专利名称：：藁本内酯的在制备预防和治疗痛经的药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及藁本内酯在制备药物中的应用，特别是涉及藁本内酯在制备用于预防和治疗痛经的药物中的新用途。
背景技术：
：藁本内酯是一种不溶于水的油性物质，其结构如通式(I)所示因藁本内酯结构中有环外不对称双键，可分为顺反两种异构体，由于其自身结构的特殊性，顺式结构为空间优势构象，比反式更稳定，因而在自然界中(Z)-藁本内酯在药材中含量为(E)-藁本内酯的10倍左右。藁本内酯可以从常用中药如当归、川芎、茶芎等中提取得到，也可以通过合成得到，在中国专利03123994.3和92111278.5以及现有文献(胡长鹰，丁霄霖，无锡轻工大学学报，2003，969)中，都有不同程度的报道。此外本申请人于2005年7月8日提交的发明专利申请“一种快速制备高纯度藁本内酯的方法”也提供了一种通过减压柱层析来快速简单获得藁本内酯的途径，使藁本内酯的得到变成了现实。痛经(Dysmenorrhea)是指月经前及行经期间，下腹及腰部痉挛性疼痛，严重时伴有恶心、呕吐、肢冷、尤其多见于青春期少女和未婚、未育的年轻妇女。痛经(Dysmenorrhea)发病机制包括子宫器质性病变、机体内分泌失调、精神心理因素及遗传因素等。根据发病情况分为2大类一种是无生殖系统明显器质性病变的，称为原发性痛经(PrimaryDysmenorrhea)，一般在月经初潮时就会发作；另一种是由明确的生殖系统器质性病变(如子宫内膜异位症、子宫肌瘤、盆腔炎等)引起的痛经，称为继发性痛经(SecondaryDysmenorrhea)，出现痛经的时间是在正常行经一段时间后才会发作(曹泽毅中华妇产科学，人民卫生出版社2217-2221.)。研究表明原发性痛经(PrimaryDysmenorrhea)与机体内分泌密切相关，尤其是子宫内膜前列腺素(PGs)水平的增高是导致痛经的重要原因。前列腺素在女性生殖系统如子宫内膜、月经血及卵巢中均有分布，参与调节排卵及月经等生理过程。子宫内膜合成的PGs主要是前列腺素E2(PGE2)和前列腺素F2α(PGF2α)，PGE2抑制子宫平滑肌的活动，PGF2α促进子宫平滑肌收缩，二者含量在月经周期的不同阶段呈现周期性变化。大量试验已经证明，痛经患者子宫内膜及经血中PGE2和PGF2α的含量显著升高，尤其是PGF2α的产生和释放大大增加，使得PGF2α/PGE2的比值升高，高浓度的PGF2α作用于子宫螺旋小动脉壁上的PGF2α受体，引起子宫平滑肌痉挛性收缩，表现为子宫肌张力升高，收缩幅度增加等，导致子宫血流减少，子宫缺血缺氧、酸性代谢产物堆积于肌层引起痛经。除前列腺素外，痛经患者体内的催产素(OT)含量远较非痛经患者高，OT可直接作用于子宫平滑肌引起子宫收缩，并且刺激子宫内膜释放PGs，引起和加重痛经。血管加压素可作用于子宫V1加压素受体，引起子宫肌层活动力增强和子宫肌层小血管收缩，引起子宫局部缺血和疼痛。子宫的器质性病变，如子宫颈狭窄、子宫发育不良、子宫内膜脱落、盆腔炎等均可引起子宫张力升高，经血流出不畅，子宫异常收缩引起痛经(曹泽毅中华妇产科学，人民卫生出版社2217-2221.)。多项流行病学调查表明原发性痛经是目前妇科最常见的疾病，其发病率在20％～90％之间(JamiesonDJetal，Theprevalenceofdysmenorrhealdyspareunia，pelviepain，andirritablebowelsyndromcinprimarycarepractices[J].ObstetGynecol，1996，8755)，严重影响妇女工作和生活质量。在美国痛经导致工作女性的缺勤及相应的经济损失大约每年有6亿工作时及20亿美元。因此寻找有效的药物预防及治疗痛经是非常重要的。
