一种治疗、预防心脑血管疾病的水溶性红花提取物及其口服制剂的制作方法

专利名称：一种治疗、预防心脑血管疾病的水溶性红花提取物及其口服制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种预防、治疗心脑血管疾病的水溶性红花提取物及其口服制剂。
脑血管疾病是危害人类生命与健康的常见病和多发病，具有发病率高、致残率高、死亡率高和复发率高的特点，是中老年人致死、致残的主要疾病。在人类各种疾病死因的排列顺序中，脑血管病一直位于前列，成为人类死亡的主要原因之一。近年来，随着我国人们生活水平的不断提高，老龄人口的增多，脑血管疾病发病率呈逐年上升趋势。
红花药用已有上千年的历史。《纲目》记载，红花具“活血，润燥”，《新修本草》记载，红花能“治口噤不语，血结”，《药性考》记载，红花能“生新破瘀”，治“口噤风瘫”。
我国自70年代以来对红花的化学成分进行了广泛的研究，其中主要有黄酮类、木脂素类、多炔类等，多数研究证明，红花的主要有效成分存在于其水溶性部位，为多种水溶性黄酮类化合物的混合物，具有活血化瘀的生理活性。近年来，国内学者对红花水溶性部位的药理作用进行了深入研究，发现其在扩冠、降压、抗血栓、抗凝血、活血化瘀、耐缺氧、免疫抑制等方面都有明显的药理功效。红花水溶性部位对ADP诱导的血小板聚集有明显的抑制作用及解聚作用，对大鼠有较好的抗凝血作用，并随着剂量的增加而增强，红花水溶性部位对血栓的形成有非常显著的抑制作用；红花水溶性部位可影响脑缺血性缺氧后的喘息延续时间。大量的药理实验证明，红花水溶性部位是红花治疗脑血栓形成及其后遗症的重要物质基础之一。
原料药材红花Carthamus tinctorius L.收载于《中华人民共和国药典二000年版》(一部)。现代临床上，红花单味制剂“红花注射液”收载于国家药品标准WS3-B-3825-98，用于治疗闭塞性脑血管疾病，冠心病，脉管炎等，经多年的临床应用，其疗效肯定，它们有用50％红花注射液15ml(含生药75g)加入10％葡萄糖500ml中静脉滴注；10％红花注射液2ml加10％葡萄糖2ml混合注射用于治疗缺血性脑血管疾病、治疗脑动脉硬化症，但该品种为传统的中药注射剂，多为粗提物，基础物质不明确，且成分复杂，缺乏对其质量进行有效控制的方法，由于该制剂为溶液形式，也难以确保其中的有效成分的稳定性。
国内虽然也公开了一些有关红花提取物专利，但多是一些成分不明确的粗提物，在用药方面仍然存在着同样上述的技术缺陷。
从传统红花中药研制开发出疗效确切，毒副作用小，质量可控，使用方便的红花中药剂型，具有可行性和必要性。
本发明提供一种含有水合红花黄色素A和水合红花光色素B的水溶性红花提取物，其中水合红花黄色素A和水合红花黄色素B在该红花提取物中的重量百分含量为50％-100％，优选重量百分含量范围为65％-100％；其中，在该红花提取物中水合红花黄色素A和水合红花黄色素B之间的比例为1∶(0.1-2)。
我们在单味红花临床应用的基础上，对红花的有效部位水溶性成分进行了深入的研究，从干燥花中提取到了含有水合红花黄色素A和水合红花黄色素B水溶性红花提取物。
本发明提取物可以通过常规的提取方法获得，也可采用本发明提取方法，但优选采用本发明提取方法获得，其中本发明提取方法为取干燥红花60-100℃下用水提取2-4次，用水量为10-30倍，每次提取的时间为30-90分钟，合并滤液，滤液减压浓缩至密度为1.00-1.25，加乙醇至醇浓度为60％-90％，于4℃下沉淀24小时，过滤；滤液于60℃减压回收乙醇，加至10倍水稀释后上处理好的弱极性大孔吸附树脂，上样量(相当于生药量)与树脂用量的比例为1∶(0.5-2)(w/v)，用20％-50％乙醇洗2-5个柱体积，收集洗脱液。洗脱液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量相当于生药量与树脂用量的比例为(2-4)∶1(w/v)，先用20％-50％乙醇洗脱2-4个柱体积，弃去；继续用80％-95％乙醇溶液洗脱3-5个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，干燥即得。
