专利名称：一种胸腺五肽注射液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种注射液，特别是涉及一种胸腺五肽注射液。
背景技术：
胸腺五肽(Thymopentin，简称TP-5)是胸腺生成素II(Thymopoietin)的第32至36位的氨基酸片断。Goldstein等人发现该片断是胸腺生成素II的免疫活性中心，并保留了胸腺生成素II的生物活性和生理功能，其主要生理作用为双向调节机体的免疫功能，进而增强机体的整体免疫力。
胸腺五肽目前已广泛应用于临床，治疗多种疾病，如恶性肿瘤所致的免疫功能下降；慢性乙、丙型肝炎及其并发症；各种原发性或继发性T细胞缺陷病，如儿童先天性免疫缺陷病；某些自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、儿童支气管哮喘和哮喘支气管炎等；各种细胞免疫功能低下的疾病，如病毒性肝炎、预防上呼吸道感染、顽固性口腔溃疡等等。
同绝大多数的肽类分子一样，胸腺五肽在普通的水溶液中稳定性较低。多肽在水溶液中的稳定性受盐离子种类和浓度、酸碱度、多肽的浓度、添加剂的组成等多种因素的影响(Manning等人，1986，Pharmaceutical Research杂志第6卷903-918页)。目前临床使用的是冻干粉针剂型，每支含胸腺五肽1毫克，使用前溶于1毫升的注射用水中。冻干粉针的生产工艺复杂，医生使用也不方便。
发明内容
本发明的目的是提供一种胸腺五肽注射液。
本发明所提供的胸腺五肽注射液，基本上由浓度为0.1-100mg/ml的胸腺五肽，2-100mg/ml的甘氨酸和10-50mmol/L的柠檬酸钠组成。
上述注射液中，胸腺五肽的浓度可以选择1-100mg/ml，在10-100mg/ml时胸腺五肽在水溶液中可以保存更长时间；甘氨酸的浓度可以选择为10-50mg/ml，在20-30mg/ml时对增强胸腺五肽在水溶液中稳定性的效果更佳；柠檬酸钠的优选浓度为20-30mmol/L；注射液一般用NaOH调节pH以7.0-7.2为宜。
本发明所提供的胸腺五肽注射液，具有室温稳定、保存时间长的特点，120天后胸腺五肽纯度保持在99％左右，而且使用方便，能够直接用于临床。
图1A-图1E为胸腺五肽HPLC图，示甘氨酸浓度对胸腺五肽稳定性影响，其中图1A-图1E分别为甘氨酸浓度为0、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml时保存90天后胸腺五肽的HPLC2A-图2E为胸腺五肽HPLC图，示柠檬酸钠浓度对胸腺五肽稳定性影响，其中图2A-图2E分别为柠檬酸钠浓度为0、15、20、25、30mmol/L时保存90天后胸腺五肽的HPLC3A-图3E为胸腺五肽HPLC图，示胸腺五肽浓度对其稳定性影响，其中图3A-图3E分别为胸腺五肽浓度为1、10、20、40、60mg/ml时保存120天后的HPLC图具体实施方式
实施例1、甘氨酸浓度对胸腺五肽在水溶液中稳定性的影响精密称量103.6毫克胸腺五肽(按照样品中胸腺五肽纯度为100％，水分含量为3.5％计算，胸腺五肽的重量为103.6毫克×(1-3.5％)＝100毫克)、735毫克柠檬酸钠(含2分子结晶水)、不同重量甘氨酸(0、0.2、0.5、1、2、3、4、5、7、10克)于100毫升容量瓶中，加入约90毫升水，振摇使其充分溶解后用1M NaOH调节pH值至7.0，然后加水至刻度。
将容量瓶中的溶液用0.22μm滤膜过滤除去溶液中存在的其它不溶性杂质以及细菌。
将过滤后的溶液分装至1毫升的安培瓶中。
取45瓶溶液在25℃条件下密封放置，分别在第0、30、90天采用HPLC进行含量检测跟踪。色谱条件为色谱柱Vydac 238DE54(4.6×250mm)C18柱流动相A0.1％三氟乙酸溶于10％乙腈流动相B0.1％三氟乙酸溶于90％乙腈洗脱程序(如表1所示)1.0毫升/分钟，线性梯度表1、HPLC的梯度洗脱程序
全部过程采用紫外检测仪(波长275nm)监测，根据峰面积归一化法计算胸腺五肽的纯度。试验结果如表2所示，表中数值为胸腺五肽纯度。
表2、甘氨酸浓度对水溶液胸腺五肽纯度的影响
甘氨酸浓度为0、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml时保存90天胸腺五肽样品的HPLC分离图如图1A-图1E所示。
从表2可以发现甘氨酸浓度在2-100mg/ml范围内都会增加胸腺五肽在水溶液中的稳定性，优选是浓度为10-50mg/ml，最优选是20-30mg/ml。
