专利名称：非肽的brs－3激动剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的、对铃蟾肽受体3亚型(BRS-3)具有选择地激动作用的非肽化合物，并涉及包含该化合物的药物制剂以及用于制备该化合物的方法。
铃蟾肽(Bn)是一种由14种氨基酸组成的肽，最初从两栖动物中分离的。两种在哺乳动物中发现的肽神经介肽B(NMB)和“胃泌素释放肽”(GRP)是结构相似的肽。这些铃蟾肽类的肽是相应的铃蟾肽受体、“神经介肽B受体”(NMB-R，BB1)和“胃泌素释放肽受体”(GRP-R，BB2)的天然内源配体。铃蟾肽受体属于具有7个跨膜结构域的G-偶合受体组。
由于其氨基酸序列的同源性，铃蟾肽受体3亚型(BRS-3或BB3)被归类为铃蟾肽受体家族[参见Fathi等人(1993)J.Biol.Chem.2685979-84；下面被引用为“Fathi等人”]。BRS-3的天然配体迄今还是未知的。已经证实了在大脑的不同区域[参见Yamada等人(1999)PhysiolBehav.66863-7]、次级精母细胞[参见Fathi等人]、胰岛细胞[参见Fleischmann等人(2000)Lab Invest.801807-17]和怀孕动物的子宫组织[参见Gorbulev等人(1992)Eur.J.Biochem.208405-10]中BRS-3的表达。此外，BRS-3被发现于不同的人体癌细胞系中(如肺[参见Fathi等人]、乳腺[参见Gorbulev等人(1994)FEBS Lett.340260-4]、前列腺[参见Sun等人(2000)Prostate42295-303]或卵巢[参见Sun等人(2000)Regul.Pept.9077-84])中。
已剔除BRS-3基因的遗传变异小鼠(“BRS-3敲除小鼠”)表现出包括肢体肥胖、过量摄食以及高血压和糖尿病的病状[参见Okhi-Hamazaki等人(1997)Nature 390165-9]。因此，BRS-3看来似乎在调节葡萄糖代谢和脂代谢、保持能量态和控制血压、以及在影响取食行为中是必要的参与者。因此可认为BRS-3激动性化合物特别适用于预防和/或治疗病理状态如肥胖(＝肥胖症(Adipositas))、糖尿病、血胰岛素过多、心血管病、进食失调(摄食过量、厌食、易饿病)和/或代谢综合症(＝综合症X)。综合症X表明它在所有类型II的糖尿病和/或降低葡萄糖耐量、动脉高血压、脂代谢失调、肥胖以及冠心病上。
此外，已知BRS-3的活化作用可以具有神经保护作用[参见WO01/68120]。BRS-3还看起来似乎与味觉[参见Yamada等人(1999)Physiol.Behav.66863-7]、影响社会行为[参见Yamada等人(2000)Physiol.Behav.68555-61]以及某些情绪行为[参见Yamada等人(2002)Mol.Psychiatry.7113-7]相关。因此同样地认为BRS-3-调节化合物可适用于预防和/或治疗精神症状如沮丧或恐惧状态、味觉失调和/或中枢神经系统变性疾病，如帕金森症或阿尔茨海默病(Alzheimer)。
已知一些合成的肽配体以一定的亲和性与BRS-3结合，并且在其上展示激动性作用，即BRS-3选择性八肽[D-Phe6，Phe13]Bn(6-13)丙酰胺[参见Wu等人(1996)Mol Pharmacol.501355-63]和低选择性的九肽[D-Tyr6，β-Ala11，Phe13，Nle14]Bn(6-14)[参见Mantey等人(1997)J Biol Chem.27226062-71]及其衍生物[参见Pradhan等人(1998)Eur J Pharmacol.343275-87；Mantey等人(2001)J BiolChem.2769219-29]。
此外低分子量的、非肽的铃蟾肽类似物化合物已在WO 98/07718中公开了，但是它们是铃蟾肽受体家族的另外两种亚型(NMB-R和GRP-R)的选择性激动剂。对BRS-3具有高亲合力的选择性激动作用的低分子量的、非肽类化合物迄今未有描述。
因此，本发明的一个目的是可制备对BRS-3具有高亲合力的选择性激动作用的新的、低分子量的、非肽类化合物。
出人意外地，现已发现本发明低分子量的非肽类新化合物是选择性BRS-3激动剂，从而适用于预防和/或治疗能通过刺激BRS-3产生有利影响的病症。由于其有利作用，本发明的化合物看来尤其适用于预防和/治疗肥胖(＝肥胖症)、糖尿病、血胰岛素过多、心血管病、进食失调(摄食过量、厌食、易饿病)和/或综合症X。
本发明的目的是提供如通式I所示的新化合物， 其中A1为CH或，当A2不代表键并同时A3不代表NH，也表示氮，A2为键、C1-2-亚烷基或，当A1为CH以及R2为氢，也表示羰基，A3为未取代或经C1-4-烷基或C1-4-烷基羰基酰胺取代的亚甲基或，当R2为氢或与R1一并为键，也表示NH，R1为氢或，当A2代表羰基，也表示氨基，和R2为氢，或R1和R2一并为C1-2-亚烷基或，当A2为键，R1和R2可一并为键。
R3为氢或甲基，Ar1为未取代或经卤素或C1-4-烷基取代1至2次或由键合在两个相邻环碳原子上的C1-2-亚烷基二氧基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吲哚基或四氢异喹啉基，Ar2为呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、吡咯基或吲哚基，Ar3为未取代或经卤素取代1至2次的苯基或吡啶基，m为0或1和n为0或1，以及任选的其生理相容的酸加成盐。本发明进一步的目的是包含式I化合物的药物制剂以及用于制备这些化合物的方法。
其中如果取代基C1-4-烷基包含在式I化合物中，其可为直链或支链的。其中如果包含卤素的取代基，其可尤其为氟、氯或溴。氯是优选的。
其中如果A3经C1-4-烷基取代，优选甲基。其中如果A3经C1-4-烷基羰基酰胺取代，优选正丙基酰胺。
R3优选为氢。
Ar1优选为未取代或经卤素取代1次的苯基、吡啶基、呋喃基(尤其是2-呋喃基)、或吲哚基(尤其是2-吲哚基)。
Ar2优选为苯并噻吩基或吲哚基。吲哚基，尤其3-吲哚基是优选的。
Ar3优选为苯基，尤其是无取代的苯基。
n优选为1。
优选的式I化合物是下列的通式Ia化合物， 其中Ar1和m如上定义，R101为氢或氨基，R4为氢、C1-4-烷基或C1-4-烷基羰基酰胺，并且Ar201为苯并噻吩基或吲哚基，通式Ib化合物， 其中R4、Ar1、Ar201和m如上定义，通式Ic化合物， 其中Ar1、Ar201和m如上定义，通式Id化合物，
其中Ar1、Ar201和m如上定义，通式Ie化合物， 其中Ar1、Ar201和m如上定义，通式If化合物， 其中A1、Ar1、Ar201和m如上定义。
式I化合物表示非肽化合物，然而其包含肽键。因此式I化合物可看作是非天然多肽，并且以已知用于多肽合成的方法进行部分或完全合成，例如采用具适合的氨基和羧基基底的常规固相或液相合成技术，优选以连续的方式进行合成。其它的有机化学合成方法也可用于制备式I化合物，可采用已知的常规有机化学合成方法。
因此，式I化合物及其酸加成盐例如可以下列方式进行制备
a)用于制备通式Ig化合物 其中A3、R101、R3、Ar1、Ar2、Ar3、m和n如上定义，将通式II化合物， 其中m如上定义，Ar110如上述Ar1所定义的，其中任何反应基团均受到保护基团的保护，以及R111如上述R101所定义的，任何氨基均受到保护基团的保护，与通式III化合物进行反应， 其中R3、Ar3和n如上定义，Ar210如上述Ar2所定义，任何反应基团均受到保护基团的保护，以及A310如上述A3所定义的，任何反应性氮原子均受到保护基团的保护，或b)用于制备通式Ih化合物 其中A1、A2、R1、R2、R3、Ar1、Ar2、Ar3、m和n如上定义，A301如上述A3所定义(除NH之外)，将通式IV化合物，
其中A1、A2、Ar110和m如上定义，A311如上述A301所定义，任何反应性氮原子均受到保护基团的保护，R110如上述R1所定义的，任何氨基均受到保护基团的保护，以及R201如上述R2所定义的(除氢之外)，或表示氨基保护基团，与通式V化合物进行反应， 其中R3、Ar210、Ar3和n如上定义，或c)用于制备通式Ii化合物 其中A1、R3、Ar1、Ar2、Ar3、m和n如上定义，以及A201如上述A2所定义(除羰基之外)，将具有羰基合成等价物的式V化合物与通式VI化合物反应， 其中A1、A201、Ar110和m如上定义，R104为氢或，当A1为氮，也表示氮保护基团，以及SG为适用于肽化学的保护基团，或
d)用于制备通式Ij化合物 其中A310、R3、Ar1、Ar2、Ar3、m和n如上定义，将式III化合物与通式VIII化合物反应，Ar110-(CH2)m-CHOVIII其中Ar110和m如上定义，并且随后任何保护基团均再被去除，视需要将所产生的式I化合物转变成其酸加成盐，或将酸加成盐转变成游离的式I化合物。
根据变化方法a)，可通过将式II的羧酸衍生物与式III的伯胺反应制备式Ig化合物，并且随后再去除可能的保护基团。该反应可以在肽化学方法中已知的液相或固相反应的方式进行，例如以“Merrifield”式的固相肽合成法。如果合成在固相中进行，优选在极性非质子溶剂中，如N-甲基吡咯烷酮(＝NMP)中，将式III的树脂结合(resin-bound)化合物与式III化合物、以及作为偶合反应剂的适宜化合物反应，所述偶合反应剂尤其是N-羟基苯并三唑(＝HOBT)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲阳离子四氟硼酸盐(＝TBTU)、N-羟基-9-氮杂苯并三唑(＝HOAT)和/或2-(1H-9-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲阳离子六氟磷酸盐(＝HATU)，以及也存有非亲核有机碱，尤其是二异丙基乙基胺(＝DIPEA)。适用于固相合成的树脂尤其是2-(4-甲酰基-3-甲氧苯氧基)乙基树脂(＝FMPE树脂，参见如A.Floersheimer等人，Pept.1990，Proc.Eur.Pept.Symp.，21st(1991)，Meeting Date 1990，E.Giralt等人(eds.)ESCOMLeiden，1991；131)。该树脂可用已知方法上载待用于进一步反应的化合物(参见如下)。