发明内容本发明的目的就是为了解决以上问题，提供一种藁本内酯可用于制备预防和治疗痛经的药物的新用途。为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案本发明公开了如通式(I)所示的藁本内酯的在制备预防和治疗痛经的药物中的应用。所述藁本内酯包括顺式藁本内酯、反式藁本内酯以及顺式与反式混合的藁本内酯。所述藁本内酯的有效治疗剂量为0.1～500mg/kg/天。所述的藁本内酯包括从天然植物中提取的藁本内酯及化学合成的藁本内酯。所述痛经包括原发性痛经及继发性痛经。藁本内酯可来源于本领域公知的天然植物提取以及化学合成。本领域技术人员可根据公知技术，将本发明的藁本内酯与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或保健品使用的适当的施用形式和剂量形式。藁本内酯应用于制备预防和治疗痛经的药物中时，制备出的药物组合物的给药剂量取决于多种因素，包括治疗对象的年龄、体重、个体差异；痛经的发病机制、严重程度，临床治疗的个体化实施方案等。因此本发明的治疗剂量可根据实际治疗情况进行较大范围的调整。本发明化合物的每天的合适剂量范围选为0.1～500mg/kg体重。上述剂量可根据临床治疗的实施方案采用单一剂量形式或分成多次给药，可单独服用，或与其它治疗痛经的药物合并使用，并在合理的范围内调整剂量。上述给药剂量调整方案均为本领域技术人员公知的。本发明的有益效果在于本发明通过建立醋酸致小鼠疼痛模型及福尔马林致小鼠疼痛模型，研究藁本内酯的镇痛作用，结果显示对于醋酸引起的小鼠急性疼痛反应及对于福尔马林引起的小鼠双相慢性疼痛反应，藁本内酯具有明显的镇痛作用。本发明通过离体、在体子宫平滑肌的研究说明，针对多种与临床痛经发病密切相关的致病因子引起的子宫平滑肌痉挛收缩，藁本内酯均有广泛的解痉作用对于PGF2α、催产素、乙酰胆碱或K+去极化溶液引起的大鼠离体子宫痉挛收缩，藁本内酯可明显拮抗大鼠离体子宫痉挛收缩，显著降低痉挛子宫平滑肌张力；对于PGF2α或催产素引起的小鼠在体子宫痉挛收缩，本发明的藁本内酯可显著抑制小鼠在体子宫痉挛，显著降低类痛经(在体子宫痉挛)小鼠的扭体次数。由于藁本内酯对于急性、慢性疼痛均具有显著的镇痛作用；对于多种治病因素引起的子宫平滑肌痉挛，藁本内酯具有广泛的解痉作用。因此，可将藁本内酯应用于制备预防与治疗痛经的药物，并且制备出的药物可通过其中藁本内酯的镇痛、解痉的效果用于预防和治疗痛经，且效果显著。具体实施例方式本发明人通过醋酸致小鼠急性疼痛模型(徐叔云、卞如濂、陈修。药理学实验方法学，人民卫生出版社，P882)对藁本内酯镇痛作用进行了研究，发现其对于急性疼痛具有显著的镇痛作用。对于福尔马林引起的小鼠二相疼痛反应(徐叔云、卞如濂、陈修。药理学实验方法学，人民卫生出版社，P884)，藁本内酯对其中枢及炎症机制引起的两相疼痛均有明显的抑制作用。对于多种与临床痛经发病相关的治病因素引起的大鼠离体子宫平滑肌的痉挛，藁本内酯具有明显的、广泛的解痉作用。本发明还提示对于PGF2α和催产素导致的小鼠在体子宫痉挛收缩(类痛经反应)(孙海燕、曹永孝、刘静等。小鼠痛经模型的建立。中国药理学通报，2002，18(2)233-236)藁本内酯均能发挥显著的拮抗子宫痉挛的作用，明显抑制类痛经反应。本发明的研究结果表明藁本内酯通过有效的镇痛、解痉作用，能够用于预防和治疗痛经。下面通过具体的实施例对本发明作进一步详细的描述。其中本发明所用的藁本内酯由本发明人通过已知的方法经天然植物提取或化学合成制备。实施例1藁本内酯对醋酸致小鼠急性疼痛的影响。试剂和药品所用藁本内酯为本发明人从天然植物中提取得到的顺式藁本内酯，化学纯度＞98％，3％吐温-80配制；其余为市售分析纯试剂。动物昆明种小鼠30只，雌雄各半，体重19～23g，由广州中医药大学实验动物中心提供。