本方法最佳为取干燥红花，加水在80℃下提取3次，第一次加20倍水下提取60分钟，第二次加1 5倍水提取60分钟，第三次加1 5倍水提取60分钟，合并提取液；提取液滤过，滤液减压浓缩至密度为1.05(80℃)，加乙醇至醇浓度为80％，于4℃下沉淀24小时，滤过；滤液于60℃减压回收乙醇，加至10倍水稀释后上处理好的DM-130大孔吸附树脂，上样量(相当于生药量)与树脂用量的比例为1∶1(w/v)，用30％乙醇洗脱3个柱体积，收集洗脱液。洗脱液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量相当于生药量与树脂用量的比例为2.8∶1(w/v)，先用30％乙醇洗脱3个柱体积，弃去；继续用95％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，干燥即得。
将有效剂量的本发明提取物和药学上接受的口服药物载体可做成片剂、胶囊、颗粒剂，其中优选为胶囊剂和颗粒剂。
做成胶囊时，本发明红花提取物在胶囊药物中的重量百分比应为2％-80％，其余为填充剂、70％乙醇溶液和适量橘子香精。
本发明胶囊剂药物具体的组方和制备方法为红花提取物50g、淀粉100g、糊精50g、90％乙醇溶液适量、微粉硅胶适量。
称取处方量的红花提取物、淀粉、糊精过80目筛混匀两次，加入90％乙醇溶液混合制软材，软材以手握成团，用手指按压裂开为佳，过24目筛挤压制湿颗粒，50℃鼓风干燥箱中干燥，颗粒近干时取出过20目筛整粒，继续烘制一段时间至干，总共约烘制一小时左右，将烘干的颗粒称重，按0.8％(W/W)加入微粉硅胶，先与颗粒中的细粉混合均匀，再加入颗粒中混合均匀，颗粒填装入胶囊即得。
做成颗粒剂时，本发明提取物在颗粒剂药物中的重量百分含量为2％-68％，其余为填充剂、适量90％乙醇溶液和适量微粉硅胶。
本发明颗粒剂药物的具体组方和制备方法为红花提取物100g、蔗糖1000g、乳糖400g、柠檬酸7.5g、70％乙醇溶液适量、橘子香精适量。
蔗糖粉碎过80目筛，将蔗糖和乳糖放入60℃烘箱中干燥3小时，称取处方量的蔗糖和乳糖过80目筛混匀两次，然后按等量倍增法加入红花提取物，混合均匀，柠檬酸溶于部分70％乙醇溶液，加入固体粉末中制软材，视软材的干湿程度再酌加适量70％乙醇制成适宜软材，过16目筛挤压制湿颗粒，50℃鼓风干燥箱中干燥，颗粒近干时取出过14目筛整粒，继续烘制一段时间至干，总共约烘制一小时左右，颗粒的分级将烘干的颗粒分别过一号筛和四号筛，弃去不能通过一号筛的粗颗粒和通过四号筛的细粉，喷洒香精颗粒置于包衣锅内滚动，橘子油香精溶于无水乙醇中(1％)，通过喷枪将其喷入。然后将颗粒放入密闭容器中，密封12小时，分装、即得。
药理毒理研究结果表明，本发明提取物口服给药和已有红花药物提取物相比体内吸收良好，可明显减少大脑中动脉栓塞模型脑缺血区坏死面积，抑制体外血栓的形成，延长凝血时间；毒理实验表明，红花提取物疗效显著、毒副作用小；另外本发明基础物质明确、有效成分质量稳定可控、而且服用方便、吸收好。
红花水溶性提取物的制备实施例1取干燥红花，加水在80℃下提取3次，第一次加20倍水下提取60分钟，第二次加15倍水提取60分钟，第三次加15倍水提取60分钟，合并提取液；提取液滤过，滤液减压浓缩至密度为1.05(80℃)，加乙醇至醇浓度为80％，于4℃下沉淀24小时，滤过；滤液于60℃减压回收乙醇，加至10倍水稀释后上处理好的DM-130大孔吸附树脂，上样量(相当于生药量)与树脂用量的比例为1∶1(w/v)，用30％乙醇洗脱3个柱体积，收集洗脱液。洗脱液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量相当于生药量与树脂用量的比例为2.8∶1(w/v)，先用30％乙醇洗脱3个柱体积，弃去；继续用95％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，干燥即得，测定。
实施例2取干燥红花，加水在70℃下提取2次，第一次加20倍水下提取60分钟，第二次加15倍水提取60分钟，第三次加15倍水提取60分钟，合并提取液；提取液滤过，滤液减压浓缩至密度为1.00(80℃)，加乙醇至醇浓度为60％，于4℃下沉淀24小时，滤过；滤液于60℃减压回收乙醇，加至10倍水稀释后上处理好的DM-130大孔吸附树脂，上样量(相当于生药量)与树脂用量的比例为1∶0.8(w/v)，用25％乙醇洗脱2个柱体积，收集洗脱液。洗脱液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量相当于生药量与树脂用量的比例为2∶1(w/v)，先用25％乙醇洗脱2个柱体积，弃去；继续用80％乙醇溶液洗脱3个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，干燥即得，测定。