式II化合物本来是已知的或可以已知方法从已知化合物制备(参见例如R.Gretler等人(1978)Helv.Chim.Acta 61(5)1730-1755)。因此例如式II化合物(其中Ar110为任选地经保护的2-吲哚基)可通过将硝基苯基乙酰乙酸衍生物与三氯化钛还原反应的已知方法获得(参见例如C.J.Moody等人(1990)J.Chem.Soc.Perkin Trans.1673-679；A.Mai等人(1999)J Med.Chem.42619-627)。用于本发明范围内的保护基团均可以已知方法引入，并且通常是选择性地、相互独立的并再度去除的，例如用于肽合成的适宜的保护基团已知于J.A.W.McOmie，″ProtectiveGroups in Organic Chemistry″，Plenum Press 1971，or T.W.Green andP.G.M.Wuts，″Protective Groups in Organic Synthesis″，Wiley andSons 1999。若取代基R111经适宜的保护基团保护，尤其来自肽化学已知的保护基团是适合的。优选适宜的是叔丁基羰基氧基(＝Boc)或(9H-芴-9-基甲氧基)羰基(＝Fmoc)保护基团。
例如式III化合物可通过将式V化合物与通式X化合物反应制得， 其中A310如上定义，以及SG如上定义并且优选为Fmoc保护基团，随后以已知的方法再度去除保护基团SG。该反应可以上述用于将式II化合物与式III化合物反应的方法进行，其中优选式V化合物是与树脂结合的。若存在于基团A310中的反应性氮原子受到适宜保护基团的保护，三苯基甲基(＝三苯甲基，Trt)保护基团尤其适用于此。式X化合物本身是已知的，或可以已知方法由已知化合物制备。
式V化合物可以通式XI化合物来加以制备，
其中Ar210和SG如上定义，与通式XII化合物反应， 其中R3、Ar3和n如上定义，随后将保护基团SG再度去除。该反应可以上述用于将式II化合物与式III化合物反应的方法以固相合成法进行，在此优选式XII化合物是与树脂结合的。若使用FMPE树脂，该树脂可以已知的还原胺化方法上载式XII化合物(参见B.Drner等人，Pept.1998，Proc.Eur.Pept.Symp，25th(1999)，Meeting Date 1998；S.Bajusz等人(eds.)，Akadémiai KiadóBudapest，1999；90)。式XI化合物本身是已知的，或可以已知方法由已知化合物制备。若式XI化合物中的Ar210是受到保护基团保护的，尤其是来自肽化学的已知保护基团是适宜的。优选的Boc保护基团是适宜的。式XII化合物本身是已知的，或可以已知方法由已知化合物制备。
方法a)的实施方式中，式Ik化合物， 其中R101、R3、Ar1、Ar2、Ar3、m和n如上定义，可以由式II的羧酸衍生物与式IIIa的肼衍生物反应制得， 其中R3、Ar210、Ar3和n如上定义，随后再度去除可能存在的保护基团。该反应可以上述用于将式II化合物与式III化合物反应的方法以固相合成法进行。式IIIa化合物可通过将式V化合物与已知的5-(9H-芴-9-基甲氧基)-3H-[1，3，4]噁二唑-2-酮反应加以制备，并且随后去除不需要的保护基团。该反应可以例如上述用于将式II化合物与式III化合物反应的方法，以固相合成法进行，其中可用作溶剂的尤其是二氯甲烷。
根据变化方法b)，式Ih化合物可通过将式IV的羧酸衍生物与式V的伯胺进行反应，随后再度去除可能存在的保护基团来制备。该反应可以上述用于将式II化合物与式III化合物反应的方法以固相合成法或也可以用液相法进行反应。若反应在固相中进行，优选式V化合物是与树脂结合的。若反应在液相中进行，可以在极性非质子溶剂中如二甲基甲酰胺(＝DMF)和在方法a)中给出的作为偶联剂的适宜化合物的存在下以及在非亲核有机碱尤其是对称三甲基吡啶(sym.Colliding)的存在下进行反应。当R201表示氨基保护基团时，其可优选为Fmoc保护基团。当取代基R110受到适宜保护基团保护时，适用于取代基R111的上述给定保护基团是适宜的。式IV化合物可通过将通式XIII化合物与通式XIV反应制得， 其中A1、A2、R110、R2、Ar110和m如上定义， 其中A311如上定义，X为可去除的离去基团，以及SG1为羧酸保护基团，随后以已知方法再度去除羧酸保护基团SG1，并且视需要将保护基团引入取代基R2中。介于-20℃至室温之间(＝RT)，优选在0℃，在芳族溶剂如甲苯中进行反应。尤其是卤素，优选氯或溴，被用作式XIV化合物中的离去基团X。羧基保护基团SG1尤其是较低烷基，优选乙基或叔丁基。式XIII化合物本身是已知的，或可以已知方法由已知化合物制备。或XIV化合物是本身已知的，或可以已知方法由已知化合物制备。
根据变化方法c)，式Ii化合物可通过将式V的伯胺与羰基合成等价物和式VI的肼衍生物进行反应，并且随后再去除可能存在的保护基团而制得。该反应优选在室温下的液相中进行，尤其是双极性的非质子性溶剂如二氯甲烷。有利的是，操作是在溶于溶剂的有机非亲核碱中进行，如4-二甲基氨基吡啶(＝DMAP)。适宜的羰基基团合成等价物优选二戊氟苯基碳酸酯或碳酰氨、双-(三氯甲基)碳酸酯(＝三碳酰氯)、氯甲酸三氯甲酯(＝二碳酰氯)或羰基二咪唑。式VI化合物本身是已知的，或可以已知方法由已知化合物制备。因此例如通式VIa的化合物， 其中Ar110、m和SG如上定义，可以已知方法由通式VIII相应的醛和通式XVII相应的胺通过还原胺化作用制得， 其中SG2表示肽化学中已知的保护基团，优选Boc保护基团，随后引入保护基团SG，并且最终去除保护基团SG2。该反应可在双极性非质子性溶剂如四氢呋喃(＝THF)以及优选在室温下进行。还原获得的作为中间产物的相应亚胺化合物可在双极性非质子性溶剂如THF以及介于-20℃和室温，优选0℃下进行。适宜的还原剂为络合的氢硼化物如NaCNBH3。式VIII和XVII化合物本身是已知的，或可以已知方法由已知化合物制备。
根据变化方法d)，式Ij化合物可通过将式III的胺化合物与式VIII的醛反应，并且随后再去除可能存在的保护基团。该反应可以上述用于将式XVI化合物与式XVII化合物反应的方法进行，然而该实例中最终亚胺并没有减少。
所述获得的式I化合物均可以已知方法从反应混合物中分离并进行纯化。可以常规方法将酸加成盐转化为游离碱，并且视需要可以已知方法将其转化为生理相容的酸加成盐。
式I化合物的生理相容的盐是其与无机酸的盐，例如硫酸、磷酸或氢卤酸，优选氢氯酸，或其与有机酸的盐，如低级脂肪族的一元羧酸、二元羧酸或三元羧酸如马来酸、富马酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸，或磺酸例如低级烷烃磺酸，如甲烷磺酸或未经取代或在苯环上经卤素或低级烷烃取代的苯磺酸，如对甲苯磺酸。
式I化合物除连有-CH2-Ar2基的碳原子外，也可进一步包含其它手性中心，即连有取代基R3的碳原子、亚甲基A3的经C1-4烷基或C1-4烷基羰基酰胺取代的碳原子和/或CH基团A1的碳原子，其中R1为氨基。因此式I化合物可以多种立体异构形式存在。本发明既包含光学异构体的混合物，又包含式I的纯异构体化合物。式I的纯异构体化合物是优选的，尤其是式I化合物(其中亚甲基A3的碳原子经C1-4-烷基或C1-4-烷基羰基酰胺取代具有S构型)。若将光学异构体混合物的初始化合物用于合成式I化合物，式I化合物也以光学异构体的混合物形式获得。由立体化学均一形式的初始化合物进行合成，则可获得式I的立体化学均一的化合物。式I的立体化学均一化合物也可以已知方法从光学异构体混合物中获得，例如通过对于手性分离物质的色谱分离法，或通过与适宜的光学活性的酸反应，如酒石酸或樟脑-10-磺酸，并且随后通过所获得的非对映异构体盐的分馏结晶分离成光学活性对映体。
式I新化合物及其生理相容的酸加成盐对铃蟾肽受体3亚型(与其它已知的铃蟾肽受体亚型、NMB-R和GRP-R比较)的高选择性亲和力而著称，并对铃蟾肽变体3亚型起激动作用。因此，应期望式I化合物适用于预防和/或治疗通过刺激BRS-3能产生有利影响的病症。特别是，本发明的化合物看起来适用于预防和/或治疗肥胖(＝肥胖症)、糖尿病、血胰岛素过多、心血管病、进食失调(摄食过量、厌食、易饿病)和/或综合症X。
药理学试验方法描述例如在按照FLIPR方法(“Fluorometric Imaging Plate Reader”)中进行的药理标准试验方法，可体外证明试验物质的BRS-3-激动性效果。
对此，首先以已知的方法，用表达载体转染CHO细胞(＝“中国仓鼠卵巢细胞”)，所述表达载体用于人体铃蟾肽3亚型的受体，即BRS-3。