小鼠常规饲养3天后，按体重随机分为阴性对照组、药物高、低剂量组，按照表1所示，分别灌胃给予生理盐水、藁本内酯，给药1次，给药30分钟后，腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/只，观察记录30分钟内小鼠扭体次数，并计算扭体抑制率，公式如下扭体抑制率＝(阴性对照组扭体次数-用药组扭体次数)/阴性对照组扭体次数×100结果见表1。表1藁本内酯对醋酸致小鼠急性疼痛的影响(x±s，n＝10)注与模型组比较*P＜0.05，▲P＜0.01结果显示高、低剂量的藁本内酯均能显著、迅速的抑制醋酸引起的小鼠急性疼痛反应，疼痛小鼠扭体次数显著低于阴性对照组，表明藁本内酯具有显著、迅速的镇痛作用。实施例2藁本内酯对福尔马林致小鼠慢性疼痛的影响。试剂和药品藁本内酯同上，3％吐温-80配制；其余为市售分析纯试剂。动物昆明种小鼠30只，雌雄各半，体重19～23g，由广州中医药大学实验动物中心提供。小鼠常规饲养3天后，按体重随机分为阴性对照组、藁本内酯高、低剂量组，按照表2所示，分别灌胃给予溶媒、藁本内酯，给药1次，给药30分钟后，在小鼠右侧足底皮下注射2％福尔马林溶液20μl，观察记录0-10分钟和10-30分钟内小鼠舔足的时间，计算舔足时间抑制率，公式如下舔足时间抑制率＝(阴性对照组舔足时间-用药组舔足时间)/阴性对照组舔足时间×100结果见表2。表2藁本内酯对福尔马林致小鼠慢性疼痛的影响(x±s，n＝10)注与模型组比较*P＜0.05，▲P＜0.01结果显示高、低剂量藁本内酯均能显著、迅速的抑制福尔马林引起的小鼠双相疼痛反应，舔足时间显著少于阴性对照组，表明藁本内酯对于中枢急性疼痛及炎症引起的慢性疼痛均具有显著的镇痛作用。实施例3藁本内酯对催产素引起的大鼠离体子宫平滑肌痉挛收缩的影响试剂和药品藁本内酯同上，DMSO配制溶液；催产素SigmaO3251；其余均为市售分析纯试剂。动物Wistar大鼠，雌性，体重180～200g，由广州中医药大学实验动物中心提供。仪器张力传感器(MLT1030，ADInstrumentsPtyLtd，Australia)，8通道动物生理记录仪(ADInstrumentsPtyLtd，Australia)方法与结果雌性Wistar大鼠在试验开始24小时前，皮下注射己烯雌酚0.1mg/kg。动物脱颈处死后，取出子宫，轻柔剥离附着于子宫壁上的结缔组织和脂肪组织。同时开启超级恒温浴槽，使浴槽中营养液的温度为37±1℃，并连续通入95％O2和5％CO2的混合气体。取一侧子宫角，两端分别用线结扎，将一端固定于浴槽中的支架上，另一段与张力换能器相连，实验开始前给予子宫1g左右的负荷，待离体子宫平滑肌稳定45min后，记录10min正常活动曲线，用催产素(0.01U/ml)，刺激子宫平滑肌产生痉挛收缩，待收缩达到平衡期，累积加入藁本内酯(0.5～8ug/ml)或等体积溶媒，子宫平滑肌的张力由张力传感器和8通道动物生理记录仪进行记录。结果见表3。表3藁本内酯对催产素诱导的离体子宫平滑肌痉挛状态的影响(x±s，n＝8)注*与同期对照组比较P＜0.05，▲与对照组比较P＜0.01结果如表3所示，藁本内酯(2～8μg/ml)可以显著的拮抗催产素(0.01U/ml)诱导的离体大鼠子宫平滑肌痉挛收缩，显著的降低了子宫平滑肌的张力。实施例4藁本内酯对PGF2α引起的大鼠离体子宫平滑肌痉挛收缩的影响试剂和药品所用藁本内酯为本发明人化学合成得到的顺式藁本内酯与反式藁本内酯的混合，化学纯度＞98％，DMSO配制溶液；PGF2α白色粉末，5mg/瓶，Sigmachemicalcorporation，Lot18H37982.动物Wistar大鼠，雌性，体重180～200g，由广州中医药大学实验动物中心提供。