改善中枢神经系统功能的方法

专利名称：改善中枢神经系统功能的方法
技术领域：
本发明涉及改善中枢神经系统功能的方法。
背景中枢神经系统是一种在一起相互作用以具有广泛的包括运动、导航、认知、语言、视觉和情绪在内的各种功能的组织的复合系统，该组织包括细胞、液体和化学物质。不幸的是，可能会出现各种中枢神经系统衰弱性功能失调、并破坏其中一些功能或所有这些功能。这些功能失调的范围很广，包括例如，缺少遗传因子，如Tay-Sachs之类的遗传疾病；细胞进程发生故障，如帕金森氏病；外伤，如头部损伤；退行性疾病，如阿尔茨海默氏疾病；以及缘于缺氧的损伤，如由中风或窒息所致的损伤。
对于损伤后的中枢神经系统功能的上述功能失调的恢复治疗，通常局限于药物、以及适应疗法或行为治疗。这些方法通常局限在其逆转损伤(或阻止退变)和恢复正常功能的能力。
最近的研究已探明有可能使用细胞来恢复中枢神经系统的功能。使用动物模型的数据提示细胞植入或移植可能是恢复损伤后的中枢神经系统功能的一种有效方法。用于该研究中的细胞包括各种非造血前体细胞、例如来自猪的和人的胎儿或胚胎的神经细胞(见，例如，Nairne，S.P.，动物对人的移植；异体移植的道德规范LondonNuffield Council of Bioethics，1996)；无限增殖化胎儿神经细胞(Ren等，神经干细胞和bFGF联合给药提高大鼠局灶性小脑梗塞后的功能恢复，Soc.Neurosci.Abstr.，262291，2000)；间质骨髓干细胞和祖细胞(Chen等，大鼠进行MCAO后用培养的骨髓基质细胞进行的大脑内的移植，美国神经移植和修复学会，Program and Abstracts)，Volume 72000，A-3)，包括多能成人干细胞(参见，例如，Keene等，将来源于人的骨髓的多能成人干细胞移植至大鼠CNS的表型表达，美国神经移植和修复学会，Program and Abstracts，Volume 72000，6-3)；鼠的神经干细胞(Marciniak，神经干细胞、与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF))联合可代表一种治疗中风的方法，supra，A-1)、包括无限增殖化的鼠神经上皮干细胞(Modo等，MCAO大鼠的干细胞的移植部位影响不同的行为试验的恢复，supra，8-2)；成年小鼠和人的神经干细胞和祖细胞(参见，例如，Steindler等，人脑中的干细胞，supra，8-3)；胎儿的中脑细胞(Mendez等，帕金森氏病中同时出现的壳内和黑质内的致死的多巴胺能移植物First Clinical Trials，supra，5-3)；来源于睾丸的塞尔托利氏细胞(Cameron等，通过模拟的塞尔托利氏细胞和NT2细胞的微重力共培养的SNAC的形成，supra，C-)、和天然的骨髓提取液(Mahmood等，骨髓细胞移植对脑外伤后的Wistar大鼠的影响，supra，A-4)。为了克服许多这类细胞的可用性的不足，研究人员已致力于研究给予癌细胞例如畸胎癌细胞的可能性(Kondziolka等，对中风患者移植培养的人神经元细胞，Neurology，2000，55565-569)，尽管使用癌性细胞存在固有的危险。对细胞疗法的一些研究已进行到临床阶段。总之，用于上述研究的细胞给患者提出了可能的冒险机会、和/或难以得到。
发明简述本发明描述了通过给予来源于血液的细胞如来源于脐带血的细胞而改善中枢神经系统的功能的方法。对于“脐带血”，我们意谓的是来源于婴儿出生时的胎盘或脐带的血。有利的是，这些细胞的供给很容易，而不需要诉诸于胎儿或胚胎或获得患者自己的脑细胞。例如，目前将脐带血细胞存放库中以在其它应用中自身使用或同种异体使用。结果，这些细胞不需要无限增殖，因此，由于使用无限增殖细胞而可能导致的潜在的癌性副作用或其它有害的并发症的风险就减少了。由于这些细胞是原生细胞，它们也不太可能具有致癌性或引起其它相关问题。而且，使用自身或免疫学上相配的脐带血细胞可降低排斥的风险。
