专利名称：原儿茶醛的医药新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及原儿茶醛在预防或治疗休克中的应用，具体地涉及原儿茶醛在预防或治疗感染性休克、失血性休克、创伤性休克、心源性休克、过敏性休克中的应用。
背景技术：
休克(shock)是一种急性组织灌注量不足而引起的临床综合征。是临床各科严重疾病中常见的并发症。休克的共同特征是有效循环量不足，组织和细胞的血液灌注虽经代偿仍受到严重的限制，从而引起全身组织和脏器的血液灌注不良，导致组织缺氧、微循环瘀滞、脏器功能障碍和细胞的代谢功能异常等一系列病理生理改变。因此，休克的发病规律一般是从代偿性低血压(组织灌注减少)发展到微循环衰竭，最后导致细胞膜的损伤和细胞死亡。其主要临床表现有血压下降，收缩压降低至12kPa(90mmHg)以下，脉压差小于2.67kpa(20mmHg)，面色苍白，四肢湿冷和肢端紫绀，浅表静脉萎陷，脉搏细弱，全身无力，尿量减少，烦躁不安，反应迟钝，神志模糊，甚至昏迷等。
本发明人经过大量的实验研究，提供了原儿茶醛在预防或治疗感染性休克、失血性休克、创伤性休克、心源性休克、过敏性休克中的应用。
发明内容
本发明提供了原儿茶醛在制备预防或治疗休克的药物中的应用。
本发明提供了原儿茶醛在制备预防或治疗感染性休克的药物中的应用。
本发明提供了原儿茶醛在制备预防或治疗失血性休克的药物中的应用。
本发明提供了原儿茶醛在制备预防或治疗创伤性休克的药物中的应用。
本发明提供了原儿茶醛在制备预防或治疗心源性休克的药物中的应用。
本发明提供了原儿茶醛在制备预防或治疗过敏性休克的药物中的应用。
本发明提供的原儿茶醛用于预防或治疗休克时，通过注射途径给药。注射用制剂优选冻干粉针。
本发明所述的原儿茶醛在用于上述任一用途时，其使用剂量范围为25-500mg，优选剂量范围为25-250mg。
本发明提出的原儿茶醛可以由但不限于以下方法制得丹参碱液提取液经弱碱性树脂吸附，洗脱，洗脱液调PH值1-4，弱极性树脂酸性条件吸附，先用纯水或酸性水洗脱，再用低浓度醇洗脱，收集醇洗液，浓缩，冷却，静置，得到原儿茶醛结晶体，过滤，洗涤，干燥即得。
本发明人通过下列试验证实了在预防或治疗感染性休克、失血性休克、创伤性休克、心源性休克、过敏性休克中的应用，但作用不限于此。
具体实施例方式制备例1原儿茶醛的制备将药材丹参50kg用0.4％的氢氧化钠1200L溶液提取，获得含有原儿茶醛的提取液；提取液用盐酸调节至中性，用填充了弱碱性大孔吸附树脂D301M的吸附柱进行吸附，待吸附剂饱和后，用乙醇溶液50％(V/V)400L洗脱，用氢氧化钠水溶液0.4％(m/V)500L进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至约20L，用盐酸调至PH值为2，用填充了弱极性吸附剂AB-8的吸附柱进行酸性条件(预处理，处理好的树脂用盐酸溶液洗脱至洗脱液PH值为2)吸附，用纯水800L洗脱，再改用5％乙醇溶液洗脱800L，收集洗脱液，浓缩，得到浓缩液2L；冷却，静置，得到原儿茶醛结晶体，过滤，洗涤，干燥，得到原儿茶醛结晶体238g，经HPLC检测，纯度达到93％。
制备例2原儿茶醛的制备将药材丹参50kg用0.4％的氢氧化钠溶液1200L提取，获得含有丹参素的提取液；提取液用盐酸调节至中性，用填充了弱碱性大孔吸附树脂D301R的吸附柱进行吸附，待吸附剂饱和后，用乙醇溶液60％(V/V)450L洗脱，用氢氧化钠水溶液0.5％(m/V)600L进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至约10L，用盐酸调至PH值3，用填充了弱极性吸附剂AB-8的吸附柱进行酸性条件(处理好的树脂用盐酸溶液洗脱至洗脱液PH值为3)吸附，盐酸水溶液0.2％(V/V)750L洗脱，在改用10％乙醇溶液洗脱500L，收集洗脱液，浓缩，得到浓缩液1.5L，冷却，静置，得到原儿茶醛结晶体，过滤，洗涤，干燥，得到原儿茶醛结晶体196g，经HPLC检测，纯度达到96％。
制备例3制备注射用原儿茶醛冻干粉针称取25g原儿茶醛，加入注射用水2000ml，加入0.1％的针用活性炭85℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤，0.22um的微孔滤膜过滤；滤液分装于10ml西林瓶中，每支装量2ml，经冻干机冻干制成冻干粉针。
制备例4制备注射用原儿茶醛冻干粉针称取50g原儿茶醛，加入注射用水2000ml，加入0.1％的针用活性炭85℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤，0.22um的微孔滤膜过滤；滤液分装于10ml西林瓶中，每支装量2ml，经冻干机冻干制成冻干粉针。
