专利名称：一类抗病毒化合物在制造用于治疗或预防在呼吸道中病毒感染的制剂中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及二硫代氨基甲酸酯化合物和消毒剂的应用以及消毒表面、介质或细胞培养物的方法。
有许多病毒在人和哺乳动物的呼吸道内引起疾病。虽然这些呼吸-致病的病毒可能结构不同且属于不同的病毒科，但是它们都有共同点即它们能通过例如袭击呼吸道中的特定细胞穿过呼吸道进入体内，这些特定细胞例如呼吸道中的上皮细胞层、肺泡细胞、肺细胞等等。对于所有这些，流感的经典症状是相同的，特征是局部发炎和在呼吸道中的疾病症状(例如流鼻涕、嘶哑、咳嗽、小水疱、咽喉痛)。
病毒感染，特别是在呼吸道中，通过氧化性应激反应在被感染的细胞中产生病理变化，特别是在上皮细胞中。活性的氧中间体(ROIs)，例如由白细胞、上皮肺部细胞或黄嘌呤氧化酶产生的，被认为是这些病毒诱导的细胞损伤的媒介物。氧化-特异性转录因子NFκKB(核因子κB)的激活可以在这一氧化性应激反应的过程中发生。已经在大部分变化的细胞类型中发现了NFκB并且它与用于炎性和免疫应答的基因的激活有关。
抗氧化剂能通过诱捕ROIs来阻断NFκB的激活，否则，它会引起这种激活。因此，已经提出了应用抗氧化剂，特别是来治疗潜伏病毒的感染。但是已经发现，只利用单独的抗氧化剂不能有效地治疗这类潜伏感染，而-即使能有效地治疗-只有通过利用不同的抗氧化剂的混合物(即具有不同作用的抗氧化剂)和其它的抑制病毒的制剂(US5,686,436)的组合。利用抗氧化剂还不可能达到抑制病毒复制，或甚至抑制病毒感染，且特别是不可能抑制流感或细小核糖核酸病毒感染(Knobil等，Am.J.Physiol.274(1)(1998)(134-142))。
另一方面，提出用来对抗病毒感染的不同的抗氧化剂在它们的抗氧化活性方面有很大差异。例如，L-抗坏血酸和维生素E保护谷胱甘肽；维生素K、A和E是过氧亚硝酸盐和体内其它强氧化剂的拮抗剂。抗炎的类固醇、非-糖皮质激素拉扎洛依(Lazaroide)，二硫代氨基甲酸酯和N-乙酰基-L-半胱氨酸作为NFκB活化的抑制剂已有描述。
病毒取决于它们的遗传信息载体可被分为DNA或RNA病毒，其中核酸以单链或双链存在并被蛋白质膜包封。
这些RNA病毒的单链RNA以正链(mRNA)或负链出现。这一病毒遗传物质也可以出现在许多片段中，例如在流感病毒的情形下。
属于细小核糖核酸病毒的人鼻病毒(HRV)是世界上普通感冒的主要原因。HRV的频繁出现、严重的二次感染的风险和鉴于医疗花费、看病和雇员的因病休假的经济效应使得HRVs成为重要的、严肃对待的病原体。尽管它们频繁发生，至今除了症状治疗，还没有对于这一病毒疾病的可靠治疗。另一方面，感染的结果，例如鼻病毒，不是很严重或甚至到威胁生命的地步，以致服用具有高副作用风险的药物作为代价。因此，被用来抵抗这种病毒的制剂必须显示低副作用或没有副作用。动物细小核糖核酸病毒组包括马鼻炎A病毒(ERAV)，与足和口疾病病毒(MKS)一样，它属于口蹄疫病毒属。
其它造成呼吸道疾病的重要病毒科包括正粘病毒科和副粘病毒科，以人流感病毒作为最重要的代表。
新流行的流感病毒株的出现，通常被认为归因于包含新的凝血素或神经氨酸酶基因的新亚型。这些新的病毒在免疫学上与先前流行的流感病毒不同。流感A和B病毒需要8个RNA片段来使其有传染性，然而流感C病毒仅需要7个。流感A、B和C病毒在体内能产生同型的重排列，但不是在异型之间。理论上，从两个流感A病毒的8个片段能产生256种重排列；但是这种随机的分离并不发生，因为在蛋白质水平上某些蛋白质需要它们的病毒株特异性配偶体。这一点对于禽流感病毒A/小鸡/德国/34(H7N1)FPV Rostock HA已经明确地表明，其被片段4编码，它只能特异性地与它的被片段7编码的病毒株特异M2蛋白质形成功能性病毒。(Grambas，S，Hay，A J.，Maturation ofInfluenza A virus hemagglutinin-estimates of the pHencountered during transport and its regulation by the M2protein；Virology 1992；199011-18)(Grambas，S，Bennett，HS，Hay，AJ.Influence of amantadine resistance mutations on thepH regulatory function of the M2 protein of Influenza A viruses.Virology 1992；191541-549)。流感接种是抵抗每年的在人群中流感病毒传染的首要策略之一。然而，流感仍旧是世界上发病率和死亡率的主要原因并且是具有虚弱的免疫系统的病人以及老年人生病和死亡的首要原因。虽然金刚烷胺和金刚乙胺的抗病毒活性缩短临床流感症状的持续时间，但是重要的副作用以及有抵抗力的突变株的出现已有描述(Fields等，Virology，第三版(1995)，Lippincott-RovenPubl.，Philadelphia，第1卷，第434-436页)。目前，在市场上有新的抗病毒剂组，它们抑制流感病毒神经氨酸酶。扎那米韦(Zanamivir)和奥塞米韦(Oseltamivir)是流感A和B病毒神经氨酸酶抑制剂的实例。然而，这些药物只能缩短症状的持续时间。
抑制人体内逆转录病毒和潜伏病毒(例如HIV)繁殖的方法在US 5686 436中有描述。其中，施用了包含在其它成分中的抗氧化剂和NFκB诱导抑制剂的药物。相反，为了达到抗呼吸性病毒感染的有效作用，当病毒仍旧在急性感染阶段时它必须被有效攻击。只能被用在潜伏病毒水平的治疗并不适用于阻止或治疗在呼吸道内的急性病毒感染。
因此，需要高效性的物质，其在呼吸道中能有效地抗病毒感染，特别是对于人，其无副作用或只有小的副作用、便宜并且能大量生产。