实施例3取干燥红花，加水在90℃下提取4次，第一次加20倍水下提取60分钟，第二次加15倍水提取60分钟，第三次加15倍水提取60分钟，合并提取液；提取液滤过，滤液减压浓缩至密度为1.20(80℃)，加乙醇至醇浓度为90％，于4℃下沉淀24小时，滤过；滤液于60℃减压回收乙醇，加至10倍水稀释后上处理好的DM-130大孔吸附树脂，上样量(相当于生药量)与树脂用量的比例为1∶2(w/v)，用40％乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液。洗脱液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量相当于生药量与树脂用量的比例为4∶1(w/v)，先用30％乙醇洗脱4个柱体积，弃去；继续用95％乙醇溶液洗脱5个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，干燥即得，测定。
口服制剂的制备实施例4 颗粒剂的制备红花提取物100g、蔗糖1000g、乳糖400g、柠檬酸7.5g、70％乙醇溶液适、橘子香精适量，蔗糖粉碎过80目筛，将蔗糖和乳糖放入60℃烘箱中干燥3小时，称取处方量的蔗糖和乳糖过80目筛混匀两次，然后按等量倍增法加入红花提取物，混合均匀，柠檬酸溶于部分70％乙醇溶液，加入固体粉末中制软材，视软材的干湿程度再酌加适量70％乙醇制成适宜软材，过16目筛挤压制湿颗粒，50℃鼓风干燥箱中干燥，颗粒近干时取出过14目筛整粒，继续烘制一段时间至干，总共约烘制一小时左右，颗粒的分级将烘干的颗粒分别过一号筛和四号筛，弃去不能通过一号筛的粗颗粒和通过四号筛的细粉，喷洒香精颗粒置于包衣锅内滚动，橘子油香精溶于无水乙醇中(1％)，通过喷枪将其喷入。然后将颗粒放入密闭容器中，密封12小时，分装、即得。
实施例5 胶囊剂的制备红花提取物50g、淀粉100g、糊精50g、90％乙醇溶液适量、微粉硅胶适量；称取处方量的红花提取物、淀粉、糊精过80目筛混匀两次，加入90％乙醇溶液混合制软材，软材以手握成团，用手指按压裂开为佳，过24目筛挤压制湿颗粒，50℃鼓风干燥箱中干燥，颗粒近干时取出过20目筛整粒，继续烘制一段时间至干，总共约烘制一小时左右，将烘干的颗粒称重，按0.8％(W/W)加入微粉硅胶，先与颗粒中的细粉混合均匀，再加入颗粒中混合均匀，颗粒填装入胶囊即得。
实验例1.红花提取物胶囊对大鼠局部脑缺血损伤的影响1.1材料受试样品红花提取物胶囊，按实施例5制备。规格200mg(含红花提取物原料50mg)/粒，临用前用生理盐水配制成所需浓度的溶液。
阳性对照药尼莫地平片，中日合资河北东龙药业有限公司，规格25mg/片，批号000703，批准文号冀卫药准字(1995)第040128号，用前以生理盐水配成1.8mg/ml的混悬液。
阳性对照药脑得生咀嚼片，山东绿叶制药股份有限公司，规格1.1g/片，批号20010426，批准文号国药准字Z20000073，用前以生理盐水配成125mg/ml的混悬液。红四氮唑美国Sigma公司产品，临用前用生理盐水配成4％溶液。数码相机Olympus公司实验动物普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g-350g，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，合格证号鲁动质字200106005号。