实验例1 原儿茶醛对小鼠内毒素致死的影响试验1实验材料原儿茶醛按制备例1制备内毒素上海第二军医大学微生物教研室，批号040412二级昆明种小白鼠，体重19-21g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动(质)字20010603。
地塞米松磷酸钠注射液(天津药业涟水有限公司，规格5mg，批号030825)2实验方法与结果小鼠随机分为7组NS组、地塞米松组、静脉注射原儿茶醛100mg/kg组、50mg/kg组、20mg/kg组、10mg/kg组、5mg/kg组，每组20只，雌雄各半，每只小鼠静脉注射内毒素25mg/kg，随即各组给药，NS组给予同体积的NS，小鼠8小时后出现死亡，到48小时小鼠死亡停止，各组死亡率组间进行X2检验，进行统计学处理。
表1试验结果表明静脉注射原儿茶醛5mg/kg、10mg/kg(与NS组比较，P＜0.05)，静脉注射原儿茶醛20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg，能显著降低由内毒素所致小鼠死亡率(与NS组比较，P＜0.01)。
表1 原儿茶醛对小鼠内毒素致死的影响(n＝20)
与NS组比较，△P＜0.05；△△P＜0.01；实验例2 原儿茶醛对内毒素致大鼠休克的影响2.1材料原儿茶醛按制备例1制备PowerLab多导生理记录仪(澳大利亚ADI-Instrument公司生产)压力传感器(YP200型，河北高碑店新航机电设备有限公司，规格50g)内毒素上海第二军医大学微生物教研室，批号040412
Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-220g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动质字200106005号2.2实验方法与结果大鼠随机分为6组正常组、NS组、地塞米松组、静脉注射原儿茶醛50mg/kg组、25mg/kg组，10mg/kg组，每组10只，雌雄各半，体重，NS组给予同体积的NS。
动物称重后以3.5％戊巴比妥钠1.0ml/kg腹腔注射麻醉。分离一侧颈总动脉，作动脉插管，将动脉插管的另一端连接到装有三通阀的压力传感器上，压力信号经传感器输入PowerLab多导生理记录仪，记录正常的血压，随即静脉注射内毒素5mg/kg，120分钟后静脉注射各药，NS组给予同体积的NS，观察给内毒素后120-240min的血压变化，组间T检验，进行统计学处理。
表2试验结果表明静脉注射原儿茶醛50mg/kg能显著升高由内毒素所致休克大鼠的血压(与模型组比较，P＜0.01)，静脉注射原儿茶醛25mg/kg60-120min能显著升高由内毒素所致休克大鼠的血压(与NS组比较，P＜0.01)，静脉注射原儿茶醛25mg/kg 120-240min、10mg/kg60-120min能明显升高由内毒素所致休克大鼠的血压(与NS组比较，P＜0.05)。
表2 原儿茶醛对内毒素休克大鼠血压的影响(n＝10)
与NS组比较，△P＜0.05；△△P＜0.01；实验例3 原儿茶醛对重度烫伤引起损伤大鼠的影响3.1材料原儿茶醛按制备例1制备PowerLab多导生理记录仪(澳大利亚ADI-Instrument公司生产)压力传感器(YP200型，河北高碑店新航机电设备有限公司，规格50g)内毒素上海第二军医大学微生物教研室，批号020412Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-220g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动质字200106005号
3.2实验方法与结果大鼠80只，雌雄各半，取70只去毛，每只大鼠用80℃热水烫伤腰部以下肢体30s，造成深II度烧伤，复制大鼠重度烧伤休克模型。动物称重后以3.5％戊巴比妥钠1.0ml/kg腹腔注射麻醉。分离一侧颈总动脉，作动脉插管，将动脉插管的另一端连接到装有三通阀的压力传感器上，压力信号经传感器输入PowerLab多导生理记录仪，大鼠随机分为7组NS组、地塞米松组、静脉注射原儿茶醛50mg/kg组、25mg/kg组，10mg/kg组，5mg/kg组，2.5mg/kg组，NS组给予同体积的NS，另外10只作为正常对照组。
表3试验结果表明静脉注射原儿茶醛50mg/kg、25mg/kg、10mg/kg能显著升高重度烫伤休克大鼠的血压(与模型组比较，P＜0.01)，静脉注射原儿茶醛5mg/kg，2.5mg/kg组，能显著升高重度烧伤休克大鼠的血压(与模型组比较，P＜0.05)。
