专利名称：流感病毒活体外快速结合转化滴鼻液制取方法
技术领域：
流感病毒活体外快速结合转化滴鼻液制取方法是根据存在于马齿苋体内的半乳糖醛酸具有结合磷脂、胆固醇、蛋白质、糖蛋白、核酸生成易溶于水的半乳糖醛酸苷的生物学功能与病毒特性、流感病毒囊膜、核衣壳结构及其化学组成、理化性质综合研制的生物化学技术。
背景技术：
目前，市售的各类抗流感病毒药物的生产技术先进、治疗效果显著，但所有的抗流感病毒药物必须要先进入机体方能产生相应的抗体或在血液中提高干扰素的水平。为了要达到高速、高效地中和流感病毒的目的，必须要大剂量的使用，这就注定给机体带来相当大的毒副作用，而且对流感病毒的侵染几乎不起防护作用。
发明内容
一、机理马齿苋是一年生肉质草本植物，丰富的粘液是循环体液。粘液中富含半乳糖醛酸，多以钙、镁离子的形式存在。半乳糖醛酸是强极性结合物质，分子内含有一个羧酸根负离子基团，能与含带正电荷离子基团的化合物形成离子键；分子内含有一个半缩醛羟基很活泼，能与含有羟基、羧基、氨基、硫氢基、硫酚基、酚基的化合物结合生成易溶于水的、无毒的半乳糖醛酸苷分子。
流感病毒在活体外只具有一般大分子特性。流感病毒结构是最外层囊膜，次外层蛋白质，核心是核酸。流感病毒囊膜由内向外可分为内膜蛋白、类脂和糖蛋白三层。糖蛋白层由两种糖蛋白刺突组成，一种是血凝素，一种是神经氨酸酶。糖蛋白的糖基部分是由半乳糖、甘露糖、岩藻糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、葡萄糖、唾液酸等结合的多糖。该糖基侧链与肽链N末端片段上的苏氨酸、丝氨酸、天门冬酰氨以糖苷键相互结合成为糖蛋白大分子。
血凝素N末端有一个疏水区，是流感病毒侵入宿主细胞的必须结合部位。血凝素是由3条糖基多肽链以非共价形式聚合成的三聚体。也就是说三聚体的3条糖基多肽链之间是以弱的次级键相互吸引的。用强极性半乳糖醛酸分子接触三聚体时，3条糖基多肽链之间的次级键发生断裂，糖基多肽链上自由的羟基，氨基极性基团与半乳糖醛酸分子的半缩醛羟基脱水缩合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷糖基多肽链。三聚体发生变构、质变。没有了N末端的疏水区，失去与宿主细胞受体糖蛋白结合的部位，不能进行吸附。
神经氨酸酶是由4条相同的糖基多肽链组成的蘑菇状四聚体，具有酶活性。同样神经氨酸酶4条糖基多肽链之间也是以弱的次级键相互吸引的。用强极性的半乳糖醛酸接触四聚体时，4条糖基多肽链之间的次级键发生断裂，糖基多肽链上的自由羟基、氨基极性基团与半乳糖醛酸分子的半缩醛羟基脱水缩合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷糖基多肽链。四聚体发生变构、质变，导致神经氨酸酶失活。
(反应式见说明书第6页(1))类脂层是双分子层结构，它来自宿主细胞膜或核膜。在双层膜结构中，蛋白质约占52％。在双分子层中的蛋白质有两种，一种是外周蛋白，一种是结构蛋白。两种蛋白质的亲水基团都浮露在双分子层外部，N末端露在双分子外侧层，C末端露在双分子内侧层。用强极性半乳糖醛酸接触蛋白质分子时，亲水的氨基、羧基、羟基与半乳糖醛酸分子的半缩醛羟基脱水缩合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子多肽链。
