专利名称：醋酸亮丙瑞林固体脂质纳米粒口服制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于多肽类化合物的固体脂质纳米粒口服制剂及其制备方法，尤其是促性腺激素释放激素类似物醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒制剂及其制备方法。
背景技术：
人工合成促性腺激素释放激素(GnRH)类似物是GnRH拮抗剂，属于多肽类药物，其吸收特征是半衰期短、血浆清除率高、分子量大、透膜能力差、易受体内酶和细菌以及体液的破坏、非注射给药生物利用度低，一般都仅为百分之几，如狗口服醋酸亮丙瑞林的生物利用度低于3％。醋酸亮丙瑞林是GnRH类似物，短时期作用能刺激性腺激素分泌，从而提高血中睾酮和二氢睾酮的浓度。用药一周后，受体数目减少，促性腺激素分泌减少。用药2-4周后，睾酮和二氢睾酮的浓度降至去势水平。本品适用于不能或不愿作睾丸切除的前列腺患者，对乳癌也有疗效。醋酸亮丙瑞林口服给予大鼠和人后，由于易遭受小肠中胰凝乳蛋白酶等酶的降解以及对生物膜的通透性差等原因，血药浓度大多低于0.2ng/ml，口服无效。
目前，研究其口服给药剂型仍较少。虽然在制备醋酸亮丙瑞林的口服制剂时，应用蛋白酶抑制剂、胆盐、络合剂等可以抑制酶的活性，使用渗透促进剂能够提高药物的吸收。但是蛋白酶抑制剂的长期应用可能会引起胃肠道正常生理尤其是消化功能的紊乱，小分子渗透促进剂的促吸作用与小肠生化和组织损伤有很大关系。
固体脂质纳米粒与以磷脂为主要成分的脂质体双分子层结构不同，固体脂质纳米粒是由多种类脂材料如脂肪酸、脂肪醇、脂肪酸酯及磷脂等形成的固体颗粒，主要适合于难溶性药物的包裹，用作静脉注射或局部给药。固体脂质纳米粒用作水溶性多肽和蛋白质载体的研究较少，而且包封率低。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于研究固体脂质纳米粒作为水溶性多肽类大分子药物的口服给药载体。针对水溶性多肽醋酸亮丙瑞林的化学结构与理化性质，筛选合适的类脂材料与溶剂系统，研究类脂材料之间的协同与配比，进一步增加水溶性药物的包封率。最终使药物能够持续缓慢释放，提高血药浓度、延长在血液中循环时间，显著提高了醋酸亮丙瑞林的口服吸收生物利用度。本发明要解决的技术问题还涉及水溶性多肽醋酸亮丙瑞林固体脂质纳米粒的制备方法，包括其的冻干制剂。
为解决上述问题，本发明提供如下技术方案。
一种醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒，按重量计包括醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸1-100份、磷脂2-100份，含0.1％-5％亲水性表面活性剂的pH3-6.9的磷酸盐缓冲液适量。
当普朗流尼、吐温80、苄泽、卖泽等亲水性表面活性剂溶解于pH值范围在3-6.9的缓冲液中，保证一分子醋酸亮丙瑞林携带一个或两个单位正电荷，有利于药物包封。
本发明可以使用常用的磷脂，包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂或合成磷脂。磷脂中磷脂酰胆碱的含量可在76％-100％间，优选纯度＞93％。
所述固体脂质纳米粒可以是醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸10-80份、磷脂10-80份、含1％-3％亲水性表面活性剂的pH4.5-6.0磷酸盐缓冲液适量，丙酮和/或氯仿适量。
所述固体脂质纳米粒较好的配比是醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸20-60份、磷脂20-70份；脂肪酸选自硬脂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、花生酸中的一种或几种；磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、合成磷脂中的一种或几种；亲水性表面活性剂选自普朗流尼、吐温80、苄泽、卖泽中的一种或几种；丙酮和氯仿比例为1-9∶9-1。