1.2方法与结果动物随机分为假手术组(i.g.NS)，模型对照组(i.g.生理盐水)，尼莫地平组(i.g.Nim，12mg/kg)，脑得生组(i.g.NDS，1g/kg)，SF小剂量组(i.g.SF，10mg/kg)，SF中剂量组(i.g.SF，20mg/kg)，SF大剂量组(i.g.SF，40mg/kg)，每组10只。禁食12小时后，各组动物分别灌胃相应药物，给药体积1ml/100g。2小时后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分离左侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将栓线(选用直径0.24mm尼龙线，长度5.0cm)由颈外动脉插入至颅内，遇轻微阻力时停止，插入深度约为2cm。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成左侧大脑中动脉缺血模型；假手术组仅进行左侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离(以上实验均在23℃～25℃进行)。24小时后按文献方法及标准观察并记录大鼠的行为障碍(1)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为0分，如手术对侧前肢出现腕屈曲计为1分，肘屈曲计为2分，肩内旋计为3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩内旋者，计为4分。(2)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，计为0分，如向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重三度，分别计为1，2和3分。(3)将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为0分。同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为1，2和3分。(4)动物有不停地向一侧转圈者，计为1分。根据标准评分，满分为11分，分数越高，表示动物行为障碍越严重。行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成5片，脑片用红四氮唑(TTC)染色，正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色，染色后照相，用中国航空航天大学病理图像分析软件求梗塞面积比。数据用X±S表示，以组间t检验进行统计学处理。
结果显示，缺血24小时后，大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，达到全脑的25％左右；给予不同剂量的SF，动物行为障碍有不同程度的减轻，大鼠脑缺血区也有明显好转，且呈剂量依赖性(表1)。
表1 花提取物胶囊对大鼠局部脑缺血损伤的影响(n＝10，X±S)组别 行为障碍 缺血面积(％)假手术组 0 0模型对照组 10.10±1.37 24.26±4.13NDS组 7.30±2.67**19.90±3.02*Nim组 6.90±2.33**13.09±7.11**SF大剂量组 7.20±1.93**12.27±4.73**SF中剂量组 7.50±3.03*18.41±2.84*SF小剂量组 8.80±2.44△21.06±3.20△与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，△P＞0.05.1.3结论红花提取物胶囊可明显改善脑缺血大鼠的行为障碍，缩小缺血区范围，对缺血性脑损伤有明显的保护作用。
试验例2.红花提取物胶囊对大鼠体内血栓形成的影响2.1 材料受试样品红花提取物胶囊，按本发明实施例5制备。规格200mg(含红花提取物原料50mg)/粒，临用前用生理盐水配制成所需浓度的溶液。
阳性对照药脑得生咀嚼片，山东绿叶制药股份有限公司，1.1g/片，批号20010426，批准文号国药准字Z20000073，用前以生理盐水配成125mg/ml的混悬液。
普通级Wistar大鼠，雄性，体重230g～250g，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，合格证号鲁动质字200106005号。