采用限制性核酸内切酶EcoRI，将人体BRS-3的cDNA(GenBankAccession Nr.L08893下的核酸序列)从质粒载体pGEM4(来自Promega，USA)中切离，并且次级克隆入表达载体pcDNA3.1(-)(来自Invitrogen，USA)。将已经用表达载体RD-HGA16(其含有人体Gα16蛋白质的cDNA序列(GenBank Accession Nr.M63904的核苷酸序列))稳定转染的CHO-K1细胞置于24样品孔的样品板中(“24-孔板”)，并在37℃下和5％CO2于添加Glutamax-I(来自GibcoBRL，kat.-Nr.31765)至已加入10％浓度的胎牛血清(56℃灭活1小时，来自GibcoBRL)、25μg/ml的庆大霉素(来自GibcoBRL)和0.2mg/ml潮霉素B(来自GibcoBRL)的F-12培养基中，无菌条件下的空气湿润的培养箱中培养过夜。第二天，通过加入BRS-3表达载体转染的细胞，利用“Effectene转染试剂”(来自Qiagen)，每样品孔中有12μl含有0.3μg/μl的DNA表达载体的溶液。转染后一天，用选择性培养基替换原培养基。对此，在37℃下和5％CO2于添加Glutamax-I(来自GibcoBRL，kat.-Nr.31765)至已加入10％浓度的胎牛血清(56℃灭活1小时，来自GibcoBRL)、25μg/ml的庆大霉素(来自GibcoBRL)、0.2mg/ml潮霉素B(来自GibcoBRL)和0.5mg/ml遗传霉素(来自GibcoBRL)的F-12培养基中，将分别同时表达BRS-3和人体Ga16蛋白质的经转染细胞在无菌条件中培养。为优化细胞试验，选择具有最高受体表达速率的细胞。对此，将所述转染的细胞用上述选择培养基以1∶30000稀释，并置于96样品孔的样品板中(“96孔板”)。将所述细胞于37℃和5％CO2中培养过夜，然后选择仅含有单细胞克隆的样品孔。这些细胞首先于24样品孔的样品板中(“24孔板”)培养，然后在Costar塑料瓶中培养(先是25ml，随后是225ml)。各个单细胞克隆的BRS-3受体表达通过测定作为配体的合成九肽[D-Phe6，β-Ala11，Phe13，Nle14]Bn(6-14)的EC50值来计算(对于测试的操作参见下文)。在-80℃下，以等分量将转染的细胞贮藏在具有10％二甲亚砜(＝DMSO)的1.8ml培养基中(细胞浓度1×106细胞/ml)。对于培养，将冻结的等分量加热至37℃，转入Costar塑料瓶(225ml)中，并用50ml的上述选择性培养基稀释。该培养基首先在培养30分钟后进行一次性交换。在接下来的每个一至3天里，除去培养基，用PBS Dulbecco’s(来自GibcoBRL)洗涤附着的细胞(40-90％汇合)，并通过在37℃用胰蛋白酶EDTA溶液(来自GibcoBRL)处理2分钟，从烧瓶底部进行分离。如果欲对该细胞作进一步培养，将它们转入新的具新鲜培养基的塑料瓶中。若欲用该细胞进行试验，将该细胞转入96样品孔、清洁的底板并且具有盖子的Costar样品板中(“Costar96孔试验板”，来自Corning)，条件是将细胞浓缩物设为1.2×104细胞/ml。
BRS-3经G-蛋白质偶联至CHO细胞的Ca2+信号传递通道。如果激动剂结合受体，经由G-蛋白质激活磷脂酶C，然后磷脂酶催化水溶性肌醇磷酸盐的合成。该水溶性肌醇磷酸盐引起存贮在内质网内的Ca2+的释放。以称为FLIPR试验测定胞液Ca2+浓度的瞬间提高。最终，细胞充满了Ca2+结合的、荧光染料Fluo4(来自Molecular Probes)。该细胞内的染料结合激活后被释放的胞液Ca2+离子，并以此加强其荧光强度。荧光强度的改变与细胞内Ca2+浓度的改变成比例，并且是经相应的激活剂激活细胞的计量标准。最高的荧光感应下，激活度取决于所采用化合物的浓度。对于每种待测物质的不同物质浓度，测定其激活BRS-3引起的荧光变化。采用合成九肽[D-Phe6，β-Ala11，Phe13，Nle14]Bn(6-14)激活BRS-3的最大荧光感应充当100％激活的参考值[参见Mantey等人(1997)J.Biol.Chem.27226062-26071]。产生50％激活的化合物浓度被确定为EC50值，并且作为每个充当BRS-3激动剂测试化合物的效果的计量标准。
在“Costar 96孔测试板”(来自Corning)中，将转染的CHO细胞培养18至24小时(＝h)，直至汇合。每天制备新鲜的250mM丙磺舒原液。对此，将710mg丙磺舒(来自Sigma #P8761)溶解在5ml的1N的NaOH中，然后用含有20mM的HEPES(来自PAA Laboratories)无苯酚磺酞的HBSS介质(GibcoBRL)稀释至10ml。通过将1mgFluo4溶解在440μl的DMSO中制备2mM荧光钙离子指示剂染料Fluo4的原液，并贮藏在-20℃下。
此外，使用20％浓度(w/v)Pluronic F-127(来自Sigma)的DMSO溶液。即刻使用前，将22μl等分量的Fluo4原液解冻。通常采用将42ml的含有60mM的HEPES(来自PAA Laboratories)无苯酚磺酞的HBSS介质(GibcoBRL)，与420μl的丙磺舒原液，以及各22μl Fluo4原液和Pluronic F-127溶液相混合来新鲜制备加载介质。在37℃和5％的CO2中，将细胞分别用100μl新鲜加载介质在每个样品孔中培养45-60分钟。然后将所述细胞用100μl的HBSS介质洗涤3次，每次使用20mM的HEPES和2.5mM的丙磺舒。在随后最终的洗涤步骤中，将100μl体积保留在每个96样品孔的细胞中。
每个实例中，由式I化合物制备10mM于DMSO溶液中的原液，用具有20mM HEPES的HBSS介质的稀释系列将其装入96样品孔的微量滴定板中(“96孔板”，来自Greiner)。测定中使用的最大浓度通常为33μM，但在某些实例中也仅为1μM。根据不同的化合物，将溶液以1∶2、1∶3、1∶4或1∶10的比例于8或16的不同样品孔中稀释。每个微量滴定板含有作为参照的九肽[D-Phe6，β-Ala11，Phe13，Nle14]Bn(6-14)的稀释系列。
FLIPR设备(来自Molecular Devices)设计为在30秒(＝sec.)时间内每间隔6秒测定背景荧光。每个实例中，从微量滴定板的每个样品孔转移至相应的细胞板样品孔50μl后，绘制100秒(＝sec.)内(以1秒的间隔)荧光的改变，于最后的42秒内，每次间隔为6秒。
绘制以浓度为函数的参照化合物荧光的改变，根据已经观察到的荧光的最大改变，确定九肽的肽浓度(通常为16μM)。将每样品孔荧光的最大变化值输至Excel电子数据程序中(来自Microsoft)，并用采用100％值的相应参照化合物的荧光最大变化值加以校验。利用GraphpadPrism程序(Version 3.00，来自Graphpad Software)计算以待测化合物的浓度为函数的相对荧光变化的变化曲线和其相应的EC50值。
在上述的药理学FLIPR试验中，所有下述给出的化合物实例的EC50值(以nM)均低于或等于2600。实施例13至34化合物显示的EC50值低于或等于710。对于式I的各种化合物，经上述FLIPR试验中确定的EC50值列于下表1中。表1中给定的实施例号与下面的制备表1试验物质对BRS-3的激活活性
式I化合物可以常规的药物制剂使用。所使用的剂量必然地分别根据待治疗的状态和所应用的物质的类型可以个别地不同和变化。然而通常来说，每份剂量含有0.1至300mg的活性物质的药物形式适用于施与人体和较大的哺乳动物。
本发明的式I化合物可与常规的药物助剂和/或赋形剂一起，包含在固体或液体药物制剂中。固体制剂的实例是可口服用药的制剂，如片剂、糖衣丸、胶囊、粉剂或粒剂，或可为栓剂。除常规的药物助剂如润滑剂或片剂崩解剂外，这些制剂可包含常规的药物无机和/或有机赋形剂，如滑石、乳糖或淀粉。液体制剂如活性物质的悬浮剂或乳剂可包含常用的稀释剂如水、油和/或悬浮剂如聚乙二醇等。还可加入其它的助剂例如防腐剂、矫味剂等。
可以已知方法将活性物质与药物助剂和/或赋形剂混合和配制。对于制备固体药剂形式，例如可以常规方法将活性物质与助剂和/或赋形剂混合，并可以湿法或干法造粒。颗粒或粉末可以常规方法直接注入胶囊中或压制成片芯。可视需要以已知方法对它们进行包糖衣。
下面的实施例将进一步解释本发明，但不限制其范围。
实施例1N1-[(1R)-2-(1H-3-吲哚基)-1-(苯乙基氨甲酰基)-乙基]-(2S)-2-{[(1R)-1-氨基-2-苯乙基]-羧酰胺基}-戊肼；(H-D-Phe-Gln-D-Trp-苯乙基酰胺) A)将100mg的FMPE树脂(最大容量0.54mmol/g)于1ml的二氯乙烷中溶胀10分钟。将0.5ml的三甲基原甲酸酯(＝TMOF)、68μl的2-苯乙基胺和114mg的NaBH(OAc)3加入上述所得溶液，用超声处理所产生的混合物10分钟，随后于室温下振荡过夜。然后三次各3分钟各用3ml二氯甲烷洗涤树脂，和三次各3分钟各用3ml NMP依次洗涤树脂。随后将56mg的Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、41mg的HATU、14.6mg的HOAT和143μl对称的三甲基吡啶的1ml NMP加入经洗涤的树脂中。将该溶液中的树脂于室温下振荡5小时，每次用3ml的NMP洗涤3次各3分钟，并将该树脂再用56mg的Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、41mg的HATU、14.6mg的HOAT和143μl对称的三甲基吡啶的1ml NMP溶液处理过夜。最后将树脂用1ml二氯甲烷洗涤3次各3分钟，并以真空油泵干燥。由此获得的129mg用Fmoc-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺[加载0.366mmol/g；相当于30mg(0.047mmol)游离的Fmoc-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺]加载的FMPE树脂，其直接用于下列反应，无需去除中间产物。
B)将上述获得的经加载的FMPE树脂总量[用0.366mmol/g的Fmoc-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载，相当于30mg(0.047mmol)游离化合物]在5ml的NMP中溶胀10分钟。然后用5ml新鲜制备的于NMP中的20％浓度(v/v)的哌啶溶液处理FMPE树脂15分钟，每次用5ml的NMP洗涤5次各3分钟，最后将FMPE树脂再用5ml新鲜制备的于NMP中的20％浓度(v/v)的哌啶溶液处理15分钟。最后，每次用5mlNMP洗涤树脂5次各3分钟。所获得的用D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂直接用于下列反应中，无需分离中间产物。