而且，在某些情况下，例如，如果大量的脐带血不容易迅速得到，那么使用相对小样本脐带血或其它来源的相对未分化的前体细胞可获得适合的细胞群，如美国专利No.5,674,750和5,925,567中所述，其整个说明书在此引作参考。
一种改善患者的中枢神经系统的功能的方法，包括给予该患者等分(analiquot of cells)来源于脐带血的细胞。
一方面，本发明描述了一种改善患者的中枢神经系统的功能的方法，包括给予该患者等分来源于血液的细胞，该等分试样(aliquot)包含干细胞。
另一方面，本发明描述了一种改善患者的中枢神经系统的功能的方法，包括给予该患者等分来源于血液的细胞和生长因子。
本发明实施方案也包括下列一个或多个特征。
细胞来源于脐带血。细胞来源于外周血。该方法还包括通过从脐带血分离所需的细胞群得到等分细胞(the aliquot of cells)。生长因子选自制瘤素M和下列家族的生长因子FGF、神经营养蛋白(neurotrophin)、IGF、CNTF、EGF、TGF-β、LIF、白介素、PDGF和VEGF。该方法还包括获得细胞样品和纯化样品以得到等分试样。该方法还包括获得细胞样品和通过ex vivo方法对样品中至少一种所选择的细胞群进行扩充(expansion)以得到等分试样。该等分试样细胞包括同种异体的细胞。或者，或另外，该等分试样细胞包括自身的细胞。此改善结果导致中枢神经系统外伤的恢复、中枢神经系统损伤或疾病的修复、和/或中枢神经系统组织的再生。该改善包括可测定的中风恢复。此改善是中风恢复的结果。此改善是中风后组织再生所致。此改善是包含在所给予的细胞中的遗传因子所致。该遗传因子对于所给予的细胞是内源性的。已将该遗传因子外源性地加入到所给予的细胞中。该改善包括头外伤恢复和/或修复。此改善是由头外伤后的组织再生所致。将细胞经脑间给药。该细胞为CD 34+/-、Lin-细胞或前体细胞。将该细胞分为CD2-、CD3-、CD14-、CD16-、CD19-、CD24-、CD56-、CD66b-、血型糖蛋白A-、flk-1+、CD45+、CXCR4+、MDR+。此改善在下列任一疾病的治疗中产生帕金森氏病、阿尔茨海默疾病、杭廷顿氏舞蹈病、ALS、MS、Tay-Sacks、以及大脑麻痹。该方法还包括给予患者细胞分化因子或神经指导分子(neural guidance molecule)。
另一方面，本发明描述了改善患者的中枢神经系统功能的方法，包括(i)通过下述步骤获得含预定的细胞靶群的等分试样(a)将细胞的初始样品导入生长培养基中；(b)使预定的靶群细胞分裂；和(c)在步骤(b)的同时、步骤(b)过程的间歇、或步骤(b)之后，将生长培养基中的这些细胞与选择因子接触、从而在生长培养基中的其它细胞中选择靶群细胞；和(ii)给予患者该等分试样。
选择因子可包括许多对靶细胞或非靶细胞的第一种群具有亲合力的选择性结合分子。初始样品可以是脐带血或来源于脐带血。等分细胞可包括CD34+/-、Lin-细胞。扩充可以是克隆基因的扩充(expansion may be clonogenic)。
本文中的术语“血液”是指外周的、胎儿的和脐带的血，不包括骨髓。
短语“来源于血液的细胞”是指相对未分化的细胞、并不包括分化的淋巴细胞例如T或B细胞。
从说明书和附图以及权利要求书中显然可发现本发明的其它特征和优势。


图1所示为根据本发明的一种治疗CNS损伤患者的方法的简图；图2-2A所示用来说明通过选择获得适于本发明使用的细胞的方法，图2所示为靶细胞的阳性选择方法的高度放大的图解视图，图2A所示为非靶细胞的阴性选择方法的高度放大图解视图；图3所示为用于中风模型的大鼠的示意性透视图，图3A为大鼠的近侧MCA(proximal MCA)阻塞(occlusion)的示意图；图4所示为接受干细胞实质内给药的大鼠的示意图；图5-5D所示为在中风模型大鼠中所进行的行为试验的结果。