2.2 方法与结果2.2.1 对动—静脉旁路血栓形成的影响[3]动物随机分为空白组(i.g.生理盐水)，脑得生组(i.g.1g/kg)，SF小剂量组(i.g.SF 10mg/kg)，SF中剂量组(i.g.SF 20mg/kg)，SF大剂量组(i.g.SF 40mg/kg)，每组10只。禁食12小时后，各组动物分别灌胃相应药物，2小时后，水合氯醛麻醉(350mg/kg，i.p.)，分离右侧颈总动脉及左颈外静脉，在聚乙烯管中放入一根长5cm已称重的七号丝线。以含肝素钠(50U/ml)的生理盐水溶液充满聚乙烯管，聚乙烯管的一端插入左颈外静脉，另一端插入右颈总动脉。打开夹闭血管的动脉夹，使血流从右总颈动脉流经聚乙烯管后，返回左颈外静脉。开放血流15min后迅速取出丝线称重，减去丝线重量即得血栓湿重。数据用X±S表示，组间t检验进行统计学处理。结果显示，NDS组、SF大、中剂量组血栓重量明显低于空白对照组(表2)。
表2 红花提取物胶囊对大鼠动—静脉旁路血栓形成的影响(X±S)组别 血栓湿重 抑制率(％)空白对照组 26.09±4.21NDS组15.43±5.15**40.86SF大剂量组 13.01±6.81**50.13SF中剂量组 16.25±3.91**37.72SF小剂量组 20.51±9.79△21.38与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；△P＞0.05。
2.2.2对大鼠静脉血栓形成的影响动物随机分为空白组(i.g.生理盐水)，脑得生组(i.g.NDS 1g/kg)，SF小剂量组(i.g.SF 10mg/kg)，SF中剂量组(i.g.SF 20mg/kg)，SF大剂量组(i.g.SF40mg/kg)，每组10只。禁食12小时后，各组动物分别灌胃相应药物，2小时后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，开腹分离下腔静脉，于左肾静脉下方用粗丝线结扎下腔静脉，缝合腹部。6小时后重新开腹，在结扎处下方2cm处夹闭血管，剖开管腔，取出血栓，称重。数据用X±S表示，组间t检验进行统计学处理。结果显示NDS组、SF大、中剂量组血栓重量明显低于空白对照组(表3)。
表3 红花提取物胶囊对大鼠静脉血栓形成的影响(X±S)组别血栓湿重抑制率(％)
空白对照组 29.91±17.16NDS组 14.01±5.76*53.16SF大剂量组 9.17±6.65**71.48SF中剂量组 15.77±4.26*47.29SF小剂量组 23.36±11.20△21.90与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；△P＞0.05。
2.3 结论红花提取物胶囊呈剂量依赖性抑制大鼠体内动—静脉旁路血栓及静脉血栓的形成。
试验例3.红花提取物胶囊对小鼠凝血时间的影响3.1材料受试样品红花提取物胶囊，山东省天然药物工程技术研究中心提供，为橙黄色的粉末，易溶于水。批号20010329，规格200mg(含红花提取物原料50mg)/粒，临用前用生理盐水配制成所需浓度的溶液。
阳性对照药脑得生咀嚼片，山东绿叶制药股份有限公司，1.1g/片，批号20010426，批准文号国药准字Z20000073；用前以生理盐水配成100mg/ml的混悬液清洁级级昆明种小鼠，雄性，体重18.g～22g，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，合格证号鲁动质字200106003号。
3.2方法与结果昆明种小鼠60只，随机分为空白组(i.g.生理盐水)，脑得生组(2g/kg)，SF小剂量组(i.g.SF 20mg/kg)，SF中剂量组(i.g.SF 40mg/kg)，SF大剂量组(i.g.SF 80mg/kg)，每组12只。禁食12小时后，各组动物分别灌胃相应药物，给药体积2ml/100g；2小时后，眼眶取血，用玻片法测定凝血时间。数据用X±S表示，组间t检验进行统计学处理。
结果显示红花提取物胶囊大、中剂量组凝血时间明显长于空白对照组(表4)。
表4 红花提取物胶囊对小鼠凝血时间的影响(X±S)组别 凝血时间空白对照组 67.00±21.21NDS组 89.17±17.43**SF大剂量组 112.75±42.03**SF中剂量组 94.08±35.68*SF小剂量组 81.92±24.84△
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；△P＞0.05。
3.3结论红花提取物胶囊明显延长小鼠凝血时间，且呈剂量依赖性。