表3 原儿茶醛对重度烫伤休克大鼠血压的影响(n＝10)
与NS组比较，△P＜0.05；△△P＜0.01；实验例4 原儿茶醛对心源性休克大鼠的影响4.1材料原儿茶醛按制备例1制备盐酸阿霉素(针剂，10mg/瓶，上海华联制药厂，批号040712)卡托普利片(25mg/片，天津飞鹰制药有限公司，批号040213)美国BIC 16导生理记录仪(美国BIC公司生产)Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-220g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动质字200106005号4.2试验方法与结果大鼠80只，雌雄各半。取70只腹腔注射盐酸阿霉素2mg/kg，每周1次，共6周，随机分为7组，即NS组、卡托普利12.5mg/kg组、静脉注射原儿茶醛50mg/kg组、20mg/kg组、10mg/kg组、5mg/kg组，2.5mg/kg组，第6周起每日静脉给予各药物，给药7天。20％乌拉坦1.1g/kg腹腔注射麻醉，手术剥离气管并插管，同时游离出右侧颈总动脉，经其插入自制的心室插管(直径1mm，充满1％肝素)，描记血压曲线；再继续插入，使其通过左侧动脉瓣进入左心室，描记室内压曲线，自动分析处理左室收缩压(LVSP)，心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)，心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)和实测心肌最大收缩速度(Vpm)等数据。另取10只大鼠作为正常对照组，不给予盐酸阿霉素，其余操作同上述，组间T检验，进行统计学处理。
表4试验结果表明原儿茶醛5mg/kg，2.5mg/kg组组能升高由盐酸阿霉素导致的心衰大鼠的LVSP，+dp/dtmax，-dp/dtmax和Vpm的降低(与NS组比较，P＜0.05)；原儿茶醛10mg/kg、20mg/kg、50mg/kg能显著升高由盐酸阿霉素导致的心衰大鼠的LVSP，+dp/dtmax，-dp/dtmax和Vpm的降低(与NS组比较，P＜0.01)。
表4 原儿茶醛对慢性心衰大鼠心功能的影响(n＝10)
与NS组比较，△P＜0.05；△△P＜0.01试验例5 原儿茶醛对猫实验性心力衰竭的治疗作用5.1材料原儿茶醛按制备例1制备美国BIC 16导生理记录仪(美国BIC公司生产)电磁流量计(MFV-3200型)日本光电公司生产。
实验动物健康成年猫体重2.5～3.5kg，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。
5.2试验方法与结果将猫随机分为NS组(等容量溶剂)，静脉注射原儿茶醛25mg/kg组、10mg/kg组、5mg/kg组、2.5mg/kg组，1mg/kg组，每组6只。禁食12小时后，静脉注射戊巴比妥钠40mg/kg麻醉，气管插管，人工呼吸，监测主动脉压(AP)与心电图。左侧开胸，从心尖插导管至左心室，测左室压及其压力变化速度(±dP/dtmax)。将Waltan-Brodie应变弓植入左心室前壁，测定心肌收缩力。用电磁流量计测定升主动脉血流量。以升主动脉流量作为心输出量(CO)，计算心脏指数(CI)，每搏指数(SI)，每搏作功(SW)，左心作功(LVW)。各项参数记录于BIC生理记录仪。术后半小时，各项参数达到稳定。从股静脉恒速输注戊巴比妥钠(0.5ml/kg·min)，以±dP/dtmax下降到约1000mmHg/s为主要指标形成急性心力衰竭。待心衰模型稳定后，各组动物静脉滴注(用输液泵注射)相应药物(给药体积10ml，30min滴完)。组间T检验，进行统计学处理。
表5 原儿茶醛对心力衰竭猫心脏作功的影响(n＝6，
)
与给药前比较*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较@P＜0.05，@@P＜0.01；结果如表5所示，滴注不同剂量原儿茶醛可增加心衰猫的SW与LVW，与模型对照组比较有显著性差异。
表6 原儿茶醛对心力衰竭猫心输出量的影响(n＝6，
)
与给药前比较*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较@P＜0.05，@@P＜0.01；
结果如表6所示，滴注不同剂量原儿茶醛可增加心衰猫的心输出量，与模型对照组比较有显著性差异。