发明详述治疗患有CNS损伤或损害的患者的优选方法如图1所示。根据此方法，患者接受治疗剂量的血源细胞。该细胞可从例如脐带血细胞库获得。或者，可将脐带血细胞经过一种选择步骤，例如根据下述步骤以及美国专利No.5,925,567所述来选择CD 34+/-、Lin-细胞，这样可以给予这些细胞的相对浓缩的样品。如果需要，在给予患者前可扩充CD 34+/-、Lin-细胞的种群，如美国专利No.5,925,567中所述。如果需要，可在脐带血细胞或CD 34+/-、Lin-细胞中加入一种辅助剂例如生长因子(growth factor)或遗传因子(geneticelement)，或者将它们联合加入。
将细胞给予患者后，使用诸如下述方法，一段时间，如90天后对患者的CNS功能进行检测以确定已出现的功能的恢复程度。如果测得恢复还不完全，就要进一步给予一定剂量的细胞、并重复评价。如果需要，可以更频繁地测定CNS功能，例如30天后，而且如果重复治疗，则需在此进一步治疗期间定期地进行测定，从而监测治疗的有效性和CNS功能改善的程度。
采用任意适合的方法都可将该细胞给予患者。一种适合的方法是大脑内注射，可直接注入大脑(实质内，intraparenchymally)或者注入脑脊液内(脑室内或池内，intraventricularly or intracisternally)。通常这些细胞是包含在药学上可接受的液体培养基中。(细胞的)给予可以重复或连续进行(例如，通过连续灌输注入脑脊液中)。一般而言，多重给药方式通常要间隔至少2-7天分别使用。
如果将细胞注射到大脑中，则将患者的头固定在标准的立体定位框架中，并且对用于给予细胞的部位进行定位，例如通过标准的CT或MRI扫描。在头盖骨上钻一小孔，用注射器将细胞注入所需的部位。
细胞的适合用量将根据患者所遭受的CNS损害或破坏的总量、患者的体重、以及其它因素而改变。通常，每次给予的剂量范围为大约100,000-1,000,000,000细胞，典型的是大约1,000,000-10,000,000细胞。
优选，所给予的细胞为非胎儿的、非胚胎的，并且来源于血液的细胞。适合的来源包括新鲜的脐带血，从脐带血分离的CD 34+/-、Lin-细胞，和通过扩充选自脐带血的细胞而得到的CD 34+/-、Lin-细胞。
在被选的和/或被扩充的种群中，细胞优选CD 34+/-、Lin-细胞或前体细胞，它们分为CD2-、CD3-、CD14-、CD16-、CD19-、CD24-、CD56-、CD66b-、血型糖蛋白A-、flk-1+、CD45+、CXCR4+、MDR+。
从脐带血分离CD 34+/-、Lin-细胞的适合方法以及扩充分离的种群的适合方法如美国专利No.5,925,567所述，概括如下。
分离/扩充方法图2和2A举例说明了适合的选择方法。根据这些方法，实质上可将所需靶群的细胞不断地增殖，即通过提供一种含营养素培养基(the nutrientmedium)的系统、在该培养基中可出现细胞增殖，在增殖的同时、增殖过程的间歇、或增殖后从该系统的非靶细胞中选择靶群的细胞。可以使用无穷种不同的方法和设置来进行细胞增殖和细胞选择，下面通过实施例仅描述了一些。对于本领域技术人员而言，是很容易了解到其它许多方法的。
然而，所有优选的方法都是基于阳性选择(提供一种对靶细胞具有亲合力(“选择”)的选择因子)、和阴性选择(提供一种对非靶细胞具有亲合力(“选择”)的选择因子)的概念。这两种方法，单独使用或联合使用，都要从系统中除去不需要的细胞、且每当需要时收获靶细胞。
阳性选择方法的例子在图2中进行了图式说明。简言之，将一种或多种对靶细胞有特异性的生物素化抗体(biotintylated antibodies)和抗生物素蛋白(avidin)顺序导入系统中。经指定的培养时间后，任何未与靶细胞形成复合体的生物素化抗体和抗生物素蛋白都将被漂洗掉。然后将生物素化葡聚糖-铁(biotintylated dextran-iron)加入细胞悬浮液中。生物素化葡聚糖-铁与抗生物素蛋白生物素化的抗体/抗原复合体(AvidinBiotintylated Antibody/AntigenComplex)发生反应形成包含生物素化葡聚糖-铁的更大的复合体。然后将此悬浮液通过一个磁场。被阳性选择的细胞保留在磁场中，而不具有铁共轭复合体的细胞则被除去。截留和漂洗后，拆除磁场，再将被阳性选择的预定的靶群放回含营养素培养基中。