试验例4.红花提取物胶囊对大鼠血液流变性的影响4.1材料受试样品红花提取物胶囊，山东省天然药物工程技术研究中心提供，为橙黄色的粉末，易溶于水。批号20010329，规格200mg(含红花提取物原料50mg)/粒，临用前用生理盐水配制成所需浓度的溶液。
阳性对照药脑得生咀嚼片，山东绿叶制药股份有限公司，1.1g/片，批号20010426，批准文号国药准字Z20000073，用前以生理盐水配成125mg/ml的混悬液。
普通级wistar大鼠，雄性，体重350～430g，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，合格证号鲁动质字200106005号。LBY-N6A血液流变学测试仪北京普利生公司产品。
4.2方法与结果动物随机分为空白组(i.g.生理盐水)，脑得生组(i.g.NDS 1g/kg)，SF小剂量组(i.g.SF 10mg/kg)，SF中剂量组(i.g.SF 20mg/kg)，SF大剂量组(i.g.SF40mg/kg)，每组10只。禁食12小时后，各组动物分别灌胃相应药物，2小时后，水合氯醛麻醉(350mg/kg，i.p.)心脏采血5ml/只，以0.5％肝素抗凝，用血液流变学测试仪测定全血粘度、血浆粘度等指标。数据用X±S表示，组间t检验进行统计学处理。
结果显示，红花提取物胶囊大、中剂量均可降低大鼠全血粘度、血浆粘度和红细胞压积(表5)。
表5 红花提取物胶囊对大鼠血液流变学的影响(X±S)全血粘度(mPa.s)血浆粘度 红细胞压积组别低切变率 中切变率高切变率 (mPa.s) (％)空白对照组5.19±0.47 6.38±0.59 13.45±1.05 1.60±0.20 0.53±0.05脑得生组 4.33±0.20**5.31±0.26**11.52±0.53**1.43±0.03*0.47±0.06*SF大剂量组4.31±0.46**5.27±0.58**11.45±1.09**1.46±0.04*0.46±0.04*SF中剂量组4.55±0.57*5.58±0.73*12.10±1.47*1.40±0.20*0.53±0.06△SF小剂量组4.93±0.38△6.05±0.47△12.90±0.80△1.46±0.15△0.52±0.05△与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，△P＞0.05。
结论红花提取物胶囊可降低大鼠全血粘度、血浆粘度和红细胞压积。
试验例5、1材料药物红花提取物胶囊，按实施例5制备，规格200mg(含红花提取物50mg)/粒。临用前用生理盐水配制成所需浓度的溶液。
动物清洁级昆明种小鼠，雄性，体重18.g～22g，雌雄各半，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，合格证号鲁动质字200106003号。Wistar大鼠，170-200g，雌雄各半，由山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，合格证号鲁动字200106005号。
仪器张力传感器(JZ100型)、压力传感器(YP200型)均为河北高碑店新航机电设备有限公司生产。PowerLab多导生理记录仪，澳大利亚ADI-Instrument公司生产。单道心电图机，FX-2111型，北京福田电子医疗仪器有限公司。
2方法与结果2.1红花提取物胶囊对小鼠一般行为的影响取小鼠40只，按体重随机分为4组，每组10只，雌雄各半，空白对照组(给予生理盐水)，红花提取物胶囊高(160mg/kg)、中(80mg/kg)、低(40mg/kg)剂量组，灌胃给药。给药容积为0.4ml/20g体重，给药后立即至2小时观察小鼠的一般行为改变[1]。
结果显示红花提取物胶囊高、中、低3个剂量对小鼠耳壳血管及毛色无明显影响，无瞳孔扩大和缩小，无竖毛，无眼裂增大或缩小现象，步态、肌力正常，无翻正反射消失现象，说明红花提取物胶囊对小鼠一般行为无影响。
2.2 红花提取物胶囊对小鼠机能协调的影响按文献[1]法稍作改良，将小鼠置于与水平面成70°角的光滑板上，对小鼠进行筛选，取不跌落小鼠40只，按体重随机分为4组，分组及给药同上。灌胃给药，分别于给药后30min、60min、90min、120min、150min、180min观察各组小鼠的跌落率(以连续放3次，跌落2次者为阳性)，并与阴性对照组进行x2检验比较(表6)。
