专利名称：可治疗关节炎的抗寒因子激活素复合针剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物制剂，具体涉及一种可治疗寒凉型关节炎的抗寒因子激活素复合针剂。
背景技术：
关节炎是常见病、多发病，全世界约有3.5亿。关节炎的种类很多，而以怕寒凉的关节炎居多。国内医学界风湿病专家在东北、北京地区调查结果表明约有33％-77％的被调查成人患有“风关痛”(即老寒疾、良性关节炎)；南方热天由于使用空调、电扇等，发病率也在不断增多；同时，随着年龄的增长，患病率也在增加，一般来说，相对寒冷和相对潮湿的地区患病率较高。虽然目前有一些不同疗效的有效药物，但尚无公认的根治关节炎的药物，近期而据称效果较好有美国进口的“关支灵”(含鲸蜡烯酸脂)，需要3-4个疗程，费用约为3150-4200元；国产药物“葡立”(含氨基葡萄糖)每一疗程约1800元，且每年需重复治疗2-3次，非常麻烦。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷，提供一种可显著提高人体抗寒能力、成本低廉、治疗效果显著之抗寒因子激活素复合针剂，可治疗因受寒凉所致的关节炎。
本发明是通过下面的技术方案解决上述技术问题的。其特征在于是以耐寒动物的新鲜关节骨组织为原料，通过粉碎冷藏、综合提取、酶降解制成的注射液；所述耐寒动物可以是犬类动物、鹅、雪兔、熊、狍子、鹿或雪蛤；其具体步骤为1)粉碎冷藏取耐寒动物的新鲜骨关节组织，洗净、消毒、去皮毛脂肪，粉碎后冷藏；2)综合提取将冷藏后的组织加入1-2倍量的注射用水，浸渍后过滤，取滤液另置；其滤渣中加入1-2倍量的30％乙醇，浸渍过滤后去乙醇，取滤液另置；再在其滤渣内加入1-2倍量的氢氧化钠溶液，浸渍后过滤，调PH值6-8，取滤液另置；然后在其滤渣中加1-2倍量水再煎煮，取滤液；将上述四种滤液合并后调PH值2-3；3)酶降解在上述合并液中加入浓度为0.5-2％、1∶3000的胃蛋白酶降解，调PH值至6-8，或采用0.5-2％的胰酶降解，调PH值至8-10；4)降解后溶液浓度调至10％，然后用细菌过滤器过滤后分装；或先用G4球过滤，分装后在100℃温度下消毒30分钟。
上述步骤中所述冷藏时间为20-24小时以上；所述浸渍时间为3-5小时；所述氢氧化钠溶液浓度为0.2-1％；所述胃蛋白酶或胰酶降解时间为7-9小时，温度为30℃-45℃。
本发明具有下列技术效果1、本发明通过提取耐寒动物体新鲜关节骨组织中所含抗寒因子，经生化处理，综合提取，制成针剂后注入人体，可激活人体本身抗寒系统隐匿或退化的抗寒因子、酶、或促酶，使因受寒凉而变异的组织抗原发生逆转，使T淋巴细胞识别不再视为异己，而不再指令巨噬细胞攻击之，阻断了病理损害，关节擦音擦感明显减轻，使病损得到修复；2、本发明中所含活性物质，可产生高能的“能量代谢旁路”同等质量的物质，会产生更多的能量，体力增强，抗寒能力亦显著增强，产生利于关节变化--温通微循环，去除局部致痛因子，有效减轻或消除关节疼痛感；3、本发明还可提供相关组织修复所需的重要物质，加速组织修复，利于病损组织的康复，治疗时间短，疗效显著；4、本发明为生物制剂，制作方法简单，，成本低廉，安全无毒，无过敏，无任何副作用。
具体实施例方式“风寒湿合而为痹”、“寒为痹首”。绝大部分关节炎患者均有风寒湿邪侵袭史，由于风、寒、湿的作用，导致人体内结缔组织内在代谢异常，而关节组织浅表血运较差，寒冷会使周围血管收缩，更影响关节组织的供血和代谢产物的排泄，而易受外界风寒、湿的侵袭以及天气的气压、电离度等变化的影响，当外在条件使肌体部分基因、细胞、组织发生变异时，会激活T淋巴细胞、指令巨噬细胞、吞噬、清除、破坏机体内环境的正常平衡。素问曰丈夫五八肾气衰……，命门火衰，阳气不足，则四肢百骸失于阳气温煦，人或动物胸腺到性成熟即开始退化，随年龄的增长而逐渐萎缩。细胞组织老化，免疫监视识别系统能力减弱而较易紊乱，在反复关节病损的刺激下，T淋巴细胞不能正确的识别异己，一些误导的T淋巴细胞剌激巨噬细胞，而误伤破坏自身组织。当人在某一特定的时间和地点，受风寒湿等原因影响时，T淋巴细胞被激活，不断指令巨噬细胞不分异己，对病变细胞组织及正常关节组织吞噬、侵蚀，而导致关节组织损伤和发炎。另外，由于人类主动适应环境-温暖的衣着、居室，使机体的“抗寒系统”的某些因子或酶退化或隐匿，从而降低了对寒湿等的抵御能力。