本发明的目标是通过应用具有结构式R1R2NCS2H的二硫代氨基甲酸酯化合物和这些化合物的氧化形式、特别是它们的二聚物和它们的可药用盐来制备用于治疗或预防攻击呼吸道并在那里引起疾病的RNA病毒感染的制剂达到的，其中R1和R2各自独立地代表直链或支链C1-C4烷基或与氮原子形成具有4到6个C原子的脂族环，其中R1、R2或脂族环任选地被一个或多个选自OH、NO2、NH2、COOH、SH、F、Cl、Br、I、甲基或乙基的取代基取代。在本发明中，“呼吸道”指所有从机体开口并且直到肺泡的器官和区域(鼻、口、眼(包括泪腺)和耳朵)。在这里，可药用盐，特别是指Na、K、Ca、Mg、NH4和Zn。现在第一次出乎意料地发现，本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物能被用来很有效地抵抗RNA病毒引起的感染，所述病毒攻击呼吸道并在那里引起疾病；在本申请中这些病毒被称作“呼吸性RNA病毒”。与Knobil等的观察相反，(Am.J.Physiol.(1998)，第134-142页)，在本发明的范围内，本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物抗呼吸性RNA病毒感染的抗病毒作用，例如HRV和流感感染，能被明显的体现。这一点是特别令人吃惊的，因为其它抗氧化剂不显现抗呼吸性RNA病毒的抗病毒作用，并且氧化还原电位的变化不仅仅是本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物抗病毒作用的原因。例如，根据本发明这一点能清楚地显示，即抗氧化剂维生素C、维生素E，2-巯基乙醇和N-乙酰基-L-半胱氨酸对于抵抗呼吸性RNA病毒根本不起作用。而且，本发明的抗呼吸性RNA病毒感染和这些病毒增殖的二硫代氨基甲酸酯化合物的有效性不能仅归因于抑制NFκB激活，而是已经显示本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物，在本发明申请的范围中，它被理解为还包含氧化型，特别是二聚物，针对性抑制呼吸性RNA病毒的繁殖。
DE 1963223 A涉及用于治疗脑内病毒感染的制剂，其中所述制剂据称包含单胺去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色氨生物合成的抑制剂。在此文献中提出的实施例显示了α-甲基络氨酸甲酯对被单纯疱疹感染的小鼠的作用。因此，在此文献中描述的抑制特定的单胺生物合成的机制仅被应用来治疗脑内的DNA病毒感染。本发明的呼吸性RNA病毒的治疗按照另一规则起作用并且不可应用于脑内病毒感染，如否定实施例FSME(实施例13)和EMC(实施例14)所示。因此，DE 1963223A涉及不同的应用领域，它不能和本发明的应用相比较，并且因此是非显而易见的。
在Calvert，J.G.，Interferon Research，1990(10)，第13-23页中描述了二乙基二硫代氨基甲酸酯对于门戈病毒的作用。在那里发现DDTC钝化门戈病毒病毒粒子。然而门戈病毒是严重的脑心肌炎的动因，并不影响呼吸道或在那里引起疾病。
WO 95/03792 A1涉及硫醇化合物在制造用于治疗病毒诱导的疾病的药物组合物中的应用，病毒蛋白中的二硫桥被硫醇化合物破坏。此文献提及了许多病毒，其中包括RNA病毒、细小核糖核酸病毒科。此文献也很广泛地给出了许多硫醇化合物的实例，还一般性包括二硫代氨基甲酸酯。从许多不同的潜在组合只说明了下述的实施例如硫醇化合物N-乙酰半胱氨酸(NAC)、半胱氨酸、半胱氨酸盐酸盐和N，S-二乙酰半胱氨酸乙酯(DACEE)。只有肝炎B和牛痘病毒被显示为病毒疾病。
因此，不仅对于大多数化合物和病毒疾病没有实施例显示，而且已经证明在那篇文献中公开的治疗不能操作到描述的程度，如其所述某些细小核糖核酸病毒(那些不攻击呼吸道，但是攻击神经细胞的)不被PDTC抑制，或者它们的繁殖不减少。因此，不是所有由病毒诱导的疾病和硫醇化合物的结合都是被降低，并且应用根据本发明选择的二硫代氨基甲酸酯的化合物(它们在WO 95/03792 A1中没有公开)来治疗或预防由呼吸性RNA病毒引起的感染是非显而易见的。
GB 861 043 A涉及组合物，其中它们还被用于抵抗病毒的保护。那些组合物例如包括二硫代氨基甲酸酯，但是在那里未公开特异性的病毒。
Knobil等，Am.J.Physiol.(1998)，第134-142页，涉及氧化剂和它们在病毒诱导的基因表达上的影响的研究。虽然在那里明确地发现既不是NAC也不是PDTC抑制流感病毒感染或复制。
在DE 2555730 A中描述了包含二甲基二硫代氨基甲酸酯化合物的抗微生物剂。这一化合物是8-羟基喹啉金属盐-N，N-二甲基二硫代氨基甲酸酯复合物。但是那篇文献仅公开了杀真菌和抗细菌作用。
WO 99/66918 A1涉及应用二硫代氨基甲酸酯的二硫化物衍生物来减少病人的氧化氮或抑制NFκB。在那篇文献中，虽然报道了很大量的疾病，但是没有详细描述病毒疾病。
Flory E等，J.Biol.Chem.，2000年3月24日，275(12)，第8307-8314页，涉及各种流感A病毒蛋白质在NFκB-依赖性表达激活中的作用的研究。
Tai D.I.等，Hepatology，2000年3月，31(3)，第785-787页，涉及PDTC抑制NFκB激活的研究，其中假设HCV感染会通过NFκB的激活产生抗细胞凋亡。
Schwarz等，1998(J.Virol；Vol.72(7))；第5654-5660页)研究了NFκB对与人鼻病毒有关的脑心肌炎病毒(EMCV)的繁殖的作用。用EMCV感染的无NFκB(knockout p50-/-或p65-/-)的细胞，病毒繁殖虽然减少了，但是引起了增强的凋亡性细胞死亡。那与在这提出的数据极端相反这些实施例能清楚地表明本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物不仅抑制相关鼻病毒的复制，而且阻止病毒诱导的细胞死亡。因此，根据本发明，NFκB的抑制不是本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物有效性的关键因素。