阴性选择方法的例子在图2a中进行了图式说明。简言之，将一种或多种抗葡聚糖共轭的抗体(对不包含在预定靶群中的特定种群有特异性)导入培养物中。经指定的培养时间后，将细胞悬浮液通过包含葡聚糖包被的玻璃珠的柱。抗原/抗体/抗-葡聚糖/葡聚糖/玻珠复合体形成，从营养素培养基中除去不是预定的靶群的细胞。在下游收集预定的靶群并放回营养素培养基中。
很显然，许多其它方法也可用于阳性和阴性选择，只要选择因子可提供所需的亲合力。
选择因子可以只是选择分子本身、或者可包括其它组分，例如，选择分子结合在其上的一种固体载体。该固体载体可形成一种物质，该物质有助于进行选择或保持选择分子在所需的位置或从系统导入和除去。例如，如上面图2所述，通过应用磁场可将选择分子与铁或其它磁性颗粒结合以使所选择的细胞易于从系统中除去，然后移去磁场进行收集。或者，可将选择分子结合在含营养素培养基的容器的壁上、或者结合在该方法过程中营养素培养基流经的槽(chamber)的壁上。玻璃或其它惰性的、不能渗透的珠粒也可用作固体载体，下面将详细论述。如果使用珠粒或其它颗粒，它们可以是填充构型(packedconfiguration)，这样营养素培养基可以流过，或者它们可以以松散的形式、悬浮液、或任何所需的排列样式引入系统中。不难理解，多种其它固体载体都可以使用。
辅助剂可以对患者给予各种辅助剂以进一步增强CNS功能的恢复。等分细胞可包括各种辅助剂，或者辅助剂可与细胞联合给予。适合的辅助剂包括神经兴奋剂例如生长因子和神经递质。遗传因子也可用作辅助剂，下面将进行描述。
在2000年8月18日提交的共同未决的序列号为60/149,561的美国申请(co-pending application U.S.Serial No.60/149,561)中对适合的生长因子进行了描述，其说明书在此引作参考。适合的生长因子包括成纤维细胞生长因子(FGF)家族的成员，例如，碱性FGF、酸性FGF、hst/Kfgf基因产物、FGF-5、或int-2；神经营养蛋白家族，例如神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋白3(NT3)、或神经营养蛋白4/5(NT4/5)；胰岛素样生长因子家族，包括IGF-1和IGF-2；睫状神经营养生长因子(CNTF)家族；EGF家族，包括EGF、TGF-α、和HB-EGF；TGF-β家族，包括TGF-β和BMP亚族的成员；白血病抑制因子(LIF)；M制瘤素；白介素例如IL-11；来源于血小板生长因子(PDGF)家族的成员；以及VEGF家族。也可使用上述生长因子的生物活性片段、类似物和活性片段。
生长因子的优选剂量根据所需的结果和给药途径而定。生长因子可与细胞一同给予，或者通过不同的途径给予，包括直接注入大脑(经大脑内)、全身给予(例如，经静脉内)或注入脊液中(经脑池内或经脑室内)。如直接给予至大脑或脊液中，每次给予生长因子的优选总量通常约为0.001-1000mg，优选约0.01-100mg。如果全身给予，剂量一般根据患者的体重而定，典型的剂量为约0.001-100mg/kg，优选约0.01-10mg/kg。
适合的神经递质包括神经递质兴奋剂或拮抗剂例如Prozac、苯丙胺(amphetamines)、利他林(Ritalin)和三环抗抑郁剂，例如Elavil。这些化合物用作神经兴奋剂，并且对大脑具有确切的作用。
给予遗传因子可增强患诸如Tay-Sachs的遗传疾病患者的恢复。例如，如果一位患者患有因天然产生的蛋白质的功能不足或机能障碍而导致的疾病，结果出现基因突变或遗传缺陷，那么可将外源基因置于给患者使用的细胞上。当所给予的细胞是自身的细胞时，这通常是必需的。如果对患者给予同种异体的细胞例如免疫学上相配的细胞，通常不需要安置外源性基因，因为必需的基因通常会内源性存在并且适当地发挥作用。但是，在某些情况下，在此类病例中安置外源性基因也是必要的。
也可给予其它辅助剂，如共同未决的序列号为No.60/149,561的美国申请中所述，例如，细胞分化因子如视黄酸(retinoic acid)，神经指导分子如semaphorins、netrins、neuropilins和ephrins，以及物理治疗例如经颅磁性刺激。
