专利名称：油菜花粉中抗前列腺癌有效成分的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种在油菜花粉中提取抗前列腺癌有效成分的方法。
背景技术：
油菜花粉是一种含有丰富营养素和众多生理活性成分的天然产物。80年代以来，油菜花粉营养药理学作用的研究和作为保健品与药品的开发应用得到迅速发展。许多临床实验证明，油菜花粉及其粗提物对多种前列腺疾病具有良好的治疗效果，但所需剂量很大。主要原因在于花粉及其粗提物中有效作用成分含量很低，少量服用效果不明显。为了解决这一问题，许多学者进行了研究，并基本解决了花粉的破壁问题。但是对于破壁后有效成分的提取，特别是防治前列腺癌的有效成分的提取未有相关专利和报道。
发明内容
针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种工艺简单、效果好的油菜花粉中抗前列腺癌有效成分的提取方法。
本发明为达到以上目的，是通过这样的技术方案来实现的提供一种油菜花粉中抗前列腺癌有效成分的提取方法，此方法的提取步骤依次如下1)浸提在油菜花粉破壁液中加入8-12倍体积的4-6％蔗糖溶液，浸提4-6小时，真空抽滤，分别得液体A和滤渣；在所述滤渣中加入5-8倍体积的5％蔗糖溶液，浸提4-6小时，真空抽滤，得液体B和残渣；2)层析分离合并所述液体A和液体B，用浓氨水调节pH至5.8-6.0；上大孔树脂柱，接着用去离子水洗脱，至无色，再用45％碱性乙醇洗脱、收集。
将层析分离步骤后的产物进行减压浓缩、喷干。
45％碱性乙醇是用浓氨水调浓度为45％乙醇至PH为9.0-10.0。
用本发明的方法所提取的有效成分，抗前列腺癌效果非常好，具体实验方式及数据如下。培养前列腺癌细胞PC-3，用MTT法测定所得油菜花粉有效成分对前列腺癌生长的抑制作用取对数生长期PC-3细胞，接种于96孔板，每孔190μl，细胞密度约为105个/孔，每孔设只加培养液不加细胞的平行对照，培养48小时后，分别留6个加入细胞和加入纯培养液的培养孔作阳性和阴性对照，其余每孔加入不同浓度所得有效成分10μl，对照孔加入10μl培养液。每种药物每一浓度设14个重复。加入药物后继续培养24小时，取出后每孔加入20μl MTT，放入CO2培养箱继续培养4小时。取出96孔板，2000rpm离心10分钟，尽量去掉孔内液体，注意不要将里面的紫色结晶倒出，每孔加入150μl DMSO，迅速用水平振荡器摇动，使孔内紫色结晶物充分溶解，但时间不得超过30分钟，然后用酶标仪读取490nm处的吸光度值。每孔的吸光度值减去并列平行孔的吸光度值，得到绝对吸光度值，阳性对照减去阴性对照吸光度值，为正常细胞的绝对吸光度值，将正常细胞存活率设为100％，各孔绝对吸光度值与正常细胞绝对吸光度值之比为各自的细胞存活率，得IC50为1.5mg/ml。
且本发明的提取方法，所需要的设备简单，成本低，易实现产业化；生产工艺简捷、易操作；生产周期短，得率高。
具体实施例方式实施例1一种油菜花粉中抗前列腺癌有效成分的提取方法，此方法的提取步骤依次如下1)、浸提在油菜花粉破壁液中加入8倍体积的5％蔗糖溶液，浸提4小时，真空抽滤，分别得液体A和滤渣；在所述滤渣中加入5倍体积的5％蔗糖溶液，浸提4小时，真空抽滤，得液体B和残渣；2)、层析分离合并所述液体A和液体B，用浓氨水调节pH至5.8，得混合液体；将上述混合液体上大孔树脂柱，使混合液体中的有效成分吸附于大孔树脂，接着用去离子水洗脱，至无色；再用45％碱性乙醇进行洗脱、收集。此45％碱性乙醇是用浓氨水调浓度为45％乙醇至PH为9.8。
3)、将层析分离步骤后的产物进行减压浓缩、喷干。
用此种方法提取的有效成分，其抗前列腺癌效果为癌细胞IC50为1.2mg/ml。
