麦冬拟神经生长因子活性组分和化合物及制备方法
【专利摘要】本发明提供一种从中药麦冬中提取的活性组分的制备方法、该组分中所含的活性皂苷化合物和其分离制备方法，从该麦冬活性组分中鉴定出4个活性化合物。本发明通过抗老年痴呆的体外筛选模型——大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞实验证实所述的麦冬活性组分及4个活性化合物具有显著的拟神经生长因子活性，即NGFmimics，可促使神经细胞长出突起。本发明开拓了麦冬活性组分及其所含的活性化合物的防治老年痴呆症的药物用途，为预防和治疗老年性痴呆等神经退行性疾病提供新的治疗药物。
【专利说明】麦冬拟神经生长因子活性组分和化合物及制备
【技术领域】
[0001]本发明属于医药、食品领域，具体涉及从中药材麦冬中分离提取和制备活性组分的方法，并涉及所含皂苷类化合物的结构及制备方法，以及该活性组分和活性化合物在防治老年性痴呆症等神经退行性疾病和神经营养保护药物、食品中的应用。
【背景技术】
[0002]老年痴呆症(Alzheimer’s disease,阿尔茨海默病)是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病，临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性减退，并有各种神经精神症状和行为障碍。目前，阿尔茨海默病仅次于心脏病、癌症、中风，已成为人类死亡的第四大病因。我国阿尔茨海默病的患者已超过500万，约占世界总病例数的1/4，随着人口老龄化的加快，患者数量会更为巨大，会严重影响社会的稳定与发展。因此，开发有效的预防和治疗老年性痴呆 等神经退行性疾病的药物已成为全世界迫切需要解决的医学问题。
[0003]针对老年性痴呆的治疗药物种类，主要有胆碱能药，例如作为乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase, AChE)抑制剂上市的药物有他克林(tacrine)、酒石酸卡巴拉汀(rivastigmine)、石衫碱甲(huperzine A)、多奈哌齐(donepezil)等；β、Y 分泌酶抑制药；脑代谢调节剂，如长春胺、尼莫地平、脑益嗪；影响自由基代谢的药物，如维生素C结合维生素E等。但这些治疗药物只能延缓AD病程的进展，且随病情发展药物疗效逐渐降低，有副作用，所以寻找针对AD病因的治疗药物和方法成为医药界的热点和难点。
[0004]研究表明，神经营养因子对神经发育和成年神经系统的疾病过程都有重要的影响。其中神经生长因子(nerve growth factor, NGF)在神经退行性疾病动物模型中发现能阻止或减少神经元的退变。作为人类发现的第一个最重要的神经营养因子，NGF对神经细胞的生长、发育、分化和功能保持等方面具有重要调控作用。进一步发现神经营养因子能阻止或减少神经萎缩、神经变性，促进外伤后的神经修复。但是NGF是含有100多个氨基酸的蛋白质，较大的分子量和较强的极性使之不能通过血脑屏障，限制了它在临床上的应用。因此，寻找具有拟NGF活性并且能通过血脑屏障的小分子化合物自然成为研究热点。拟NGF活性的小分子化合物应该具有神经营养和神经保护功能。
[0005]中草药是中药学的物质基础，为天然活性有机化合物提供了巨大的资源。我国几千年的中医药发展历史，分布有宝贵的道地药材。利用巨大的中药材资源来进行新的成分和新的活性的研究是十分重要和有意义的。一些中药对老年性痴呆症有显著疗效，其中最著名的是从蛇足石杉中提取的生物碱——石杉碱钾(huperzine A)。作为中国科学院药物研究所开发的具有自主知识产权的创新药物，它不仅是高效高选择性的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制药，而且还能减少谷氨酸诱发的神经细胞死亡；具有明显的保护神经细胞对抗β淀粉样多肽(Αβ )产生的氧化应激反应；能够对抗过氧化氢、蛋白激酶C抑制剂等诱导神经细胞凋亡作用。
