专利名称：含硫的磷脂衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及预防和/或治疗原发性与转移性肿瘤的方法，该方法涉及使用本发明的脂肪酸类似物治疗患有癌症的患者。
癌症的两种本质特征是侵袭和转移。在一种极端情况下，基膜的微侵袭是从瘤形成到癌的转变的特征，在另一种极端情况下，转移一般引起死亡。
原发性肿瘤侵入结缔组织分阶段进行，受到由肿瘤细胞产生的各种介导物的促进。尚未侵袭基膜并且局限于上皮内的肿瘤细胞被称为原位癌。
另一方面，当循环中的肿瘤细胞与粘连性淋巴细胞和血小板被捕集在毛细管中和肿瘤细胞膜作用于毛细管内皮时，可以形成转移瘤。毛细管内皮连接消退，肿瘤细胞配体与内皮和基膜上的受体结合。肿瘤细胞然后释放胶原酶IV，它破坏胶原蛋白IV，后者是基膜的主要组分。与糖蛋白层粘连蛋白和纤连蛋白的结合、破坏基质的蛋白酶的释放和能动性与趋化性因子的分泌，都有助于毛细管下结缔组织的侵袭。肿瘤细胞然后可以增殖，合成血小板聚集因子，例如血栓烷和前凝血剂，从而引起纤维蛋白茧沉积在细胞周围。这样一种茧可以保护微转移瘤免受宿主免疫系统的攻击。
可以用本发明组合物和方法预防和/或治疗的癌症包括但不限于人类的肉瘤和癌，例如癌，例如结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、鳞状上皮癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞癌、胆管癌、绒膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯氏瘤、宫颈癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑脊膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤；白血病，例如急性淋巴细胞性白血病和急性髓细胞性白血病(成髓细胞性、前髓细胞性、骨髓单核细胞性、单核细胞性和红白血病)；慢性白血病(慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病和慢性淋巴细胞性白血病)；和真性红细胞增多、淋巴瘤(何杰金氏病和非何杰金氏病)、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症和重链疾病。这类癌症的具体实例描述在下面的章节中。
皮肤障碍 正如WO02/26218所讨论的，增生性皮肤疾病普遍见于世界各地，影响到数百万的人和家养动物。增生性皮肤疾病是以角化细胞增殖或分裂为特征的，也可能与不完全的表皮分化有关。
牛皮癣是本发明所涉及的最严重的增生性皮肤疾病。
牛皮癣是一种遗传性皮肤疾病，以两个生物学标记为特征。首先，存在突出的表皮过度增殖，涉及加速的和不完全的分化。其次，存在显著的表皮与真皮炎症，伴有T淋巴细胞募集增加，在有些情况下还有嗜中性白细胞微脓肿的形成。牛皮癣的很多病理特征可以归因于表皮角化细胞的生长与成熟改变，伴有表皮细胞增殖增加，发生在皮肤表面的0.2mm内。
牛皮癣发病机理的传统研究集中在表皮的增加的增殖与增生上。在正常皮肤中，细胞从基底层移动至颗粒层的时间为4至5周。在牛皮癣病灶中，该时间减少了七倍至十倍，因为细胞周期时间缩短了、能够增殖的细胞绝对数量增加了和实际分裂的细胞比例增加了。在牛皮癣患者的临床未发病皮肤中，也表现过度增殖现象，不过程度较小。
牛皮癣的一种常见形式是寻常牛皮癣，以界线明显的红斑为特征，覆盖有厚的银色鳞屑。特有的发现是同型反应(科布内氏现象)，其中在皮肤创伤部位出现新的牛皮癣病灶。
病灶经常位于肢端的伸肌表面，一般也牵涉指甲和头皮。
牛皮癣的治疗努力致力于降低表皮的增殖速率，这通过对细胞分裂的直接作用或者间接减少免疫应答。就局限性牛皮癣患者而言，局部用皮质类固醇的给药是最方便的门诊患者疗法。
利用这种方法可以见到迅速的改善，但是有益的短期功效是有限的，长期局部皮质类固醇治疗是不明智的。长期局部皮质类固醇疗法的副作用可以包括皮肤的萎缩、对所用试剂耐药性的形成(快速减敏性)和疾病在停止治疗后严重恶化。垂体-肾上腺抑制是有力局部用皮质类固醇疗法的潜在严重并发症，特别是当该试剂覆盖大部分机体表面和在封闭性敷料下使用时。
类视色素，特别是阿维A酯单独或者与PUVA的组合也是有效的牛皮癣治疗法。阿维A酯尤其可用于牛皮癣的表皮脱落与脓疱变异。不过，在接受类视色素的患者中必须监测若干主要的潜在并发症。作为一类化合物，类视色素是有力的致畸原，不应当给以没有使用适当避孕措施的育龄妇女。
阿维A酯象其他类视色素一样，能够引起胆固醇和甘油三酯水平升高；因此饮食调节可能是必要的。另外，因为阿维A酯能够诱发肝毒性，在用药之前和期间应当定期进行肝功能试验。
鉴于目前用于治疗皮肤增生疾病，例如牛皮癣的不同药物与光化学疗法伴随有并发症和副作用，存在对新方法和新组合物的需要，以抑制角化细胞增殖，减轻皮肤增生疾病的症状。
炎性与自身免疫障碍 正如WO02/43728所讨论的，白介素、干扰素、集落刺激因子和TNFα是一组不同的多功能蛋白质的实例，称为细胞因子。细胞因子是一类所分泌的可溶性蛋白质，通常以非常低的浓度存在于多种细胞中。淋巴样、炎性造血性与其他细胞(例如结缔组织细胞，例如成纤维细胞、成骨细胞)分泌多种细胞因子，它们通过控制细胞增殖、分化和效应器功能，调节免疫、炎症、修复和急性期反应。细胞因子的作用受到与特定细胞类型上高亲和性受体结合的介导。
一种重要的细胞因子是IL-10，它是一种35-40kDa的肽，由辅助T-细胞、B-细胞、单核细胞、巨噬细胞和其他细胞类型产生。体外IL-10已经证明有免疫抑制性质，证据是其抑制细胞因子产生的能力，所述细胞因子包括IL-1和TNFα。
IL-10也抑制其他炎性细胞因子的活化，因此具有有力的抗炎活性。
最近已经关注在某些以过度IL-1和TNFα产生为特征的病症的治疗中给以IL-10。这类疾病或病症包括假体关节植入物的松弛、炎症、糖尿病、癌症、移植物对宿主的疾病、病毒、真菌与细菌感染、脂多糖内毒素休克、骨髓功能受抑制的疾病、血小板减少、骨质疏松、脊关节病、佩吉特氏病、炎性肠疾病、关节炎、骨关节炎、自身免疫疾病(例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮)和结缔组织疾病。
例如，体外已经显示纯化的IL-10抑制某些类型的病毒感染。US-A-5,665,345公开了通过给以IL-10抑制人细胞中人免疫缺陷病毒、逆转录病毒和卡波西肉瘤复制的方法。
还已提示IL-10用于治疗某些癌症。US-A-5,570,190公开了给以外源性IL-10治疗哺乳动物急性骨髓性白血病和急性淋巴细胞性白血病。IL-10据说是以纯化或重组形式给药的，据信抑制急性白血病母细胞的增殖。
类似地，显示IL-10抑制严重联合免疫缺陷小鼠中的骨髓转移。
上述治疗以过度IL-1与TNFα产生为特征的病症的常规方法局限于静脉内给以外源性纯化或重组IL-10。由于IL-10是一种蛋白质，它难以静脉内注入哺乳动物，因为蛋白质经常从溶液中析出，与用于静脉内给药的塑料或玻璃器皿结合。而且，在与生理溶液例如葡萄糖或盐水混合时，蛋白质经常是不相容的，并沉淀出来。另外，口服和局部途径不可用于IL-10给药。口服途径不可用是因为蛋白质在胃肠道中降解。
上述方法没有一个提示增强哺乳动物中内源性IL-10的产生，以预防和治疗疾病或病症。
进而，已知IL-10是巨噬细胞和T-细胞的强大去活化剂，在多种自身免疫与炎性障碍中其生产量是不足的。
本研究显示，本化合物在来自健康血液供体的PBMC中增强LPS与PHA刺激的IL-10，抑制PHA刺激的IL-2产生。这可能具有若干含义。首先，这些发现提示了本化合物的显著抗炎净效果，既增强抗炎细胞因子IL-10的释放，又抑制炎性细胞因子IL-2的释放。其次，我们的发现提示本化合物可能调控单核细胞活化(即LPS刺激)和淋巴细胞活化(即PHA刺激)。最后，本化合物对来自健康血液供体的活化PBMC的体外效果可能反映以炎性活化作用增强为特征的各种患者群体的体内情形。事实上，离体的健康对照活化PBMC可能代表在各种炎性障碍中体内治疗性干预的有关靶细胞。
另外或者作为替代选择，本发明化合物或组合物可以用于治疗WO-A-98/05635所列举的障碍。为了容易参照，现在提供该列表的一部分癌症、炎症或炎性疾病、皮肤病学障碍、发热、心血管效应、出血、凝血与急性期反应、恶病质、食欲缺乏、急性感染、HIV感染、休克状态、移植物对宿主的反应、自身免疫疾病、再灌注损伤、脑脊膜炎、偏头痛和阿司匹林依赖性抗血栓形成；肿瘤生长、侵袭与扩散、血管生成、转移瘤、恶性肿瘤、腹水和恶性胸膜渗漏；脑缺血、缺血性心脏病、骨关节炎、类风湿性关节炎、骨质疏松、哮喘、多发性硬化、神经变性、阿尔茨海默氏病、动脉粥样硬化、中风、脉管炎、克罗恩氏病和溃疡性结肠炎；牙周炎、齿龈炎；牛皮癣、特应性皮炎、慢性溃疡、大疱性表皮松解；角膜溃疡、视网膜病和手术伤口愈合；鼻炎、变应性结膜炎、湿疹、过敏反应；再狭窄、充血性心力衰竭、子宫内膜异位、动脉粥样硬化或endosclerosis。
另外或者作为替代选择，本发明化合物或组合物可以用于治疗WO-A-98/07859所列举的障碍。为了容易参照，现在提供该列表的一部分细胞因子与细胞增殖/分化活性；免疫抑制或免疫刺激活性(例如用于治疗免疫缺陷，包括人免疫缺陷病毒感染；调节淋巴细胞生长；治疗癌症和很多自身免疫疾病；和预防移植排斥或诱导肿瘤免疫性)；调节造血，例如治疗骨髓样或淋巴样疾病；促进骨、软骨、腱、韧带和神经组织生长，例如用于愈合伤口、治疗烧伤、溃疡和牙周疾病与神经变性；抑制或活化促卵泡激素(调控生育力)；趋化性/化学促进活性，例如用于使特定细胞类型活动至损伤或感染部位；止血与溶栓活性，例如用于治疗血友病和中风；抗炎活性，例如用于治疗脓毒性休克或克罗恩氏病；用作抗微生物剂；用作例如代谢或行为的调控剂；用作止痛剂；治疗特定的缺陷障碍；在人类或兽医医学中治疗例如牛皮癣。