C)将上述获得的经加载的FMPE树脂总量[假定用0.366mmol/g的D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于19.2mg(0.047mmol)游离化合物]每次用5ml NMP洗涤5次各3分钟。随后将57.4mg的Fmoc-Gln(Trt)-OH、12.7mg的HOBT×H2O和于2ml NMP中的30mgTBTU溶液加入经加载的FMPE树脂中。最后将46μl的DIPEA加入最终所得溶液，并将混合物振荡45分钟。只要每次用5ml NMP洗涤FMPE树脂5次各3分钟后，重复上述的偶合步骤。最后将其每次用5ml NMP再洗涤5次各3分钟。获得用Fmoc-Gln(Trt)-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，将其直接用于下列反应中，无需分离中间产物。
D)以上述步骤B)，将上述获得的经加载的FMPE树脂总量[假定用0.366mmol/g的Fmoc-Gln(Trt)-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于47mg(0.047mmol)游离化合物]处理至去除Fmoc保护基团。获得用Gln(Trt)-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，将其直接用于下列反应中，无需分离中间产物。
E)将上述获得的经加载的FMPE树脂总量[假定用0.366mmol/g的Gln(Trt)-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于36.6mg(0.047mmol)游离化合物]每次用5ml NMP洗涤5次各3分钟。随后将36.4mg的Fmoc-Phe-OH、12.7mg的HOBT×H2O和于2ml NMP中的30mg TBTU溶液加入所述经加载的FMPE树脂中。最后将46μl的DIPEA加入所得溶液，并将混合物振荡45分钟。每次用5ml NMP洗涤FMPE树脂5次各3分钟后，重复上述的偶合步骤。最后将其每次用5ml NMP再洗涤5次各3分钟。获得用Fmoc-Phe-Gln(Trt)-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，将其直接用于下列反应中，无需分离中间产物。
F)以上述步骤B)，将上述获得的经加载的FMPE树脂总量[假定用0.366mmol/g的Fmoc-Phe-Gln(Trt)-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于54mg(0.047mmol)游离化合物]处理至去除Fmoc保护基团。获得用Phe-Gln(Trt)-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，将其直接用于下列反应中，无需分离中间产物。
G)将上述获得的经加载的FMPE树脂总量[假定用0.366mmol/g的Phe-Gln(Trt)-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于43.5mg(0.047mmol)游离化合物]每次用3ml二氯甲烷洗涤3次各10分钟。随后每次用2ml三氟乙酸(＝TFA)/三异丙硅烷(＝TIPS)/H2O(18∶1∶1v/v/v)的混合物处理3次各30分钟，并从FMPE树脂中滤去。然后再每次用3ml二氯甲烷洗涤3次各3分钟，并从FMPE树脂中滤去。合并的滤液用经氮冷却的接收器以真空水泵蒸发浓缩。残余物吸收至DMSO中，并通过反相HPLC[来自Amersham PharmaciaBiotech kta Basic 100F的HPLC系统；泵系统P-900和检测器UV-900；来自Omnicrom YMC的ODS-A的C18柱(250mm×20mm，10μm，流速8ml/min)；用乙腈(溶剂B)和0.1％(v/v)TFA中的水(溶剂A)线性梯度洗脱(30分钟)]进行纯化。冷冻干燥纯化馏分，得到19.2mg无色粉末的标题化合物。
HPLC-MS(ESI)m/z 276.1(32)，308.1(90)，583.3(72)[m+H]+，605.4(100)[m+Na]+，893.6(13)，1165.2(10)[2m+H]+，1187.2(40)[2m+Na]+.
实施例2N1-苯乙基-(2R)-2-[(1S)-1-(苄基羧酰胺基)-乙基]-羧酰胺基-3-(1H-3-吲哚基)-丙酰胺 A)将100mg用Fmoc-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂[制备参见实施例1A]；加载0.345mmol/g；相当于22.3mg(0.035mmol)游离Fmoc-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺]以相应于实施例1B的方法起反应。将所得的经树脂结合的Trp(Boc)-苯乙基酰胺直接用于下列反应中，无需分离或纯化。
B)将上述获得的用D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂总量[假定用0.354mmol/g的D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于14.4mg(0.035mmol)游离化合物]每次用5ml NMP洗涤5次各3分钟。随后将22mg的Fmoc-Ala-OH、9.5mg的HOBT×H2O和于2mlNMP中的22.5mg TBTU溶液加入经加载的FMPE树脂中。最后加入34μl的DIPEA，并将所得混合物振荡45分钟。每次用5ml NMP洗涤FMPE树脂5次各3分钟后，重复上述的偶合步骤。最后将其每次用5ml NMP再洗涤5次各3分钟。获得用Fmoc-Ala-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，该树脂直接用于下列反应，而无需分离。
C)将上述获得的经加载的FMPE树脂总量[假定用0.354mmol/g的Fmoc-Ala-D-Trp(Boc)-N-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于24.5mg(0.035mmol)游离化合物]以相应于实施例1B的方法处理去除Fmoc保护基团。获得用Ala-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，无需分离将其直接用于下列反应中。
D)将上述获得的经加载的FMPE树脂总量[假定用0.354mmol/g的Ala-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于16.7mg(0.035mmol)游离化合物]每次用5ml NMP洗涤5次各3分钟。随后将9.6mg苯乙酸、9.5mg的HOBT×H2O和于2ml NMP中的22.5mgTBTU溶液加入经加载的FMPE树脂中。最后加入34μl的DIPEA，并将所产生的混合物振荡45分钟。每次用5ml NMP洗涤FMPE树脂5次各3分钟后，重复上述的偶合步骤。最后将其每次用5ml NMP再洗涤5次各3分钟。获得用苯基乙酸酯-Ala-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，无需分离将其直接用于下列反应中。
E)将上述获得的经加载的FMPE树脂总量[假定用0.354mmol/g的苯基乙酸酯-Ala-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于20.9mg(0.035mmol)游离化合物]以相应于实施例1G)的方法处理去除Fmoc树脂和Boc保护基团。采用HPLC和随后的冷冻干燥方法纯化所获得的粗产物，得到12.6mg(0.025mmol)无色粉末状的标题化合物，熔点为205-207℃。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，300K)δ＝10.78(s，1H，NH-CH-C)，8.24(d，JHH＝6.8Hz，1H，NH-CH-CH3)，8.18(d，J＝8.4Hz，1H，NH-CH-CH2)，8.00(t，J＝5.5Hz，1H，NH-CH2-CH2)，7.57(d，J＝7.9Hz，1H，arom)，6.95-7.32(m，14H，arom)，4.38-4.43(m，1H，NH-CH-CH2)，4.21-4.25(m，1H，NH-CH-CH3)，3.45(s，2H，CO-CH2)，3.19-3.24(m，2H，NH-CH2-CH2)，3.11(dd，J＝14.7Hz，J＝4.6Hz，1H，NH-CH-CH2)，2.84(dd，J＝14.6Hz，J＝9.6Hz，1H，NH-CH-CH2)，2.61(t，J＝7.6Hz，2H，NH-CH2-CH2)，1.01(d，J＝7.0Hz，3H，CH3).
HPLC-MS(ESI)m/z 159.1(40)，291.2(35)，308.1(100)，497.2(80)[M+H]+，519.4(55)[M+Na]+，764.5(20)，993.1(10)[2M+H]+，1015.2(100)[2M+Na]+.
实施例3N1-苯乙基-(2R)-2-{1-[(4-氯苄基)-氨基]-乙基羧酰胺基}-3-(1H-3-吲哚基)-丙酰胺 A)在4小时内，将8.35g 2-溴丙酸乙酯的18ml甲苯溶液搅拌并冷却滴入7.08g 4-氯苄胺和5.06g三乙胺于38ml甲苯中的溶液，随后将反应混合物搅拌4天。然后用300ml水萃取有机相，并用Na2SO4干燥。以真空水泵蒸发溶剂，在压力为1-1.2巴，采用急骤层析(flashchromatography)纯化所获得的残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相乙酸乙酯/己烷1∶1)。以真空水泵浓缩溶剂以及以真空油泵干燥残余物后，得到4.25g黄色油状的N-(4-氯苄基)-丙胺酸乙酯。
1H-NMR(250MHz，DMSO-d6，300K)δ＝7.31-7.38(m，4H，arom)，4.09(q，J＝7.1Hz，2H，CH2-CH3)，3.65(q，J＝13.9Hz，NH-CH2-C6H4Cl)，3.20-3.24(m，1H，NH-CH)，2.51(bs，1H，NH)，1.17-1.22(m，6H，CH2-CH3和CH-CH3).