仪器张力传感器(MLT1030，ADInstrumentsPtyLtd，Australia)；8通道动物生理记录仪(ADInstrumentsPtyLtd，Australia)方法与结果大鼠子宫平滑肌取材方法同实施例3，实验开始前给予子宫1g左右的负荷，待离体子宫平滑肌稳定45min后，记录10min正常活动曲线，加入PGF2α1μg/ml刺激子宫平滑肌产生痉挛收缩，待收缩达到平衡期，累积加入藁本内酯(0.5～8μg/ml)或等体积溶媒，子宫平滑肌的张力由张力传感器和8通道动物生理记录仪进行记录。结果见表4。表4藁本内酯对PGF2α诱导的离体子宫平滑肌痉挛状态的影响(x±s，n＝8)注*与对照组比较P＜0.05，▲与对照组比较P＜0.01结果如表4所示，藁本内酯(4～8μg/ml)可以显著的拮抗PGF2α(1μg/ml)诱导的大鼠离体子宫平滑肌痉挛收缩，显著的降低了子宫平滑肌的张力。实施例5藁本内酯对乙酰胆碱引起的大鼠离体子宫平滑肌痉挛收缩的影响试剂和药品藁本内酯同实施例1，DMSO配制溶液；其余为市售分析纯试剂。动物Wistar大鼠，雌性，体重180～200g，由广州中医药大学实验动物中心提供。仪器张力传感器(MLT1030，ADInstrumentsPtyLtd，Australia)8通道动物生理记录仪(ADInstrumentsPtyLtd，Australia)方法与结果大鼠子宫平滑肌取材方法同实施例3，实验开始前给予子宫1g左右的负荷，待离体子宫平滑肌稳定45min后，记录10min正常活动曲线，加入乙酰胆碱10-5M，刺激子宫平滑肌产生痉挛收缩，待收缩达到平衡期，累积加入藁本内酯(0.5～8ug/ml)或等体积溶媒，子宫平滑肌的张力由张力传感器和8通道动物生理记录仪进行记录。结果见表5。表5藁本内酯对乙酰胆碱诱导的大鼠离体子宫平滑肌痉挛状态的影响(x±s，n＝8)注*与对照组比较P＜0.05，▲与对照组比较P＜0.01结果如表5所示，藁本内酯(2～8μg/ml)可以显著的拮抗乙酰胆碱(10-5M)诱导的大鼠离体子宫平滑肌痉挛收缩，显著的降低了子宫平滑肌的张力。实施例6藁本内酯对KCl去极化溶液引起的大鼠离体子宫平滑肌痉挛作用的影响。试剂和药品所用藁本内酯为本发明人从天然植物中提取得到的顺式藁本内酯与反式藁本内酯的混合，化学纯度＞98％，DMSO配制溶液其余为市售分析纯试剂。动物Wistar大鼠，雌性，体重180～200g，由广州中医药大学实验动物中心提供。仪器张力传感器(MLT1030，ADInstrumentsPtyLtd，Australia)8通道动物生理记录仪(ADInstrumentsPtyLtd，Australia)方法与结果大鼠子宫平滑肌取材方法同实施例3，实验开始前给予子宫1g左右的负荷，待离体子宫平滑肌稳定45min后，记录10min正常活动曲线，加入KCl(56.3mM)刺激子宫平滑肌产生痉挛收缩，待收缩达到平衡期，累积加入藁本内酯(0.5～8ug/ml)或等体积溶媒，，子宫平滑肌的张力由张力传感器和8通道动物生理记录仪进行记录。结果见表6。表6藁本内酯对KCL去极化溶液诱导的离体子宫平滑肌痉挛收缩的影响(x±s，n＝8)注*与对照组比较P＜0.05，▲与对照组比较P＜0.01结果如表5所示，藁本内酯(2～8μg/ml)可以显著的拮抗KCl(56.3mM)去极化溶液诱导的离体大鼠子宫平滑肌痉挛收缩，显著的降低了子宫平滑肌的张力。实施例7藁本内酯对催产素引起的小鼠在体子宫平滑肌痉挛(类痛经)的影响药品和试剂藁本内酯同实施例1，3％吐温-80配制；其余为市售分析纯试剂。动物雌性小鼠，30只，体重18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。方法和结果动物常规饲养3天后，按体重随机分组，分为模型组、藁本内酯高、低剂量组。