实施例2、柠檬酸钠浓度对胸腺五肽在水溶液中稳定性的影响精密称量103.6毫克胸腺五肽(按照样品中胸腺五肽纯度为100％，水分含量为3.5％计算，胸腺五肽的重量为103.6毫克×(1-3.5％)＝100毫克)、3克甘氨酸、不同重量含2分子结晶水的柠檬酸钠(0、147毫克、294毫克、441毫克、588毫克、735毫克、882毫克、1.18克、1.47克)于100毫升容量瓶中，加入约90毫升水，振摇使其充分溶解后用1M NaOH调节pH值至7.1，然后加水至刻度。
将容量瓶中的溶液用0.22μm滤膜过滤除去溶液中存在的其它不溶性杂质以及细菌。
将过滤后的溶液分装至1毫升的安培瓶中。
取45瓶溶液在25℃条件下密封放置，分别在第0、30、90天采用HPLC进行含量检测跟踪。色谱条件与实施例1相同。
全部过程采用紫外检测仪(波长275nm)监测，根据峰面积归一化法计算胸腺五肽的纯度。试验结果如表3所示，表中数值为胸腺五肽纯度。
表3、柠檬酸钠浓度对水溶液胸腺五肽纯度的影响
柠檬酸钠浓度为0、15、20、25、30mmol/L时保存90天胸腺五肽样品的HPLC分离图如图2A-图2E所示。
从表3可以发现柠檬酸钠在浓度10-50mmol/L范围内都会增加胸腺五肽在水溶液中的稳定性，优选浓度是20-30mmol/L。
实施例3、胸腺五肽浓度对其在水溶液中稳定性的影响精密称量735毫克柠檬酸钠(含2分子结晶水)、3克甘氨酸及不同重量的胸腺五肽(取胸腺五肽适量，精密称定，按照样品中胸腺五肽纯度为100％，水分含量为3.5％计算，使胸腺五肽重量分别达到10、50、100、500毫克、1、2、4、6、8、10克)于100毫升容量瓶中，加入约90毫升水，振摇使其充分溶解后用1M NaOH调节pH值至7.2，然后加水至刻度。
将容量瓶中的溶液用0.22μm滤膜过滤除去溶液中存在的其它不溶性杂质以及细菌。
将过滤后的溶液分装至1毫升的安培瓶中。
取45瓶溶液在37℃条件下密封放置，分别在第0、60、120天采用HPLC进行纯度检测跟踪。色谱条件与实施例1相同。
全部过程采用紫外检测仪(波长275nm)监测，根据峰面积归一化法计算胸腺五肽的纯度。试验结果如表4所示，表中数值为胸腺五肽纯度。
表4、胸腺五肽浓度浓度对其水溶液纯度的影响
胸腺五肽浓度为1、10、20、40、60mg/ml时保存120天胸腺五肽样品的HPLC分离图见附图3A-图3E。
结果表明，胸腺五肽浓度在0.1-100毫克/毫升时都比较稳定，但是随着胸腺五肽浓度的增加，其在水溶液中的稳定性略有提高，优选是1-100毫克/毫升，最优选是10-100毫克/毫升。
权利要求
1.一种胸腺五肽注射液，基本上由浓度为0.1-100mg/ml的胸腺五肽，2-100mg/ml的甘氨酸和10-50mmol/L的柠檬酸钠组成。
2.根据权利要求1所述的胸腺五肽注射液，其特征在于所述胸腺五肽的浓度为1-100mg/ml，
3.根据权利要求2所述的胸腺五肽注射液，其特征在于所述胸腺五肽的浓度为10-100mg/ml。
4.根据权利要求1所述的胸腺五肽注射液，其特征在于所述甘氨酸的浓度为10-50mg/ml。
5.根据权利要求4所述的胸腺五肽注射液，其特征在于所述甘氨酸的浓度为20-30mg/ml。
6.根据权利要求1所述的胸腺五肽注射液，其特征在于所述柠檬酸钠的浓度为20-30mmol/L。
7.根据权利要求1至6任一所述的胸腺五肽注射液，其特征在于所述注射液pH为7.0-7.2。
8.根据权利要求1所述的胸腺五肽注射液，其特征在于胸腺五肽浓度为1mg/ml，甘氨酸浓度为30mg/ml，柠檬酸钠浓度为25mmol/L，pH为7.0-7.2。
全文摘要
本发明公开了一种胸腺五肽注射液，该注射液可以直接用于临床注射使用。本发明的胸腺五肽注射液，基本上由浓度为0.1－100mg/ml的胸腺五肽，2－100mg/ml的甘氨酸和10－50mmol/L的柠檬酸钠组成。胸腺五肽的优选浓度为10－100mg/ml，甘氨酸的优选浓度为20－30mg/ml，柠檬酸钠的优选浓度为20－30mmol/L，注射液pH为7.0－7.2。本发明所提供的胸腺五肽注射液，具有室温稳定的特点，120天后胸腺五肽纯度保持在99％左右，而且使用方便，能够直接用于临床。
文档编号A61P1/16GK1676162SQ20041002985
公开日2005年10月5日 申请日期2004年3月30日 优先权日2004年3月30日
发明者杨先刚, 严莉 申请人:北京中科亚光生物科技有限公司