另外或者作为替代选择，本发明组合物可以用于治疗WO-A-98/09985所列举的障碍。为了容易参照，现在提供该列表的一部分巨噬细胞抑制和/或T-细胞抑制活性，因而抗炎活性；抗免疫活性，也就是对细胞和/或体液免疫应答的抑制作用，包括与炎症无关的应答；抑制巨噬细胞和T-细胞黏附细胞外基质组分和纤连蛋白的能力，以及抑制T-细胞中的fas受体表达的增量调节；抑制所不希望的免疫反应和炎症，包括关节炎，包括类风湿性关节炎、与过敏有关的炎症、变态反应、哮喘、系统性红斑狼疮、胶原疾病和其他自身免疫疾病、与动脉粥样硬化有关的炎症、动脉粥样硬化、动脉粥样硬化性心脏病、再灌注损伤、心动停止、心肌梗塞、血管炎性障碍、呼吸窘迫综合征或其他心肺疾病，与消化性溃疡有关的炎症、溃疡性结肠炎和其他胃肠道疾病，肝纤维变性、肝硬化或其他肝疾病，甲状腺炎或其他腺体疾病，肾小球性肾炎或其他肾与泌尿科疾病，耳炎或其他耳鼻喉科疾病，皮炎或其他皮肤疾病，牙周疾病或其他牙科疾病，睾丸炎或附睾-睾丸炎，不育症，睾丸创伤或其他免疫相关性睾丸疾病，胎盘功能障碍、胎盘机能不全、习惯性流产、子痫、子痫前期和其他免疫和/或炎性相关性妇科疾病，后葡萄膜炎、中葡萄膜炎、前葡萄膜炎、结膜炎、脉络膜视网膜炎、葡萄膜视网膜炎、视神经炎、眼内炎症(例如视网膜炎或囊性黄斑水肿)、交感性眼炎、巩膜炎、色素性视网膜炎、变性性fondus疾病的免疫与炎性组分、眼创伤的炎性组分、由感染所导致的眼部炎症、增殖性玻璃体-视网膜病、急性缺血性视神经病、过多的瘢痕形成(例如继发于青光眼过滤手术)、对眼植入物的免疫和/或炎症反应和其他免疫与炎性相关眼科疾病，与自身免疫疾病或病症或障碍有关的炎症(其中在中枢神经系统(CNS)或任意其他器官中，免疫和/或炎症抑制将是有益的)，帕金森氏病、帕金森氏病治疗的并发症和/或副作用、AIDS相关性痴呆复合征、HIV相关性脑病、德维克氏病、西登哈姆氏舞蹈病、阿尔茨海默氏病和其他变性性疾病，CNS的病症或障碍、中风的炎性组分、脊髓灰质炎后综合征、精神病学障碍的免疫与炎性组分、脊髓炎、脑炎、亚急性硬化性大脑炎、脑脊髓炎、急性神经病、亚急性神经病、慢性神经病、格-巴氏综合征、西登哈姆氏舞蹈病、重症肌无力、脑假瘤、唐氏综合征、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化、CNS压迫或CNS创伤或CNS感染的炎性组分、肌肉萎缩与营养障碍的炎性组分、和免疫与炎性相关性中枢与外周神经系统疾病、病症或障碍，创伤后炎症、脓毒性休克、传染性疾病、手术、骨髓移植的炎性并发症或副作用或者其他移植并发症和/或副作用，基因疗法的炎性和/或免疫并发症(例如由病毒载体感染引起)或者与AIDS有关的炎症，用以压制成抑制体液和/或细胞免疫应答，通过减少单核细胞或淋巴细胞数量治疗或改善单核细胞或白细胞增生疾病(例如白血病)，预防和/或治疗天然或人工细胞、组织与器官移植中的移植物排斥(例如角膜、骨髓、器官、晶状体、起博器、天然或人工皮肤组织)。
治疗 这包括任何能够使人或非人类动物受益的治疗应用。治疗哺乳动物是特别优选的。人兽治疗都属于本发明的范围。
治疗可以是针对现有病症的或者可以是预防性的。可以针对成人、少年、婴儿、胎儿或任意上述的一部分(例如器官、组织、细胞或核酸分子)。
治疗用活性试剂可以经由任意适当的途径按照任意适当的剂量给药。剂量可以在宽泛的限度内变化，这依赖于治疗的性质、所要治疗个体的年龄和条件等，医师将最终决定所使用的适当剂量。不过，不受任何特定剂量的局限，本发明化合物从1μg至1mg/kg体重的每日剂量可能是适合的。服药可以按照适当的频率重复。如果形成副作用，那么可以按照良好的临床实践减少服药的量和/或频率。
多晶型(S)/不对称碳(S) 本发明试剂可以存在多晶型。
本发明试剂可以含有一个或多个不对称的碳原子，因此存在两种或多种立体异构体形式。若试剂含有链烯基或亚链烯基，则还可以存在顺式(E)和反式(Z)异构现象。本发明包括试剂的单个立体异构体，如果适当的话，还包括其单个的互变异构体形式及其混合物。
非对映异构体或者顺式与反式异构体的分离可以利用常规技术实现，例如试剂或其适合的盐或衍生物的立体异构体混合物的分步结晶、色谱或H.P.L.C.。试剂化合物的单个对映体也可以从对应的光学纯中间体制备，或者借助拆分制备，例如使用适合的手性载体进行对应外消旋物的H.P.L.C.或者进行非对映异构体盐的分步结晶，所述盐是这样生成的使对应的外消旋物酌情与适合的光学活性酸或碱反应。
同位素变体 本发明还包括本试剂或其药学上可接受的盐的所有适合的同位素变体。本发明试剂或其药学上可接受的盐的同位素变体被定义为这样一种，其中至少一个原子被原子数相同但是原子质量不同于自然界常见原子质量的原子所代替。可以结合在本试剂及其药学上可接受的盐中的同位素实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别例如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。本试剂及其药学上可接受的盐的某些同位素变体，例如其中结合有3H或14C等放射性同位素的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究。氚，即3H和碳-14，即14C同位素是特别优选的，因为它们容易制备和检测。进而，被氘，即2H等同位素取代因代谢稳定性更大可以提供某些治疗上的优点，例如体内半衰期增加或剂量需求减少，因此在有些情况下可能是优选的。本发明试剂及其药学上可接受的盐的同位素变体一般可以通过常规工艺制备，使用合适试剂的适当同位素变体。
前体药物 将为本领域技术人员所领会的是，本发明试剂可以从前体药物衍生而来。前体药物是这样的实体，它们本身可以具备或者可以不具备药理活性，但是可以被给药(例如口服或肠胃外)，之后在机体内受到生物转化作用(例如代谢)，生成有药理活性的本发明试剂。前体药物的实例包括这样的实体，它们具有某些被保护的基团，并且本身可能不具备药理活性，但是在某些情形中可以被给药(例如口服或肠胃外)，之后在机体内被代谢生成有药理活性的本发明试剂。
前体部分(pro-moiety) 将被进一步领会的是，某些被称为“前体部分”的部分，例如“Design of Prodrugs”，H.Bundgaard，Elsevier，1985所述(其公开内容结合在此作为参考)，可以被置于试剂的适当的官能团上。这类前体药物也属于本发明的范围。
衍生物 本文所用的术语“衍生物”或“衍生的”包括试剂的化学修饰。这类化学修饰的例证是将氢用卤素基团、烷基、酰基或氨基代替。
化学修饰 在本发明的一种实施方式中，试剂可以是经过化学修饰的试剂。
本发明试剂的化学修饰可以增强或减少试剂与靶之间的氢键相互作用、电荷相互作用、疏水性相互作可用、范德华相互作用或偶极相互作用。
一方面，已被鉴定的试剂可以充当开发其他化合物的模型(例如模板)。
现在将在下列实施例中详细描述本发明。
实施例 结合有所述脂肪酸的本发明磷脂、三酰甘油和其他脂质(天然或非天然)(包括2.3节所提出的脂质)可以显示与脂肪酸例如TTA相似的治疗与生物性质。因而，合成了大量含有硫代脂肪酸衍生物的磷脂、三酰甘油和其他非天然脂质。在一些实施例中进行了体内实验(在雄性Wistar大鼠中)，目的是比较它们相对于TTA3的生物学效应(关于血浆脂质水平和肝脂肪酸氧化)。还进行了进一步的体内研究，其中在脂质体中结合有TTA和TTA磷脂，以促进静脉内给药。
脂肪酸的合成 用于本发明的脂肪酸衍生物可以按照WO01/68502的教导进行合成。
流程1给出合成脂肪酸3和4的策略。首先，在甲醇钠的存在下使硫代乙酸与十四烷基溴缩合，酸化后得到TTA，为无色固体，收率82％。
流程1 (a)NaOMe，MeOH，r.t.，2d；然后H+，82％；(b)PPh3，AcOH，回流，6d，98％；(c)NaH，DMSO，然后辛醛，0℃，54％；(d)PBr3，吡啶，Et2O，70％；(e)硫代乙酸，NaOMe，MeOH，然后8，96％. 利用维悌希反应在鏻盐6与1-辛醛之间进行顺式-烯烃类似物4的合成，得到顺式-烯烃醇7(59％收率)7。醇的溴化和随后与硫代乙酸二钠盐的反应得到所需脂肪酸dTTA4(67％，2步)。
由于维悌希反应关于顺式/反式选择性的不确定性，采用更具顺式-选择性的方法(流程2)。因而将乙酸酯9用p-TsOH水解，使所得伯醇THP-保护，将溴化物经由芬克尔斯坦卤素置换反应转化为碘化物，从而得到10，3步收率为70％。然后使碘化物10与就地生成的炔基锂化物11反应，得到被保护的炔基醇12(76％收率)。在此阶段，借助顺式-选择性林德乐氢化作用生成烯烃，反应进行顺利，收率良好(93％)。GC-MS分析显示顺式部分的同质性。将被保护的醇在一步中转化为溴化物8，随后在碱的存在下用硫代乙酸处理，得到所需脂肪酸4(dTTA)，收率74％(2步)。
流程2 (a)pTsOH，MeOH，Δ；(b)DHP，PPTS，CH2Cl2，r.t.；(c)NaI，丙酮，Δ，＞70％3步；(d)n-BuLi，THF/HMPA，0℃，然后2-(3-碘戊氧基)四氢吡喃，76％；(e)林德乐催化剂，H2，喹啉，己烷，93％；(f)PPh3Br2，PPh3，CH2Cl2，0℃，86％；(g)硫代乙酸，NaOMe，MeOH，然后8，＞85％. 按照上述相似方式合成炔烃类似物5。10-溴癸-1-醇的THP-保护得到14(74％收率)(流程3)8。然后将所得溴化物14用乙炔化锂处理，得到末端炔烃15，收率65％9。在HMPA的存在下将所得锂化物用乙基碘处理，从而允许将炔烃用正丁基锂去质子化，得到烷基化炔烃169。按照与4的合成相似的方式完成合成，得到所需的tTTA5，总收率35％。
流程3 (a)DHP，PPTS，CH2Cl2，r.t.，74％；(b)乙炔化锂，DMSO，65％；(c)n-BuLi，THF/HMPA，Etl，0℃；(d)PPh3Br2，PPh3，CH2Cl2，87％2步；(e)硫代乙酸，NaOMe，MeOH，然后 17，86％. 2.2磷脂衍生物的合成 磷脂酰胆碱(PC)衍生物1，2-二-十四烷基硫代乙酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(TTA-PC，18)的合成如流程4所示。类似物dTTA-PC19和tTTA-PC20是按照类似方式合成的。
将sn-甘油-3-磷酸胆碱(GPC)用活化脂肪酸，例如脂肪酸咪唑酰胺(imidazolide)酰化是磷脂酰胆碱合成中的标准工艺。这通常是在DMSO阴离子的存在下进行的，以DMSO作为溶剂。据报道没有外消旋作用10。
流程4 (a)CDI，CHCl3；(b)GPC.CdCl2，DMSO，DBU；5h，56％. 因而，在文献工艺10的轻微变化中，将TTA3用N，N’-羰基二咪唑(CDI)活化为咪唑酰胺。在DBU(一种防止外消旋作用的位阻碱)的存在下，使sn-甘油-3-磷酸胆碱(GPC)的镉(II)加合物与这种咪唑酰胺反应，在处理和纯化后得到所需的TTA-PC 18，为黄色蜡状固体，收率56％。类似地得到dTTA-PC 19和tTTA-PC 20，收率分别为65和57％。
磷脂酰乙醇胺(PE)衍生物1，2-二-十四烷基硫代乙酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(TTA-PE，21)的合成如流程4所示。按照类似方式合成类似物dTTA-PE22和tTTA-PE23。