评价CNS功能有利的是，本发明的方法通常使CNS功能出现可测量的改善，例如可测量的中风恢复。可用于评价人的中风恢复的试验包括整体功能结果记分和神经学结果记分(Modified Rankin Scale、NIH stroke scale、和Barthel Index)；神经学功能的特异性试验(运动功能的Fugl-Meyer Scale；神经心理学试验电池)以及其它试验，例如美国专利No.5,885,231中所述的试验，其说明书在此引作参考。其它可用于评价CNS功能的试验在神经学领域中是众所周知的。
实施例用美国专利No.5,925,567的实施例5所述的方法从新鲜的脐带血细胞样品中选择干细胞(CD 34+/-、Lin-细胞)，上面引作参考。
用2％氟烷和氧化氮/氧混合物(2∶1)麻醉20只每只体重为300-350g雄性Sprague Dawley大鼠，使用改进的Tamura模型(见图3和3A)进行MCA阻塞(occlusion)。这种中风模型在文献中已有描述(见，例如，Kawamata，T.，等，脑池内的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)增强功能恢复和提高局灶性小脑梗塞后的神经元芽胞的分子标记的表达，Proc.Natl.Acad.Sci.，1997.94p.8179-8184)。
手术前一天以及手术后立即给大鼠腹腔内注射(i.p.)头孢唑啉钠(40mg/kg)。阻塞后24小时，所有的大鼠在中风周围的脑组织直接接受注射(图4)。其中10只大鼠每只注射1,000,000干细胞；另外的10只注射生理缓冲盐水(PBS)作为对照。注射后，每天i.p.给予大鼠环孢菌素(10mg/kg)。
阻塞手术后对大鼠进行3天试验，然后此后21天中每4天测定其中枢神经系统功能。在阻塞手术前一天(-1天)也对大鼠采用同一实验方法进行试验。用下面所述的几个行为试验进行测试。对于这些试验，中风手术之前每天处理大鼠10分钟，共7天。
下面简述的前肢和后肢放置试验在Kawamata等，supra.中做了进一步描述。对于前肢放置试验，检查者拿住大鼠靠近桌子顶部，并在大鼠对腮须胡须、视觉、触觉、或本体感受的刺激出现反映时对大鼠将前肢置于桌子顶部的能力进行记分。与此类似，对于后肢放置试验，检查者评价大鼠对触觉和本体感受的刺激出现反映时大鼠将后肢置于桌子顶部的能力。对每一感觉输入状态分别进行亚记分，相加后得到总分数(对于前肢放置试验0＝正常，12＝最大损害；对于后肢放置试验0＝正常，6＝最大损害)。
身体摇摆试验(在Borlongan等，低温保存的来源于人胚胎癌的神经元(NT2N细胞)的移植促进缺血大鼠的功能恢复Exp.Neurol.，1998.149p.310-321中有详细描述)已成为验证中风后的侧优选(side preference)。距动物尾底部约1英寸处抓住动物。然后升至桌面上1英寸。在垂直轴方向抓住动物，规定向左侧或右侧不超过10°。每当动物的头伸出垂直轴至任一侧则记录一次摇摆。在要进行另一次摇摆之前，动物必须返回到垂直位置方能计数下次摇摆。共计数30次摇摆。正常的动物通常向任一侧的摇摆数都相等。局灶性中风后动物易于向对侧摇摆。中风后第一个月身体摇摆的自发性恢复缓慢。
还进行了另外两个试验，圆筒试验和伸爪试验。圆筒，或“自发肢”试验(详见Jones，T.A.和Schallert，T.，新大脑皮质(neocortical)损伤后锥状神经元的使用依赖性生长，J.Neurosci.，1994.14p.2140-2152)，用于检验当动物在狭窄的玻璃圆筒中暴跳时的动物前肢的侧优选(side preference)。在中风手术之前一天以及此后每隔一周，将动物置于狭窄的树脂玻璃圆筒(18×30cm)中并录相5分钟(或将运动的最小数目录像)。录相带记录下每一前肢开始跳起、到达圆筒壁或沿着圆筒壁侧移动、或跳起后落在底部的自发运动数。然后将每一前肢的自发运动的平均数表示为不匀称得分(总的对侧前肢使用-总的同侧前肢使用)/总的前肢使用)。中风前，动物趋于等同使用两前肢。中风之后，对未受损伤的(同侧的)前肢有优选。中风后第一个月这种不对称自发地部分恢复。