[0006]麦冬又名沿阶草、书带草、麦门冬，为百合科沿阶草属多年生常绿草本植物。须根较粗壮，根的顶端或中部常膨大成为纺锤状肉质小块。作为传统中药，麦冬能提高免疫功能；对多种细菌有抑制作用；能增强垂体肾上腺皮质系统功能，提高机体适应能力；有抗心律失常和扩张外周血管的作用；能提高耐缺氧能力；有降血糖作用。
[0007]用于阴虚肺燥，咳嗽痰粘；热伤胃阴或胃阴虚，咽干口渴，大便干结；心阴虚或心经有热，心烦不眠，舌红少津。
[0008]麦冬原产慈溪天元镇，后逐渐引种至坎墩。主要分布在慈溪西部和北部平原以及余姚市东部和北部平原。麦冬性喜湿润。慈溪、余姚一带，受海洋性气候影响，暖和湿润，光照资源丰富，加上土地肥沃含有沙质，是麦冬良好的生活环境，因而产量高。九十年代的年产量稳定在200吨左右，部分供出口。
【发明内容】
[0009]本发明的目的是提供一种麦冬中活性组分的制备方法。本发明提出的制备方法，主要通过以下步骤实现:
(I)粉碎和浸提:
中菊麦冬 Ophiopogon japonicus (Thunb.) Ker-Gawl 经粉碎后，用 50.0 L 工业级甲醇室温下浸提4飞天，抽滤浓缩，得甲醇浸提物粗样，再用水和乙酸乙酯溶解粗样，均转移至分液漏斗进行溶剂分配，上层酯层和下层水层分别浓缩后，得到乙酸乙酯层粗样和水层粗样。
[0010](2)分离和纯化:
将水层粗样先经十八烷基键合硅胶色谱柱(ODS)开口柱分离，溶剂体系按体积比为甲醇:水= 50:50，60:40, 70:30, 80:20, 100:0，根据TLC结果将相同馏分合并，得到6个部分A1-A6。随后，将A2部分(14.2 g)(洗脱系统为甲醇:水=50:50)再次用硅胶柱层析分离(硅胶200-300目，溶剂体系按体积比为甲醇:氯仿=20:80，50:50, 100:0),根据TLC结果将相同馏分合并，得到4个部分B1-B4，其中B2部分(洗脱系统为甲醇:氯仿=20:80)质量为1.1 g。将B2部分再次经硅胶柱层析分离(溶剂体系按体积比为甲醇:氯仿=10:90，12:88，14:86，16:84，18:82，20:80，30:70，50:50，100:0)，根据 TLC结果将相同馏分合并，得到8个馏分C1-C8。由此得到C7 (洗脱系统为甲醇:氯仿=30:70)为麦冬中含皂苷的活性组分。
[0011]本发明另一个目的是分离鉴定了所述麦冬中活性组分所含的四种皂苷类化合物并提供其制备方法，其中化合物(I)为25⑶-ruscogenin \-0-β -d-xylopyranosyl- (I — 2) -[/? -d-xylopyranosyl- (I — 3) ] - β -d-fucopyranoside ;化合物(2)为neoruscogenin \-0-a -1-rhamnopyranosyl-(I — 3)-σ -1-rhamnopyranosyl-(I — 2)-β -d-fucopyranoside ;化合物(3)为 25 (S) -ruscogenin \-0- a -1-rhamnopyranosyl-(I—2) -[/? -d-xylopyranosyl- (I — 3) ] -4-0-acetyl-/? -d-fucopyranoside ;化合物(4)为25 (51) -ruscogenin \-0 -a -1- rhamnopyranosyl-(I 2)-[β -d-xylopyranosyl-(I 3)]-β -d-fucopyranoside.其中化合物1,2, 3为新化合物。其结构式如下:I
【权利要求】