由Wang等11略微改进的工艺实现所需的酶学磷脂酰转移作用，从磷脂酰胆碱转移至磷脂酰乙醇胺。
流程5(a)PLD，30℃，pH6.5，两相系统，乙醇胺，4h，94％ 从所合成的TTA-PC18开始，在过量乙醇胺的存在下通过磷脂酶D(PLD)的酶学磷脂酰转移作用得到TTA-PE21，收率良好(94％)，为淡黄色蜡状固体。类似地得到dTTA-PE22和tTTA-PE23，收率分别为89和86％。
利用HBTU/DMAP偶联条件，分别使TTA3、dTTA4和tTTA5与甘油偶联，合成TTA-TAG24、dTTA-TAG25和tTTA-TAG26。得到所需的甘油三酯，收率良好(例如TTA-TAG24的收率为85％)。
2.2.3生物学结果 按照等摩尔剂量TTA(1mmol/天/kg体重)向雄性Wistar大鼠(每一处理组4-5只大鼠)饲喂TTA、TTA-PC或TTA-TAG达6天。对照大鼠仅接受0.5％CMC。将大鼠处死，评价脂质降低效果、脂肪酸氧化增加和关键线粒体酶的活性，所述酶为肉碱棕榈酰转移酶-II、3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA合酶和脂肪酰-CoA氧化酶。
在进一步的研究中，向雄性Wistar大鼠(每一处理组4只大鼠)通过尾静脉注射含有TTA(60μmol TTA)、TTA-PC(50μmol TTA)或没有TTA(DMPC)的脂质体。注射后1.5或3小时杀死大鼠，收集血浆，测定三酰甘油和胆固醇水平。
酯化TTA的脂质降低效果 从表1可以看到，与对照相比，全部处理导致血浆三酰甘油和胆固醇水平有显著减少。最大减少(60％)是由TTA-PC实现的，它比非酯化TTA更显著地减少血浆三酰甘油水平。
表1酯化与非酯化TTA对雄性Wistar大鼠血浆脂质的影响(mmol/L)处理三酰甘油胆固醇对照1.20±0.351.84±0.25TTA0.64±0.31a1.14±0.23aTTA-PC0.47±0.21a，b0.74±0.20aTTA-TAG0.56±0.21a1.18±0.12a 按照等摩尔剂量TTA(1mmol/天/kg体重)向雄性Wistar大鼠(每一处理组4-5只大鼠)饲喂TTA、TTA-PC或TTA-TAG达6天。对照大鼠仅接受0.5％CMC。
a显著不同于对照(0.5％CMC)，p＜0.05. b显著不同于未酯化TTA，p＜0.05. 酯化TTA减少肝脂质含量 从表2可以看到，与对照相比，饲喂酯化TTA导致肝三酰甘油水平有显著减少，最大减少(30％)是由TTA-PC实现的。这说明了对与脂肪肝有关的病理状态的有益效果。
表2酯化与非酯化TTA对雄性Wistar大鼠肝三酰甘油含量的影响(μmol/mg蛋白质)处理三酰甘油对照3.71±0.50TTA3.09±0.96TTA-PC2.53±0.43aTTA-TAG2.88±0.50a 按照等摩尔剂量TTA(1mmol/天/kg体重)向雄性Wistar大鼠(每一处理组4-5只大鼠)饲喂TTA、TTA-PC或TTA-TAG达6天。对照大鼠仅接受0.5％CMC。
a显著不同于对照(0.5％CMC)，p＜0.05. 酯化TTA增加脂肪酸氧化 增加脂肪酸氧化是TTA降低脂质效果的重要因素。增加脂肪酸分解代谢将减少可用于酯化的脂肪酸量，从而减少肝产生和分泌VLDL。从表3可以看到，与对照相比，全部三种饲喂方案显著增加棕榈酰-辅酶A的氧化作用，其中TTA-PC比其他两种处理具有略大的效果。
表3酯化与非酯化TTA对大鼠肝组织匀浆中棕榈酰-CoA氧化的影响处理被氧化的棕榈酰-CoA(nmol/mg/min)对照0.75±0.06TTA1.32±0.22aTTA-PC1.39±0.15aTTA-TAG1.37±0.08a 按照等摩尔剂量TTA(1mmol/天/kg体重)向雄性Wistar大鼠(每一处理组4-5只大鼠)饲喂TTA、TTA-PC或TTA-TAG达6天。对照大鼠仅接受0.5％CMC。
a显著不同于对照(0.5％CMC)，p＜0.05. 酯化TTA增加肉碱棕榈酰转移酶-II的活性 肉碱棕榈酰转移酶-II是脂肪酸向线粒体转运的重要酶。已经显示TTA诱导的CPT-II活性增加是TTA增加脂肪酸氧化的重要因素。从表4看到，全部三种处理显著增加这种酶的活性，TTA-PC的这种增加作用显著高于非酯化的TTA。
表4酯化与非酯化TTA对线粒体肉碱棕榈酰转移酶-II活性的影响处理酶活性(nmol/mg/min)对照8.32±1.42TTA19.51±5.50aTTA-PC31.96±2.63a，bTTA-TAG17.88±4.37a 按照等摩尔剂量TTA(1mmol/天/kg体重)向雄性Wistar大鼠(每一处理组4-5只大鼠)饲喂TTA、TTA-PC或TTA-TAG达6天。对照大鼠仅接受0.5％CMC。
a显著不同于对照(0.5％CMC)，p＜0.05. b显著不同于未酯化TTA，p＜0.05. 酯化TTA增加3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA合酶的活性 3-羟基-3-甲基戊二酰(glutharyl)-CoA合酶被认为是线粒体中酮体产生的限速酶。酮体的产生一般随着脂肪酸氧化的增加而增加，为外周组织中的能量产生提供能源。与对照相比，全部处理显著增加这种酶的活性，TTA-PC饲喂后所增加的活性比非酯化TTA饲喂后大三倍(表5)。
表5酯化与非酯化TTA对大鼠肝组织匀浆中3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA合酶活性的影响处理酶活性(nmol/mg/min)对照28.23±4.43TTA45.72±5.98aTTA-PC97.77±20.51a，bTTA-TAG40.35±6.16a 按照等摩尔剂量TTA(1mmol/天/kg体重)向雄性Wistar大鼠(每一处理组4-5只大鼠)饲喂TTA、TTA-PC或TTA-TAG达6天。对照大鼠仅接受0.5％CMC。
a显著不同于对照(0.5％CMC)，p＜0.05. b显著不同于未酯化TTA，p＜0.05. 酯化TTA增加脂肪酰-CoA氧化酶的活性 脂肪酰-CoA氧化酶是啮齿动物脂肪酸过氧化物酶体氧化中的限速酶。它是其基因表达受转录因子PPARα调节的很多酶之一，所述因子是脂质分解代谢调节中的重要转录因子。该酶被认为是判断化合物是PPARα配体的优异标志。与对照相比，全部处理增加这种酶的活性，PC-TTA饲喂后所增加的活性显著高于非酯化TTA饲喂后(表6)。
表6酯化与非酯化TTA对大鼠肝组织匀浆中脂肪酰-CoA氧化酶活性的影响处理酶活性(nmol/mg/min)对照16.50±4.74TTA63.10±35.84aTTA-PC129.48±15.05a，bTTA-TAG49.87±22.51a 按照等摩尔剂量TTA(1mmol/天/kg体重)向雄性Wistar大鼠(每一处理组4-5只大鼠)饲喂TTA、TTA-PC或TTA-TAG达6天。对照大鼠仅接受0.5％CMC。
a显著不同于对照(0.5％CMC)，p＜0.05. b显著不同于未酯化TTA，p＜0.05. TTA和PC-TTA的脂质体制剂减少血浆脂质 TTA的脂质体制剂允许比其他溶液更高的TTA浓度用于静脉内注射。将TTA或TTA-PC结合在脂质体中，与不含TTA的DMPC脂质体比较。在注射后1.5或3小时测定三酰甘油和胆固醇的血浆水平，从表7可以看到，与DMPC相比，在脂质体中注射的TTA和TTA-PC都将降低血浆胆固醇和三酰甘油，减少的三酰甘油水平显著低于DMPC注射后。
表7含有酯化与非酯化TTA的脂质体对雄性Wistar大鼠血浆脂质的影响(mmol/L)制剂三酰甘油1.5h三酰甘油3h胆固醇1.5h胆固醇3hDMPC脂质体-1.97±0.28-1.80±0.24TTA脂质体1.68±0.201.38±0.28a1.56±0.091.58±0.08TTA-PC脂质体1.00±0.14a1.69±0.601.67±0.311.52±0.29 通过尾静脉向雄性Wistar大鼠(每一处理组4只大鼠)注射含有TTA(60μmol TTA)、TTA-PC(50μmol TTA)或没有TTA(DMPC/SA)的脂质体。在注射后1.5或3小时杀死大鼠，收集血浆，测定三酰甘油和胆固醇水平。
a显著不同于DMPC，p＜0.05. 2.2.4讨论生物学效应 代谢综合征是一种复杂的病症，以胰岛素敏感性减低、血液脂质异常(TAG升高伴有HDL降低、低密度LDL升高和膳食后脂血延长)、腹部肥胖和高血压为特征。这种病症与血浆脂肪酸水平升高和骨骼肌中三酰甘油蓄积有联系。脂质代谢异常是形成这些障碍的核心。这种代谢的调节是复杂的，受多种脂质代谢产物与介导物和各种转录因子的影响，其复杂的相互作用远非人们所理解的。
肥胖与2型糖尿病之间的联系是由于过多体脂对胰岛素全身响应性的不利影响，导致胰岛素对碳水化合物与脂质代谢的作用减低，这引起代偿性高胰岛素血症。脂肪组织质量是胰岛素抗性和代谢综合征形成和发病的关键决定因素症。尽管胰岛素抗性的最明显表现是糖尿病，不过程度不太严重的胰岛素抗性导致多组分障碍，被称为代谢综合征(或X综合征)。
有令人信服的证据表明，适度的身体活动和体重下降可提高胰岛素敏感性和改善代谢综合征的特性。这也反映在体脂质量下降上。因而，有理由相信，脂肪组织质量、骨骼肌三酰甘油含量和血浆脂肪酸水平减少将有益于这些脂质障碍和提高胰岛素敏感性。
代谢综合征已被世界卫生组织和American National CholesterolEducation Program(NCEP)Adult Treatment Panel(ATPIII)定义为一种临床实体[Curr Opin Lipidol，Volume 14(3)，pp329-332]。两种定义都反映该综合征的异质性。世界卫生组织的定义包括葡萄糖耐受性受损或2型糖尿病、和/或胰岛素抗性，加下面中的两项腹部肥胖、脂血异常、高血压和微白蛋白尿。另一方面，NCEP定义包括下面中的三项或以上禁食血浆葡萄糖水平升高(＞6.0mmol/l)、甘油三酯浓度升高(＞1.6mmol/l)、低HDL胆固醇(女性＜1.3mmol/，男性＜1mmol/l)、血压升高(＞＝130/85mmHg)和腹部肥胖(男性腰围＞102cm，女性＞88cm)。
这些疾病的发生和流行不断增加(包括工业化国家和发展中国家)，死亡率、发病率和对个人、团体与社会的医药负担都在日益增加。它们经常是难以治疗的。从科学观点来看，这些疾病和病症的起源和发病是复杂的，人们对此仅有部分认识。
过去五年已经引入2型糖尿病和肥胖的突破性新药。这些药物包括用于2型糖尿病的罗格列酮(SmithKline Beecham′s Avandia)和吡格列酮(Lilly′s Actos)，和用于肥胖的奥利司他(Roche′s Xenical)和西布曲明(Knoll AG′s Meridia)。