生物在自然环境中适者生存，不适者则被淘汰，其与生理、生化、组织结构的进化相关联。高寒地区的耐寒生物，之所以可在严寒的自然环境中傲然生存，是因在其冷适应中存有“抗寒因子”或“抗寒因子激活素”，酶或促酶存留或进化，使其对寒冷的生理、生化反应有特殊的反应和(或)能、功、热高能代谢方式，使冷适应更趋完善和加强，而保证其在寒冷环境中存活。同时，其“抗寒系统”和“抗风湿免疫系统”能正确、即时的清除风寒湿等风湿因子而导致的病损的细胞、组织，而不误伤自我正常细胞、组织等，可维持组织功能正常；酶系统在严寒条件下，仍保持正常的活性，特殊的能量代谢，产生高能的生化反应，以适宜在严寒的环境中生存。
各种组织各有特异的组织结构和功能，其与特异的分子结构相关联，分子的性能取决于决定簇和(或)某元素而呈现分子生物学特点，其对构成特异的组织结构有嗜特异分子的趋向性，如碘嗜甲状腺，硒对心脏的作用等。高寒地区耐寒动物具有较高的耐寒能力，本发明根据寒凉性关节炎发病原因，采用耐寒动物之新鲜关节骨组织，经生化处理、综合提取保留其决定簇的小分子多肽、氨基酸等活性成分和抗寒因子，制成复合针剂作用人体内，可激活和提高人体的抗寒能力，促进病患部位的血液循环，补充、强化和关节的修复，激活逆转变异的抗原等，彻底修复病变关节及其周围软组织，恢复其正常生理功能，斩断形成痹痛的变异反应链，达到根除风湿骨痛的内邪的目的。
本发明可调节人体“抗风湿免疫系统”中受损的T淋巴细胞，恢复、纠正及控制误导的T淋巴细胞，指令巨噬细胞吞噬变异的细胞、组织等，而不损伤正常细胞、组织，恢复正常识别功能，终止关节炎性损伤。使病变逐渐消除，由正常组织取代，受损的关节功能障碍逐渐恢复，从而实现永久康复，同时稳定了受外界负面影响的不良反应，如对天气变化预感的减弱、消失。
本发明是以耐寒动物的新鲜关节骨组织为原料，通过粉碎冷藏、综合提取、酶降解制成注射液，其中所述耐寒动物为犬类动物、鹅、雪兔、熊、狍子、鹿或雪蛤，这些耐寒动物具有较强的耐寒能力，在我国的长白山、大兴安岭等高寒地区生存。具体实施包括下述步骤1)粉碎冷藏取耐寒动物的新鲜关节骨组织，洗净，消毒，去除皮毛脂肪，切成段，粉碎后冷藏20-24小时以上，冷藏后可产生更多的抗寒因子；2)综合提取将冷藏后的组织加入1-2倍量的注射用水，浸渍3-5小时后过滤，形成滤液①，然后在其滤渣中加入1-2倍量30％的乙醇，亦浸渍3-5小时，过滤去乙醇，形成滤液②，再在其滤渣中加入1-2倍量浓度为0.2-1％的氢氧化钠溶液，浸渍3-5小时后过滤，形成滤液③，该滤液③须调PH值6-8，避免碱性对其他成分的影响；再将其滤渣又加水1-2倍量水煎煮，过滤后形成滤液④，合并上述四滤液，调PH值2-3；3)酶降解在上述合并液中加入0.5-2％的胃蛋白酶(1∶3000)降解，降解时间为7-9小时，温度为30℃-45℃，然后调PH值至6-8或采用0.5-2％的胰酶降解，降解时间亦为7-9小时，温度为30℃-45℃，然后调PH值至8-10；4)降解后溶液浓度调至10％，然后用细菌过滤器过滤，以去除沉淀和渣，再分装成成品；或先用G4球过滤去渣，分装后成品在100℃温度下消毒30分钟。
一、动物实验1、耐寒实验将每组5只小白鼠置于自然寒冷条件的室外，按平时饮食条件进行观察，结果为1)预备实验组