各组小鼠按2mg/kg体重/day，灌胃己烯雌酚混悬液，连续9天，从第10天开始，上午灌胃己烯雌酚，下午按照表7所示剂量分别给予溶媒、藁本内酯。连续给药3天。末次给药30分钟后腹腔注射催产素20U/kg体重，观察记录30分钟内小鼠扭体次数，并按下述公式计算扭体抑制率扭体抑制率＝(模型组扭体次数—用药组扭体次数)/模型组扭体次数×100结果见表7。表7藁本内酯对催产素所致的小鼠在体子宫痉挛(类痛经)的影响(x±s，n＝10)注*表示与模型组比较有显著性的差异P＜0.05结果显示高、低剂量的藁本内酯对催产素诱发的小鼠类痛经反应有显著的抑制作用，药物组小鼠扭体次数均显著少于阴性对照组(P＜0.05)。实施例8藁本内酯对PGF2α引起的小鼠在体子宫平滑肌痉挛(类痛经)的影响药品和试剂藁本内酯同实施例1，3％吐温-80配制；PGF2α白色粉末，5mg/瓶，Sigmachemicalcorporation，Lot18H37982其余均为市售分析纯试剂。动物雌性小鼠，30只，体重18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供方法和结果动物常规饲养3天后，按体重随机分组，分为模型组、藁本内酯高、低剂量组。各组小鼠按2mg/kg体重/day，灌胃己烯雌酚混悬液，连续9天，从第10天开始，上午灌胃己烯雌酚，下午分别给予表8所示药物剂量，连续给药3天。末次给药30分钟后腹腔注射PGF2α1mg/kg体重，观察记录30分钟内小鼠扭体次数，并按下述公式计算扭体抑制率扭体抑制率＝(模型组扭体次数—用药组扭体次数)/模型组扭体次数×100结果见表8。表8藁本内酯对PGF2α所致的小鼠在体子宫痉挛(类痛经)的影响(x±s，n＝10)注*表示与模型组比较有显著性的差异P＜0.05结果显示高、低剂量的藁本内酯对PGF2α诱发的小鼠类痛经反应有显著的抑制作用，药物组的小鼠扭体次数均显著少于阴性对照组(P＜0.05)。本发明人进一步利用化学合成的反式藁本内酯(化学纯度＞98％)进行了上述实验，结果显示反式藁本内酯也能产生镇痛、解痉作用，并降低痉挛子宫平滑肌张力。权利要求1.如通式(I)所示的藁本内酯的在制备预防和治疗痛经的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的藁本内酯在制备预防和治疗痛经的药物中的应用，其特征在于所述藁本内酯为顺式藁本内酯。3.根据权利要求1所述的藁本内酯在制备预防和治疗痛经的药物中的应用，其特征在于所述藁本内酯为顺式与反式混合的藁本内酯。4.根据权利要求1所述的藁本内酯在制备预防和治疗痛经的药物中的应用，其特征在于所述藁本内酯为反式藁本内酯。5.根据权利要求1所述的藁本内酯在制备预防和治疗痛经的药物中的应用，其特征在于所述藁本内酯的有效治疗剂量为0.1～500mg/kg/天。6.根据权利要求1所述的藁本内酯在制备预防和治疗痛经的药物中的应用，其特征在于所述的藁本内酯包括从天然植物中提取的藁本内酯及化学合成的藁本内酯。7.根据权利要求1所述的藁本内酯在制备预防和治疗痛经的药物中的应用，其特征在于所述痛经包括原发性痛经及继发性痛经。全文摘要本发明公开了如通式(I)所示的藁本内酯的在制备预防和治疗痛经的药物中的应用。由于藁本内酯对于急性、慢性疼痛均具有显著的镇痛作用；对于多种治病因素引起的子宫平滑肌痉挛，藁本内酯具有广泛的解痉作用。因此，将藁本内酯应用于制备预防与治疗痛经的药物后，制备出的药物可通过其中藁本内酯的镇痛、解痉的效果用于预防和治疗痛经，且效果显著。文档编号A61P15/00GK1732920SQ200510021300公开日2006年2月15日申请日期2005年7月15日优先权日2005年7月15日发明者钱忠明,杜俊蓉,汪程远申请人:钱忠明,杜俊蓉,汪程远