已经证明本发明化合物(TTA-PC和TTA-TAG)增加脂肪酸氧化，减少血浆与肝脂质水平。由于这些新颖脂质与TTA的结构联系和预计它们可能遵循相似的生物学代谢途径，预期本发明化合物能够用于预防和/或治疗肥胖、糖尿病、高胰岛素血症、脂肪肝和高血压。这些可取的作用已经得到母体脂肪酸类似物十四烷基硫代乙酸(TTA)的证明，它对脂肪酸氧化和血浆与肝脂质具有性质上相似的作用。已经证明TTA可改善高胰岛素血症、高血糖、脂肪肝和肥胖(WO01/68582)。
已经证明被S或Se取代的脂肪酸类似物由于杂原子的存在而具有抗氧化性质(WO97/03663)。由于相似的分子结构，也预期本发明化合物具有抗氧化性质，因而可以抑制低密度脂蛋白的氧化性修饰。
由于与S和Se取代的脂肪酸分子结构上的相似性，也预期本发明化合物具有抗炎性质，这已经在十四烷基硫代乙酸和十四烷基硒代乙酸中得到了证明(WO02/43728)。
再狭窄和动脉粥样硬化的过程是相关的，但不是相似的。再狭窄是对使用气囊冠状血管成形术(PTCA)或者在血管壁中插入支架之后血管损伤的响应，涉及一种炎性反应和氧化性应激反应。它是一种修复过程，导致因血管壁中平滑肌细胞增殖与移行而使腔变窄，还有胶原与胶原桥连数量上的变化。因而，预期本发明化合物将抑制再狭窄的过程。进而预期它们将有效预防和/或治疗炎性障碍(关于TTA参见WO02/43728)。
进一步预期本发明化合物将抑制特定癌细胞和平滑肌细胞的增殖，这已经在其他杂原子取代的脂肪酸类似物中得到了证明。因而，这些化合物可以有效预防和/或治疗增生性皮肤障碍，它们涉及角化细胞增殖增加和分化减少(关于TTA参见WO02/26218)。
进而预期它们将有效抑制肿瘤的生长，可以用于抑制肿瘤的转移性质，也就是抑制继发性肿瘤的形成(关于TTA参见WO02/03983)。
2.3实验 2.3.1化学实验 一般工艺 干燥CH2Cl2是以五氧化磷蒸馏的，其他溶剂是购买的，根据需要预先干燥。薄层色谱(TLC)是在预涂层的Merck-Kieselgel 60 F254铝衬平板上进行的，用紫外光、碘、酸性钼(IV)酸铵、酸性香兰素乙醇溶液或酌情其他试剂显色。快速柱色谱是在Merck-Kieselgel 60(230-400目)上完成的。红外光谱是在Jasco FT/IR 620上记录的，使用NaCl平板。质谱是用Bruker Esquire 3000，VG-7070B或JEOLSX-102仪器记录的。1H & 13C NMR光谱是在Bruker DRX300，Advance400 UltrashieldTM或Jeol GX-270Q机器上记录的，使用残留的同位素溶剂作为内部参照(CHCl3，δH＝7.26ppm)(s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，quin＝五重峰)。所有化学品都是从Sigma-Aldrich或Lancaster购买的，如果没有另外说明的话。FCC表示硅胶快速柱色谱。
十四烷基硫代乙酸(TTA)3
将硫代乙酸(3.32g，36.0mmol)的MeOH(150ml)溶液连续用NaOMe(25％MeOH溶液，12g，0.08mol)和十四烷基溴(10.0g，0.036mol)处理，在室温下剧烈搅拌48小时。将混合物倒入H2O中，酸化至pH2(浓HCl)，用二乙醚萃取。干燥(MgSO4)，在真空中浓缩，得到粗固体，经过快速柱色谱(FCC)纯化(含25％EtOAc的己烷至含35％EtOAc的己烷)，得到3，为无色固体(8.6g，82％)；m.p.64-66℃(文献值65-67℃)； δH(300MHz，CDCl3)0.89(t，3H，J6.7Hz)，1.27(m，22H)，1.32(m，2H)，1.61(m，2H)，2.67(t，2H，J7.4)和3.28(s，2H)；MS(FAB+)289(M+H)+，288M+；HRMS实测值M+288.211823.计算值C16H32O2SM+288.212302. (6-羟基己基)三苯基溴化鏻6
将6-溴-1-己醇(5.0g，27.6mmol)和三苯膦(7.6g，28.2mmol)在乙腈(100ml)中回流6天，然后在真空中除去溶剂，得到粗的6(12.0g，98％)；δH(300MHz，CDCl3)1.53(m，4H)，1.69(m，4H)，3.65(m，2H)，3.73(m，3H)，7.7-7.9(m，15H). (Z)-6-十四碳烯-1-醇7
将(6-羟基己基)三苯基溴化鏻6(0.5g，1.13mmol)的热DMSO(3ml)溶液加入到甲亚磺酰基甲烷离子(从NaH(57mg，2.37mmol)和DMSO(1ml)制备，在70-75℃N2下80分钟)的THF溶液，同时在冰浴中冷却。将亮黄色正膦溶液在室温下搅拌10分钟，然后在0℃下用辛醛(0.159g，1.25mmol)处理。搅拌20分钟后，将反应混合物倒入5ml H2O中，用乙醚萃取若干次。用MgSO4干燥，浓缩，得到残余物，经过FCC纯化(含14％EtOAc的己烷)，得到7(0.13g，54％，文献值60％)； δH(270MHz，CDCl3)0.86(3H，t，J6.5Hz)，1.10-1.43(16H，m)，1.55(2H，m)，2.00(4H，m)，3.6(2H，t，J6.5Hz)和5.3-5.4(2H，m). 顺式-1-溴-十四碳-6-烯8
在0℃下，将醇7(115mg，0.541mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液连续用四溴化碳(395mg，1.20mmol)和三苯膦(312mg，1.20mmol)处理，温热至室温，搅拌2小时。将反应混合物用水研制，用二氯甲烷萃取，干燥(MgSO4)，在真空中浓缩。粗产物经过快速柱色谱纯化，使用己烷作为洗脱剂，从而得到纯的8，为亮色的油(105mg，0.381mmol，70％)； δH(270MHz，CDCl3)；0.87(3H，t，J6.1Hz)，1.1-1.65(14H，m)，1.85(2H，quin，J7.0)，2.03(4H，m)，3.4(2H，t，J6.8)和5.35(4H，m)；δC(67.5MHz，CDCl3)27.06，27.32 27.72，27.91，28.04，28.96，29.32，29.37，29.71，29.83，31.96，32.82，34.01，129.31，130.47. 顺式-十四碳-6-烯基硫代乙酸(dTTA)4
将硫代乙酸(35mg，0.38mmol)的甲醇(20ml)溶液连续用甲醇钠(50mg，0.9144mmol)和溴化物8(105mg，0.381mmol)处理，在室温下搅拌2天。将反应混合物用水稀释，用冷的浓HCl水溶液酸化。水层用己烷萃取，干燥(MgSO4)，在真空中浓缩，得到粗残余物，经过快速柱色谱纯化(洗脱剂含65-75％EtOAc的己烷梯度洗脱)，得到纯的4，为粘性的油(105mg，0.367mmol，96％)； δH(270MHz，CDCl3)；0.86(3H，t，J6.8)，1.35(14H，m)，1.60(2H，m)，2.00(4H，m)，2.65(2H，t，J7.4)，3.24(2H，s)，5.34(2H，m)和10.0(1H，br s)；δC(67.5MHz，CDCl3)14.20，22.76，27.09，27.31，28.45，28.89，29.32，29.35，29.35，29.83，31.95，32.82，33.54，129.44，130.36和176.77；MS(CI)304(M+NH4)+；HRMS实测值[M+NH4]+304.230876.计算值C16H34NO2S[M+NH4]+304.231026. 2-(5-碘-戊氧基)-四氢-吡喃10
利用Bestmann和Gunawardena的方法10从5-溴戊基乙酸酯9分3步合成标题化合物10。因而从9(58.8g，0.281mol)得到纯的碘化物10(54.7g，0.183mol，65％)； δH(270MHz，CDCl3)；1.40-1.90(12H，m)，3.17(2H，t，J6.9)，3.30-3.55(2H，m)，3.69-3.90(2H，m)和4.55(1H，m)；δC(67.5MHz，CDCl3)7.05，19.75，25.54，27.38，28.74，30.82，33.42，62.47，67.28，69.65，73.45，98.97和116.07；MS(EI)297(M-H)+；HRMS实测值[M-H]+297.034067.计算值C10H18O2I[M-H]+297.035157. 2-十四碳-6-炔基氧基-四氢-吡喃12
在0℃下，将1-壬炔11(1.0g，8.06mmol)的THF(20ml)溶液用n-BuLi(1.7M己烷溶液，6.6ml，0.011mmol)处理，将所得淡黄色溶液搅拌15分钟。然后加入HMPA(15ml)，将混合物在0℃下搅拌另外15分钟。然后在0℃下向所得暗黄色/橙色溶液加入10(3.6g，0.0121mol)，导致溶液颜色立即变为亮黄色。将该亮黄色溶液在室温下搅拌过夜，在此阶段将其用水研制，用己烷萃取。将己烷萃取液用水充分洗涤，干燥(MgSO4)，在真空中浓缩，得到亮黄色残余物，经过快速柱色谱纯化(洗脱剂含8.5％EtOAc的己烷)，得到纯的12(1.6g，70％)； δH(270MHz，CDCl3)；0.86(3H，t，J6.2)，1.15-1.85(13H，m)，2.11(4H，m)，3.30-3.55(2H，m)，3.69-3.90(2H，m)和4.56(1H，m)；δC(67.5MHz，CDCl3)14.17，18.82，18.82，19.74，22.71，25.57，25.57，28.91，28.91，29.08，29.24，29.38，30.49，30.84，31.84，62.40，62.40，67.57，67.57，98.90.MS(EI)295(M+H)+；HRMS实测值295.2616[M+H]+.计算值C19H35O2295.263706[M+H]+. 顺式-1-溴-十四碳-6-烯8
将炔烃12(150mg，0.509mmol)、喹啉(0.18ml，1.50mmol)与林德乐催化剂(Pd，5％wt百分数基于碳酸钙，混有铅，100mg)的混合物在H2气氛(气囊压力)和室温下搅拌3小时。通过硅藻土过滤除去固体残余物后，将滤液用水洗涤，用己烷萃取，干燥(MgSO4)，浓缩，得到粗残余物，该残余物不经纯化。在0℃下将残余物溶于二氯甲烷，将混合物连续用三苯膦(52mg，0.20mmol)和二溴化三苯膦(236mg，0.56mmol)处理，将所得混合物在0℃下搅拌1小时。然后将混合物用10％含水碳酸钾、水洗涤，干燥(MgSO4)。浓缩，得到粗残余物，经过快速柱色谱纯化(洗脱剂己烷)，得到纯的8(81％)； δH(270MHz，CDCl3)；0.87(3H，t，J6.1Hz)，1.1-1.65(14H，m)，1.85(2H，quin，J7.0)，2.03(4H，m)，3.4(2H，t，J6.8)和5.35(4H，m)；δC(67.5MHz，CDCl3)27.06，27.32 27.72，27.91，28.04，28.96，29.32，29.37，29.71，29.83，31.96，32.82，34.01，129.31，130.47. 2-(10-溴癸氧基)四氢吡喃14