小白鼠在-14℃时1小时被冻死，在-18℃时50分钟左右被冻死；2)实验组“生理盐水组”注射有生理盐水的小白鼠在32小时内全部冻死，最低温度为-16℃；“氟美松”组注射有氟美松的小白鼠在38小时内全部冻死，最低温度-19.3℃；而注射有本发明(本发明产品使用名称“关节灵针”)的小白鼠在331小时内全部冻死，在41小时开始被冻死第一只小白鼠时，当时温度是-21℃。
动物实验说明，本发明实验组能显著提高小白鼠的抗寒能力。
2、急性毒性实验取小白鼠15只(平均体重35.4克)，将本发明0.5毫升注入其尾静脉，除一只因注射时间太快当时有些萎缩(稍后转入正常)外，其余照常活跃，48小时后仍然正常。
计算成人体重按50公斤计算，小白鼠35.4克，即成人重量∶小白鼠重量＝1416∶1。
成人按2毫升/次，小白鼠的耐受量是是成人用量的348.7倍以上；成人按4毫升/次，小白鼠的耐受量是成人用量的176倍以上。按规定相当于人用量60倍以上则较安全，此耐受量为176-348倍以上，且临床是肌肉注射，而动物实验是静脉注射，故本发明是非常安全的。
3、刺激性实验取家兔两只，将本发明1毫升、生理盐水1毫升，分别注入左右股四头肌处，48头部击毙，解剖两侧股四头肌未见炎症反应及出血，故可作局部注射。
4、溶血实验取兔血10毫升，去纤维蛋白，反复洗涤三次，取血球1毫升，加0.9％氯化钠40毫升，形成2％的红血球混合液，分取2.5毫升于四只试管内，分别在其内加本发明0.1毫升(含量2％)、0.3毫升(含量6％)、0.5毫升(含量10％)，余用0.9％氯化钠补至5毫升(即2.4毫升、2.2毫升、2.0毫升、2.5毫升)混匀呈红色混悬液置28℃室温放置一小时后观察，无溶血现象。
二化学分析1、本发明经紫外分光实验，其值为230nmOD11.88260nmOD2.145280nmOD1.542、经聚丙烯蛋白电泳实验，仅4S区有单一区带；3、经定氮实验测定其总氮量为0.3735％。
4、氨基酸分析实验报告
样品浓度稀释成1.5％的溶液分析仪器KLA-5型氨基酸分析仪分析条件6φ-130-PH-2.3-SS
三、部分病例例1刘XX，男，46岁，7年前因在水中作业，受冰冻2小时而致踝关节长年疼痛，活动受限，行动迟缓，怕冷，变天前2-3天有预感，检查诊断为风关痛寒湿型关节炎，经多年治疗不效，需常年服止痛药暂时缓解，后肌注本发明4毫升/次，共注射20次，关节疼痛消失，踝关节活动范围较前逐渐加大到42°，灵活有力，怕冷明显减轻，变天前预感减退，膝踝关节局部皮温回升3.4℃。2年后回访，关节未再疼痛，治疗后未再服止痛药，关节活动较前加大而有力，变天前预感不明显。
例2梁XX，男，54岁，四肢关节疼痛7-8年，需经常服止痛药，喜暖怕凉，夏季需穿棉裤，检查诊断为风关痛寒冷型关节炎，后肌注本发明4毫升/次，共注射15天，关节疼痛消失，注射后未再服止痛药，怕惊消退，夏季已脱掉棉裤，与常人一样穿衣，2年后随访，与常人无异。
例3潘X，男，43岁，两膝关节因受寒冷疼痛12年，下蹲受限，怕凉，夏季热天需加穿秋裤，常服止痛药暂缓解，膝关节擦音+，擦感+++，局部皮温下降，诊断为风关痛，后肌注本发明4毫升/次，注射10天时，疼痛明显减轻，注射20次时，疼痛消失，膝关节活动加大，不怕凉，膝关节擦音、擦感明显减轻，18个月后随访膝关节未再疼痛，下蹲活动正常，怕惊消失，膝关节擦音(±)擦感(+)局部皮温转正常，关节未再疼痛。
例4李XX，女，40岁，因受湿凉，两膝关节疼痛7余年，下楼甚痛，需扶楼梯，两腿脚怕凉，平时总比正常人多穿一个季节的衣服，脚无汗，易抽筋，变天前2-3天有预感，腿疼加重，检查诊断为风关痛，注射本发明4毫升/次，注射7天时，两腿脚怕凉消失，关节疼痛减轻，注射20次后，关节不痛，不怕凉，脚出汗，抽筋止，3年内随访多次无复发。
例5乔X，女，22岁，因受凉两膝关节疼痛8年余，喜暖怕凉，变天前疼痛加重，检查诊断为风关痛，注射本发明3毫升/次，注射3次时，关节疼痛消失，怕凉消失，夏季可穿裙子，随访1年，关节未再痛，变天无不适。