B)将6.2ml的1N的NaOH和12ml甲醇加入1.0g上述获得的N-(4-氯苄基)-丙胺酸乙酯中，并且搅拌混合物30分钟。用1N的HCL中和并以真空水泵蒸发溶剂。将所获得的残余物置于15ml NaHCO3饱和水溶液和4ml二烷混合物中。将1.1g FmocCL的8ml二烷溶液在15分钟内滴入用冰冷却的所得溶液中。将反应混合物在冰冷却下搅拌30分钟，然后于室温下过夜。随后将20ml水加入反应混合物中，分离含水相并用100ml二乙醚进行提取。通过加入浓盐酸将含水相调节至pH1，并每次用100ml乙酸乙酯再提取3次。将合并的有机相用Na2SO4干燥，并以真空水泵蒸发溶剂。采用柱层析纯化所获得的残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相乙酸乙酯/己烷/乙酸1∶1∶1)。以真空水泵蒸发溶剂后，以真空油泵干燥残余物，得到1.3g无色油状的2-{4-氯苄基-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-氨基}-丙酸(2.98mmol)。未测定顺式/反式异构体的比例。
HPLC-MS(ESI)m/z 179.1(95)，436.0(75)[M+H]+，458.2(40)[M+Na]+，893.0(50)[2M+Na]+，909.2(100)[2M+K]+.
C)将0.26g苯乙基胺、1.13g Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、0.43g HOBT和1.03g TBTU溶解至15ml DMF中。将1.19g DIPEA于5分钟内滴入该所得溶液。然后搅拌反应混合物1小时，以真空水泵蒸发溶剂，并在压力为1-1-2巴，采用急骤层析纯化所获得的残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相乙酸乙酯/己烷1∶1)。以真空水泵浓缩溶剂并以真空油泵干燥残余物后，得到1.33g无色、蜡状固体的N1-苯乙基-(2R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基)-酰胺-3-[1-(叔丁氧基羰基)-3-吲哚基]-丙酰胺(＝Fmoc-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺)，熔点为140℃。
HPLC-MS(ESI)m/z 308.2(20)，530.3(40)，630.3(40)[M+H]+，652.4(10)[M+Na]+，1259.5(100)[2M+H]+，1281.5(30)[2M+Na]+.
D)将1.0g上述获得的Fmoc-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺溶解在6ml的20％浓度(v/v)哌啶的DMF溶液中。将反应混合物搅拌30分钟，随后用氮冷却的接收器以真空水泵蒸除溶剂。在压力为1-1.2巴，采用急骤层析从所得的Fmoc-哌啶混合物分离残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相乙酸乙酯/己烷2∶1)，然后进行洗脱(流动相三氯甲烷/甲醇15∶1)。以真空水泵浓缩溶剂并以真空油泵干燥残余物后，得到0.63g黄色油状的叔丁基-3-[(2R)-2-氨基-2-(苯乙基氨甲酰基)-乙基]-1H-1-吲哚羧酸酯(＝D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺)。
MS(ESI)m/z 159.1(20)，291.2(75)，308.1(95)，352.1(70)，408.1(100)[M+H]+，430.1(35)[M+Na]+，815.2(15)[2M+H]+，837.1(20)[2M+Na]+.
E)将0.32g 2-{4-氯苄基-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-氨基}-丙酸(0.736mmol，其制备参见上述步骤B))、0.30g叔丁基-3-[(2R)-2-氨基-2-(苯乙基氨甲酰基)-乙基]-1H-1-吲哚羧酸酯(其制备参见上述步骤D)、0.42g HATU和0.15g HOAT溶解至7ml DMF中。然后10分钟内滴加1.33g的对称的三甲基吡啶。将反应混合物搅拌1小时，随后在用氮冷却的真空水泵中蒸发溶剂。在压力为1-1.2巴，采用急骤层析纯化残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相乙酸乙酯/己烷1∶1)。以真空水泵浓缩溶剂并以真空油泵干燥残余物，得到0.54g无色泡沫状的N1-苯乙基-(2R)-2-{1-[N-(4-氯苄基)-N-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-氨基]-乙基羧酰胺基}-3-[1-(叔丁氧基羰基)-3-吲哚基]-丙酰胺。
MS(ESI)m/z 179.2(10)，769.4(10)，825.4(100)[m+H]+，1651.6(55)[2m+H]+.
F)将上述获得的N1-苯乙基-(2R)-2-{1-[N-(4-氯苄基)-N-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-氨基]-乙基羧酰胺基}-3-[1-(叔丁氧基羰基)-3-吲哚基]-丙酰胺总量(0.54g)(0.654mmol)溶解在2.5ml二氯甲烷中。将0.25ml三异丙基硅烷加入上述所得溶液，并将所产生的混合物冷却至0℃。随后于5分钟内将2.5ml TFA滴入混合物中，并在0℃搅拌混合物1小时。用氮冷却的接收器以真空水泵蒸除溶剂。将残余物置于20ml DMSO、2.5ml水和2.5ml乙酸的混合物中，并于室温下搅拌过夜。随后以真空水泵蒸发溶剂，并且将残留的N1-苯乙基-(2R)-2-{1-[N-(4-氯苄基)-N-(9H-芴-9-基甲氧羰基)-氨基]-乙基羧酰胺基}-3-[1H-3-吲哚基]-丙酰胺直接用于下列反应中，无需进一步纯化或表征。
G)将上述获得的Fmoc-保护的丙酰胺总量(0.654mmol，100％转化率)溶解在10ml 20％浓度(v/v)哌啶的DMF溶液中，并且搅拌30分钟。溶剂用氮冷却的接收器以真空水泵蒸除，并在压力为1-1.2巴，采用急骤层析纯化所获得的残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相乙酸乙酯)。冷冻干燥纯化馏分后，得到320mg无色粉末状的标题化合物(0.637mmol)，熔点为107-110℃。两种异构体相互的比例为1∶1.24。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，300K)δ＝10.85和10.83(s，1H，NH-CH-C)，9.2(m，1H，NH-CH-CH3)，8.72和8.77(d，J＝8.5Hz，1H，NH-CH-CH2)，8.28和8.34(t，J＝5.5Hz，1H，NH-CH2-CH2)，7.68和7.63(d，J＝7.7Hz，1H，arom)，6.98-7.48(m，13H，arom)，4.61-4.69(m，1H，NH-CH)，3.98-4.02(m，1H，NH-CH2-C6H4Cl)，3.75(m，1H，NH-CH-CH3)，3.60-3.67和3.39-3.43(m，1H，NH-CH2-C6H4Cl)，3.34-3.38(m，1H，NH-CH2-CH2)，3.24-3.29(m，1H，NH-CH2-CH2)，3.05-3.08(m，1H，NH-CH-CH2)，2.85-2.92(m，1H，NH-CH-CH2)，2.67-2.71(m，2H，NH-CH2-CH2)，1.33和1.10(d，J＝6.9Hz，3H，CH3).
HPLC-MS(ESI)m/z 291.2(30)，308.1(100)，503.2(35)[M+H]+，525.4(15)[M+Na]+，1027.1(20)[2M+Na]+.
实施例4N1-苯乙基-(2R)-2-{N’-[2-(3-吡啶基)-乙酰基]-肼基}-羧酰胺基-3-(1H-3-吲哚基)-丙酰胺(181) A)将10.0g Boc-肼溶解在200ml干燥二氯甲烷和12.95ml的DIPEA(75.6mmol)中，并随后将溶液冷却至0℃。于30分钟内，将19.6gFmocCL的100ml干燥二氯甲烷溶液滴入上述所得溶液中。随后反应混合物于室温下搅拌过夜。紧接着，用200ml水萃取有机相，并用Na2SO4干燥，以真空水泵浓缩至100ml体积。随后用冰冷却加入100ml三氟乙酸，并将混合物搅拌1.5小时。将300ml Na2CO3饱和水溶液加入混合物中，过滤混合物并用Na2SO4干燥所分离的有机相。以真空水泵蒸发溶剂，并以真空油泵干燥所获得的残余物，得到18.02g无色固体状的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-肼(70.8mmol)，熔点为150-153℃。
1H-NMR(250MHz，DMSO-d6，300K)δ＝10.10(bs，1H，NH)，9.60(bs，1H，NH)，7.89(d，J＝7.6Hz，2H，arom)，7.70(d，J＝7.3Hz，2H，arom)，7.30-7.45(m，4H，arom)，4.48(d，J＝6.6Hz，2H，CO-CH2)，4.27(t，J＝6.7Hz，1H，CO-CH2-CH).
B)将上述获得的1.49gN-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-肼悬浮液(5.78mmol)、60ml二氯甲烷和60ml饱和含水NaHCO3溶液于0℃剧烈搅拌5分钟，然后在该温度让其静置5分钟。随后采用将7.95ml1.89M碳酰氯的甲苯溶液加入底部有机相。一完成加入，就再次剧烈搅拌反应混合物10分钟。然后将20ml水和20ml的二氯甲烷加入反应混合物，并且迅速分离相位。用50ml二氯甲烷萃取含水相，并在Na2SO4上干燥合并的有机相。以真空水泵蒸发溶剂以及以真空油泵干燥残余物后，得到1.35g无色固体状的5-(9H-芴-9-基甲氧基)-3H-[1，3，4]噁二唑-2-酮(4.82mmol)，熔点为125℃。
1H-NMR(250MHz，CDCl3，300K)δ＝8.72(bs，1H，NH)，7.77(d，J＝7.5Hz，2H，arom)，7.59(d，J＝7.4Hz，2H，arom)，7.28-7.45(m，4H，arom)，4.49(d，J＝7.8Hz，2H，CH2-CH)，4.32-4.41(m，1H，CH2-CH).