(反应式见说明书第7页(2))在双分子层膜结构中，脂质约占40％，其中磷脂约占脂质的60％，还有少量胆固醇。在双分子层中的磷脂有两种，一种是磷脂酰胆碱，一种是丝氨酸磷脂。两种磷脂在内外侧层均有分布。外侧层磷脂酰胆碱数量多；内侧层丝氨酸磷脂数量多。用强极性半乳糖醛酸接触双层磷脂分子，磷脂分子极性头部带正电荷的氨基与半乳糖醛酸分子上的带负电荷的羧酸根相互吸引形成离子键，生成易溶于水的磷脂半乳糖醛酸盐。胆固醇第3号位上有一个自由羟基，与半乳糖醛酸分子中的半缩醛羟基脱水缩合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子胆固醇。
(反应式见说明书8页(3)、(4))内膜蛋白是包围在病毒核蛋白外的一层膜六结构，介于核蛋白与类脂双层膜之间，与脂质双分子层的外周蛋白以弱的次级键相互吸引，用强极性的半乳糖醛酸接触内膜蛋白结构时，内膜蛋白与外周蛋白之间的次级键发生断裂，自由的羟基、氨基极性基团与半乳糖醛酸分子上的半缩醛羟基脱水缩合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子多肽链。
(反应式见说明书第7页(2))流感病毒的蛋白质卷曲螺旋包绕着螺旋形RNA，该蛋白质中有三种分子量较大的蛋白质P1、P2、P3蛋白，均为RNA多聚酶，此酶与RNA转录有关，其它均为核蛋白。核蛋白是核酸和组蛋白结合的复合体。组蛋白是碱性蛋白质，富含丝氨酸、精氨酸两种碱性氨基酸，带有自由氨基。在核酸外的蛋白质呈螺旋状有规律地排列，各亚基之间靠二硫键、疏水键等次级键相互吸引形成稳定的空间结构。用强极性的半乳糖醛酸分子接触核蛋白时，各亚基间的二硫键、次级键发生断裂，同时，维系亚基分子内三级结构的各次级键也发生断裂，自由的氨基、羟基、羧基极性基团与半乳糖醛酸分子的半缩醛羟基脱水缩合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子多肽链，从螺旋状的核酸分子表面一条条地脱落下来，RNA多聚酶也变构失活。
(反应式见说明书第7页(2))流感病毒核酸为单股负链RNA。在流感病毒RNA中含腺苷酸23％、鸟苷酸20％、胞苷酸24％、尿苷酸23％。用强极性的半乳糖醛酸接触裸露的RNA链时，RNA的二级结构之间的氢键发生断裂，各碱基分子的自由氨基与半乳糖醛酸分子上的半缩醛羟基脱水缩合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子RNA链。流感病毒RNA发生质变，丧失遗传功能。
(反应式见说明书第9页(5))流感病毒血凝素N末端有一个疏水区是病毒侵入宿主细胞的结合部位。流感病毒的受体是糖蛋白，存在于敏感动物红血细胞及粘膜细胞表面。既然血凝素N末端有一个疏水区是结合部位，那么在粘膜细胞表面也一定有一个疏水区的空间结构，而且两个疏水区具有相同的烃基组成，烃基分子间又必须在分子结构上构成互补，才能形成疏水键，达到病毒与宿主细胞结合的目的。用强极性半乳糖醛酸接触粘膜细胞表面，受体糖蛋白分子上的自由氨基、羟基极性基团与半乳糖醛酸分子上的半缩醛羟基脱水缩合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷糖基多肽链。受体糖蛋白的空间构象发生严重的改变，血凝素与宿主细胞失去结合位点，无法进行吸附，阻断和关闭病毒进入细胞的途径。