例6郑XX，女，51岁，周身关节痛14年，受累、受寒后加重，左膝关节活动则痛，下蹲及直立困难，检查诊断为风关痛并骨质增生，肌注本发明2毫升/次，共15支，每次用药后关节疼痛减轻，肢体活动有力。1年后随访膝关节痛消失，活动正常、轻快。
例7侯XX，女，20岁，腕、肘、膝、踝关节游走痛1年余，痛时关节红肿，运动障碍，曾服强的松、保泰松，因关节红、肿抬入病房，后肌注本发明2毫升，每日2次，共注射9天(同时另肌注青霉素7天)，关节肿痛消失，活动正常，后继续注射3日。1年后随访关节未再肿痛。
例8张XX，女，45岁，腕、膝、踝关节游走痛3年余，肢体沉重，变天前加重，右膝关节擦音+。肌注本发明4毫升，每日1次，肌注10天后两下肢活动灵活，疼痛消失，再注射5天后，变天前不适减轻，注射24天后关节痛消失。2年后随访未用其他抗风湿药物，关节疼痛及沉重感消失，右膝关节擦音消失，活动灵活，无乏力，步行8000米也不觉得累。
例9姜XX，女，50岁，右肩关节受风寒后疼痛年余，上肢活动受限，不能梳头，诊断为肩周炎，肌注本发明3毫升，每日1次，共注8次，肩关节活动正常。1年后随访，肩关节不再痛，活动正常。
权利要求
1.一种可治疗关节炎的抗寒因子激活素复合针剂，其特征在于是以耐寒动物的新鲜关节骨组织为原料，通过粉碎冷藏、综合提取、酶降解制成的注射液。
2.根据权利要求1所述的可治疗关节炎的抗寒因子激活素复合针剂，其特征在于所述耐寒动物为犬类动物、鹅、雪兔、熊、狍子、鹿或雪蛤。
3.根据权利要求1或2所述的可治疗关节炎的抗寒因子激活素复合针剂，其特征在于包括下述具体步骤1)粉碎冷藏取耐寒动物的新鲜骨关节组织，洗净、消毒、去皮毛脂肪，粉碎后冷藏；2)综合提取将冷藏后的组织加入1-2倍量的注射用水，浸渍后过滤，取滤液另置；其滤渣中加入1-2倍量的30％乙醇，浸渍过滤后去乙醇，取滤液另置；再在其滤渣内加入1-2倍量的氢氧化钠溶液，浸渍后过滤，调PH值6-8，取滤液另置；然后在其滤渣中加1-2倍量水再煎煮，取滤液；将上述四种滤液合并后调PH值2-3；3)酶降解在上述合并液中加入浓度为0.5-2％、1∶3000的胃蛋白酶降解，调PH值至6-8，或采用0.5-2％的胰酶降解，调PH值至8-10；4)降解后溶液浓度调至10％，然后用细菌过滤器过滤后分装；或先用G4球过滤，分装后在100℃温度下消毒30分钟。
4.根据权利要求3所述的可治疗关节炎的抗寒因子激活素复合针剂，其特征在于所述冷藏时间为20-24小时以上。
5.根据权利要求3所述的可治疗关节炎的抗寒因子激活素复合针剂，其特征在于所述浸渍时间为3-5小时。
6.根据权利要求3所述的可治疗关节炎的抗寒因子激活素复合针剂，其特征在于所述氢氧化钠溶液浓度为0.2-1％。
7.根据权利要求3所述的可治疗关节炎的抗寒因子激活素复合针剂，其特征在于所述胃蛋白酶或胰酶降解时间为7-9小时，温度为30℃-45℃。
全文摘要
一种可治疗关节炎的抗寒因子激活素复合针剂，其特征在于是以耐寒动物的新鲜关节骨组织为原料，通过粉碎冷藏、综合提取、酶降解制成的注射液，所述耐寒动物为犬类动物、鹅、雪兔、熊、狍子、鹿或雪蛤。本发明通过提取耐寒动物体新鲜关节骨组织中所含抗寒因子，经生化处理，综合提取，制成针剂后注入人体，可激活人体本身抗寒因子、酶、或促酶，使因受寒凉而变异的组织抗原发生逆转，阻断了病理损害，使病损得到修复，抗寒能力亦显著增强，可有效减轻或消除关节疼痛感，治疗时间短，疗效显著。本发明为生物制剂，制作方法简单，成本低廉，安全无毒，无过敏，无任何副作用。
文档编号A61K35/32GK1686168SQ200510033640
公开日2005年10月26日 申请日期2005年3月21日 优先权日2005年3月21日
发明者李继公, 李岩, 李欣蓉 申请人:李继公