在0℃下，将1-溴癸-1-醇13(5.0g，21.1mmol)用二氢吡喃(2.14g，25.4mmol)与吡啶鎓-对-甲苯磺酸盐(0.1g cat.)的无水二氯甲烷(100ml)溶液处理，在室温下搅拌8小时。用10％NaHCO3猝灭反应，用二氯甲烷萃取。将有机萃取液用盐水和水洗涤，经无水MgSO4干燥。在真空中除去溶剂，得到油，经过FCC纯化(含4-8％Et2O的己烷)。得到纯的14，为粘性的油(5.0g，15.5mmol，73％)； δH(270MHz，CDCl3)1.27-1.91(22H，m)，3.36(2H，t，J6.9Hz)，3.34-3.90(4H，m)和4.55(1H，m)；MS(FAB+)321M+，HMRS实测值319.127007(M-H+).计算值C15H28BrO2，319.127267(M-H)+. 2-(十二碳-11-炔基-1-氧基)四氢吡喃15
在干燥N2气氛下，将无水DMSO(15ml)加入到冷的乙炔化锂(1.47g，15.2mmol)中。将混合物在5℃下搅拌10分钟，然后用14(3g，11.3mmol)的DMSO(4ml)溶液逐滴处理。将所得混合物在5℃下搅拌3小时，温热至室温过夜，然后用冰水猝灭，继之以用乙醚萃取若干次。将醚萃取液用水洗涤若干次，经MgSO4干燥，在真空中浓缩，得到粗产物。经过FCC纯化(含4％EtOAc的己烷)，得到纯的15(1.95g，65％)；δH(270MHz，CDCl3)1.20-1.50(12H，m)，1.50-1.88(10H，m)，1.95(1H，t，J 2.6Hz)，2.19(2H，dt，J2.6，7.0Hz)，3.35-3.92(4H，m)和4.58(1H，m)；HRMS实测值267.231735(M+H)+.计算值C17H31O2267.232406(M+H)+. 2-十四碳-11-炔基氧基-四氢-吡喃16
按照与炔烃12相同的方式合成炔烃16。因而从末端炔烃15(5.09g，0.0191mol)和乙基碘(5.46g，0.031mol)得到粗的16，不经纯化直接用于下一步，即溴化物17的合成。
14-溴-十四碳-3-炔17
在0℃下，将炔基醚16(5.62g，0.0191mol)的二氯甲烷(150ml)溶液连续用四溴化碳(8.23g，0.0248mol)和三苯膦(13g，0.050mol)处理，在室温下搅拌5小时。将溶液用硅胶处理，在真空中除去溶剂，将干燥残余物装上已备好的快速柱。用己烷洗脱，得到纯的溴化物17(87％，从15计)； δH(270MHz，CDCl3)1.10(3H，t，J7.4)，1.27-1.54(14H，m)，1.84(2H，quin，J7.3)，2.15(4H，m)和3.40(2H，t，J6.8).δC(100MHz，CDCl3)12.82，14.79，27.28，29.23，29.26，29.4，29.53，29.80，29.80，30.11，33.04，79.96(quartenary)and 82.00(quartenary). 十四碳-11-炔基硫代乙酸(tTTA)5
按照与化合物3和4相同的方式合成酸5。因而从溴化物17(4.4g，15.98mmol)和硫代乙酸(1.5g，16.2mmol)得到粗的酸，该酸从己烷中结晶，从而得到纯的酸5(3.90g，86％)，为白色固体；δH(270MHz，CDCl3)1.10(3H，t，J7.30)，1.20-1.50(14H)，1.60(2H，m)，2.15(4H，m)，2.64(2H，t，J7.30)，3.25(2H，s)和11.0(1H，br s)；δC(67.5MHz，CDCl3)12.49，14.47，18.80，28.80，28.95，28.95，29.21，29.21，29.21，29.51，32.88，33.56，79.82，81.80和176.51；MS(CI)302[M+NH4]+，HMRS实测值302.214964[M+NH4]+.计算值C16H32NO2S302.215376[M+NH4]+. 1，2-二-十四烷基硫代乙酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(TTA-PC，18)
在N2气氛下，向搅拌着的TTA3(231mg，0.80mmol)的无水CHCl3(5ml)溶液加入N，N-羰基二咪唑(CDI；162mg，1.00mmol)。同时，将sn-甘油-3-磷酸胆碱氯化镉(II)加合物(GPC；137mg，0.30mmol，1eq.)溶于DMSO(5ml)，同时轻微加热。向该溶液加入DBU(120μl，0.80mmol)。将CHCl3溶液以及另外的CHCl3(2ml)经由套管转移至DMSO溶液。7小时后，将粗反应混合物用0.1M乙酸(20ml)中和，然后用2∶1CHCl3∶MeOH混合物(总体积150ml)萃取，用1∶1H2O∶MeOH混合物洗涤(从100ml逐步到250ml，洗涤五次)，每次反萃取。合并随后的有机级分，在真空中浓缩，使水和甲醇与苯共沸。残留的橙色-褐色粘性油经过SiO2快速柱色谱纯化[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，77.54∶20.23∶2.23]，得到TTA-PC18，为灰白色蜡状固体(135mg，56％)； Rf0.33[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，65∶25∶4]；1H NMR(270MHz，CDCl3)δH 0.82(6H，t，J＝6.5Hz，2CH2CH3)，1.15-1.39(44H，2m，22CH2)，1.47-1.65(4H，m，2CH2CH3)，2.54-2.61(4H，2xt，J＝7.2Hz，2CH2SCH2CO2)，3.20和3.23(2x1H，2s，2CH2SCH2CO2)，3.34(9H，s，N(CH3)3)3.59-3.67(2H，m，CH2N(CH3)3)，3.87-3.98(2H，m，甘油-C3-Ha，b)，4.07-4.15(1H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝7.8Hz，甘油-C1-Hb)，4.26-4.33(2H，m，CH2CH2N(CH3)3)，4.34-4.39(1H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝2.5Hz，甘油-C1-Ha)，5.13-5.22(1H，m，甘油-C2-H)，13C NMR(67.5MHz，CDCl3)δC 170.44，170.19(2CO)，71.66(d，JCP＝7.74Hz，POCH2CHCH2)，66.30(d，JCP＝4.67Hz，POCH2CH2N(CH3)3)，63.63(POCH2CHCH2)，63.28(d，JCP＝25.2Hz，POCH2[甘油])，59.38(d，JCP＝21.2Hz，POCH2[胆碱])，54.42(N(CH3)3)，33.66，33.50，32.80，32.73，29.77(40xCH2)，29.43，28.91，28.89，28.89，22.75，14.18(2CH3)；m/z(FAB+)820([M+Na]+)，798([M+H]+)；HRMS计算值C40H81NO8PS2798.514126.实测值798.510895([M+H]+). 1，2-二(顺式-十四碳-6-烯基硫代乙酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dTTA-PC，19)
在N2气氛下，向搅拌着的dTTA4(229mg，0.80mmol)的无水CHCl3(5ml)溶液加入N，N’-羰基二咪唑(CDI；162mg，1.00mmol)。同时，将sn-甘油-3-磷酸胆碱氯化镉(II)加合物(GPC；137mg，0.30mmol，1eq.)溶于DMSO(5ml)，同时轻微加热。向该溶液加入DBU(120μl，0.80mmol)。将CHCl3溶液以及另外的CHCl3(2ml)经由套管转移至DMSO溶液。7小时后，将粗反应混合物用0.1M乙酸(20ml)中和，然后用2∶1CHCl3∶MeOH混合物(总体积150ml)萃取，用1∶1H2O∶MeOH混合物洗涤(从100ml逐步到250ml，洗涤五次)，每次反萃取。合并随后的有机级分，在真空中浓缩，使水和甲醇与苯共沸。残留的橙色-褐色粘性油经过SiO2快速柱色谱纯化[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，77.54∶20.23∶2.23]，得到dTTA-PC19，为灰白色蜡状固体(155mg，65％)； Rf0.33[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，65∶25∶4]；1H NMR(270MHz，CDCl3)δH0.82(6H，t，J＝6.5Hz，2CH2CH3)，1.15-1.39(28H，2m，14CH2)，1.47-1.65(4H，m，2CH2CH3)，1.92-2.07(8H，m，2CH2CH＝CHCH2)，2.54-2.61(4H，2xt，J＝7.2Hz，2CH2SCH2CO2)，3.20和3.23(2x1H，2s，2CH2SCH2CO2)，3.34(9H，s，N(CH3)3)3.59-3.67(2H，m，CH2N(CH3)3)，3.87-3.98(2H，m，甘油-C3-Ha，b)，4.07-4.15(1H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝7.8Hz，甘油-C1-Hb)，4.26-4.33(2H，m，CH2CH2N(CH3)3)，4.34-4.39(1H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝2.5Hz，甘油-C1-Ha)，5.13-5.27(1H，m，甘油-C2-H)和5.25-5.38(4H，m，2CH＝CH)；13C NMR(67.5MHz，CDCl3)δC170.36，170.09(2CO)，130.29，129.38(2C＝C)，71.58(d，JCP＝7.74Hz，POCH2CHCH2)，66.30(d，JCP＝4.67Hz，POCH2CH2N(CH3)3)，63.63(POCH2CHCH2)，63.16(d，JCP＝25.2Hz，POCH2[甘油])，59.38(d，JCP＝21.2Hz，POCH2[胆碱])，54.42(N(CH3)3)，33.60，33.46，32.72，32.64，31.91，29.77，29.40，29.32，29.28，28.96，28.47，27.29，27.11，22.75和14.18(2CH3)；m/z(FAB+)816([M+Na]+)，794([M+H]+)；HRMS计算值C40H77NO8PS2794.482826.实测值794.480957([M+H]+). 1，2-二(十四碳-11-炔基硫代乙酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(tTTA-PC，20)