已经侵入宿主细胞的流感病毒，其子代会以芽生的形式从鼻腔、口腔粘膜表面释放出来，此时鼻腔、口腔粘膜表面的受体糖蛋白已经被结合成为半乳糖醛酸苷糖基多肽链，病毒丧失结合部位，另外，在鼻腔、口腔中过剩的半乳糖醛酸分子会在粘膜表面将释放出的病毒子代逐一结合转化成半乳糖醛酸苷分子，溶于水，使其无法进行再侵染和传播。
RNA基因片段不同的序列组合，导致流感病毒血凝素和神经氨酸酶活性部位的频繁改变，进而产生不同抗原类型的流感病毒，甚至有些病毒使人群在长期生命过程中积累的特异性免疫功能失去效力，严重危害生命。
从理论上讲，RNA基因片段无论是怎样的组合方式，也无论怎样与外来基因片段发生重组，RNA只有A、U、G、C四种碱基是固定不变的，它也只能转录、合成出二十几种氨基酸。因此，各种流感病毒糖蛋白上的自由羟基、氨基、羧基都会与强极性的半乳糖醛酸分子结合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子糖基多肽链，丧失与宿主细胞结合的部位。
综合分析和理论推断；SARS病毒和禽流感病毒也是囊膜和核蛋白结构，也是与粘膜受体糖蛋白结合，侵入宿主细胞。然而，粘膜细胞受体糖蛋白的糖基序列和氨基酸序列是固定不变的；不断变化的只是病毒糖蛋白的氨基酸序列。用强极性半乳糖醛酸覆盖结合转化口腔、鼻腔粘膜受体糖蛋白，使之生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子糖基多肽链结构。当SARS病毒或禽流感病毒进入口腔、鼻腔时，第一没有结合位点；第二会被鼻腔、口腔中过剩的半乳糖醛酸分子迅速结合转化，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子，如此，病毒与宿主细胞双双丧失结合能力，无法侵染与传播，达到在活体外摧毁SARS病毒和禽流感病毒的理想目的。
二、滴鼻液制取方法6-10月间采收野生马齿苋，用剪刀剪下马齿苋地上部分，摘去有溃烂和创伤的枝叶，在实验台上轻轻磕下马齿苋种子，收集起来，随时可以在温室里播种。将马齿苋植株用剪刀剪成约5厘米的小段，用清水冲净马齿苋表面的尘土，将洗净的马齿苋装入一个40目的尼龙纱网袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面清水。将实验用具全部用75％酒精杀菌处理，取一个不锈钢盆倒入75％酒精约1000毫升，将洗净的马齿苋植株放入酒精盆中，杀菌10秒钟，取出装入40目尼龙纱网袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面的酒精，放入一个瓷盘中，称取马齿苋2000克，用榨汁机(九阳牌)榨取马齿苋汁液，将榨出的汁液倒入双层尼龙绸布袋中，放入不锈钢盆中，用左手抓紧布袋口，右手用不锈钢饭勺在布袋上来回推挤，随时将挤压出的汁液倒入另一个不锈钢盆中，将汁液倒入离心管中4000转/分，离心5分钟，取上清液倒入磨口瓶中，盖紧盖子，瓶口再用塑料膜覆盖，用皮筋扎紧，勿使染菌，1℃冰箱存放，2000克马齿苋植株可制取200毫升马齿苋滴鼻液。
采收的鲜马齿苋植株用清水和酒精处理后，可以放入-10℃以下冰箱存放备用。该技术、原料丰富、无毒可食、成本低、工艺简单、无污染产生、符合环保和绿色医药要求。
具体实施例方式
马齿苋滴鼻液适用于健康人和流感患者，无毒、无副作用。