本发明的二硫代氨基甲酸酯的根据本发明的抗病毒作用不依赖于特定物质的组合。本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物完全能被单独地应用，不依赖于另外的添加剂，特别是抗氧化剂，按照US 5,686,436这一点对于NFκB-激活抑制剂的抗逆转录病毒作用是绝对必需的，因为，出乎意料地，抗病毒作用不仅与抵抗氧化性应激反应有关，而且感染/复制能被本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物抑制。
能够表明本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物诱导基因，其作为抗氧化剂作用于经诱导的转录因子起作用(Meyer et al.，EMBO J.12，2005-2015，1993)。异二聚物转录因子AP1能被NAC和本发明的二硫代氨基甲酸酯诱导，导致DNA结合和转移活化。本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物诱导的AP1的活化依赖于蛋白质合成并涉及c-jun和c-fos基因的转录。然而，单独AP1的活化不是本发明的抑制病毒的重大原因。
已知吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)作为氧化强化剂和抗氧化剂、转录因子NFκB激活抑制剂、锌离子载体和金属螯合剂。在Sherman等，Biochem.Biophys.Res.Comm.，191(3)1301-1308，1993中描述了PDTC作为NFκB激活抑制剂以及NO-合成酶抑制剂。WO01/00193 A2涉及包含在微微摩尔和毫微摩尔范围的二乙基二硫代氨基甲酸酯组合物，其显示强烈的抗凋亡作用。
根据本发明，能够表明本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物既在体外也在体内显示强烈的抗RNA病毒作用，所述RNA病毒攻击呼吸道并在那里引起疾病(“呼吸性RNA病毒”)。
根据本发明，感染在非常早的阶段已受到对抗，甚至在广泛的细胞损伤前或甚至在细胞死亡发生之前。
在本发明中，呼吸性RNA病毒指任何通过呼吸道(也就是呼吸的通道和肺)攻击机体并进入机体在呼吸道引发疾病的人和哺乳动物病毒。显然，在这一感染中发生的生物过程是相似的，使得本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物的作用以类似的方式有效地发生，不管这组病毒的生物异质性。但是，相反地，已经显示单独的本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物的作用不足以成功地抵抗由其它病毒引起的病毒感染，那些病毒通过其它的感染途径进入体内并经过不同的生物循环(例如那些能整合入宿主基因组作为潜伏病毒的)，或在其它器官(例如脑)引发疾病。
在这方面已经显示，在其间用二硫代氨基甲酸酯治疗AIDS病人不能使被人类免疫缺陷病毒(The HIV87 Study Group，AIDS Res.Hum.Retroviruses 1993，1月；9(1)，83-89)感染的无症状和极小症状的病人治愈或改善(二硫代氨基甲酸酯(Imuthiol)的多中心随机安慰剂对照研究)。基于此结果，对于潜伏病毒没有再做进一步的研究(见US 5 686 436)。
根据本发明，二硫代氨基甲酸酯化合物，基本上在病毒感染的早期阶段或者如果它们是在感染前使用的，显现它们的独特的活性。因此，如果预防性使用本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物能预防病毒感染的爆发，例如，在有呼吸性病毒感染危险，甚至有上升的危险的地方和时间，例如在有流行病或寒潮的区域。本发明的二硫代氨基甲酸酯优选被用来阻止病毒感染。
尤其优选的是根据本发明的病毒抑制，但是主要是在呼吸性病毒感染的早期阶段抑制病毒。因此，本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物的目的是被用来抑制病毒的复制，也就是在被感染的个体的持久损伤发生之前的时候。在那方面，不仅在被感染的个体上阻止进行性的病毒感染的结果是可能的，而且也阻止了其它传染性病毒向其它个体传播；最小化了进一步感染的危险，它对于健康策略有很大的总的作用和意义，特别是关于人流感病毒。
下面的病毒，尤其被认为是本发明范围内的呼吸性RNA病毒鼻病毒、柯萨奇病毒、艾柯病毒、冠状病毒、肠道病毒、人正粘病毒(例如流感病毒(A、B和C))、副粘病毒(例如副流感病毒和肺病毒)、呼吸合胞体病毒(RSV)和其它只要(至少)在呼吸道中引起疾病的RNA病毒。病毒或病毒株不在呼吸道中引起疾病但是在另一器官(例如脑)中引起疾病的，例如脑膜炎病毒、脑心肌炎病毒、脊髓灰质炎病毒、心脏病毒等等，不在本申请的范围内。对于本发明的呼吸性RNA病毒，上或下呼吸道表皮细胞的感染是同样的。另外，其它器官能被攻击。它们在呼吸道引起的局部发炎被认为是流感经典症状的主要原因，例如流鼻涕、喉咙痛、嘶哑、咳嗽、小水疱和经常发烧。具有虚弱免疫力的个体的二次感染的频繁发生也是由于被这些呼吸性病毒的感染。
在本发明的范围内，按照基于King等(“Picornaviridae”in“Virus Taxonomy，Seventh Report of the InternationalCommittee for the Taxonomy of Viruses”，(2000)，Van Regenmortel等编；Academic Press 657-673)的细小核糖核酸病毒科的目前分类，只要攻击呼吸道并在那里引起疾病的细小核糖核酸病毒都被认为是“真”细小核糖核酸病毒，也就是肠道病毒属、鼻病毒、口蹄疫病毒、Parechovirus、Erbovirus、Kobuvirus和Teschovirus。这些细小核糖核酸病毒属病毒的特征是相似的遗传结构、蛋白质组成、培养性质和抵抗热或杀病毒剂的能力。