实验6 原儿茶醛对对失血性休克大鼠的影响6.1材料原儿茶醛按制备例1制备盐酸肾上腺素注射液(规格1ml/1mg，上海禾丰制药有限公司，批号040719)PowerLab多导生理记录仪(澳大利亚ADI-Instrument公司生产)压力传感器(YP200型，河北高碑店新航机电设备有限公司，规格50g)Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-220g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动质字200106005号6.2实验方法与结果休克模型制备将大鼠腹腔注射20％乌拉坦(1.1g/kg)麻醉后，背位固定，剪颈部毛后，切开颈部皮肤，分离双侧颈动脉，一侧颈动脉插管连接压力换能器，记录血压连接肢体导联，另一侧颈动脉放血至平均动脉压血压降至40mmHg左右，并维持血压10min，确定休克模型成立。大鼠随机分为6组NS组、盐酸肾上腺素0.1mg/kg组、静脉注射原儿茶醛50mg/kg组、20mg/kg组、10mg/kg组、5mg/kg组，2.5mg/kg组，每组10只，雌雄各半，休克模型成立后10分钟，静脉注射不同剂量的药物或生理盐水，盐酸肾上腺素组皮下注射，给药完毕后，观察120min内平均动脉压变化。另外10只大鼠作为正常对照组，组间T检验，进行统计学处理。
表7试验结果表明原儿茶醛5mg/kg，2.5mg/kg组能升高失血性休克大鼠的血压(与NS组比较，P＜0.05)；原儿茶醛50mg/kg组、20mg/kg组、10mg/kg组能显著升高失血性休克大鼠的血压(与NS组比较，P＜0.01)。
表7 原儿茶醛对失血性休克大鼠血压的影响(n＝10)
与NS组比较，△P＜0.05；△△P＜0.01；
实验7 原儿茶醛对过敏性休克大鼠的影响7.1材料原儿茶醛按制备例1制备盐酸肾上腺素注射液(规格1ml/1mg，上海禾丰制药有限公司，批号040719)动物豚鼠(guineapig)，体重150-320g健康豚鼠山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供供体马血清(donorequineserum，DES)，购自哈尔滨医科大学新生物技术公司7.2试验方法与结果取豚鼠140只，雌雄各半，随机分为7组NS组、盐酸肾上腺素0.1mg/kg组、静脉注射原儿茶醛50mg/kg组、20mg/kg组、10mg/kg组、5mg/kg组，2.5mg/kg组，各组动物均以10％马血清生理盐水溶液0.1mL心腔注入致敏，致敏15后，再以马血清纯液1mL心腔内注入攻击致休克，攻击后，各组立即分别给药，马血清攻击30s左右，模型组大多数动物先后出现咳嗽，呼吸困难，鼻翼扇动，四肢软弱无力等症，继之可见惊厥，竖毛，前爪抓嘴，呼吸更加困难，四肢无力，倒下挣扎，皮肤黏膜紫绀，角膜反射消失，最后大多数在10min内呼吸和心跳停止而死亡，统计各组死亡情况，根据死亡率作X2检验，结果见表8。
表8 原儿茶醛对过敏性休克大鼠的影响
结果表明静脉注射原儿茶醛2.5mg/kg、5mg/kg(与NS组比较，P＜0.05)，静脉注射原儿茶醛10mg/kg、20mg/kg、50mg/kg能显著降低由马血清所致小鼠死亡率(与NS组比较，P＜0.01)。
权利要求
1.儿茶醛在制备预防或治疗休克的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其在制备预防或治疗感染性休克的药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其在制备预防或治疗失血性休克的药物中的应用。
4.根据权利要求1所述的应用，其在制备预防或治疗创伤性休克的药物中的应用。
5.根据权利要求1所述的应用，其在制备预防或治疗心源性休克的药物中的应用。
6.根据权利要求1所述的应用，其在制备预防或治疗过敏性休克的药物中的应用。
7.根据权利要求1-6任一所述的应用，原儿茶醛用于预防或治疗休克时，通过注射途径给药。
8.根据权利要求1-6任一所述的应用，原儿茶醛以注射给药的剂型存在。
9.根据权利要求8所述的应用，优选为冻干粉针。
10.权利要求1-6任一所述的应用，其使用剂量范围为25-500mg。
全文摘要
本发明提供了原儿茶醛的医药新用途，具体地提供了其在预防或治疗休克中的应用，提供了在感染性、失血性、创伤性、心源性或过敏性休克中的应用。
文档编号A61K9/19GK1951376SQ20051004499
公开日2007年4月25日 申请日期2005年10月21日 优先权日2005年10月21日
发明者蒋王林, 岳喜典, 曲桂武 申请人:山东绿叶天然药物研究开发有限公司