在N2气氛下，向搅拌着的tTTA5(228mg，0.80mmol)的无水CHCl3(5ml)溶液加入N，N’-羰基二咪唑(CDI；162mg，1.00mmol)。同时，将sn-甘油-3-磷酸胆碱氯化镉(II)加合物(GPC；137mg，0.30mmol，1eq.)溶于DMSO(5ml)，同时轻微加热。向该溶液加入DBU(120μl，0.80mmol)。将CHCl3溶液以及另外的CHCl3(2ml)经由套管转移至DMSO溶液。7小时后，将粗反应混合物用0.1M乙酸(20ml)中和，然后用2∶1CHCl3∶MeOH混合物(总体积150ml)萃取，用1∶1H2O∶MeOH混合物洗涤(从100ml逐步到250ml，洗涤五次)，每次反萃取。合并随后的有机级分，在真空中浓缩，使水和甲醇与苯共沸。残留的橙色-褐色粘性油经过SiO2快速柱色谱纯化[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，77.54∶20.23∶2.23]，得到tTTA-PC20，为灰白色蜡状固体(135mg，57％)； Rf0.33[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，65∶25∶4]；1H NMR(270MHz，CDCl3)δH1.09(6H，t，J＝6.9Hz，2CH2CH3)，1.15-1.60(32H，m，16CH2)，2.0-2.17(CH2C≡CCH2)，2.56(4H，2xt，J＝7.2Hz，2CH2SCH2CO2)，3.20和3.23(2x1H，2s，2CH2SCH2CO2)，3.34(9H，s，N(CH3)3)，3.59-3.67(2H，m，CH2N(CH3)3)，3.87-3.98(2H，m，甘油-C3-Ha，b)，4.07-4.15(1H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝7.8Hz，甘油-C1-Hb)，4.26-4.33(2H，m，CH2CH2N(CH3)3)，4.34-4.39(1H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝2.5Hz，甘油l-C1-Ha)，5.13-5.27(1H，m，甘油-C2-H)；13C NMR(67.5MHz，CDCl3)δC170.36，170.09(2CO)，81.6和79.58(2C≡C)，71.61(d，JCP＝7.74Hz，POCH2CHCH2)，66.35(d，JCP＝4.67Hz，POCH2CH2N(CH3)3)，63.65(POCH2CHCH2)，63.22(d，JCP＝25.2Hz，POCH2[甘油])，59.33(d，JCP＝21.2Hz，POCH2[胆碱])，54.47(N(CH3)3)，33.64，33.50，32.79，32.72，29.56，29.56，29.32，29.21，29.21，29.03，28.92，28.87，18.76，14.45和12.46(2CH3)；m/z(FAB+)812([M+Na]+)，790([M+H]+)；HRMS计算值C40H73NO8PS2790.451526.实测值790.453156([M+H]+). 1，2-二-十四烷基硫代乙酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(TTA-PE，21)
在30℃下，将乙醇胺(91μl，1.50mmol，6eq.)在100mM NaOAc/50mMCaCl2缓冲液(0.625ml)，pH6.5(用乙酸调节pH)中的溶液加入到搅拌着的18(135mg，0.169mmol，1eq.)的CHCl3(5ml)溶液中。向该两相系统加入PLD(在440μl上述缓冲液pH6.5中含有310单位)，将反应混合物在30℃下搅拌3小时。加入另外的PLD(35单位)。10小时后，将水相稀释至15ml，将粗有机产物用CHCl3∶MeOH，2∶1洗涤(30ml×3)进行萃取。合并有机层，用H2O(15ml)洗涤，然后在真空中浓缩，经过SiO2快速柱色谱纯化[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，77.54∶20.23∶2.23]。得到标题化合物21，为非常淡黄色的蜡状固体(120mg，94％)Rf0.32[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，65∶25∶4]；1H NMR(400MHz，CDCl3)δH0.85(6H，t，J＝6.9Hz，2CH2CH3)，1.15-1.41(44H，2m，22CH2)，1.50-1.62(4H，m，2CH2CH3)，2.58(4H，2t，J＝6.9Hz，2CH2SCH2CO2)，3.05-3.13(2H，m，CH2NH3)，3.20和3.24(2H，2s，2CH2SCH2CO2)，3.85-3.91(2H，m，甘油-C3-Ha，b)，3.97-4.05(2H，m，CH2CH2NH3)，4.09-4.14(1H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝6.4Hz，甘油-C1-Hb)，4.30-4.35(1H，dd，2J＝11.8Hz，3J＝2.6Hz，甘油-C1-Ha)，5.14-5.20(1H，m，甘油-C2-H)，8.20-8.60(br s，NH3)；13C NMR(400MHz，CDCl3)δC170.29，170.13(2CO)，71.28(d，JCP＝27.6Hz，POCH2CHCH2)，63.73(d，JCP＝22.0Hz，POCH2[甘油])，63.25(POCH2CHCH2)，62.40(m，POCH2[胆碱])，40.49(CH2NH3)，33.59，33.42，32.81，32.75，32.01，29.81(14CH2)，29.46，29.09，28.97，28.93，22.77和14.19. 1，2-二-(顺式-十四碳-6-烯基硫代乙酰)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dTTA-PE，22)
在30℃下，将乙醇胺(91μl，1.50mmol，6eq.)在100mM NaOAc/50mMCaCl2缓冲液(0.625ml)，pH6.5(用乙酸调节pH)中的溶液加入到搅拌着的19(188mg，0.237mmol，1eq.)的CHCl3(5ml)溶液中。向该两相系统加入PLD(在440μl上述缓冲液pH6.5中含有250单位)，将反应混合物在30℃下搅拌3小时。加入另外的PLD(35单位)。10小时后，将水相稀释至15ml，将粗有机产物用CHCl3∶MeOH，2∶1洗涤(30ml×3)进行萃取。合并有机层，用H2O(15ml)洗涤，然后在真空中浓缩，经过SiO2快速柱色谱纯化[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，77.54∶20.23∶2.23]。得到标题化合物22，为非常淡黄色的蜡状固体(158mg，89％)Rf0.32[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，65∶25∶4]；1H NMR(400MHz，CDCl3)δH0.85(6H，t，J＝6.9Hz，2CH2CH3)，1.15-1.41(36H，2m，18CH2)，1.50-1.62(4H，m，2CH2CH3)，1.90-1.21(8H，m，2CH2CH＝CHCH2)，2.58(4H，2t，J＝6.9Hz，2CH2SCH2CO2)，3.05-3.13(2H，m，CH2NH3)，3.20和3.24(2H，2s，2CH2SCH2CO2)，9Hz，2CH2SCH2CO2)，3.05-3.13(2H，m，CH2NH3)，3.20和3.24(2H，2s，2CH2SCH2CO2)，3.85-3.91(2H，m，甘油-C3-Ha，b)，3.97-4.05(2H，m，CH2CH2NH3)，4.09-4.14(1H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝6.4Hz，甘油-C1-Hb)，4.30-4.35(1H，dd，2J＝11.8Hz，3J＝2.6Hz，甘油-C1-Ha)，5.14-5.20(1H，m，甘油-C2-H)，5.22-5.32(4H，m，2CH＝CH)，8.20-8.60(br s，NH3)；13C NMR(400MHz，CDCl3)δC170.28，170.11(2CO)，130.29，129.41(2C＝C)，71.28(d，JCP＝27.6Hz，POCH2CHCH2)，63.73(m，POCH2[甘油])，63.25(POCH2CHCH2)，62.40(m，POCH2[胆碱])，40.49(CH2NH3)，33.58，33.41，32.72，32.67，31.94，29.82，29.46，29.35，29.31，28.99，28.55，28.52，27.32，27.16，22.75和14.18(2CH3)；m/z(FAB+)748([M+Na]+)，770([M+H]+)；HRMS计算值C37H67NO8PS2748.404576.实测值748.404526([M+H]+). 1，2-二-(十四碳-11-炔基硫代乙酰)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(tTTA-PE，23)
