专利名称：一种神经生长因子口服胶囊的制备方法
技术领域：
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种神经生长因子口服胶囊的制备方法。
背景技术：
神经生长因子(NGF)的研究已有40年的历史，其分子结构、理化性质、主要的生物学功能、NGF受体的结构和性质等均先后被阐明。NGF是神经系统最主要的生物活性物质之一，它影响中枢神经系统某些神经元的存活和分化，在神经元受到损伤或自然退化时，它能提供有效保护，减轻伤害程度，并促进相应神经纤维的再生及功能恢复，因NGF具有这些特殊的生物学功能使其成为治疗中风后遗症、糖尿病性神经炎、老年性痴呆、外伤及中毒性神经炎非常有效的药物。
目前，国内外已经成功研制和开发了NGF针剂，并大量应用于临床，收到可观的经济和社会效益。在本发明以前的现有技术中，“一种制备神经生长因子的方法”(ZL专利号98112906.4)，提供了NGF提取制备方法，其注射液在临床上已广泛用于治疗各种神经性疾病，尤其在治疗外伤性神经损伤和中毒性神经炎方面疗效明显，但是由于针剂在保存、运输和使用等方面有诸多不便以及社会需求的日益增多，而且目前市场上仅有注射液针剂的单一剂型，就越发显示出开发研制口服新型制剂的必要性、迫切性及可行性。
发明内容
针对上述现有技术状况，本发明的目的在于提供一种神经生长因子口服胶囊的制备方法，以期为NGF的临床应用开辟新的给药途径，满足不同患者的需求，为患者提供更多的选择。
神经生长因子(NGF)是一种具有生物活性的小分子物质，它的治疗作用完全依赖其生物活性，即活性决定效果。注射液到口服胶囊的转换，至关重要的是选择什么样的辅料。医用辅料种类繁多，利弊各有千秋。就NGF疗效而言，所加辅料必须保持其活性不变或使其活性增强，并且所加辅料既要保护药物分子免受消化道破坏，又必须使用安全，对人体无害，同时，所选的辅料应有廉价易得性。
根据上述原则，本发明在大量试验的基础上，确定了神经生长因子口服胶囊的制备方法，以提取神经生长因子(NGF)，为口服胶囊的主药，生物活性在10～60BU/ml为符合要求；辅料有三种，辅料1可为十二烷基硫酸钠或丙二醇或聚乙二醇6000，辅料2可为酪蛋白或人血白蛋白，辅料3可为微晶纤维素或硫酸钙或淀粉；从实验结果来看，选用的辅料是成功可行的，和NGF溶液相比，在同等条件下，NGF胶囊其促神经节生长的活性得到明显的增强。
本发明神经生长因子(NGF)口服胶囊的制备方法，所制备的神经生长因子由人胎盘或动物腺体组织中提取，包括匀浆、酸性解离、阳离子层析的分离纯化过程，其特征在于按照下述步骤进行步骤1将提取的神经生长因子(NGF)用鸡胚背根神经节培养法检测其活性，神经生长因子(NGF)的活性在10～60BU/ml为符合要求，作为主药；步骤2将主药NGF移入烧杯内，置磁力搅拌器上，在2～10℃条件下，加辅料(1)，连续搅拌10～16h；步骤3在上述搅拌物中再加辅料(2)，继续搅拌30～60min后再加辅料(3)，继续搅拌30～60min；步骤4混合搅拌好的主药及辅料置于-20℃～-70℃低温条件下72～48h后，冷冻干燥，得神经生长因子口服胶囊内容物；步骤5将上述神经生长因子口服胶囊内容物无菌条件下装入胶囊得神经生长因子口服胶囊制剂。