1.一种麦冬中活性组分的制备方法，其特征在于: (1)粉碎和浸提: 中药麦冬经粉碎后，用工业级甲醇室温下浸提4飞天，抽滤浓缩，得甲醇浸提物粗样，再用水和乙酸乙酯溶解粗样，均转移至分液漏斗进行溶剂分配，上层酯层和下层水层分别浓缩后，得到乙酸乙酯层粗样及水层粗样； (2)分离和纯化: 将水层粗样先经十八烷基键合硅胶色谱柱开口柱分离，溶剂体系按体积比为甲醇:水=50:50, 60:40, 70:30, 80:20, 100: 0，根据TLC结果将相同馏分合并，得到6个部分A1-A6，随后，将由甲醇:水=50:50洗脱而来的A2部分再次用硅胶柱层析分离，所用硅胶200-300目，溶剂体系按体积比为甲醇:氯仿=20:80, 50:50, 100:0,合并相同馏分，得到4个部分B1-B4，将由甲醇:氯仿=20:80洗脱而来的B2部分再次经硅胶柱层析分离，溶剂体系按体积比为甲醇:氯仿=10:90，12:88, 14:86, 16:84, 18:82, 20:80, 30:70,50:50, 100:0,根据TLC结果将相同馏分合并，得到8个馏分C1-C8，其中由甲醇:氯仿=30:70洗脱得到的C7为麦冬中含皂苷的活性组分。
2.根据权利要求1所述的一种麦冬中活性组分的制备方法，其特征在于，从获得的活性组分中再制备获得化合物1-化合物4，通过以下步骤实现: (1)粉碎和浸提: 中药麦冬经粉碎后，用工业级甲醇室温下浸提4飞天，抽滤浓缩，得甲醇浸提物粗样，再用水和乙酸乙酯溶解粗样，均转移至分液漏斗进行溶剂分配，上层酯层和下层水层分别浓缩后，得到乙酸乙酯层粗样及水层粗样； (2)分离和纯化: 将水层粗样先经十八烷基键合硅胶色谱柱开口柱分离，溶剂体系按体积比为甲醇:水=50:50, 60:40, 70:30, 80:20, 100: 0，根据TLC结果将相同馏分合并，得到6个部分A1-A6，随后，将由甲醇:水=50:50洗脱而来的A2部分再次用硅胶柱层析分离，所用硅胶200-300目，溶剂体系按体积比为甲醇:氯仿=20:80, 50:50, 100:0,合并相同馏分，得到4个部分B1-B4，将由甲醇:氯仿=20:80洗脱而来的B2部分再次经硅胶柱层析分离，溶剂体系按体积比为甲醇:氯仿=10:90，12:88, 14:86, 16:84, 18:82, 20:80, 30:70,50:50, 100:0,根据TLC结果将相同馏分合并，得到8个馏分C1-C8，其中由甲醇:氯仿=30:70洗脱得到的C7为麦冬中含皂苷的活性组分； (3)获得化合物1-4: 按洗脱系统为甲醇:氯仿=30:70洗脱出来的馏分C7 107.0 mg用高效液相色谱纯化，色谱条件为:色谱柱 Develosil 0DS-UG-5 Φ 20X250 mm, Nomura Chemical,流速 3mL/min，检测波长210 nm，流动相为甲醇:水=80:20，在保留时间为33分钟，36分钟，55分钟，38分钟分别得到化合物1-4 ； 所述化合物的结构式如下:
3.根据权利要求1所述的方法获得的麦冬中活性组分在制备防治老年痴呆症药物中的应用。
4.根据权利要2所述方法获得的化合物1-4在制备防治老年痴呆症药物中的应用。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述麦冬中活性组分或化合物1-4在制备防治阿尔茨海默症药物中的应用。
6.根据权利要求3-5任一所述的应用，其特征在于，所述药物的给药途径为肠道和非肠道。
7.根据权利要求3-5任一所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为固体制剂或液体制剂。
8.根据权利要求1所述方法获得的麦冬中活性组分在制备防治老年痴呆症食品中的应用。
9.根据权利要求2所述方法获得的化合物1-4在制备防治老年痴呆症食品中的应用。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述麦冬中活性组分或化合物1-4在制备防治阿尔茨海默症食品中的应用，所述食品剂型为固体或液体。
【文档编号】A61K31/7048GK103450323SQ201310389541
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年8月31日 优先权日:2013年8月31日
【发明者】戚建华, 叶英, 曲媛 申请人:浙江大学