已经发现本发明特别适于抵抗使人和动物致病的真呼吸细小核糖核酸病毒，特别是那些肠道病毒属(肠道病毒70、71、柯萨奇病毒)和鼻病毒属(例如人鼻病毒)和口蹄疫病毒属(例如足和口疾病病毒)，然而对于其它病毒不能证明本发明的优点，包括引起潜伏感染的细小核糖核酸病毒，例如HAV。这可能也是由于“真”呼吸细小核糖核酸病毒组很相似的事实，并且在感染中发生的病理生理学过程是很相似的以至于本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物类似地起作用。
在本申请中，“病毒感染”指呼吸性病毒在细胞上的任何攻击，其包括，例如下述步骤中的一个开始于病毒粒子与细胞对接，并且在较后的阶段中将病毒的遗传信息引入细胞，生产新病毒粒子部分并表达感染的病毒粒子。
此外，也可能使用这些化合物的氧化型，特别是它们的二聚物，因为在有机体内它们很快被代谢成还原型，这是本身已知的。在本申请中，“氧化型”指那些其中S基团被氧化的化合物。二硫化四乙基秋兰姆(disulfiram)是一种此氧化的二聚物形式的优选实例，它也被称作“安塔布司(Antabuse)”或“戒酒硫(Abstinyl)”并且是二硫化四乙基秋兰姆(tetraethylthiuram disulfide)(C10H20N2S4)。二硫化四乙基秋兰姆本身是已知的，并且特别被用来治疗酒精中毒。二硫化四乙基秋兰姆在氧化还原作用中作为介质并钝化醛脱氢酶。当摄入乙醇时，乙醛在体内累积并对总体的身体健康产生明显的副作用。同时摄入二硫化四乙基秋兰姆和酒精导致焦虑状态、恶心、失明、胸痛、头疼等等，这些症状的持续时间从3-4天至一星期。出于此原因，二硫化四乙基秋兰姆被治疗地施用给酒精中毒者，然而因为这些严重的副作用，任何随后的酒精消耗都应该被避免。
二硫化四乙基秋兰姆其它已知的作用是抑制酶，例如果糖、1，6-二磷酸脱氢酶、黄嘌呤氧化酶、己糖激酶、醛脱氢酶和多巴胺β-羟化酶。
二硫化四乙基秋兰姆也被用来治疗虱病和疥疮，并用来治疗镍皮炎。
对于二硫化四乙基秋兰姆的代谢已有详细的研究，例如见Dollery，C.，1999，Therapeutic Drugs，第二版，第1卷，ChurchillLivingstone，Edinburgh。解释了二硫化四乙基秋兰姆在体内的主要代谢产物是二乙基二硫代氨基甲酸酯，并且此过程进行的非常快。
本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物的氧化型是非常容易脂溶的，并且能被提供例如作为口服制剂，化合物在胃内吸收。特别地，化合物也能被用作喷粉剂。此外，本发明化合物的氧化型能提供羟基来增加它们的水溶性以使它们能被用作气雾剂。如果本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物是以氧化形式提供并且尤其是二聚体产品，可达到这种制剂的贮存作用，也就是本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物在一定的时期内逐渐被释放到机体并被机体吸收。氧化的二硫代氨基甲酸酯化合物也能被植入机体来治疗以获得这一贮库作用，这一点是本身已知的。
本发明一种优选的化合物的特征是R1和R2各自独立地代表C1-C3烷基或与氮原子一起形成具有4到6个C原子的脂族环，其已被证明对于治疗或预防呼吸性RNA病毒感染是尤其有利的。
二硫代氨基甲酸酯化合物优选吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)和N，N-二乙基二硫代氨基甲酸酯(DDTC)。这些化合物显示有突出的抗呼吸性RNA病毒感染的强大活性。
特别优选的病毒感染是细小核糖核酸病毒、正粘病毒或副粘病毒感染。本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物抵抗这些病毒感染是尤其有效的。
在这里，正粘病毒优选为人流感病毒，尤其选自流感A、流感B、流感C或者副粘病毒为副流感病毒或肺炎病毒。正粘病毒优选是哺乳动物的流感A病毒，而细小核糖核酸病毒是鼻病毒，特别是人或马鼻病毒，肠道病毒，特别是肠道病毒70、71或柯萨奇病毒，或是口蹄疫病毒，特别是足和口疾病病毒或马鼻炎病毒A。上面已解释了，这样的病毒或病毒株不包括不在呼吸道引起疾病而只在脑或神经细胞内引起疾病的，例如属于细小核糖核酸病毒的心脏病毒或脊髓灰质炎病毒。用本发明的化合物治疗或阻止这些病毒感染是特别有效的。
细小核糖核酸病毒科包括一系列小RNA病毒组，其中有鼻病毒(例如人鼻病毒)、肠道病毒(例如肠道病毒70、71、柯萨奇病毒，已知它们是例如手、足和口疾病的病原体)、口蹄疫病毒(例如在嘴里引起疾病的足和口疾病病毒和马鼻炎病毒A)。例如，特别有兴趣的是对于足和口疾病，应用本发明的化合物来渡过接种和当疫苗开始生效这一段时期(大约10-12天)，因为在此期间被接种的动物不被保护，并且在此无疫苗保护的情况下动物在感染生病后会分泌大量病毒。因此，本发明的化合物应该在接种同时或在其后约两星期给动物施用。
正粘病毒和副粘病毒是流感病毒和其它类似病毒的早期集体名称的细分。在人体上，副粘病毒引起麻疹、腮腺炎及呼吸和神经疾病。副粘病毒中包括副流感病毒、腮腺炎病毒、纽卡斯尔病病毒、呼吸合胞体病毒(RSV)、麻疹病毒和牛瘟病毒。在人体上引起流感的流感A、B和C病毒属于正粘病毒。