伸爪试验(详见Kolb等，神经生长因子疗法预防树状萎缩和促进皮质损伤后的功能恢复，Neuroscience，1997.76p.1139-1151)，用于评定前爪在伸出笼子的杆去抓取和吃食物粒的机敏性。训练和测试日期前仅喂养少量食物(food-deprived，每天允许给予15g正常食物))。将这些动物置于试验笼(23×30×13cm)中，该笼子的底部和笼壁由2mm棒条构成、边与边之间距离9mm。在笼子的一个壁上装有一个宽8cm和深6cm的托盘，内有巧克力味的食粒(45mg/个)。这些大鼠需要伸长前肢穿过杆中的间隙来抓住和取回食物。该托盘距离笼子0.5cm以使大鼠不能弄掉食物进入笼子中。中风手术前对大鼠两只前爪训练10天。中风手术后，只用受损害的(对侧的)爪子再训练5天。这可通过下列方法得以实现在无损伤的爪子上绑一腕带，使它不能伸出笼子的杆。然后，给带着腕带的动物录相5分钟、再去掉腕带录相5分钟。记录每一时间间隔中“达到”和“击中”(成功抓取和吃到食物粒)的总数。
这些行为试验的结果如图5-5D所示。图5A和5B中的星号表示干细胞组的数据与对照组有差异，经双边ANOVA(治疗×时间)检验，p＜0.05。图5B、5C和5D没有星号表示没有显著性差异。
在前肢和后肢放置试验中，在接受干细胞的大鼠和用于对照的大鼠之间观察到统计学上的显著差异，接受干细胞的大鼠的功能恢复明显更好。对于前肢放置试验，实验结束时除一只动物外的所有干细胞治疗动物(9/10)好于对照组动物的平均值。对于后肢放置试验，实验结束时所有干细胞治疗动物(10/10)均好于对照组动物的平均值。
在摆动、圆筒、或伸爪试验中未观察到显著差异。
虽然上述数据显示出各种结果，但在前肢和后肢放置试验中观察到的足够多的改善使得发明人相信本发明是可行的。所进行的试验测定了不同方面的感觉运动恢复，前肢和后肢放置试验或许对治疗效果最灵敏。发明人相信其它试验结果或许可通过给予较高剂量细胞或通过重复给予来改进；这些试验至今还没有进行。
其它实施方式都在权利要求范围内。例如，细胞可来自其它基于血液的、非胎儿的和非胚胎的来源。
权利要求
1.一种改善中枢神经系统功能损伤患者的中枢神经系统的功能的方法，包括给予该患者等分来源于脐带血的细胞。
2.一种改善患者的中枢神经系统的功能的方法，包括给予该患者等分来源于血液的细胞，该等分试样包含干细胞。
3.一种改善患者的中枢神经系统的功能的方法，包括给予该患者等分来源于血液的细胞和生长因子。
4.根据权利要求2或3的方法，其中细胞来源于脐带血。
5.根据权利要求2或3的方法，其中细胞米源于外周血。
6.根据权利要求1、2或3的方法，还进一步包括通过从脐带血分离所需细胞群获得等分细胞。
7.根据权利要求3的方法，其中生长因子选自M制瘤素和下列家族的生长因子FGF、神经营养蛋白、IGF、CNTF、EGF、TGF-β、LIF、白介素、PDGF和VEGF。
8.根据权利要求1、2或3的方法，还进一步包括获得细胞样品和纯化样品以得到等分试样。
9.根据权利要求1、2或3的方法，还进一步包括获得细胞样品和通过ex vivo方法对样品中至少一种所选择的细胞群进行扩充以得到等分试样。
10.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述的等分细胞包括同种异体的细胞。
11.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述的等分细胞包括自身的细胞。
12.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善导致中枢神经系统外伤的恢复。
13.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善导致中枢神经系统损伤的修复。
14.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善导致中枢神经系统疾病的修复。