所述固体脂质纳米粒更为理想的配比是醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸25-50份、磷脂30-60份；磷酸盐缓冲液pH5.0-5.6；丙酮和氯仿比例为8-5∶2-3；脂肪酸选自硬脂酸；磷脂选自大豆卵磷脂、棕榈酰磷脂酰胆碱；亲水性表面活性剂选自普朗流尼和/或吐温80。
本发明固体脂质纳米粒最佳配比是醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸20-40份、磷脂20-40份。
前述固体脂质纳米粒的制备方法包括如下步骤将按重量计醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸1-100份、磷脂2-100份，加热至70-85℃形成油相；将1％-5％亲水性表面活性剂溶解在70-85℃的pH3-6.9的磷酸盐缓冲液中形成水相，在搅拌下将油相加至水相中形成初乳后，可采用高压乳匀或乳化沉淀的方法，冷却后形成醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒，冷冻干燥或在3-5℃条件下保存。所述制备方法中，可以将溶解脂肪酸1-100份和磷脂2-100份的丙酮和/或氯仿溶液，加入含醋酸亮丙瑞林1份的水液，形成初乳，再将初乳加至含有1％-5％表面活性剂的pH3-6.9磷酸盐缓冲液中，3-5℃条件下乳化，得含醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒，冷冻干燥或3-5℃条件下保存。
前述固体脂质纳米粒的冻干粉，基本上由醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒与冻干剂右旋糖酐、单糖、双糖和/或多糖组成；冻干剂的量按脂肪酸和磷脂的总重量计，1份总重量加入0.05-4.0份的冻干剂；较好的重量配比是，1份总重量加入0.2-1.0份的甘露醇和/或葡萄糖。
所述固体脂质纳米粒的冻干粉的制备方法，取醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒与冻干剂右旋糖酐、单糖、双糖和/或多糖；冻干剂的量按脂肪酸和磷脂的总重量计，1份总重量加入0.05-4.0份的冻干剂，溶解后，冷冻干燥。
一种醋酸亮丙瑞林固体脂质纳米粒的制备方法，经下述步骤制备，将亮丙瑞林1份、硬脂酸1-100份及磷脂5-100份，加热至80℃形成油相，将水溶性表面活性剂(1％-5％)溶解在80℃缓冲液(pH3-6.9)中，在搅拌下将油相加至水相中，形成初乳。然后以高压乳匀等方法进行分散。冷却后形成硬脂酸纳米粒。冷冻干燥或在4℃条件下保存。较好的亮丙瑞林固体脂质纳米粒的制备方法是，将亮丙瑞林1份、硬脂酸10-30份及磷脂(5-40份)加热至80℃形成油相，将水溶性表面活性剂(1％-2％)溶解在80℃磷酸盐缓冲液(pH4-6.9)中，在搅拌下将油相加至水相中，形成初乳。然后以高压乳匀等方法进行分散。冷却后形成硬脂酸纳米粒。冷冻干燥或在4℃条件下保存。
由于醋酸亮丙瑞林是碱性药物，本发明选择脂肪酸，而非脂肪醇或脂肪酸酯(例如山嵛酸甘油酯)，作为纳米粒的骨架材料，通过醋酸亮丙瑞林与脂肪酸形成离子对来提高其包封率。本发明采用的磷酸盐缓冲液的pH值低于7，保证醋酸亮丙瑞林携带一个或两个单位正电荷，有利于形成离子对。在处方中加入大量磷脂，改善纳米粒强烈疏水性，进一步增加水溶性药物的包封。通过纳米粒的空间位阻来减少药物的酶解，利用纳米粒的亲脂性和小粒径通过淋巴循环增加药物的吸收。纳米粒中的药物持续缓慢释放，提高血药浓度、延长在血液中循环时间，从而提高了醋酸亮丙瑞林的口服吸收生物利用度。
