.63 6250±16453970±789 427±23.9AS-IV口服组20172±20.7 3.2±1.26*6810±16023692±664 406±28.6AS-IV腹腔注射组15185±27.8 2.5±1.38 8107±1283*4290±1117407±34.2雷米普利组 12158±20.2 2.8±0.85*6750±21743274±612 373±14.9与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01表4.AS-IV对心肌肥厚大鼠形态学的影响(x±s)光镜观察组别 n 电镜观察(纤维化记分*)无线粒体肿胀，无缺血带，无心肌假手术组 8 0.25(2/8)纤维化线粒体肿胀，有明显缺血带，心肌模型组8 1.63(13/8)纤维化较明显线粒体轻度肿胀，局部有缺血带，AS-IV口服组 6 1.00(6/6)心肌有纤维化存在线粒体轻度肿胀，局部有缺血带，AS-IV腹腔注射组 6 0.33(2/6)心肌纤维化有改善线粒体轻度肿胀，缺血带明显改善，雷米普利组8 0.00(0/8)心肌较少有纤维化存在*纤维化记分方法纤维化占高倍视野的1/3以下记1分；纤维化占高倍视野的1/3以上记2分(2/3以下)；纤维化占高倍视野的2/3以上记3分；高倍视野下基本无纤维化记0分表5.AS-IV对心肌肥厚大鼠ET、cAMP的影响(x±s)心肌组织cAMP组别n 血浆ET(pg/L)(pmol/mg)假手术组5 155±22.2507±82.8模型组 6 243±49.7354±77.9AS-IV口服组 5 232±43.2363±77.8AS-IV腹腔注射组 5 229±42.5380±59.4雷米普利组 5 239±77.2355±48.9ELISA法测定，每个样品重复2次表6.AS-IV对心肌肥厚大鼠血管紧张素(AngII)的影响(x±s)Ang II组别n血浆(pmol/L)心肌组织(pmol/mg)假手术组532±6.2**122±28.0**模型组 669±16.6 349±66.6AS-IV口服组 559±7.1 292±22.6AS-IV腹腔注射组 549±6.2*245±28.4*雷米普利组口服组531±9.4**130±20.1**与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01ELISA法测定，每个样品测1次这些结果表明，黄芪皂甙甲能明显降低左室重量指数，减轻心肌肥厚；降低外周动脉血压和左室舒张末压，改善心脏舒张功能；改善心衰时的心肌线粒体肿胀、减轻心肌纤维化；降低血浆和心肌组织中血管紧张素II的含量。本研究关键要解决的问题有4个方面。1.黄芪活性物质I是否能减轻心衰大鼠左室重量指数(改善心肌重构)。2.是否能够降低血压；3.是否能够降低体内血管紧张素II的含量。4.对左室功能的改善。从目前的研究表明黄芪皂甙甲具有改善心衰大鼠以上各项指标的作用。进一步工作旨在说明黄芪皂甙甲是否抑制或拮抗体内血管紧张素II受体、以及对心肌细胞和成纤维细胞的纤维化作用。
由于雷米普利类药物在逆转心肌肥厚(抗心肌纤维化)同时，会抑制粒细胞的生成、收缩肾血管以及长期使用造成心脏功能下降，限制了它的广泛使用。而AS-IV都不会产生上述副作用。AS-IV除了具有抗心肌纤维化的作用外，同样可能抑制肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化等，所以AS-IV具有很大市场开发前景。