所述的步骤3与步骤4也可合并为如下过程在步骤2所述的搅拌物中再加辅料(2)，继续搅拌30～60min后，将混合搅拌好的主药及辅料置于-20℃～-70℃低温条件下72～48h，冷冻干燥，加辅料(3)，混合搅拌，得神经生长因子口服胶囊内容物；辅料(1)可为十二烷基硫酸钠或丙二醇或聚乙二醇6000；辅料(2)可为酪蛋白或人血白蛋白；辅料(3)可为微晶纤维素或硫酸钙或淀粉。辅料(1)和辅料(3)的质量体积浓度为10～50mg/ml；辅料(2)的质量体积浓度为1～10mg/ml。神经生长因子与辅料(1)、辅料(2)、辅料(3)的质量比例关系为1∶0.044即每1个生物活性单位BU所需辅料(1)、辅料(2)、辅料(3)的质量分别为0.044mg、0.0089mg、0.044mg。0.0089∶0.044，即每1个生物活性单位BU所需辅料(1)、辅料(2)、辅料(3)的质量分别为0.044mg、0.0089mg、0.044mg。
具体实施例方式
按本发明方法分别取神经生长因子、辅料(1)、辅料(2)、辅料(3)的活性单位范围、质量体积比浓度范围的上、中、下限进行实施。
实施例1①取测其活性在60BU/ml的神经生长因子(NGF)750ml，移入烧杯内，置磁力搅拌器上于5℃下；②在不断搅拌下缓慢加入质量体积浓度为50mg/ml的辅料1(十二烷基硫酸钠或丙二醇或聚乙二醇6000)40ml，连续搅拌12h；③加质量体积浓度为10mg/ml辅料2(酪蛋白、人血白蛋白)8ml，继续搅拌40min；④加质量体积浓度为50mg/ml辅料3(微晶纤维素、硫酸钙、淀粉)40ml，继续搅拌40min；⑤冷冻干燥，收冻干粉，依活性检测结果分装胶囊。同法制备空白胶囊，只是不加NGF。
实施例2①取测其活性在10BU/ml神经生长因子(NGF)4500ml，移入烧杯内，置磁力搅拌器上于10℃下；②在不断搅拌下缓慢加入质量体积浓度为10mg/ml的辅料1(十二烷基硫酸钠或丙二醇或聚乙二醇6000)200ml，连续搅拌16h，再加加质量体积浓度为1mg/ml辅料(2)400ml，继续搅拌60min后，将混合搅拌好的主药及辅料置于-50℃低温条件下50h，冷冻干燥，加质量体积浓度为10mg/ml的辅料(3)200ml，混合搅拌，得神经生长因子口服胶囊内容物。
实施例3①取测其活性在35BU/ml神经生长因子(NGF)128ml，移入烧杯内，置磁力搅拌器上于10℃下；②在不断搅拌下缓慢加入质量体积浓度为30mg/ml的辅料1(十二烷基硫酸钠或丙二醇或聚乙二醇6000)67ml，连续搅拌16h，再加加质量体积浓度为5mg/ml辅料(2)80ml，继续搅拌60min后，将混合搅拌好的主药及辅料置于-50℃低温条件下50h，冷冻干燥，加质量体积浓度为30mg/ml的辅料67ml，混合搅拌，得神经生长因子口服胶囊内容物。
将上述神经生长因子口服胶囊成品进行检定，结果为性状为无色或类白色的冻干疏松体；PH值为5.0～6.0；水分不超过9％；崩解时限不高于30分钟；微生物限度检查大肠杆菌、霉菌阴性，细菌合格；其它符合胶囊剂项下有关各项规定；生物活性检测及结果(1)准备样品用2ml培养液分别溶解神经生长因子口服胶囊以及空白对照胶囊，并将此溶解液和NGF溶液一起进行一定倍数的稀释，待用(2)检测活性采用鸡胚背根神经节培养法来检测样品的活性。取孵化7-10天的鸡胚背根神经节接种于涂布鼠胶原纤维的24孔培养板中，加入含不同浓度NGF或对照样品的培养液，在无血清条件下37℃培养24-48小时，在倒置显微镜下进行相差观察，确定NGF的活性，以突起生长最好的稀释度的倒数定为NGF活性单位。检测结果空白对照胶囊，无活性；神经生长因子口服胶囊，投入活性为1800(BU/粒)，实测活性是7200(BU/粒)；结论按本发明选择的三种辅料及使用浓度所制备的胶囊对神经生长因子促鸡胚背根神经节生长具有明显的增强作用。