1、健康人使用方法从冰箱取出马齿苋滴鼻液，倒入表面皿8毫升，立即用75％酒精棉签擦干净磨口瓶内外瓶口，盖紧盖子，用塑料膜和皮筋扎紧，放入冰箱，用注射器(不加针头)抽取表面皿中的滴鼻液，仰头慢慢滴入双鼻孔中2毫升，仰头1分钟，让滴鼻液顺鼻腔流到咽部，咽下，取2毫升涂抹在脸上，杀菌、护肤，将注射器中剩余的部分滴入口中，用此液刷牙处理1分钟(马齿苋无毒，有杀菌、抑菌功能，半乳糖醛酸是羧酸盐，有乳化、净化作用，强似牙膏。)，每4天处理一次，可以有效地预防流感病毒。
2、流感患者使用方法与上述处理方法相同，取10毫升滴鼻液，滴入双鼻孔2毫升，鼻腔内的清鼻涕在10秒钟内可吸收干净并立即恢复通气，且再无清鼻涕产生，连续处理两次，取2毫升涂抹在脸上，特别是鼻孔周围，剩余的滴鼻液滴入口中，刷牙、漱口，每天处理3次，3日内恢复健康。
(1)糖蛋白分子与半乳糖醛酸分子结合反应如下
(2)蛋白质分子与半乳糖醛酸分子反应如下
(3)磷脂与半乳糖醛酸反应如下 (4)胆固醇与半乳糖醛酸分子的半缩醛羟基脱水缩合，生成半乳糖醛酸苷分子胆固醇如下 半乳糖醛酸苷分子胆固醇
(5)半乳糖醛酸分子上的半缩醛羟基与RNA分子碱基上的自由氨基脱水缩合，生成半乳糖醛酸苷分子RNA
权利要求
1.滴鼻液制取方法6-10月间采收野生马齿苋，用剪刀剪下马齿苋地上部分，摘去有溃烂和创伤的枝叶，在实验台上轻轻磕下马齿苋种子，收集起来，随时可以在温室里播种。将马齿苋植株用剪刀剪成约5厘米的小段，用清水冲净马齿苋表面的尘土，将洗净的马齿苋装入一个40目的尼龙纱网袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面清水。将实验用具全部用75％酒精杀菌处理，取一个不锈钢盆倒入75％酒精约1000毫升，将洗净的马齿苋植株放入酒精盆中，杀菌10秒钟，取出装入40目尼龙纱网袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面的酒精，放入一个瓷盘中，称取马齿苋2000克，用榨汁机(九阳牌)榨取马齿苋汁液，将榨出的汁液倒入双层尼龙绸布袋中，放入不锈钢盆中，用左手抓紧布袋口，右手用不锈钢饭勺在布袋上来回推挤，随时将挤压出的汁液倒入另一个不锈钢盆中，将汁液倒入离心管中4000转/分，离心5分钟，取上清液倒入磨口瓶中，盖紧盖子，瓶口再用塑料膜覆盖，用皮筋扎紧，勿使染菌，1℃冰箱存放，2000克马齿苋植株可制取200毫升马齿苋滴鼻液。采收的鲜马齿苋植株用清水和酒精处理后，可以放入-10℃以下冰箱存放备用。该技术、原料丰富、无毒可食、成本低、工艺简单、无污染产生、符合环保和绿色医药要求。
全文摘要
流感病毒活体外快速结合转化滴鼻液制取方法是根据存在于植物体内的半乳糖醛酸具有结合磷脂、胆固醇、蛋白质、糖蛋白、核酸生成易溶于水的半乳糖醛酸苷的生物学功能与病毒特性、流感病毒结构、化学组成综合研制的生化技术。实验证明该技术在流感高发生期间和区域内能有效地防止流感病毒的侵染；已经被感染的患者10秒钟内可将鼻腔内的清鼻涕吸收干净，且12小时内干燥成痂，3日内恢复健康。该发明解决了在鼻腔内快速结合转化摧毁流感病毒和阻断、关闭流感病毒侵染途径的问题。该技术原料丰富、无毒可食、成本低、工艺简单、无污染、符合环保和绿色医药要求。
文档编号A61P31/16GK1843391SQ200510065460
公开日2006年10月11日 申请日期2005年4月8日 优先权日2005年4月8日
发明者王丽华, 何金荣, 韩文樵, 于合月, 于一鸣, 于敏 申请人:王丽华, 何金荣, 韩文樵