指标 单位数值体重(HW) 克(g)384左心重(LVW) 克(g)1.04左心重量指数(LVWI) 毫克/克(mg/g)2.11股动脉收缩压(SBP 毫米汞柱(mmHg) 139股动脉舒张压(DBP)毫米汞柱(mmHg) 78左室收缩压(LVSP) 毫米汞柱(mmHg) 160左室舒张压(LVDEP)毫米汞柱(mmHg) 2左室压力微分最大值(+dp/dtmax) 毫米汞柱/秒(mmHg/s) 6720左室压力微分最小值(-dp/dtmin) 毫米汞柱/秒(mmHg/s) 3890心率(BP) 次/分(BPM) 3842.心肌形态学变化2.1左室心肌病理切片(HE染色)见图5无明显异常变化，基本正常形态2.2左室心肌超微结构(电镜)见图6细胞轻度水肿，形态结构基本正常，间质未见胶原原纤维增生。3.循环内分泌指标指标 单位数值心肌环腺苷(cAMP) pmol/mg 388血浆内皮素(ET) pg/L204心肌血管紧张素II(AngII)pmol/mg 134血浆血管紧张素II(AngII)pmol/L 32药物组(AM-1口服组)大鼠1.心肌重量指数及血流动力学指标 单位 数值体重(HW) 克(g) 412左心重(LVW)克(g) 0.99左心重量指数(LVWI) 毫克/克(mg/g) 2.40股动脉收缩压(SBP 毫米汞柱(mmHg)141股动脉舒张压(DBP) 毫米汞柱(mmHg)79左室收缩压(LVSP) 毫米汞柱(mmHg)158左室舒张压(LVDEP) 毫米汞柱(mmHg)1.00左室压力微分最大值(+dp/dtmax) 毫米汞柱/秒(mmHg/s) 6920左室压力微分最小值(-dp/dtmin) 毫米汞柱/秒(mmHg/s) 2930心率(BP) 次/分(BPM)3812.心肌形态学变化2.1左室心肌病理切片(HE染色)见图7局部少量纤维化灶。2.2左室心肌超微结构(电镜)见图8线粒体轻度肿胀，间质胶原原纤维略多。3.循环内分泌指标指标 单位数值心肌环腺苷(cAMP) pmol/mg 346血浆内皮素(ET) pg/L231心肌血管紧张素II(AngII) pmol/mg 299血浆血管紧张素II(AngII) pmol/L 57药物组-2(AM-1腹腔注射组)大鼠1.心肌重量指数及血流动力学指标 单位 数值体重(HW) 克(g) 382左心重(LVW) 克(g) 0.89左心重量指数(LVWI) 毫克/克(mg/g) 2.33股动脉收缩压(SBP 毫米汞柱(mmHg) 151股动脉舒张压(DBP)毫米汞柱(mmHg) 94左室收缩压(LVSP) 毫米汞柱(mmHg) 180左室舒张压(LVDEP)毫米汞柱(mmHg) 0.50左室压力微分最大值(+dp/dtmax) 毫米汞柱/秒(mmHg/s)8100左室压力微分最小值(-dp/dtmin) 毫米汞柱/秒(mmHg/s)4560心率(BP) 次/分(BPM) 4142.心肌形态学变化2.1左室心肌病理切片(HE染色)见图9心肌细胞较纤细，余无明显改变。2.2左室心肌超微结构(电镜)见图10形态结构大体正常，间质未见胶原原纤维增生。3.循环内分泌指标指标单位 数值心肌环腺苷(cAMP) pmol/mg366血浆内皮素(ET)pg/L 225心肌血管紧张素II(AngII) pmol/mg254血浆血管紧张素II(AngII) pmol/L 48
权利要求
1.一种具有抗心肌纤维化作用的黄芪皂甙甲，其特征在于具有下列结构式 黄芪皂甙甲MW＝802
2.一种如权利要求1所述的黄芪皂甙甲在制备抗心肌纤维化作用的药物中的应用。
全文摘要
本发明是具有抗心肌纤维化作用的黄芪皂甙甲，涉及中药技术领域。本发明提供了中药黄芪中的有效成分黄芪皂甙甲。该有效成分具有很好的抗心肌纤维化作用。
文档编号A61P9/00GK1403470SQ01126609
公开日2003年3月19日 申请日期2001年8月31日 优先权日2001年8月31日
发明者吴大正, 胡之壁, 周吉燕, 樊懿 申请人:上海中医药大学