A型流感病毒是大部分流感流行病和所有大流行病的原因。流感A病毒在马、猪和鸟身上发生，例如经典禽类瘟疫的病原体；然而，只有人流感病毒和哺乳动物的流感病毒，例如马，能被认为是真正意义上的呼吸性病毒，因为禽流感病毒(Avian Influenza Virus(AI))的生物学和人类流感病毒的生物学完全不同。因此，AI病毒不能被认为是呼吸性病毒。在鸭子体内，病毒基本上在肠道内复制；然而在人体内则并非如此。因此，AI病毒也能从鸟粪中被分离出来(Hinshaw等，1980，Canad.J.Microbiol.26，622-9)。除此之外，AI病毒的核苷酸变异率比从哺乳动物中分离出的病毒的核苷酸变异率低。与鸟不同的有机体内，病毒蛋白质的进化典型地显示突变的快速累积，而此在AI病毒中不发生(Gorman等，1991，J.Virol.653704-14；Ludwig等，1995，Virology 212555-61)。不同的流感病毒的受体特异性不同。大部分的AI病毒优选地与α2-3-半乳糖-唾液酸受体结合。相反，人流感病毒基本上与α2-6-半乳糖-唾液酸受体结合(Rogers和Paulson，1983，Virology 127，361-73；Baum和Paulson，1990，Acta Histochem.，Suppl.4035-8)。
由于本发明覆盖的病毒在人类和哺乳动物中引起许多广泛传播的疾病，本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物的抗病毒作用对于那些病毒是尤其重要的。由于本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物抵抗那些病毒是显著有效的，本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物尤其适于生产一系列用来治疗或预防那些病毒感染的制剂。本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物能容易地且低成本地大量生产，并且甚至在高浓度时它们对于被治疗的细胞几乎没有毒性。
在一个优选的具体实施方式
中，本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物以浓度为0.01-5000mM的制剂的形式，优选1-300mM，并且特别优选10-100mM。在这些浓度，本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物抵抗呼吸性RNA病毒是特别有效的并且几乎不显示副作用或无副作用。使用的浓度按照要治疗的病毒感染选择，取决于病毒感染的强度或按照要治疗的有机体选择，无论动物或人类，取决于年龄。
特别适合的是，本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物在制剂中浓度为10mM-1M。在这一情况下，本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物以高浓度形式存在，并且制剂可以在治疗前取决于需要的浓度被稀释。
制剂优选进一步包含可药用载体。在药学领域内任何本领域技术人员已知可药用载体都能被使用，例如磷酸缓冲盐溶液(PBS)或有不同缓冲液的氯化钠溶液，或包含脂质体的配制剂，其中载体的选择也取决于治疗的类型、病毒感染或被治疗的有机体。
制剂优选口服、鼻内、静脉内、胃肠外、直肠、作为眼或耳滴剂、含漱剂或气雾剂施用。给药的模式特别取决于被治疗的病毒感染。例如，在呼吸道内的感染用鼻内给药的制剂治疗，如包含二硫代氨基甲酸酯化合物的气雾剂形式，因为被治疗的病毒感染正好在病毒攻击的位置。取决于给药形式，在特定的浓度提供二硫代氨基甲酸酯，或制剂为适合那一形式的给药而包括另外的物质。当然可能以干燥的形式提供制剂，在此情况下在治疗前用合适的溶剂来稀释。
一种特别优选的应用是制剂包含另外的抗病毒物质。以这种方式可以从许多方面被攻击呼吸道内的病毒感染能，或所有不同病毒能被同时削弱或彻底根除。这种另外的抗病毒物质包括抑制复制的物质、免疫刺激物质、中和性抗体等等并且任选通常能支持免疫系统的物质。
优选地，制剂包含至少两种本发明的不同的二硫代氨基甲酸酯的组合，特别是PDTC和DDTC的混合物。本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物在细胞内发挥促氧化和抗氧化作用。它们的抗氧化作用包括根除过氧化氢、除去超氧自由基、过氧亚硝酸盐、羟基自由基和脂质过氧化产物。通过这些排除，二硫代氨基甲酸酯被氧化成二硫化秋兰姆。二硫化秋兰姆造成二硫代氨基甲酸酯的促氧化作用，并且在许多情况下，秋兰姆的形成取决于金属的存在。已有报道，也许二硫代氨基甲酸酯的抗-细胞凋亡活性与由硫醇氧化导致的Kaspasen的钝化有关。
尤其优选的本发明的制剂进一步包含选自如下的物质抗生素、疫苗、免疫-抑制剂、稳定剂、免疫-刺激物质、血液制品或它们的混合物。如果使用另外的抗生素，细菌感染和呼吸性病毒能一起被抵抗。如果制剂包含另外的疫苗，在这里理解为既指灭活的也指活性的疫苗，在本发明的治疗或预防病毒感染的同时阻止容易感染虚弱的有机体的某些其它的、另外的病毒感染。此外，也可加入稳定剂来增加储存稳定性或储存期。血液制品，例如血浆、血细胞、凝集因子等等，取决于治疗的病人。
有利的是将制剂应用于抑制病毒繁殖。以此方式确保已经存在的感染不会扩散，而是相反很快被治疗。
根据本发明的另一方面，本发明也涉及包含至少一种上述本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物的消毒剂。在本发明中，“消毒剂”指任何在人或动物有机体外部抵抗病毒的物质，如在表面、在制剂中、特别是在介质中或用于细胞培养物。特别地，如果被处理的物质对于其它更加有侵蚀性的抗病毒物质是敏感的，可使用这种消毒剂。例如，包含本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物的消毒剂适于作为介质的添加剂或用来处理对其它更具侵蚀性的消毒剂或抗病毒物质反应敏感的细胞或细胞培养物。本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物已经显示它们在治疗或预防呼吸细胞和细胞培养物的呼吸性RNA病毒感染方面是特别有效的。