C)将100mg用Fmoc-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂(其制备参见实施例1A)；加载0.354mmol/g；相当于22.3mg(0.035mmol)游离的Fmoc-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺)在5ml NMP中溶胀10分钟，随后每次用5ml新鲜制备的NMP中20％浓度(v/v)的哌啶溶液处理2次，每次15分钟。紧接着，每次用5ml NMP洗涤5次各3分钟，并再每次用5ml二氯甲烷洗涤5次各3分钟。随后将树脂在5ml干燥二氯甲烷中静置30分钟。经过滤分离溶液后，将在1ml干燥二氯甲烷中的30.5mg上述步骤B)获得的5-(9H-芴-9-基甲氧基)-3H-[1，3，4]噁二唑-2-酮加入用D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，并将混合物振荡90分钟。最后每次用5ml二氯甲烷洗涤3次各3分钟，随后再每次用5ml NMP洗涤5次各3分钟。得到用Fmoc-肼-羰基-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，其直接用于下列反应中，无需分离中间产物。
D)将上述获得的经加载的FMPE树脂总量(假定用0.354mmol/gFmoc-肼-羰基-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于24mg(0.035mmol)游离化合物)处理至如实施例1B)所述的去除Fmoc保护基。得到用肼-羰基-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，其直接用于下列反应，无需去除或分离中间产物。
E)将上述获得的经加载的FMPE树脂总量(假定用0.354mmol肼-羰基-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于16.5mg(0.035mmol)游离化合物)每次用5ml NMP洗涤5次各3分钟。随后将12mg 3-吡啶乙酸(0.07mmol)、9.5mg HOBT×H2O(0.07mmol)和2ml NMP中的22.5mg的TBTU(0.07mmol)溶液加入经加载的FMPE树脂中。最后将34μl的DIPEA(0.2mmol)加入最终所得溶液，并将混合物振荡45分钟。每次用5ml NMP洗涤FMPE树脂5次各3分钟后，重复上述的偶合步骤。最后将其每次用5ml NMP再洗涤5次各3分钟。得到用3-吡啶乙酸酯-肼-羰基-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺加载的FMPE树脂，将其直接用于下列反应中，无需分离中间产物。
F)将上述获得的经加载的FMPE树脂总量(假定用0.354mmol/g的3-吡啶乙酸酯-肼-羰基-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺100％地反应加载，相当于20.5mg(0.035mmol)游离化合物)处理至去除FMPE树脂，并且除去如实施例1G)所述的Boc保护基团。HPLC纯化和冷冻干燥后，得到4.5mg(0.0093mmol)无色粉末状的标题化合物，熔点为116-120℃。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，300K)δ＝10.79(s，1H，NH)，9.89(s，1H，NH)，8.63(s，1H，arom)，8.61(d，J＝5.0Hz，1H，arom)，8.02-8.04(m，2H，NH和arom)，7.96(bs，1H，NH-CH2-CH2)，7.63(t，J＝5.5Hz，1H，arom)，7.51(d，J＝7.9Hz，1H，arom)，7.30(d，J＝8.2Hz，1H，arom)，7.25(t，J＝7.6Hz，2H，arom)，6.99-7.18(m，5H，arom)，6.95(t，J＝8.0Hz，1H，arom)，6.44(d，J＝8.1Hz，1H，NH-CH)，4.32-4.36(m，1H，NH-CH)，3.59(s，2H，CO-CH2-C5H4N)，3.22-3.26(m，1H，NH-CH2-CH2)，3.15-3.19(m，1H，NH-CH2-CH2)，3.01(dd，J＝14.4Hz，J＝5.6Hz，1H，NH-CH-CH2)，2.91(dd，J＝14.6Hz，J＝7.4Hz，1H，NH-CH-CH2)，2.58(t，J＝7.5Hz，2H，NH-CH2-CH2).
HPLC-MS(ESI)m/z 152.1(40)，185.2(30)，334.3(30)，485.3(100)[M+H]+，507.3(70)[M+Na]+，523.3(10)[M+Na]+，969.3(20)[2M+H]+，991.4(50)[2M+Na]+，1007.5(20)[2M+K]+.
实施例5N1-苯乙基-(2R)-2-[N’-(4-氯苯基)-肼基]-酰胺-3-(1H-3-吲哚基)-丙酰胺(185) A)室温下，将2.12g4-氯苯甲醛的5mlTHF在10分钟内不断搅拌滴入1.98g叔丁基肼基甲酸酯(Boc-肼)的15mlTHF溶液中。3小时后，以真空水泵蒸发溶剂，并在压力为1-1.2巴，采用急骤层析纯化所获得的残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相乙酸乙酯/己烷1∶5)。以真空水泵蒸发溶剂并以真空油泵干燥残余物后，得到3.64g无色固体状的叔丁基N’-(4-氯苯基亚甲基)-肼-羧酸酯，熔点为170-171℃。
MS(EI)m/z 41.2(20)，57.2(100)，154.0(10)，181.0(5)，197.9(20)，253.9(5)[M]+.
B)用冰冷却并在氩保护大气下，将0.55gNaCNBH3加入25ml用干燥THF中的1.5g上述获得的叔丁基N’-(4-氯苯基亚甲基)-肼-羧酸酯悬浮液中。将10ml乙酸在10分钟滴入该混合物中。所得的清澈溶液于室温下搅拌过夜。随后加入60ml水和60ml乙酸乙酯并用NaHCO3调节含水相的pH值至8。分离有机相并用50ml饱和NaHCO3水溶液和50ml饱和普通盐水溶液连续洗涤。在Na2SO4上干燥有机相并以真空水泵蒸发溶剂。将40ml甲醇和20ml1N的NaOH连续加入剩余的无色残余物中，并将所得混合物首先于室温下搅拌1小时，随后加热至沸点回流冷却1小时。用二乙醚萃取于室温下冷却的混合物3次，将合并的醚相在Na2SO4上干燥，并且以真空水泵蒸发溶剂。在压力为1-1.2巴，采用急骤层析纯化剩余的黄色油(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相乙酸乙酯/己烷1∶4)。以真空水泵蒸发溶剂并以真空油泵干燥残余物，得到1.05g无色固体状的N-(叔丁氧基羰基)-N，-(4-氯苄基)肼，熔点为77-82℃。
1H-NMR(250MHz，DMSO-d6，300K)δ＝8.23(bs，1H，NH-CO)，7.35(m，4H，arom)，4.84(bs，1H，NH-CH2)，3.85(s，2H，NH-CH2)，1.37(s，9H，CH3).
C)将0.8g上述获得的N-(叔丁氧基羰基)-N’-(4-氯苄基)肼用冰冷却悬浮在4ml二烷和16ml的10％浓度NaHCO3水溶液的混合物中。随后在10分钟内加入0.89g FmocCL于10ml二烷中的溶液，然后于室温下搅拌反应混合物过夜。加入50ml的水，并每次用100ml的二乙醚萃取水相3次。合并所分离的有机相，在Na2SO4上干燥，并以真空水泵所产生的蒸发溶剂。在压力为1-1.2巴，采用急骤层析纯化残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相乙酸乙酯/己烷1∶2)。以真空水泵蒸发溶剂并以真空油泵干燥残余物，得到1.37g无色固体状的N-(4-氯苄基)-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-N’-(叔丁氧羰基)-肼，熔点为53-55℃。
1H-NMR(250MHz，DMSO-d6，300K)δ＝9.62(s，1H，NH)，7.89(d，J＝7.3Hz，2H，arom)，7.74(d，J＝6.7Hz，1H，arom)，7.56(m，1H，arom)，7.27-7.43(m，7H，arom)，6.99(m，1H，arom)，4.2-5.52(m，5H，N-CH2和CO-CH2-CH)，1.43(s，9H，CH3).
D)将0.1ml三异丙基硅烷加入0.30g上述步骤c)得到的N-(4-氯苄基)-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-N’-(叔丁氧羰基)-肼于2.5ml二氯甲烷的溶液中，并将混合物冷却至0℃。随后在5分钟内滴加2.5ml的TFA，然后搅拌溶液30分钟。溶剂在氮冷却下以真空水泵蒸发，再将残余物置于77mg DMAP(0.63mmol)于10ml干燥二氯甲烷溶液中。该混合物在20分钟内搅拌滴入0.25g双戊氟苯碳酸酯(0.63mmol)的20ml干燥二氯甲烷溶液中。加入完成后，将0.26g叔丁基-3-[(2R)-2-氨基-2-(苯乙基氨甲酰基)-乙基]-1H-1-吲哚羧酸酯(其制备参见实施例3D)、77mgDMAP(0.63mmol)和10ml干燥二氯甲烷搅拌加入所得溶液。室温上搅拌30分钟后，以真空水泵蒸发溶剂并将残余物吸收至4ml的二氯甲烷中。随后加入0.1ml的三异丙基硅烷并将混合物冷却至0℃。然后5分钟内滴加4ml TFA并搅拌混合物30分钟。以在真空油泵除去溶剂，于室温下将10ml的20％浓度(v/v)哌啶的DMF溶液30分钟内加入经干燥的残余物中。用氮冷却的接收器以真空水泵蒸除溶剂，残余物吸收至DMSO中，并将其通过反相HPLC纯化(HPLC系统AmershamPharmacia Biotech Akta Basic 100F，泵系统P-900和检测器UV-900；来自Omnicrom YMC的ODS-A的C18柱(250mm×20mm，10μm，流速8ml/min)；用乙腈(溶剂B)和0.1％(v/v)TFA中的水(溶剂A)线性梯度洗脱(30分钟)]进行纯化。冷冻干燥纯化馏分，得到26.8mg无色粉末状的标题化合物，熔点为75-80℃。
1H-NMR(500MHz，ACN-d3，300K)δ＝9.74(bs，1H，NH)，7.91(d，J＝7.7Hz，1H，arom)，7.98(d，J＝8.1Hz，1H，arom)，7.58-7.83(m，12H，arom)，6.99(bs，1H，NH-CH)，6.89(bs，1H，NH-CH2-CH2)，4.87(q，J＝6.9Hz，NH-CH)，4.34(bs，2H，NH-CH2-C6H4Cl)，3.87-3.94(m，1H，NH-CH2-CH2)，3.76-3.82(m，1H，NH-CH2-CH2)，3.66(d，J＝6.2Hz，2H，NH-CH-CH2)，3.17(t，J＝7.3Hz，2H，NH-CH2-CH2).