实施例2一种油菜花粉中抗前列腺癌有效成分的提取方法，此方法的提取步骤依次如下1)、浸提在油菜花粉破壁液中加入10倍体积的5％蔗糖溶液，浸提6小时，真空抽滤，分别得液体A和滤渣；在所述滤渣中加入5-8倍体积的5％蔗糖溶液，浸提6小时，真空抽滤，得液体B和残渣；2)、层析分离合并所述液体A和液体B，用浓氨水调节pH至6.0，得混合液体；将上述混合液体上大孔树脂柱，使混合液体中的有效成分吸附于大孔树脂，接着用去离子水洗脱，至无色；再用45％碱性乙醇进行洗脱、收集。此45％碱性乙醇是指用浓氨水调浓度为45％乙醇至PH为10.0所得。
3)、将层析分离步骤后的产物进行减压浓缩、喷干。
用此种方法提取的有效成分，其抗前列腺癌效果为癌细胞IC50为1.5mg/ml。
实施例3一种油菜花粉中抗前列腺癌有效成分的提取方法，此方法的提取步骤依次如下1)、浸提在油菜花粉破壁液中加入12倍体积的5％蔗糖溶液，浸提5小时，真空抽滤，分别得液体A和滤渣；在所述滤渣中加入5倍体积的5％蔗糖溶液，浸提5小时，真空抽滤，得液体B和残渣；2)、层析分离合并所述液体A和液体B，用浓氨水调节pH至5.9，得混合液体；将上述混合液体上大孔树脂柱，使混合液体中的有效成分吸附于大孔树脂，接着用去离子水洗脱，至无色；再用45％碱性乙醇进行洗脱、收集。此45％碱性乙醇是指用浓氨水调浓度为45％乙醇至PH为9.0所得。
3)、将层析分离步骤后的产物进行减压浓缩、喷干。
用此种方法提取的有效成分，其抗前列腺癌效果为癌细胞IC50为1.1mg/ml。
以上所述仅为本发明的若干个具体实施方式
，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，还可以作出许多变型和改进，例如改变蔗糖溶液的浓度，所有的变型或改进均应视为本发明的保护范围。
权利要求
1.一种油菜花粉中抗前列腺癌有效成分的提取方法，其特征在于它的提取步骤依次如下1)浸提在油菜花粉破壁液中加入8-12倍体积的4-6％蔗糖溶液，浸提4-6小时，真空抽滤，分别得液体A和滤渣；在所述滤渣中加入5-8倍体积的5％蔗糖溶液，浸提4-6小时，真空抽滤，得液体B和残渣；2)层析分离合并所述液体A和液体B，用浓氨水调节pH至5.8-6.0；上大孔树脂柱，接着用去离子水洗脱，至无色，再用45％碱性乙醇洗脱、收集。
2.根据权利要求1所述的油菜花粉中抗前列腺癌有效成分的提取方法，其特征在于它的提取步骤依次如下1)浸提在油菜花粉破壁液中加入10倍体积的5％蔗糖溶液，浸提5小时，真空抽滤，分别得液体A和滤渣；在所述滤渣中加入5倍体积的5％蔗糖溶液，浸提5小时，真空抽滤，得液体B和残渣；2)层析分离合并所述液体A和液体B，用浓氨水调pH至6.0；上大孔树脂柱，接着用去离子水洗脱，至无色，再用45％碱性乙醇洗脱、收集。
3.根据权利要求1或2所述的油菜花粉中抗前列腺癌有效成分的提取方法，其特征在于将层析分离步骤后的产物进行减压浓缩、喷干。
4.根据权利要求1或2所述的油菜花粉中抗前列腺癌有效成分的提取方法，其特征在于所述45％碱性乙醇是用浓氨水调浓度为45％乙醇至PH为9.0-10.0。
全文摘要
本发明公开了油菜花粉中提取抗前列腺癌有效成分的方法，此方法的提取步骤依次如下1)浸提在油菜花粉破壁液中加入8－12倍体积的4－6％蔗糖溶液，浸提4－6小时，真空抽滤，分别得液体A和滤渣；在所述滤渣中加入5－8倍体积的5％蔗糖溶液，浸提4－6小时，真空抽滤，得液体B和残渣；2)层析分离合并所述液体A和液体B，用浓氨水调节pH至5.8－6.0；上大孔树脂柱，接着用去离子水洗脱，至无色，再用45％碱性乙醇洗脱、收集。用本发明的方法所提取的有效成分，抗前列腺癌效果非常好；且本方法所需设备简单、成本低、易实现产业化，生产工艺简捷、易操作、生产周期短、得率高。
文档编号A61P13/00GK1557420SQ20041001636
公开日2004年12月29日 申请日期2004年2月13日 优先权日2004年2月13日
发明者沈生荣, 于海宁, 白骅, 许重阳 申请人:浙江大学