如果消毒剂包含浓度在10μM-5M的本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物，此消毒剂是特别有效的，特别是30μM-1M。一方面，这些浓度是抗呼吸性RNA病毒感染有效的，另一方面，这种消毒剂是显著地温和的，例如，它能被用作细胞培养物的抗病毒物质。在这里，浓度取决于病毒感染的性质或高级阶段，以及用于处理的物质，例如细胞的性质和敏感性。显然，也可能提供统一浓度的消毒剂，在这种情况下在使用前用合适的溶剂稀释本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物至想要的浓度。
消毒剂优选包含另外的消毒剂，特别是抗病毒物质。这些物质对于微生物领域的技术人员是已知的，特别是如果在同时抵抗其它病毒(例如DNA病毒)将它们加入。当然，另外抗微生物物质，特别是抗生素，也能被加入。
本发明的另一方面涉及消毒表面、介质或细胞培养物的方法，其中本发明的消毒剂，例如如上所述的，被分别施用于表面或细胞培养物或被加入介质中。例如为了消毒表面，用消毒剂来清洁表面是足够的。在介质和细胞培养物情况下，消毒剂能经过较长的时间发挥它的作用，并且如上所述消毒剂的浓度可以取决于不同的目的而变化。
本发明的另一方面，发明涉及用发明的二硫代氨基甲酸酯化合物治疗或预防呼吸性RNA病毒感染。在这里，以适当的形式和适当的浓度，向病人或动物施用如上所述的包含本发明的二硫代氨基甲酸酯化合物的制剂。
现在将通过附加的实施例和附图来详细地解释本发明，但是它们不构成限制。
图1显示在细胞培养物中PDTC对HRV复制的抑制作用；图2显示PDTC对由鼻病毒诱导的细胞病理效应的抑制；图3显示PDTC和DDTC增加了细胞存活力；
图4显示PDTC的治疗作用与时间的相关性；图5显示eIF4GI的分裂；图6显示用于测定鼻病毒衣壳蛋白质表达的蛋白质印迹分析；图7显示其它抗氧化剂在HRV病毒感染中的作用；图8和9显示PDTC在流感病毒复制中的作用；图10显示PDTC在被流感病毒感染的vero细胞上的作用与浓度的相关性。
图11A和11B显示PDTC对被流感病毒感染的小鼠的作用。
图12显示PDTC抗ERAV的有效性。
图13A和13B显示PDTC抗MKS的有效性；和图14显示PDTC缺乏抗EMCV作用。
实施例实施例1PDTC导致的传染的鼻病毒粒子生产的减少在用不同的HRV血清型感染细胞后加入PDTC来测试被HRV感染期间它的有效性。
用HRV血清型1A、2、14和16以20TCID50(组织-培养-感染-剂量50)/细胞感染HeLa细胞。同时将PDTC以125μM的浓度加入介质中。在感染4小时后移去多余的病毒，同时将PDTC加入新鲜的介质中。在感染(p.I.)24小时(图1，顶部)和48小时(图1，底部)后，收集上清液并通过TCID50试验测定病毒后代的量。在24小时后用PDTC处理细胞病毒滴定度(vt)减少了103(图1，顶部)。在感染48小时后，从用PDTC处理的细胞收集的上清液也显示病毒滴定度显著减少(图1，底部)。这些试验表明PDTC具有抗不同的HRV血清型的强大的抗病毒作用。
实施例2PDTC抑制HRV-诱导的细胞病理效应并且增加被感染的细胞的生存能力。
细胞中形态学的变化，被称作“细胞病理效应”(CPE)，在鼻病毒感染的晚期阶段发生。这些HRV诱导的CPE的特征为细胞变圆、收缩、核变形及染色质缩合。当HeLa细胞被HRV2、HRV14、HRV1A和HRV16以100TCID50/细胞感染时，在后-感染8小时后可见明显的细胞病理效应。在感染期间添加PDTC阻断了这些细胞病理效应的出现。图2显示在125μM PDTC(见较低的右图)的存在下在感染8小时后被感染的细胞的形态学和未感染(n.i.)的细胞的形态学不能区分开(见两个较高的图)。
因此，PDTC处理在非常早的阶段攻击病毒感染，这样阻止了更广泛的细胞损伤。
实施例3PDTC和DDTC增加被感染细胞的生存能力。
进行细胞增殖分析来检验在病毒感染期间PDTC或DDTC对细胞生存能力的影响。
按照制造商的指示做了细胞滴定度96水性非放射性细胞增殖分析(Promega；Madison，Wisconsin，U.S.A.)。在感染前一天将细胞放置在96孔板中。用不同的HRV血清型以20TCID50/细胞感染这些细胞。通过添加四唑物质来测定细胞的生存能力，在37℃保温2小时，并在492nm测定吸收。
与未感染的HeLa细胞相比，在用HRV2感染24小时后，HeLa细胞显示完全丧失了它们的代谢活性(模拟的感染介质＝MIM)。在图3中能够看到(顶部DDTC，底部PDTC)通过添加甚至极微浓度的PDTC或DDTC能显著地增加细胞的生存能力。对于未感染的细胞单独用PDTC或DDTC仅有很小的作用。尽管使用的抑制病毒感染的浓度显示无毒性(“-”指“无”)。
实施例4PDTC效能与时间的相关性(给药)为了测定被PDTC攻击的病毒生命周期阶段，在病毒感染后以20TCID50/细胞在不同的时间添加PDTC并进行增殖分析。显示在感染后(“-”指“无”)最初的六小时内添加PDTC(125μM)提供了抵抗病毒诱导的增殖丧失的最好的保护(图4A)。这一效能对于单一的血清型也不是特异性的，如使用的HRV血清型1A、2、14和16。只有在大于感染8小时后细胞的PDTC处理(125μM)降低了保护效能。
如果在被感染的和用PDTC处理的细胞的上清液中测定病毒滴定度(vt)也获得类似的结果(见图4B)。在感染后4小时添加PDTC则HRV2产生的滴定度降低103。甚至如果在感染仅6小时后开始PDTC处理，产生的病毒滴定度也显著降低。这些结果显示添加具有抗病毒作用的PDTC，甚至是在感染的最后阶段添加，细胞的存活能力也增长，而有感染力的病毒的量显著下降。
这显示抗病毒作用不仅在病毒生命周期的早期阶段发生，例如在受体结合或进入受体期间。
实施例5PDTC存在下HRV感染过程的研究测定不同的蛋白水解活性来研究PDTC存在和不存在时鼻病毒感染的过程。由病毒2A蛋白酶导致的细胞转移启动因子4GI(eIF4GI)和4GII的酶的分裂是在被鼻病毒和肠道病毒感染过程中发生的一个特征性的蛋白水解活动。依赖于HRV血清型，eIF4G蛋白质在感染的早期分裂。在鼻病毒感染期间的另一分裂活动，仅近来有描述，是中间的丝蛋白细胞角蛋白8的分裂。这一分裂也取决于2A蛋白酶，但是在感染的较晚阶段发生。为了研究PDTC处理在病毒感染期间的作用，进行蛋白质印迹分析来分析这些2A蛋白酶底物。