15.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善导致中枢神经系统组织的再生。
16.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善包括可测定的中风恢复。
17.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善是中风恢复的结果。
18.根据权利要求1的方法，其中所述改善是中风后组织再生所致。
19.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善是由包含在所给予的细胞中的遗传因子所导致。
20.根据权利要求19的方法，其中该遗传因子对于所给予的细胞是内源性的。
21.根据权利要求19的方法，其中已将该遗传因子被外源性地加入到所给予的细胞中。
22.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善包括头外伤恢复。
23.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善包括头外伤修复。
24.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善是由头外伤后的组织再生所致。
25.根据权利要求1或2的方法，其中的细胞经脑间、脑池内、脑室内或实质内的方式给予。
26.根据权利要求1的方法，其中所述细胞为CD 34+/-、Lin-细胞或前体细胞。
27.根据权利要求26的方法，其中该细胞分为CD2-、CD3-、CD 14-、CD 16-、CD 19-、CD24-、CD56-、CD66b-、血型糖蛋白A-、flk-1+、CD45+、CXCR4+、MDR+。
28.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述改善缘于下列任一疾病的治疗帕金森氏病、阿尔茨海默疾病、杭廷顿氏舞蹈病、ALS、MS、Tay-Sacks、和小脑麻痹。
29.根据权利要求1、2或3的方法，还进一步包括给予患者细胞分化因子。
30.根据权利要求1、2或3的方法，还进一步包括给予患者神经指导分子。
31.根据权利要求3的方法，其中将生长因子经脑间、脑池内、脑室内或实质内的方式给予。
32.根据权利要求3的方法，其中生长因子与等分细胞一同给予。
33.根据权利要求3的方法，其中生长因子与等分细胞分开给予。
34.根据权利要求1、2或3的方法，其中等分细胞直接给予大脑损伤部位。
35.根据权利要求13的方法，其中损伤是由于大脑缺氧所致。
36.根据权利要求35的方法，其中损伤是由于中风或窒息所致。
37.一种改善患者的中枢神经系统功能的方法，包括通过下述步骤获得含预定的细胞靶群的等分试样(a)将细胞的初始样品导入生长培养基中；(b)使预定的靶群细胞分裂；和(c)在步骤(b)的同时、步骤(b)过程的间歇、或步骤(b)之后，将生长培养基中的这些细胞与选择因子接触、从而在生长培养基中的其它细胞中选择靶群细胞；以及给予患者该等分试样。
38.根据权利要求37的方法，其中选择因子包括许多对靶细胞或非靶细胞的第一种群具有亲合力的选择性结合分子。
39.根据权利要求37的方法，其中初始样品是脐带血或来源于脐带血。
40.根据权利要求37的方法，其中所述的等分细胞包括CD 34+/-、Lin-细胞。
41.根据权利要求37的方法，其中所述的扩充是克隆基因的扩充。
全文摘要
本发明提供了改善中枢神经系统的功能的方法。该方法包括给予患者等分干细胞，该细胞来源于血液；如脐带血。在某些情况下，将生长因子与细胞一同给予。
文档编号A61P25/28GK1655803SQ01819693
公开日2005年8月17日 申请日期2001年10月25日 优先权日2000年10月27日
发明者莫里·克劳斯, 塞思·芬克尔斯坦, 保罗·克拉克 申请人:维尔塞尔公司, 总医院有限公司