HPLC-MS(ESI)m/z 490.1(70)[M+H]+，512.3(50)[m+Na]+，754.8(100)，978.9(25)[2M+H]+，1001.0(90)[2M+Na]+，1063.1(20).
实施例6N1-苯乙基-(2R)-2-[N’-(呋喃-2-基亚甲基)-肼基]-羧酰胺-3-(1H-3-吲哚基)-丙酰胺(189) A)将500mg叔丁基-3-[(2R)-2-氨基-2-(苯乙基氨甲酰基)-乙基]-1H-1-吲哚羧酸酯(其制备参见实施例3D))和515mg新鲜制备的5-(9H-芴-9-基甲氧基)-3H-[1，3，4]噁二唑-2-酮(其制备参见实施例4B))溶解在20ml干燥DMF中，并于室温下搅拌75分钟。用氮冷却的接收器以真空水泵蒸除溶剂，并采用柱层析纯化残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相三氯甲烷/甲醇20∶1)。再以真空水泵蒸发溶剂并以真空油泵干燥残余物，得到0.58g无色固体状的N1-苯乙基-(2R)-2-{[N’-(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-肼基}-酰胺-3-[(1-叔丁氧羰基)-3-吲哚基]-丙酰胺(＝Fmoc-肼-羰基-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺)，熔点为135-137℃。
HPLC-MS(ESI)m/z 179.2(10)，334.3(10)，378.2(10)，588.4(10)，632.3(25)，654.4(35)，688.3(80)[M+H]+，710.4(100)[M+Na]+，1375.5(40)[2M+H]+，1397.5(25)[2M+Na]+.
B)将179mg如上获得的Fmoc-肼-羰基-D-Trp(Boc)-苯乙基酰胺溶解在2ml 20％浓度(v/v)吡啶的DMF溶液中，并于室温下搅拌30分钟。随后用氮冷却的接收器以真空水泵蒸除溶剂，并将残余物吸收至10mlTHF中。将25mg呋喃-2-甲醛加入该接收溶液并于室温下搅拌混合物24小时。随后再加入50mg的呋喃-2-甲醛并再搅拌混合物24小时。以真空水泵蒸发溶剂，并在压力为1-1.2巴，采用急骤层析纯化残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相乙酸乙酯/己烷1∶1)。以真空水泵浓缩溶剂并于真空油泵中干燥残余物后，得到100mg无色结晶固体状的N1-苯乙基-(2R)-2-[N’-(呋喃-2-基亚甲基)-肼基]-酰胺-3-[(1-叔丁氧羰基)-3-吲哚基]-丙酰胺。
MS(ESI)m/z 510.3(15)，544.3(55)[M+H]+，566.3(50)[M+Na]+，835.2(25)[(3M+K+H)/2]2+，1087.4(45)[2M+H]+，1109.5(100)[2M+Na]+，1630.3(5)[3M+H]+，1652.2(20)[3M+Na]+.
C)将100mg如上获得的N1-苯乙基-(2R)-2-[N’-(呋喃-2-基亚甲基)-肼基]-酰胺-3-[(1-叔丁氧羰基)-3-吲哚基]-丙酰胺溶解在3ml二氯甲烷中。向其加入0.1ml三异丙基硅烷并且随后冷却混合物至0℃。然后5分钟内滴加3ml TFA并将反应混合物搅拌1小时。随后以真空水泵蒸发溶剂，残余物吸收至8ml DMSO、1ml水和1ml乙酸的混合物中，并于室温下搅拌过夜。然后用氮冷却的接收器以真空水泵蒸除溶剂至干燥，并将残余物吸收至DMSO中。反相HPLC[HPLC系统，AmershamPharmacia Biotech kta Basic 100F；泵系统P-900和检测器UV-900；来自Omnicrom YMC的ODS-AC18柱(250mm×20mm，10μm，流速8ml/min)；用乙腈(溶剂B)和0.1％(v/v)TFA中的水(溶剂A)线性梯度洗脱(30分钟)；并冷冻干燥纯化馏分得到46mg无色粉末状的标题化合物，熔点为100-101℃。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，300K)δ＝10.82(s，1H，NH-CH-C)，10.41(s，1H，N-NH)，8.09(t，J＝5.5Hz，1H，NH-CH2)，7.75(s，1H，arom)，7.73(s，1H，arom)，7.55(d，J＝7.9Hz，1H，arom)，7.30(d，J＝8.1Hz，1H，arom)，7.23-7.26(m，2H，arom)，7.14-7.17(m，3H，arom)，7.07(s，1H，arom)，7.03(t，J＝7.4Hz，1H，arom)，6.93(t，J＝7.5Hz，1H，arom)，6.74(d，J＝3.2Hz，1H，arom)，6.58-6.60(m，2H，NH-CH-CH2和arom)，4.45(q，J＝6.8Hz，1H，NH-CH)，3.24-3.31(m，1H，NH-CH2)，3.17-3.24(m，1H，NH-CH2)，3.02-3.10(m，2H，NH-CH-CH2)，2.62(t，J＝7.4Hz，2H，NH-CH2-CH2).
HPLC-Ms(ESI)m/z 444.2(30)[M+H]+，466.3(65)[M+Na]+，685.1(90)，909.2(100)[2M+Na]+，1352.1(15)[3M+Na]+.
实施例7N1-苯乙基-(2R)-2-[(4-苯基哌啶基)-甲基]-酰胺-3-(1H-3-吲哚基]-丙酰胺 A)将3.0g 4-苄基哌啶和1.73g三乙胺搅拌和冰冷滴入13ml甲苯中。将2.86g溴乙酸乙酯的6.2ml甲苯溶液4小时内滴入该所得溶液中。随后于室温下搅拌该反应混合物4填。然后用100ml水萃取有机相并随后用Na2SO4干燥。以真空水泵浓缩溶剂以及以真空油泵干燥残余物。得到4.02g无色油状的(4-苯基-哌啶-1-基)乙酸乙酯。
HPLC-MS(ESI)m/z 188.2(100)，234.2(45)，262.2(100)[M+H]+.
B)将1.0g如上所得的(4-苯基-哌啶-1-基)乙酸乙酯加入含有5.755ml的1N含水NaOH和11.5ml甲醇的接收溶液中。于室温下搅拌过夜，然后用浓盐酸中和，并以真空水泵蒸发溶剂。在压力为1-1.2巴，采用急骤层析纯化残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相甲醇/三氯甲烷1∶1)。以真空水泵浓缩溶剂并于真空油泵中干燥残余物后，得到0.89g无色固体状的(4-苯基-哌啶-1-基)乙酸，熔点为250-252℃。
GC-MS(EI)m/z 44.1(10)，91.1(15)，188.1(100)，233.0(5)[M]+.
C)将86mg上述步骤B)所得的(4-苯基-哌啶-1-基)乙酸、150mg叔丁基-3-[(2R)-2-氨基-2-(苯乙基氨甲酰基)乙基]-1H-1-吲哚羧酸酯(制备参见实施例3D))、75mg HOBT和177mg TBTU溶解在2.6ml的DMF中。将0.20gDIPEA5分钟内滴入该所得溶液中。随后搅拌反应混合物23小时，用氮冷却的接收器以真空水泵蒸除溶剂，并在压力为1-1.2巴，采用急骤层析纯化残余物(固定相硅胶60，粒度0.040-0.063mm，流动相三氯甲烷/甲醇10∶1)。得到180mg黄色油状的N1-苯乙基(2R)-2-[(-苯基哌啶基)-甲基]-酰胺-3-[1-(叔丁氧羰基)-3-吲哚基]-丙酰胺。
HPLC-MS(ESI)m/z 188.1(20)，567.3(70)，623.3(100)[M+H]+，645.2(25)[M+Na]+，1245.2(10)[2M+H]+，1267.3(40)[2M+Na]+.