为做蛋白质印迹分析在指定的时间移除介质。通过添加100μl蛋白质缓冲液(8％十二烷基硫酸钠，20％β-巯基-乙醇，20％甘油，0.04％溴酚蓝)来溶解细胞。在每一泳道用SDS-PAGE分离20μl蛋白质提取物，并印在PVDF膜上。用在TBS中的0.1％吐温20和5％脱脂奶粉来进行抗体的温育。eIF4GI的多克隆兔抗体被用作免疫检测。与碱性磷酸酶耦联的抗-兔免疫球蛋白被用作第二抗体。用碱性磷酸酶反应染色。利用预染色SDS-7B标记物(Sigma)测定分子量。
在用HRV2感染HeLa细胞4小时后能检测到eIF4GI分裂(100TCID50/细胞)。(cp指分裂产物，“分裂产物(cleavageproduct)”)。在感染8小时后分裂完成(图5)。在那时在PDTC存在下在被感染的细胞中未能检测到eIF4GI分裂。在晚些时候，约感染24小时后，能检测到微量eIF4GI分裂，甚至在用PDTC处理的细胞中。
这显示蛋白酶功能被阻断或病毒蛋白质的量极大地减少了。
实施例6病毒包膜蛋白质检测为了测定PDTC在病毒蛋白质表达上的作用，通过对从HRV2-感染的HeLa细胞(100TCID50/细胞)的蛋白质提取物的蛋白质印迹分析来检测HRV2的衣壳蛋白质(见图6)。利用抗HRV2的多克隆兔血清，如实施例5所述进行蛋白质印迹分析。在感染六小时后在未处理的细胞中检测到了大量的鼻病毒蛋白质VP1、VP2和VP3。在感染后的第一个8小时内，PDTC处理阻止了那些衣壳蛋白质的表达。在较后的时间只检测到了VP1、VP2和VP3的微量表达，约感染后24小时。
这显示了PDTC延迟了病毒蛋白质的生产，解释了PDTC的抗鼻病毒作用和它对细胞的保护作用。
实施例7抗病毒作用与氧化还原电位相关性测定在HRV2感染HeLa细胞期间，测试了其它抗氧化剂对它们的抑制作用(图7)。用HRV2(100TCID50/细胞)在6孔板中感染HeLa细胞(“n.i.”指“未感染”)。在感染1小时后移除介质，并加入新鲜的介质或具有不同浓度PDTC或NAC的介质。24小时后，用PBS洗涤细胞菌苔并用结晶紫染色。在图7A中很明显看到HRV2感染毁坏了细胞菌苔。PDTC，而不是NAC，能阻止此作用。如实施例3所述(图7B，C，D)测定了维生素C、Trolox和β-巯基乙醇(2-ME)的效能。出乎意料地显示了这些抗氧化剂中没有一种在病毒增殖期间具有任何阻止作用。在无病毒条件下测试这些物质的毒性作用作为对照。大量的维生素C(100μg/ml)严重地抑制了细胞生长。
这表明PDTC的抗病毒作用不是由于它的抗氧化作用，而是明显与其它性质相关。
实施例8PDTC对流感病毒复制的作用用流感病毒A/PR8/34或Vienna/47/96感染5×105Vero细胞，m.o.i.(感染多重性)为0.01并在室温温育1小时。然后，移去接种体并加入包含5μg/ml胰蛋白酶和600μM PDTC的感染介质。在48和72小时后移去上清液并用标准板分析测定在上清液中的病毒滴定度。如图8中所示，与对照样本(c)相比，A/PR8/34的病毒滴定度减少了大于2个log等级。
为测试PDTC的有效性，在有和没有PDTC的情况下进行TCID50(50％组织-培养-感染剂量)分析。用Kaerber方法加和在每一浓度的TCID50用特定病毒的两倍稀释液感染96孔微滴定板。感染一小时后，移去上清液并添加包含特定浓度的介质。在4天后测定被感染细胞的数目。图9显示在PDTC浓度为300μM时，A/PR8/34和Vienna/47/96的TCID50分别减少了76.4％和82.2％。在浓度为1200μM时，对于这两种病毒都获得了高于99.9％的抑制率。
实施例9PDTC有效浓度的测定利用CPE(细胞病理效应)减少分析来测定PDTC的有效浓度。将Vero细胞在96孔微滴定板中温育并用5TCID50/孔和50TCID50/孔的流感A/PR8/34及用5 TCID50/孔的流感A/Vienna/47/96感染。在感染一小时后移去上清液，并加入具有5μg/ml胰蛋白酶和两倍稀释级数的PDTC(此PDTC初始浓度在1200μM)。在接下来的4天中对比对照样本用肉眼检测每一浓度的板的细胞病理效应。将每一浓度出现的对照样本的细胞病理效应相加。100％阳性指在所有孔中完全溶解。在图10中能够看到，在PDTC浓度在50-100μM之间时能获得阳性孔50％的减少。对于所有病毒，在PDTC浓度为600μM时能获得细胞病理效应的完全抑制。
实施例10在体内PDTC作用的测定以致死剂量(50μl 107pfu)给十只C57/BL6小鼠鼻内接种。一小时后，用25μl 600mMPDTC或用25μlPBS对它们鼻内给药。在最初的48小时，每12小时检查小鼠并给药，然后是每24小时。测定小鼠的重量并以初始体重的百分比(％w)报告(图11A)。图11B显示用PDTC治疗的所有小鼠(方形)都活过了病毒感染并且在感染7天后体重增加。所有用PBS治疗的小鼠(菱形)在感染12天内都死亡了(％s＝存活百分率)。
这表明在体外和体内单独给PDTC就显示抗流感病毒感染的强大活性。
实施例11PDTC抗马鼻炎A病毒(ERAV)的抗病毒活性如下研究了通过添加PDTC使得ERAV病毒繁殖减少以10TCID50/细胞感染Vero细胞。与此同时，以不同的浓度加入PDTC(1mM-50μm)。在感染4小时后移去接种体，并加入含PDTC的新鲜的介质。在感染24小时后移去上清液，并用标准板分析测定病毒滴定度。
图12表明与未处理的细胞(-)相比，上清液中的病毒滴定度(vt)减少了。
实施例12在细胞培养物中PDTC对足和口疾病病毒(MKS)增殖的作用用CPE(细胞病理效应)减少分析测定PDTC抵抗由MKS病毒引起的破坏的有效浓度。