表6 红花提取物胶囊对小鼠机能协调的影响(n＝10)组别 剂量0min给药后不同时间跌落率(％)
(mg/kg) 30min 60min 90min 120min 150min 180min生理盐水 等容量 0 0 0 0 0 0 0氯丙嗪10 0 80**90**100**70**70**40160 0 0 0 0 0 0 0红花 80 0 0 0 0 0 0 0提取物40 0 0 0 0 0 0 0*P＜0.05，**P＜0.01，与生理盐水组比较结果显示氯丙嗪组小鼠在30min-150min之间有明显的跌落，红花提取物胶囊高、中、低3个剂量组小鼠跌落率均为零，说明红花提取物胶囊对小鼠机能协调无影响。
2.3红花提取物胶囊对小鼠阈下剂量戊巴比妥钠的协同作用取小鼠40只，按体重随机分为4组，雌雄各半，阴性对照组(给予等容量生理盐水)，红花提取物胶囊高(160mg/kg)、中(80mg/kg)、低(40mg/kg)三个剂量组，灌胃给药后2小时腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg，以翻正反射消失为睡眠指标，观察各组在注射戊巴比妥钠30min内的睡眠鼠数(翻正反射消失达1min以上者为阳性)，并与阴性对照组进行X2检验(表7)。
表7 红花提取物胶囊对小鼠阈下剂量戊巴比妥钠的协同作用(n＝10)组别剂量(mg/kg)睡眠鼠数(只)生理盐水-- 01600红花提取物胶囊 80 040 0结果显示红花提取物胶囊高、中、低3个剂量组的小鼠未出现睡眠现象，与阴性对照组相比较无显著差异；说明红花提取物胶囊与小鼠阈下剂量戊巴比妥钠无协同作用。
2.4 红花提取物对麻醉大鼠心血管系统及呼吸系统的影响取大鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只，分别为空白对照组(给予生理盐水)、红花提取物高(80mg/kg)、中(40mg/kg)、低(20mg/kg)3个剂量组。药物用生理盐水溶解，给药体积均为1ml/kg。动物称重，灌胃，腹腔注射20％乌拉坦麻醉(1.2g/kg)。分离一侧颈总动脉，作动脉插管，将动脉插管的另一端连接到装有三通阀的压力传感器上，压力信号经传感器输入PowerLab多导生理记录仪。将针形电极分别插入动物的右前肢、左下肢及右下肢皮下，将心电信号输入FX-2111心电图机。在剑突穿线并连于张力传感器，将胸廓张力信号通过传感器输入PowerLab多导生理记录仪。分别于给药后10min、20min、30min、60min、120、180min记录麻醉大鼠的平均动脉压(MAP)、收缩压(SAP)、舒张压(DAP)、P-P(s)、P-R(s)、QRS(s)、Q-T(s)、T、呼吸频率和呼吸幅度。实验数据以X±S表示，各组与空白组进行组间T检验。
结果显示与空白组相比，红花提取物胶囊(80mg/kg，40mg/kg，20mg/kg)对麻醉大鼠平均动脉压、收缩压和舒张压、心率、心电以及呼吸频率和呼吸幅度均无明显影响；说明红花提取物胶囊对麻醉大鼠心血管系统及呼吸系统无影响；3试验结论红花提取物胶囊160mg/kg，80mg/kg，40mg/kg(相当的原料药量)灌胃给药对小鼠的一般行为和协调运动无明显影响，对小鼠腹腔注射阈下剂量戊巴比妥钠无协同作用，表明该药高、中、低3个剂量对小鼠精神神经系统无明显影响。红花提取物胶囊80mg/kg，40mg/kg，20mg/kg灌胃给药对麻醉大鼠心血管、和呼吸系统无明显影响。
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的水溶性红花提取物，其特征为该提取物中含有重量百分含量为50％-100％红花黄色素A和红花黄色素B。
2.据权利要书1所述的红花提取物，其特征为该提取物中含有重量百分含量为65％-100％红花黄色素A和红花黄色素B。
3.根据权利要书1或2所述的红花提取物，其特征为该提物中红花黄色素A红花黄色素B＝1∶0.1-2。