D)将180mg如上所得的N1-苯乙基(2R)-2-[(-苯基哌啶基)-甲基]-酰胺-3-[1-(叔丁氧羰基)-3-吲哚基]-丙酰胺溶解在3ml二氯甲烷中。向其中加入0.1ml三异丙基硅烷并将溶液冷却至0℃。随后将3ml TFA5分钟内滴入溶液并搅拌反应混合物1小时。然后用氮冷却的接收器以真空水泵蒸除溶剂。残余物吸收至8ml DMSO、1ml水和1ml乙酸的混合物中并且搅拌过夜。用氮冷却的接收器以真空水泵蒸除溶剂至干燥。残余物吸收至DMSO中，并且采用反相HPLC纯化[来自AmershamPharmacia Biotech kta Basic 100F的HPLC系统；泵系统P-900和检测器UV-900；来自Omnicrom YMC的ODS-A C18柱(250mm×30mm，10μm，流速25ml/min)；用乙腈(溶剂B)和0.1％(v/v)TFA中的水(溶剂A)线性梯度洗脱(30分钟)]。冷冻干燥纯化的馏分，得到109mg无色粉末状的标题化合物，熔点为73-75℃。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，300K)δ＝10.84(s，1H，NH-CH-C)，8.81(d，J＝8.3Hz，1H，NH-CH)，8.25(t，J＝5.2Hz，NH-CH2-CH2)，7.61(d，J＝7.7Hz，1H，arom)，7.07-7.33(m，12H，arom)，7.02(t，J＝7.3Hz，1H，arom)，6.96(t，J＝6.9Hz，1H，arom)，4.60(q，J＝6.9Hz，1H，NH-CH)，3.81(d，J＝15.2Hz，1H，N-CH2-CO)，3.67(d，J＝13.1Hz，1H，N-CH2-CO)，3.21-3.34(m，3H，NH-CH2-CH2和N-CH2-CH2-CH)，3.06(dd，J＝14.4Hz，J＝4.9Hz，1H，NH-CH-CH2)，2.97-2.93(m，3H，NH-CH-CH2和N-CH2-CH2-CH)，2.59-2.67(m，3H，NH-CH2-CH2和N-CH2-CH2-CH)，2.46-2.48(m，2H，CH-CH2-C6H5)，1.57-1.70(m，3H，N-CH2-CH2-CH和CH)，1.32-1.46(m，2H，NCH2-CH2-CH).
HPLC-MS(ESI)m/z 188.1(70)，523.3(100)[M+H]+，803.7(20)，1045.1(20)[2M+H]+，1067.3(40)[2M+Na]+.
下列表2中的式I化合物也可根据上述制备方法或类似上述制备方法加以制备。表2含有下列缩写bo键dm二氧戊环基甲基Ind吲哚基Phe苯基Py吡啶基rac外消旋THI四氢异喹啉基表2式I的其它化合物
实施例I包含N1-苯乙基-(2R)-2-{1-[(4-氯苯基)-氨基]-乙基羧酰胺}-3-(1H-3-吲哚基)-丙酰胺的胶囊制备每个胶囊含有下列组合物的胶囊N1-苯乙基-(2R)-2-{1-[(4-氯苯基)-氨基]-乙基羧酰胺}-3-(1H-3-吲哚基]-丙酰胺 20mg玉米淀粉 60mg乳糖 300mg乙酸乙酯 q.s.
采用乙酸乙酯将活性物质、玉米淀粉、乳糖加工成均一糊状的混合物。摊开该糊料，并将所产生的颗粒置于适合的盘中，并且在45℃干燥以除去溶剂。将干燥颗粒通过轧碎机，并再用如下助剂混合滑石 5mg硬脂酸镁 5mg玉米淀粉 9mg随后将其注入400mg的胶囊中(＝胶囊大小0)。
权利要求
1.通式I化合物， 其中A1为CH或，当A2不代表键并同时A3不代表NH，也表示氮，A2为键、C1-2-亚烷基或，当A1为CH以及R2为氢，也表示羰基，A3为未取代或经C1-4-烷基或C1-4-烷基羰基酰胺取代的亚甲基或，当R2为氢或与R1一并为键，也表示NH，R1为氢或，当A2代表羰基，也表示氨基，和R2为氢，或R1和R2一并为C1-2-亚烷基或，当A2为键，R1和R2可一并为键。R3为氢或甲基，Ar1为未取代或经卤素或C1-4-烷基取代1至2次或由键合在两个相邻环碳原子上的C1-2-亚烷基二氧基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吲哚基或四氢异喹啉基，Ar2为呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、吡咯基或吲哚基，Ar3为未取代或经卤素取代1至2次的苯基或吡啶基，m为0或1和n为0或1，以及任选的其生理相容的酸加成盐。
2.根据权利要求1的式I化合物，其中n为1并且R3为氢。
3.根据任一个上述权利要求的式I化合物，其中Ar2为吲哚基或苯并噻吩基。
4.通式Ia化合物， 其中R101为氢或氨基，R4为氢、C1-4-烷基或C1-4-烷基羰基酰胺，Ar1为未取代或经卤素或C1-4-烷基取代1至2次或由键合在两个相邻环碳原子上的C1-2-亚烷基二氧基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吲哚基或四氢异喹啉基，Ar201为苯并噻吩基或吲哚基以及m为0或1以及任选的其生理相容的酸加成盐。
5.通式Ib化合物， 其中R4为氢、C1-4-烷基或C1-4-烷基羰基酰胺，Ar1为未取代或经卤素或C1-4-烷基取代1至2次或由键合在两个相邻环碳原子上的C1-2-亚烷基二氧基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吲哚基或四氢异喹啉基，Ar201为苯并噻吩基或吲哚基以及m为0或1以及任选的其生理相容的酸加成盐。
6.通式Ic化合物， 其中Ar1为未取代或经卤素或C1-4-烷基取代1至2次或由键合在两个相邻环碳原子上的C1-2-亚烷基二氧基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吲哚基或四氢异喹啉基，Ar201为苯并噻吩基或吲哚基以及m为0或1以及任选的其生理相容的酸加成盐。
7.通式Id化合物， 其中Ar1为未取代或经卤素或C1-4-烷基取代1至2次或由键合在两个相邻环碳原子上的C1-2-亚烷基二氧基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吲哚基或四氢异喹啉基，Ar201为苯并噻吩基或吲哚基以及m为0或1以及任选的其生理相容的酸加成盐。
8.通式Ie化合物， 其中Ar1为未取代或经卤素或C1-4-烷基取代1至2次或由键合在两个相邻环碳原子上的C1-2-亚烷基二氧基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吲哚基或四氢异喹啉基，Ar201为苯并噻吩基或吲哚基以及m为0或1以及任选的其生理相容的酸加成盐。
9.通式If化合物， 其中A1为CH或氮，Ar1为未取代或经卤素或C1-4-烷基取代1至2次或由键合在两个相邻环碳原子上的C1-2-亚烷基二氧基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吲哚基或四氢异喹啉基，Ar201为苯并噻吩基或吲哚基以及m为0或1以及任选的其生理相容的酸加成盐。
10.权利要求1的式I化合物作为药物的应用。
11.一种药物，其特征在于包含药理学有效量的权利要求1的式I化合物以及其它常规药物助剂和/或赋形剂。
12.将权利要求1的式I化合物用于制备治疗和/预防肥胖、糖尿病、血胰岛素过多、心血管病、进食失调和/或综合症X药物的应用。
13.一种用于制备通式I化合物的方法， 其中A1为CH或，当A2不代表键以及同时A3不代表NH，也表示氮，A2为键、C1-2-亚烷基或，当A1为CH以及R2为氢，也表示羰基，A3为未经取代或经C1-4-烷基或C1-4-烷基羰基酰胺取代的亚甲基或，当R2为氢或与R1一并为键，也表示NH，R1为氢或，当A2代表羰基，也表示氨基，和R2为氢，或R1和R2一并为C1-2-亚烷基或，当A2为键，R1和R2可一并为键。R3为氢或甲基，Ar1为未经取代或经卤素或C1-4-烷基取代1至2次或由键合至两个相邻环碳原子的C1-2-亚烷基二氧基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吲哚基或四氢异喹啉基，Ar2为呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、吡咯基或吲哚基，Ar3为未经取代或经卤素取代1至2次的苯基或吡啶基，m为0或1和n为0或1，以及任选的其生理相容的酸加成盐，特征在于包括a)制备通式Ig化合物 其中A3、R3、Ar1、Ar2、Ar3、m和n如上定义，R101为氢或氨基，通式II化合物， 其中m如上定义，Ar110如上述Ar1所定义的，任何反应基团受到保护基团的保护，以及R111如上述R101所定义的，任何氨基受到保护基团的保护，与通式III化合物进行反应， 其中R3、Ar3和n如上定义，Ar210如上述Ar2所定义的，任何反应基团受到保护基团的保护，以及A310如上述A3所定义的，任何反应氮原子受到保护基团的保护，或b)制备通式Ih化合物 其中A1、A2、R1、R2、R3、Ar1、Ar2、Ar3、m和n如上定义，A301如上述A3所定义的(除NH之外)，通式IV化合物， 其中A1、A2、Ar110和m如上定义，A311如上述A301所定义，任何反应氮原子受到保护基团的保护，R110如上述R1所定义的，任何氨基受到保护基团的保护，以及R201如上述R2所定义的(除氢之外)，或表示氨基保护基团，与通式V化合物进行反应， 其中R3、Ar210、Ar3和n如上定义，或c)制备通式Ii化合物 其中A1、R3、Ar1、Ar2、Ar3、m和n如上定义，以及A201如上述A2所定义的(除羰基之外)，式V化合物与具羰基合成等价物的式V化合物和通式VI化合物反应， 其中A1、A201、Ar110和m如上定义，R104为氢或，当A1为氮，也表示氮保护基团，以及SG为适用于肽化学的保护基团，或d)制备通式Ij化合物 其中A310、R3、Ar1、Ar2、Ar3、m和n如上定义，式III化合物与通式VIII化合物反应，Ar110-(CH2)m-CHOVIII其中Ar110和m如上定义，并且随后再去除任何保护基团，视需要将所产生的的式I化合物转变成其酸加成盐，或将酸加成盐转变成游离的式I化合物。
全文摘要
新的、选择性BRS－3激动性的通式I化合物，其中A
文档编号A61K31/4439GK1649840SQ03810076
公开日2005年8月3日 申请日期2003年5月30日 优先权日2002年6月5日
发明者D·韦伯, H·凯斯勒, C·贝格尔, J·安特尔, T·海因里希 申请人:索尔瓦药物有限公司