在96孔微滴定板中用0.1TCID50/细胞MKS病毒O-Manisa来接种IB-RS-2细胞，并在37℃温育1小时。然后，移去接种体并加入含有特定浓度PDTC(10μM-1200μM)的感染介质。在24小时后，通过显微镜观察细胞病理效应来测定被感染的孔数目。
图13A显示在24小时后被感染孔的数目(％pos.)依赖于PDTC的浓度。600μM PDTC给予细胞100％抵抗病毒细胞病理效应的保护。浓度在75μM-150μM时能达到被感染的孔减少50％。
为测试PDTC对MKS病毒复制的作用，在T25cm2细胞培养瓶中用0.001 TCID50/细胞的MKS病毒O-Manisa感染IB-RS-2细胞，并在37℃温育1小时。然后，移去接种体并添加包含特定浓度PDTC(0μM-200μM)的感染介质。在感染24小时后移去上清液并用标准板分析测定病毒滴定度(TCID)。
如图13B所示，与对照样本相比(0)，O-Manisa MKS病毒的病毒滴定度被PDTC减少了大于2个log级数，在对照样本中未添加PDTC。
实施例13在细胞培养物中PDTC对FSME增殖的作用FSME病毒不属于细小核糖核酸病毒并且不引起呼吸道疾病。
在下述浓度的PDTC的存在下，用10pfu/细胞的FSME病毒(Neudoerfel)感染BHK-21细胞的茂密的单层细胞1000μM、500μM、250μM、125μM、62.5μM、31.25μM、15.6μM、7.8μM、3.9μM、1.95μM和0.975μM。
然后将细胞在37℃温育4天，并且用显微镜检查单层细胞。利用酶免疫分析测定病毒增殖。显微镜检测未显示PDTC毒性作用迹象。病毒增殖的定量显示在任何受试的浓度，PDTC都不会减少病毒增殖。
相似的，我们研究了在混悬的细胞中PDTC是否会影响细胞增殖。浓度与上述测试的相同。这一实验也显示PDTC对病毒增殖有减少迹象。
实施例14PDTC对EMC-感染的小鼠的作用用10 TCID50的EMC病毒在腹膜内感染C57B16小鼠。然后，每天一次腹膜内给对照组50μl PBS。其它两组用50μl的50mM PDTC每天治疗。在感染的同时开始一组治疗(PDTC)，而在感染24小时后开始另一组治疗(PDTC 24hpi)。
图14显示感染开始后小鼠体重的变化。很明显在被治疗的和未治疗的小鼠之间没有差别。在每一组中被感染小鼠死亡的平均时间为5.5天。
这表明PDTC对EMC感染无作用。EMC确实属于细小核糖核酸病毒，但是不在呼吸道引起疾病，而在神经细胞中引起疾病。
权利要求
1.具有结构式R1R2NCS2H的二硫代氨基甲酸酯化合物和这些化合物的氧化型，特别是它们的二聚物和它们的可药用盐在制备治疗或预防攻击呼吸道并在那里引起疾病的RNA病毒感染的制剂中的应用，其中R1和R2各自独立地代表直链或支链C1-C4烷基或者与氮原子形成具有4到6个C原子的脂族环，其中R1、R2或脂族环任选地被一个或多个选自OH、NO2、NH2、COOH、SH、F、Cl、Br、I、甲基或乙基的取代基取代。
2.根据权利要求1的应用，其特征在于R1和R2各自独立地代表C1-C3烷基或者与氮原子形成具有4到6个C原子的脂族环。
3.根据权利要求1或2的应用，其特征在于二硫代氨基甲酸酯化合物选自吡咯烷二硫代氨基甲酸酯和N，N-二乙基二硫代氨基甲酸酯。
4.根据权利要求1-3中任一项的应用，其特征在于，所述病毒感染是细小核糖核酸病毒、正粘病毒或副粘病毒的感染。
5.根据权利要求4的应用，其特征在于正粘病毒是人流感病毒，特别选自流感A、流感B、流感C或者副粘病毒分别是副流感病毒或肺炎病毒。
6.根据权利要求4的应用，其特征在于正粘病毒是哺乳动物的流感A病毒。
7.根据权利要求1-6中任一项的应用，其特征在于细小核糖核酸病毒是鼻病毒，特别是人或马鼻病毒，是肠道病毒，特别是肠道病毒70、71或柯萨奇病毒，或是口蹄疫病毒，特别是足和口疾病病毒或马的鼻炎病毒A。
8.根据权利要求1-7中任一项的应用，其特征在于二硫代氨基甲酸酯化合物以浓度为0.01-5000mM，优选1-300mM，并且尤其优选10-100mM提供于制剂中。
9.根据权利要求1-7中任一项的应用，其特征在于二硫代氨基甲酸酯化合物以浓度为10mM-1M提供于制剂中。
10.根据权利要求1-9中任一项的应用，其特征在于此制剂进一步包含可药用载体。
11.根据权利要求1-10中任一项的应用，其特征在于此制剂是口服、鼻内、静脉内、直肠、肠胃外、或作为眼或耳滴剂、作为含漱剂或作为气雾剂施用的制剂。
12.根据权利要求1-11中任一项的应用，其特征在于此制剂包含另外的抗病毒物质。
13.根据权利要求1-12中任一项的应用，其特征在于此制剂进一步包含至少两种不同的二硫代氨基甲酸酯化合物的组合。
14.根据权利要求1-13中任一项的应用，其特征在于此制剂还包含选自抗生素、疫苗、免疫抑制剂、稳定剂、免疫-刺激物质、血液制品或它们的混合物的另外的物质。
15.根据权利要求1-14中任一项的应用，其特征在于此制剂被用来抑制病毒繁殖。
16.消毒剂，其包含至少一种根据权利要求1-15中所描述的二硫代氨基甲酸酯化合物。
17.根据权利要求16所述的消毒剂，其特征在于，包含浓度为10μM-5M，特别是30μM-1M的二硫代氨基甲酸酯化合物。
18.根据权利要求16或17所述的消毒剂，其特征在于，包含其它消毒的，特别是抗病毒的物质。
19.用于表面、介质或细胞培养物消毒的方法，其特征在于，将根据权利要求17或18所述的消毒剂施用于表面或细胞培养物上或介质中。
全文摘要
本发明公开了具有结构式R
文档编号A61P31/16GK1549709SQ02817135
公开日2004年11月24日 申请日期2002年7月15日 优先权日2001年7月16日
发明者伊丽莎白·盖于德纳克, 安德列亚斯·格拉萨乌尔, 恩斯特·库赫勒, 托马斯·马斯特, 乔基姆·塞佩尔特, 塞佩尔特, 库赫勒, 马斯特, 亚斯 格拉萨乌尔, 伊丽莎白 盖于德纳克 申请人:伊丽莎白·盖于德纳克, 安德列亚斯·格拉萨乌尔, 恩斯特·库赫勒, 托马斯·马斯特, 乔基姆·塞佩尔特, 伊丽莎白 盖于德纳克