本发明神经生长因子口服胶囊的制备方法，工艺稳定、成本低廉、原材料易得、胶囊使用安全、利于运输、便于携带、开辟了新的给药途径、为患者减少了麻烦、提供了方便。目前国内外尚无此同类剂型，预计有较好的市场应用前景。
权利要求
1.一种神经生长因子(NGF)口服胶囊的制备方法，所制备的神经生长因子由人胎盘或动物腺体组织中提取，包括匀浆、酸性解离、阳离子层析的分离纯化过程，其特征在于按照下述步骤进行步骤1将提取的神经生长因子(NGF)用鸡胚背根神经节培养法检测其活性，神经生长因子(NGF)的活性在10～60BU/ml为符合要求，作为主药；步骤2将主药NGF移入烧杯内，置磁力搅拌器上，在2～10℃条件下，加辅料(1)，连续搅拌10～16h；步骤3在上述搅拌物中再加辅料(2)，继续搅拌30～60min后再加辅料(3)，继续搅拌30～60min；步骤4混合搅拌好的主药及辅料置于-20℃～-70℃低温条件下72～48h后，冷冻干燥，得神经生长因子口服胶囊内容物；步骤5将上述神经生长因子口服胶囊内容物无菌条件下装入胶囊得神经生长因子口服胶囊制剂。
2.根据权利要求1所述的神经生长因子口服胶囊的制备方法，其特征在于所述的步骤3与步骤4也可合并为如下过程在步骤2所述的搅拌物中再加辅料(2)，继续搅拌30～60min后，将混合搅拌好的主药及辅料置于-20℃～-70℃低温条件下72～48h，冷冻干燥，加辅料(3)，混合搅拌，得神经生长因子口服胶囊内容物；
3.根据权利要求1或2所述的神经生长因子口服胶囊的制备方法，其特征在于辅料(1)可为十二烷基硫酸钠或丙二醇或聚乙二醇6000；辅料(2)可为酪蛋白或人血白蛋白；辅料(3)可为微晶纤维素或硫酸钙或淀粉。
4.根据权利要求1或2所述的神经生长因子口服胶囊制剂的制备方法，其特征在于辅料(1)和辅料(3)的质量体积比浓度为10～50mg/ml；辅料(2)的质量体积浓度为1～10mg/ml。
5.根据权利要求1或2所述的神经生长因子口服胶囊制剂的制备方法，其特征在于神经生长因子与辅料(1)、辅料(2)、辅料(3)的质量比例关系为1∶0.044∶0.0089∶0.044，即每1个生物活性单位BU所需辅料(1)、辅料(2)、辅料(3)的质量分别为0.044mg∶0.0089mg∶0.044mg。
全文摘要
本发明涉及一种神经生长因子口服胶囊的制备方法。本发明将其针剂制成胶囊制剂，方法特征是将神经生长因子(NGF)与辅料十二烷基硫酸钠、酪蛋白、微晶纤维素等经混合、搅拌、置低温、冷冻干燥工序后装药，由此制备的胶囊其生物学活性较NGF溶液提高4倍，胶囊使用安全、携带方便、无须低温保存，目前国内外尚无此同类剂型，预计市场前景看好。
文档编号A61K9/48GK1569222SQ20041002606
公开日2005年1月26日 申请日期2004年4月22日 优先权日2004年4月22日
发明者王国华, 刘新平, 药立波, 陈志阳, 谢先春, 秦云, 杨志福, 张英起, 颜真, 陈南春 申请人:中国人民解放军第四军医大学