专利名称：抗鼻病毒活性剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及乙二醛衍生物用于治疗和预防鼻病毒感染的用途。
人鼻病毒(HRV)属于细小核糖核酸病毒家族并被认为是普通感冒的致病原因。
鼻病毒通过结合特异受体--主要是蛋白ICAM-1--来感染宿主细胞。ICAM-1属于免疫球蛋白家族并起LFA-1(淋巴细胞功能相关分子-1)的配体的作用。
在迄今用于降低鼻病毒感染性的不同方法中，可以提及的是1)开发阻碍病毒结合的抗表面受体的抗体，2)使用干扰素诱导抗病毒应答，3)开发病毒复制抑制剂和4)开发抗病毒衣壳蛋白的抗体。但是，所述方法由于不期望的副作用的发作而通常不令人满意。例如，观察到干扰素的经鼻施用虽然降低了病毒感染的严重性，但是会导致鼻粘膜出血。
乙二醛衍生物是一类结构上同源的化合物，它们的特征是存在酮-醛式官能团。其中，已知联苯酮-醛衍生物，尤其是xenalamine和xenaldial，具有抗流感病毒(A-PR8)、鼠肝炎病毒(MHV-3)和graig、aphta、麻疹和脊髓灰质炎-1病毒的抗病毒活性(见参考书目)。
已经发现联苯-、萘基-和茚基-乙二醛化合物能够通过防止病毒进入细胞而中止鼻病毒的不同株系引起的感染。
因此，本发明的目的是选自下列的化合物在制备用于预防或治疗鼻病毒感染、尤其是感冒的药物中的用途1)对-(α-乙氧基-对-苯基-苯甲酰甲基氨基)苯甲酸(xenalamine)
2)4，4’-二-联苯乙二醛-水合物(xenaldial) 3)对-(α-乙氧基-β-酮基-β-1-萘基)-乙基氨基-苯甲酸(DV1) 4)对-(α-乙氧基-β-酮基-β-2-萘基)-乙基氨基-苯甲酸(DV2) 5)对-(α-乙氧基-β-酮基-β-2-茚基)-乙基氨基-苯甲酸(DV3) 6)对-(α-乙氧基-β-酮基-β-1-菲基)-乙基氨基-苯甲酸(DV4)
7)对-(α-乙氧基-β-酮基-β-2-菲基)-乙基氨基-苯甲酸(DV5) 上述化合物的活性在细菌斑抑制测定法中进行评估，该测定法在恒河猴肾细胞、WI38和Ohio-HeLa人细胞的单层上进行，这些细胞分别适于鼻病毒M和H株系的繁殖。在该测定法中，与未处理的对照培养物相比，向培养基中加入能够阻止病毒进入细胞的试剂减少了微细菌斑的形成。因此，受试化合物的有效性可以通过暴露于病毒后对处理过的和未处理的培养基中的微细菌斑计数来确定。
结果表明，受试化合物能够防止或中止鼻病毒导致的感染过程。此外，化合物对处理的细胞没有毒性。尽管观察到的效果可能是由于受体阻断，但是本发明不以任何方式受特定作用机制的束缚。
另一方面，本发明涉及含有至少一种上面提到的化合物以及可药用载体和赋形剂的药物组合物。
根据优选的实施方案，组合物为适于吸入给药的形式。优选的药物形式为用于通过喷雾和气溶胶经口或经鼻给药的溶液剂、混悬剂、分散剂、散剂和颗粒剂。这些药物形式可用常规技术，例如在Remington’sPharmaceutical Sciences Handbook，Mack Pub，Co.，NY，USA，17版中所描述的技术制备。
活性成分的有效剂量可以为0.1到10mg/Kg/天，优选1mg/Kg/天。
通过下面的实施例阐明本发明。
实施例1细胞单层上的细菌斑测定法方法1.在直径6.75cm的培养皿中制备恒河猴肾细胞和人细胞系(WI 38、MRC-5和Ohio-Hela细胞)的汇合的单层；2.吸出生长培养基；3.用10ml培养基(无血清生长培养基)、Earle’s盐溶液-乳清蛋白水解液洗涤每只培养皿并在33℃孵育60分钟；4.吸出液体；5.在Earle’s盐溶液-乳清蛋白水解液中制备系列1∶10病毒稀释液(鼻病毒株系M和鼻病毒株系H)并将每只培养皿用0.2ml体积的病毒稀释液孵育。每种病毒稀释液一式两份地接种；6.在Earle’s盐溶液-乳清蛋白水解液中制备类似的系列病毒稀释液(如5中所述)，加入所需浓度的抗病毒受试化合物；7.