所述醋酸亮丙瑞林固体脂质纳米粒的冻干粉，其特征在于包封率为70％-90％，因为本发明的优点就是包封率提高，粒径为20nm-1μm。纳米粒中的药物持续缓慢释放，提高血药浓度、延长在血液中循环时间，从而提高醋酸亮丙瑞林口服吸收生物利用度。
本发明醋酸亮丙瑞林固体脂质纳米粒给大鼠灌胃给药后，与皮下注射亮丙瑞林相比，相对生物利用度为12.47±1.75％，显示出较平稳和缓释的血药浓度经时变化，平均驻留时间为2.71±0.05h。如果灌胃给予亮丙瑞林溶液剂，则相对生物利用度只有0.85±0.59％。
本发明还解决了所述醋酸亮丙瑞林固体脂质纳米粒及其冻干粉的可工业化生产的制备方法。
图1、亮丙瑞林固体脂质纳米粒以及亮丙瑞林溶液灌胃后与普通注射剂大鼠皮下注射的经时曲线(n＝3)具体实施方式
实施例1将醋酸亮丙瑞林10mg，硬脂酸100mg及大豆卵磷脂100mg加热至80℃形成油相，将水溶性表面活性剂Tween 80(1％)溶解在80℃等渗磷酸盐缓冲液(pH5.0)中形成水相，在搅拌下将油相加至水相中，形成初乳。然后以高压乳匀等方法进行分散。冷却后形成硬脂酸纳米粒。加入甘露醇(3％)，溶解后冷冻干燥。将冷冻干燥的固体脂质纳米粒在40℃贮存3个月后，醋酸亮丙瑞林含量为95.5％，且加入水重组得到的纳米粒包封率为76％，粒径为250nm。
实施例2将醋酸亮丙瑞林5mg溶解于水溶液(0.5ml)中，棕榈酸100mg及蛋黄卵磷脂150mg溶于丙酮与氯仿(9∶1)的混合溶剂10ml，将醋酸亮丙瑞林水溶液加入含硬脂酸、磷脂的丙酮与氯仿混合溶剂中形成初乳，再滴加至含普罗流尼188(2％)的磷酸盐缓冲液(pH5.6，40ml)中，4℃条件下乳化0.5h，继续搅拌4h即得。加入葡萄糖(6％)，溶解后冷冻干燥。将冷冻干燥的固体脂质纳米粒在室温贮存1年后，醋酸亮丙瑞林含量为99.5％，且加入水重组得到的纳米粒包封率为82％，粒径为160nm。
实施例3将醋酸亮丙瑞林5mg，硬脂酸100mg及棕榈酰磷脂酰胆碱50mg加热至80℃形成油相，将水溶性表面活性剂卖泽(1.6％)溶解在80℃磷酸盐缓冲液(pH6.0)中形成水相，在搅拌下将油相加至水相中，形成初乳。然后以高压乳匀等方法进行分散。冷却后形成硬脂酸纳米粒混悬液。4℃保存半年，纳米粒包封率为73％，粒径为340nm。
实施例4醋酸亮丙瑞林固体脂质纳米粒大鼠体内药代动力学性质的考查a.给药与取血方案15只大鼠禁食过夜，分为3组，每组5只，一组皮下注射醋酸亮丙瑞林溶液(113μg/kg)作为阳性对照；一组灌胃给予醋酸亮丙瑞林溶液(1.5mg/kg)作为阴性对照；一组灌胃给予硬脂酸纳米粒(1.5mg/kg)。于不同时间0，0.5，1，1.5，2，4，6，8，12，24小时眼底静脉丛取血0.5ml，离心取血清，应用放射免疫法测血清浓度。
b.经时曲线，参见图1。
本发明醋酸亮丙瑞林固体脂质纳米粒给大鼠灌胃给药后，在0.5小时内到达血药浓度峰值4.32±0.66ng/ml，1hr后血药浓度降至2.77±1.11ng/ml，但维持该血药浓度至4hr后才下降，显示出较平稳和缓释的血药浓度经时变化，平均驻留时间为2.71±0.05h。与皮下注射醋酸亮丙瑞林相比，相对生物利用度为12.47±1.75％。而灌胃给予醋酸亮丙瑞林溶液剂，相对生物利用度只有0.85±0.59％。
权利要求
1.一种醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒，按重量计包括醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸1-100份、磷脂2-100份，含0.1％-5％亲水性表面活性剂的pH3-6.9的磷酸盐缓冲液适量。
2.权利要求1所述固体脂质纳米粒，其特征在于醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸10-80份、磷脂10-80份、含1％-3％亲水性表面活性剂的pH4.5-6.0磷酸盐缓冲液适量，丙酮和/或氯仿适量。