4.根据权利要求1所述的红花提取物取干燥红花60-100℃下提取2-4次，每次提取的时间为30-90分钟，合并滤液，滤液减压浓缩至密度为1.00-1.25，加乙醇至醇浓度为60％-90％，于4℃下沉淀24小时，滤过；滤液于60℃减压回收乙醇，加至10倍水稀释后上处理好的弱极性大孔吸附树脂，上样量(相当于生药量)与树脂用量的比例为1∶(0.5-2)(w/v)，用20％-50％乙醇洗2-5个柱体积，收集洗脱液。洗脱液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量相当于生药量与树脂用量的比例为(2-4)∶1(w/v)，先用20％-50％乙醇洗脱2-4个柱体积，弃去；继续用80％-95％乙醇溶液洗脱3-5个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，干燥即得
5.根据权利要求4所述的红花提取物，其特征为该提取物通过以下方法获得取干燥红花，加水在80℃下提取3次，第一次加20倍水下提取60分钟，第二次加15倍水提取60分钟，第三次加15倍水提取60分钟，合并提取液；提取液滤过，滤液减压浓缩至密度为1.05(80℃)，加乙醇至醇浓度为80％，于4℃下沉淀24小时，滤过；滤液于60℃减压回收乙醇，加至10倍水稀释后上处理好的DM-130大孔吸附树脂，上样量(相当于生药量)与树脂用量的比例为1∶1(w/v)，用30％乙醇洗脱3个柱体积，收集洗脱液。洗脱液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量相当于生药量与树脂用量的比例为2.8∶1(w/v)，先用30％乙醇洗脱3个柱体积，弃去；继续用95％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，干燥即得。
5.含有权利要求1所述的红花提取物口服制剂，其特征为片剂、胶囊、颗粒剂。
6.据权利要求5所述的口服制剂，其特征为该提取物的剂型为胶囊和颗粒剂。
7.根据权利要求6所述的口服制剂，其中该提取物在该胶囊剂药物中的重量百分含量为2％-80％，其余为填充剂和适量的70％乙醇溶液及橘子香精。
8.根据权利要求7所述的口服制剂，其中该胶囊剂的组方和制备方法为红花总黄酮50g、淀粉100g、糊精50g、90％乙醇溶液适量、微粉硅胶适量；称取处方量的红花总黄酮、淀粉、糊精过80目筛混匀两次，加入90％乙醇溶液混合制软材，软材以手握成团，用手指按压裂开为佳，过24目筛挤压制湿颗粒，50℃鼓风干燥箱中干燥，颗粒近干时取出过20目筛整粒，继续烘制一段时间至干，总共约烘制一小时左右，将烘干的颗粒称重，按0.8％(W/W)加入微粉硅胶，先与颗粒中的细粉混合均匀，再加入颗粒中混合均匀，颗粒填装入胶囊即得。
9.根据权利要求6所述的口服制剂，其中该提取物在颗粒剂药物中的重量百分含量为2％-68％，其余为填充剂和适量90％乙醇溶液及微粉硅胶。
10.根据权利要求8所述的口服制剂，其中该颗粒剂的组方和制备方法为红花总黄酮100g、蔗糖1000g、乳糖400g、柠檬酸7.5g、70％乙醇溶液适、橘子香精适量，蔗糖粉碎过80目筛，将蔗糖和乳糖放入60℃烘箱中干燥3小时，称取处方量的蔗糖和乳糖过80目筛混匀两次，然后按等量倍增法加入红花总黄酮，混合均匀，柠檬酸溶于部分70％乙醇溶液，加入固体粉末中制软材，视软材的干湿程度再酌加适量70％乙醇制成适宜软材，过16目筛挤压制湿颗粒，50℃鼓风干燥箱中干燥，颗粒近干时取出过14目筛整粒，继续烘制一段时间至干，总共约烘制一小时左右，颗粒的分级将烘干的颗粒分别过一号筛和四号筛，弃去不能通过一号筛的粗颗粒和通过四号筛的细粉，喷洒香精颗粒置于包衣锅内滚动，橘子油香精溶于无水乙醇中(1％)，通过喷枪将其喷入。然后将颗粒放入密闭容器中，密封12小时，分装、即得
11.一种含有权利要求1所述的红花提取物的药物用途，其特征为制备治疗、预防动脉硬化、冠心病、脑血栓、脑缺血、心绞痛、心肌梗塞心脑血管疾病的药物用途。
全文摘要
本发明公开了一种红花水溶性提取物及其制备方法，本发明水溶性提取物中水合红花黄色素A和水合红花黄色素B的含量大于50％以上；并公开了含有该提取物的口服制剂以及它们的制备方法，本发明提取物口服制剂具有红花提取物疗效显著、毒副作用小，而且有效成分质量稳定可控、吸收好、服用方便。
文档编号A61P9/10GK1429830SQ0113866
公开日2003年7月16日 申请日期2001年12月29日 优先权日2001年12月29日
发明者李桂生, 张达磊, 马成俊, 田京伟, 王振华, 刘珂, 傅风华, 刘志峰 申请人:山东绿叶制药股份有限公司