制备作为对照的加入了所需浓度的受试抗病毒化合物的Earle’s盐溶液-乳清蛋白水解液(每种受试化合物1个对照)；8.在33℃孵育感染的单层60分钟，以15分钟为间隔轻柔地摇动平皿以均匀地分布接种物；9.将平皿置于平的表面；10.向每个平皿中加入溶于Earle’s盐溶液-胎牛血清中的10ml营养琼脂，在44℃平衡，使其硬化。该步骤必须在弱光下进行；11.用盖子盖上平皿并在33℃、黑暗中、5％CO2湿润空气中倒置孵育；12.孵育3天后计数微细菌斑它们在粉红色背景中显示为灰白色的接近圆形的区域。
1)病毒鼻病毒H株系，细胞系WI38结果
C*＝汇合的细菌斑以相同的摩尔浓度12.5γ/ml Xenaldial溶液试验的化合物2)病毒鼻病毒H株系，细胞系Ohio-Hela结果
C*＝汇合的细菌斑以相同的摩尔浓度12.5γ/ml Xenaldial溶液试验的化合物
3)病毒鼻病毒M株系，细胞系MKC-5结果
C*＝汇合的细菌斑以相同的摩尔浓度12.5γ/ml Xenaldial溶液试验的化合物实施例2对-(α-乙氧基-β-酮基-β-2-萘基)-乙基氨基-苯甲酸(DV2)的体外活性用被HR14鼻病毒感染并在加有2％胎牛血清的Dulbecco’s培养基中生长的HeLa细胞在连续稀释液中评估D2的活性。
将D2以100mg/ml的浓度溶于二甲亚砜(DMSO)中并用Dulbecco’s培养基稀释到3mg/ml。
所有实验一式两份地进行。
通过电子显微镜确定的最大无毒剂量(MNTD)和最低抑制浓度(MIC)分别为51μg/ml和0.006μg/ml。以MNTD/MIC的比计算的保护指数为8.5，远远高于其它已知的抗鼻病毒化合物，如Disoxaril。这些结果表明DV2具有低剂量下抗HR14鼻病毒的活性并且没有抗HeLa细胞的毒性。
实施例3药物组合物制备具有下列组成的可咀嚼的泡腾片剂活性成分(化合物DV1-DV5，xenalamine或xenaldial)＝35mg玉米淀粉 ＝8mg三碱式柠檬酸盐＝40mg硬脂酸镁 ＝2mg喷雾剂/气溶胶喷雾剂具有单剂给药器(可喷出体积0.1ml/剂)的10ml容器(约100剂)。组成(w/w)活性成分 ＝15％麝香草酚 ＝0.84％单宁酸 ＝1.68％醇 ＝45％纯化水加至100，约＝37.08％气溶胶适于喷雾器的1ml单剂小瓶和喷雾剂具有相同的组成。
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权利要求
1.选自下列的化合物在制备用于预防或治疗鼻病毒感染的药物中的用途a)对-(α-乙氧基-对-苯基-苯甲酰甲基氨基)苯甲酸(xenalamine) b)4，4’-二-联苯乙二醛-水合物(xenaldial) c)对-(α-乙氧基-β-酮基-β-1-萘基)-乙基氨基-苯甲酸(DV1) d)对-(α-乙氧基-β-酮基-β-2-萘基)-乙基氨基-苯甲酸(DV2) e)对-(α-乙氧基-β-酮基-β-2-茚基)-乙基氨基-苯甲酸(DV3) f)对-(α-乙氧基-β-酮基-β-1-菲基)-乙基氨基-苯甲酸(DV4) g)对-(α-乙氧基-β-酮基-β-2-菲基)-乙基氨基-苯甲酸(DV5)
2.如权利要求1所述的化合物的用途，用于预防或治疗上、中和下呼吸道的感染。
3.如权利要求1-2所述的化合物的用途，用于预防或治疗感冒。
4.含有如权利要求1中所述的化合物的用于吸入给药的药物组合物。
5.权利要求4所述的组合物，其为溶液剂、混悬剂、分散剂、散剂和颗粒剂的形式。
6.权利要求4和5所述的组合物用于制备喷雾剂和气溶胶的用途。
全文摘要
本发明公开了用于预防和治疗鼻病毒感染的乙二醛衍生物。
文档编号A61K31/192GK1652762SQ03810235
公开日2005年8月10日 申请日期2003年5月5日 优先权日2002年5月8日
发明者G·塔罗 申请人:尤尼哈特公司