在30℃下，将乙醇胺(91μl，1.50mmol，6eq.)在100mM NaOAc/50mMCaCl2缓冲液(0.625ml)，pH6.5(用乙酸调节pH)中的溶液加入到搅拌着的20(185mg，0.234mmol，1eq.)的CHCl3(5ml)溶液中。向该两相系统加入PLD(在440μl上述缓冲液pH6.5中含有250单位)，将反应混合物在30℃下搅拌3小时。加入另外的PLD(35单位)。10小时后，将水相稀释至15ml，将粗有机产物用CHCl3∶MeOH，2∶1洗涤(30ml×3)进行萃取。合并有机层，用H2O(15ml)洗涤，然后在真空中浓缩，经过SiO2快速柱色谱纯化[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，77.54∶20.23∶2.23]。得到标题化合物23，为非常淡黄色的蜡状固体(151mg，86％)Rf0.32[CH2Cl2∶MeOH∶H2O，65∶25∶4]；1H NMR(400MHz，CDCl3)δH□1.09(6H，t，J＝6.9Hz，2CH2CH3)，1.15-1.60(32H，m，8CH2)，2.0-2.17(CH2C≡CCH2)，2.56(4H，2xt，J＝7.2Hz，2CH2SCH2CO2)，3.05-3.13(2H，m，CH2NH3)，3.20和3.23(2x1H，2s，2CH2SCH2CO2)，3.85-3.91(2H，m，甘油-C3-Ha，b)，3.97-4.05(2H，m，CH2CH2NH3)，4.09-4.14(1H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝6.4Hz，甘油I-C1-Hb)，4.30-4.35(1H，m，甘油-C1-Ha)，5.14-5.20(1H，m，甘油-C2-H)，8.20-8.60(br s，NH3)；13C NMR(67.5MHz，CDCl3)δC170.27，170.11(2CO)，81.60和79.58(2C≡C)，71.28(d，JCP＝27.6Hz，POCH2CHCH2)，63.70(d，JCP＝22.0Hz，POCH2[甘油])，63.22(POCH2CHCH2)，62.35(m，POCH2[胆碱])，40.47(CH2NH3)，33.58，33.41，32.78，32.72，29.61(3 CH2)，29.56，29.37，29.23(3CH2)，29.04，28.95(2CH2)，28.88，18.79，14.45和12.47(2CH3). 1，2，3-三-十四烷基硫代乙酰-sn-甘油(TTA-TAG，24)
在N2气氛下，将二甲氨基吡啶(2.08g，17.00mmol)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU；6.45g，17.00mmol)和甘油(0.45g，4.95mmol)加入到搅拌着的TTA3(5.00g，17.00mmol)的无水CHCl3(120ml)溶液中。将所得混合物在室温下搅拌24小时。将粗反应混合物用7％柠檬酸洗涤，有机相经MgSO4干燥。残留固体经过SiO2快速柱色谱纯化[Et2O∶己烷，1∶5]，得到TTA-TAG24，为白色固体(3.80g，85％)Rf0.35[Et2O∶Hexane，1∶5]；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.88(9H，t，J＝6.0Hz，3CH2CH3)，1.23-1.41(66H，2m，33CH2)，1.55-1.63(6H，m，3CH2CH3)，2.62(4H，t，J＝7.6，CH2SCH2CO2)，2.63(4H，t，J＝7.6，CH2SCH2CO2)，3.15(6H，s，CH2SCH2CO2)，4.19(2H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝6.0Hz，甘油-C1-Ha和甘油-C3-Ha)，4.32(2H，dd，2J＝12.0Hz，3J＝4.4Hz，甘油-C1-Hb和甘油-C3-Hb)，5.30-5.35(1H，m，甘油-C2-H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ170.08，169.77(3CO)，69.69(甘油-C2)，62.66(甘油-C1和甘油-C3)，33.45，33.34，32.81，32.77，31.97，29.73，29.74，29.66，29.58，29.41，29.28，29.0，28.84，28.81，22.74，14.17(3CH3)；m/z(ESI)925([M+Na]+). 2.3.4生物学实验 方法 动物和处理 在实验开始时将体重200-250g的雄性Wistar Charles River大鼠喂养在金属丝笼中，控制房间的温度(22±1℃)和光线(光照从7.00a.m.至7.00p.m.)。它们可以自由进食和饮水。向它们饲喂StandardLaboratory Rat Chow R-34-EWOS-ALAB(EWOS Sweden)生长大鼠供养饲料。每笼两只大鼠。在实验开始之前，使动物适应至少5天。每天记录重量增量和食物摄取量。将TTA和酯化TTA(1，2-二(十四烷基硫代乙酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(TTA-PC)和甘油1，2，3-三(十四烷基硫代乙酸酯)(三酰甘油)(TTA-TAG))悬浮在0.5％羧甲基纤维素(CMC)中，通过胃插管给药，最终体积为0.8-1.2ml，每天一次达6天。
在实验结束时，将动物用荧光母素麻醉(0.4ml/100g体重)，进行心脏穿刺，在含有EDTA的真空容器中获得血样。制备血浆，利用Monotest酶试剂盒(Boehringer Mannheim，Germany)测量三酰甘油和胆固醇。
核后与线粒体级分的制备和酶活性的测量 将从单个雄性Wistar大鼠中新鲜分离的肝脏在冰冷的蔗糖缓冲液(0.25M蔗糖、10mM HEPES(pH7.4)和2mM EDTA)中均质化。按照DeDuve等13利用制备型差速离心法制备核后与线粒体级分。修饰、纯度和收率如文献所述14。如文献所述15，使用[1-14C]-棕榈酰-CoA(Radiochemical Centre，Amersham，England)作为底物测量核后级分中的酸溶性产物。本质上如Bremer所述16测量线粒体级分中的肉碱棕榈酰转移酶-II活性，按照Clinkenbeard等17测量核后级分中的3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA合酶。利用Small等所述偶联测定法18测量核后级分中的脂肪酰-CoA氧化酶。通过在棕榈酰-CoA的存在下监测二氯荧光黄吸光度的增加，测量过氧化氢的产生。
脂质体的制剂和给药 一般工艺。1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DMPC)和硬脂酸(SA)是从Sigma-Aldrich购买的。十四烷基硫代乙酸(TTA)和1，2-二-十四烷基硫代乙酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(TTA-PC)是在我们的实验室合成的。在二氯甲烷中制备脂质的储备溶液(5mg/ml)，贮存在-20℃下。二氯甲烷在新鲜蒸馏后使用，使用PBS(10mM磷酸盐缓冲液，150mMNaCl，pH7.4)进行脂质体的水化。
脂质体的制备。将相关脂质在二氯甲烷中的混合物在50ml圆底烧瓶中干燥成薄层。向脂质膜加入PBS，然后将混合物在40-50℃水浴中振荡10分钟。将所得脂质体悬液用声波处理5分钟。
示差扫描量热法(DSC)。利用VP-DSC微量热计(MicroCalTMIncorporated)得到差示热分析图，从5℃加热至60℃的速率为1℃/min。基于峰顶温度测量相变温度(Tc)。
光子相关性分光术(PCS)。在N4 plus MD亚微米颗粒分析仪(Beckman Coulter，High Wycombe，Buckinghamshire，U.K.)上测量粒径。在20℃下进行全部测量，在90℃下记录，平衡时间为1分钟，单次运行时间为300秒。将缓冲液的折光指数设置在1.333。利用单模式分析计算平均粒径和标准分布。
ζ电位(ZP)。在Delsa 440 SX(Beckman Coulter，High Wycombe，Buckinghamshire，U.K.)上利用表面电荷电泳法测量ζ电位。
TTA脂质体 将TTA配制成DMPC/TTA脂质体系统。分析和表征不同摩尔比的DMPC∶TTA脂质体。用于TTA静脉内注射的最终制剂是DMPC/TTA(1∶1)的PBS溶液。所制备和注射的TTA浓度如表7所示。
表7 脂质体 TTA cc.(mg/ml)总脂质cc.(mg/ml) PCS(nm)TTA8.9428.64 265.3±114.3 TTA-PC脂质体 TTA-PC脂质体最初是从单独的TTA-PC配制的，但是发现所能达到的最高浓度为2.5mg/ml脂质。为了达到更高的浓度，将TTA-PC脂质体用硬脂酸稳定化。用于TTA-PC静脉内注射的最终制剂是TTA-PC∶SA(2∶1)的PBS溶液。所制备和注射的TTA-PC浓度如表8所示。这些剂量是相对于隐含于TTA-PC中的TTA量计算的。
表8脂质体TTA-PC cc.(mg/ml)总脂质cc.(mg/ml) PCS(nm)TTA-PC12.514.72 209.1±84.6 将脂质体按所示浓度悬浮在磷酸盐缓冲盐水中，将溶液用声波处理备用。在溶于等摩尔量NaOH后，将非酯化TTA(10mmol/L)溶于200mg/ml白蛋白注射溶液(″Octapharma″)。最终的pH为7.0。在将大鼠用荧光母素麻醉后(0.4ml/100g体重)，通过尾静脉注射脂质体或TTA溶液(1ml)。如上所述杀死大鼠。
在上述说明中提到的所有出版物都结合在此作为参考。所述发明方法和系统的各种修改和变化对本领域技术人员而言将是显而易见的，并不背离发明的范围和精神。尽管已经结合具体优选实施方式描述了发明，不过应当理解所要求保护的发明不应仅限于这类具体实施方式
。事实上，所述实施发明的方式的各种修改对化学或相关领域技术人员而言将是显而易见的，都属于下列权利要求的范围。
参考文献
1a.WO-A-01/68582(PCT/NO01/00082)
1b.WO-A-99/58121(PCT/NO99/00135)
1c.WO-A-99/58122(PCT/NO99/00136)
1d.WO-A-99/58123(PCT/NO99/00149)
2.Berg，R.K.和Hvattuu，E.；Pharmac.Ther.(1994)，61，345.