3.权利要求2所述固体脂质纳米粒，其特征在于醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸20-60份、磷脂20-70份；脂肪酸选自硬脂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、花生酸中的一种或几种；磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、合成磷脂中的一种或几种；亲水性表面活性剂选自普朗流尼、吐温80、苄泽、卖泽中的一种或几种；丙酮和氯仿比例为1-9∶9-1。
4.权利要求3所述固体脂质纳米粒，其特征在于醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸25-50份、磷脂30-60份；磷酸盐缓冲液pH5.0-5.6；丙酮和氯仿比例为8-5∶2-3；脂肪酸选自硬脂酸；磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、棕榈酰磷脂酰胆碱；亲水性表面活性剂选自普朗流尼和/或吐温80和/或卖泽。
5.权利要求4所述固体脂质纳米粒，其特征在于醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸20-40份、磷脂20-40份。
6.权利要求1-5之一所述固体脂质纳米粒的制备方法，其特征在于包括如下步骤将按重量计醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸1-100份、磷脂2-100份，加热至70-85℃形成油相；将1％-5％亲水性表面活性剂溶解在70-85℃的pH3-6.9的磷酸盐缓冲液中形成水相，在搅拌下将油相加至水相中形成初乳后，高压乳匀或乳化沉淀，冷却后形成醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒，冷冻干燥或在3-5℃条件下保存。
7.权利要求1-5之一所述固体脂质纳米粒的制备方法，其特征在于将溶解脂肪酸1-100份和磷脂2-100份的丙酮和/或氯仿溶液，加入含醋酸亮丙瑞林1份的水液，形成初乳，再将初乳加至含有1％-5％表面活性剂的pH3-6.9磷酸盐缓冲液中，3-5℃条件下乳化，得含醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒，冷冻干燥或3-5℃条件下保存。
8.权利要求1-5之一所述固体脂质纳米粒的冻干粉，其特征在于基本由醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒与冻干剂右旋糖酐、单糖、双糖和/或多糖组成；冻干剂的量按脂肪酸和磷脂的总重量计，1份总重量加入0.05-4.0份的冻干剂。
9.权利要求8所述醋酸亮丙瑞林固体脂质纳米粒的冻干粉，其特征在于冻干剂的量按脂肪酸和磷脂的总重量计，1份总重量加入0.2-1.0份的甘露醇和/或葡萄糖。
10.权利要求9所述固体脂质纳米粒的冻干粉的制备方法，取醋酸亮丙瑞林的固体脂质纳米粒与冻干剂右旋糖酐、单糖、双糖和/或多糖；冻干剂的量按脂肪酸和磷脂的总重量计，1份总重量加入0.05-4.0份的冻干剂，溶解后，冷冻干燥。
全文摘要
一种醋酸亮丙瑞林固体脂质纳米粒口服制剂及其制备方法，按重量计包括醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸1－100份、磷脂2－100份，含0.1％－5％亲水性表面活性剂的pH3－6.9的磷酸盐缓冲液适量；按1份脂肪酸和磷脂总重量加入0.01－2.0份冻干保护剂的比例，制成冻干粉，包封率为70％～90％，粒径为20nm～1μm；纳米粒中的药物持续缓慢释放，血药浓度提高，在血液中循环时间延长，从而提高醋酸亮丙瑞林口服吸收生物利用度。
文档编号A61P11/08GK1555886SQ20041001384
公开日2004年12月22日 申请日期2004年1月8日 优先权日2004年1月8日
发明者平其能, 郭健新, 吴正红, 宋贇梅 申请人:中国药科大学