3.Skrede，S.et al；Biochim.Biophys.Acta(1997)，1344，115.
4.EP-A-0345038
5.WO-A-97/03663(PCT/NO95/00195)
6.WO-A-02/03983(PCT/NO01/00301)
7.Horiike，M；Masaru，T.和Hirano，C.；Agric.Biol.Chem.，(1978)，42(10)，1963.
8.Skarma，A.；Chattopadhyay，J.；J.Org.Chem.，(1998)，63，6128.
9.Jayasuriya，N.；Bosak，S.；Regan，S.L.；J.Am.Chem.Soc.，(1990)，112，5844.
10.A.Hermetter和F.Paltauf；Chemistry and Physics of Lipids，(1981)，28，111-115.
11.Wang，P.，Schuster，M.Wang，Y.F.，Wong，C.H.J.Am.Chem Soc.(1993)，115，10487-10491.
12.Bestmann和Gunawarden；Synthesis，(1992)，1239.
13.De Duve，C.，et al.，Biochem.J.，60，604-617 1955.
14.Garras，A.，et al.，Biochim.Biophys.Acta，1255，154-160 1995.
15.Willumsen，N.，et al.，J.Lipid Res.，34，13-22 1993.
16.Bremer，J.，Biochim.Biophys.Acta，665，628-631 1981.
17.Clinkenbeard，K.D.，et al.，J.Biol.Chem，250，3108-3116 1975.
18.Small，GM et.al.Biochem.J.227，205-210，1985.
权利要求
1、一种脂质化合物，包含至少一个非极性部分和极性部分，其中每个或者至少一个非极性部分为式X-Y-Z-，其中X是烃基链，Y选自S、Se、SO2、SO和O中的至少一个，Z是可选的烃基，其中该极性部分为式-[C(O)]mPHG，其中PHG是极性首基，m是非极性部分的数量。
2、根据权利要求1的化合物，其中每个非极性部分为式X-Y-Z-，其中X是烃基链，Y选自S、Se、SO2、SO和O中的至少一个，Z是可选的烃基。
3、根据权利要求1的化合物，其中该化合物为下式
其中p是1至10，优选1、2或3，每个X、Y和Z是彼此独立地加以选择的。
4、根据权利要求1的化合物，其中该化合物为下式
5、根据权利要求1的化合物，包含至少两个非极性部分，其中每个非极性部分独立地选自式X-Y-Z-的非极性部分。
6、根据权利要求3的化合物，其中该化合物为下式
其中每个X、Y和Z是彼此独立地加以选择的。
7、根据权利要求5的化合物，其中该化合物为下式
其中每个X、Y和Z是彼此独立地加以选择的。
8、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中该极性首基从下列之一衍生而来磷脂、神经酰胺、三酰甘油、溶血磷脂、磷脂酰丝氨酸、甘油、醇、烷氧基化合物、单酰甘油、神经节苷脂、鞘磷脂、脑苷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇(PI)、二酰甘油、磷脂酸、甘油糖、多元醇和磷脂酰甘油。
9、根据权利要求8的化合物，其中该极性首基从磷脂衍生而来。
10、根据权利要求9的化合物，其中该磷脂是中性或阴离子型磷脂。
11、根据权利要求10的化合物，其中该磷脂选自磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)。
12、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中该极性首基(PHG)为式-W-连接基-HG，其中W选自CH2、O、NR1和S，其中R1是H或烃基，连接基是可选的连接基团，HG是首基。
13、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中X是选自可选被取代的烷基、可选被取代的链烯基和可选被取代的炔基的基团。
14、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中X是选自未取代的烷基、未取代的链烯基和未取代的炔基的基团。
15、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中X是选自未取代的C6-C24烷基、未取代的C6-C24链烯基和未取代的C6-C24炔基的基团。
16、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中X是选自未取代的C10-C18烷基、未取代的C10-C18链烯基和未取代的C10-C18炔基的基团。
17、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中X是选自未取代的C14烷基、未取代的C14链烯基和未取代的C14炔基的基团。
18、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中X是碳氢化合物链。
19、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中X选自S和Se。
20、根据权利要求19的化合物，其中Y是S。
21、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中Z是烷基。
22、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中Z是C1-C10、优选C1-C6、优选C1-C3烷基。
23、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中Z是-CH2-。
24、根据前述权利要求任意一项的化合物，其中Y-Z一起代表基团[Y1-CH2]n，其中Y1选自S、Se、SO2、SO、O、CH2，其中当Y1是CH2时，链X-Y-Z含有偶数个原子，并且其中n是整数1至20。
25、根据权利要求24的化合物，其中Y1选自S、Se、SO2、SO和O。
26、根据权利要求25的化合物，其中Y1选自S和Se。
27、根据权利要求26的化合物，其中Y1是S。
28、根据权利要求24至26任意一项的化合物，其中n是1至10，优选1至5，优选1、2或3。
29、根据权利要求24至27任意一项的化合物，其中n是1。
30、根据权利要求1的化合物，其中该化合物为下式
其中Y2和Y3独立地是S或Se，X2和X3独立地选自未取代的C10-C18烷基、未取代的C10-C18链烯基和未取代的C10-C18炔基。
31、根据权利要求1的化合物，其中该化合物为下式
其中X2和X3独立地选自未取代的C10-C18烷基、未取代的C10-C18链烯基和未取代的C10-C18炔基。
32、根据权利要求1的化合物，其中该化合物为下式
其中X2和X3独立地选自未取代的C14烷基、未取代的C14链烯基和未取代的C14炔基。
33、根据权利要求1的化合物，其中该化合物为下式
其中X2和X3独立地选自CH3(CH2)13-、CH3(CH2)6CH＝CH(CH2)5-和CH3CH2C≡C(CH2)10-。
34、根据权利要求30、31、32或33的化合物，其中该极性首基从磷脂的极性首基衍生而来。
35、根据权利要求34的化合物，其中该磷脂是磷脂酰胆碱(PC)或磷脂酰乙醇胺(PE)。
36、根据权利要求1的化合物，其中该化合物为下式
其中每个W、X、Y和Z是彼此独立地加以选择的。
37、根据权利要求36的化合物，其中该化合物为下式
其中Y2、Y3和Y4独立地是S或Se，X2、X3和X4独立地选自C10-C18烷基、C10-C18链烯基和C10-C18炔基。
38、根据权利要求36的化合物，其中该化合物为下式
其中X2、X3和X4独立地选自C10-C18烷基、C10-C18链烯基和C10-C18炔基。
39、包含脂质体和根据权利要求1至38任意一项的化合物的组合。
40、药物组合物，包含根据权利要求1至38任意一项的化合物或者根据权利要求39的组合，可选地混合有药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或助剂。
41、可局部给药的根据权利要求40的药物组合物。
42、可肠胃外给药的根据权利要求40的药物组合物。
43、可静脉内给药的根据权利要求42的药物组合物。
44、根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐或者根据权利要求39的组合在医药中的用途。
45、根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐在药物生产中的用途，所述药物用于治疗和/或预防选自X综合征、肥胖、高血压、脂肪肝、糖尿病、高血糖、高胰岛素血症和狭窄的病症。
46、根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐在药物生产中的用途，所述药物用于降低哺乳动物的血液胆固醇与甘油三酯浓度和/或抑制低密度脂蛋白的氧化性修饰。
47、在需要时引起人类或非人类动物的重量减轻或脂肪质量减少的方法，包含对其给以有效量的根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐。
48、改变动物脂肪分布与含量的方法，包含对其给以有效量的根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐。
49、根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐在药物生产中的用途，所述药物用于抑制和/或防止肿瘤生长。
50、治疗和/或预防原发性和继发性转移瘤的方法，包含给以根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐。
51、根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐在药物生产中的用途，所述药物用于预防和/或治疗增生性皮肤障碍。
52、根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐在药物生产中的用途，所述药物用于抑制角化细胞增殖和/或诱导其分化。
53、根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐在药物生产中的用途，所述药物用于预防和/或治疗炎性障碍。
54、增强哺乳动物细胞或组织白介素-10(IL-10)内源性产生的方法，包含给以根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐。
55、抑制哺乳动物细胞或组织白介素-2(IL-2)内源性产生的方法，包含给以根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐。
56、根据权利要求1至38任意一项的化合物或其药学上可接受的盐在药物生产中的用途，所述药物用于抑制受刺激的外周单核细胞(PBMC)增殖。
全文摘要
本发明提供一种脂质化合物，包含至少一个非极性部分和极性部分，其中每个或者至少一个非极性部分为式X－Y－Z－，其中X是烃基链，Y选自S、Se、SO2、SO和O中的至少一个，Z是可选的烃基，其中该极性部分为式－[C(O)] m PHG，其中PHG是极性首基，m是非极性部分的数量。
文档编号A61K31/21GK1675229SQ0381743
公开日2005年9月28日 申请日期2003年6月16日 优先权日2002年6月20日
发明者A·D·米勒, M·R·乔根森, R·博格, J·斯科夫 申请人:Ic Vec有限公司, 蒂亚梅迪卡有限公司