专利名称：一种治疗缺血性脑中风的药物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗缺血性脑中风的药物，具体地说是以中草药为原料制备的中成药，本发明还涉及该药物的制备方法。
背景技术：
缺血性脑中风是中国发病率较高的一种脑血管疾病，总发病率为千分之二，死亡率、致残率均相当高。目前临床上常见的治疗方法是溶栓。由于该方法药物很难通过头部血脑屏障，进入受损的脑组织而发挥效用。因而大多数缺血性脑中风病人需采用开颅手术，但这种手术治疗的方法仅对百分之二的患者有效。
从治疗缺血性脑中风的药物来看，种类很多，但从另一方面也可看出，缺血性脑中风还没有真正含义上的特效药，很难说有某一类药物对所有的缺血性脑中风病人都有良效，因此医药部门都在大力开展研究，希望能开发出疗效果更好的药物。
发明内容本发明的目的在于提供一种针对性强，治疗缺血性脑中风疗效好，毒性低，服用方便的纯中药制剂。
本发明药物是由下列原料制成的(用量为重量份)栀子2000-12000份广霍香2000-12000份川芎2000-12000份麝香30-150份。
本发明药物中各原料的重量配比可以是栀子2000份 广霍香5000份 川芎12000份 麝香100份。
本发明药物中各原料的重量配比可以是栀子2500份 广霍香2500份 川芎2500份 麝香40份。
本发明药物中各原料的重量配比可以是栀子5000份 广霍香12000份 川芎2000份 麝香60份。
本发明药物中各原料的重量配比可以是栀子8000份 广霍香2000份 川芎12000份 麝香130份。
本发明药物中各原料的重量配比可以是栀子10000份 广霍香6000份 川芎6000份 麝香38份。
本发明药物中各原料的重量配比可以是栀子10000份 广霍香6000份 川芎6000份 麝香38份。
本发明的中药制剂可以是药剂学上可接受的任意口服剂型。
将上述各原料制成合剂的生产方法是(1)川芎，广藿香提取挥发油，备用；(2)步骤(1)药渣水提醇沉；
(3)栀子乙醇回流；(4)川芎、广藿、栀子提取物合并，加入人工麝香、挥发油、加水调整至一定体积，加入甜味剂，调pH值，灌装，灭菌，即得。
将上述各原料制成颗粒剂的生产方法是(1)川芎，广藿香提取挥发油，挥发油包结备用；(2)步骤(1)药渣水提醇沉；(3)栀子加乙醇回流提取；(4)挥发油包结物、药材提取物细粉以及人工麝香、甜味剂加适量糊精混匀，制粒，干燥，整粒，分装即得。
本药品以浸膏为例的药效学实验如下该浸膏主治缺血性脑中风，根据治疗缺血性脑中风的主要药效研究要求选做相关试验，试验结果摘要如下1.该浸膏对大脑中动脉血栓(Middle Cerebral Artery Thrombosis，MCAT)模型大鼠神经症状及脑梗塞范围的影响试验采用了三氯化铁致大脑中动脉血栓形成大鼠模型，造模后MCAT大鼠神经症状评定的结果显示除假手术组未见行为异常改变，MCAT模型组大鼠在术后6h，24h均出现偏瘫样症状，主要表现为手术对侧前肢内收，肩内旋，前肢肌张力降低，肩抗力下降。除该浸膏0.6、0.3g/kg组在术后6h神经症状改善不明显外，该浸膏各剂量组与安宫牛黄丸组的大鼠在术后6h，24h其神经症状均有不同程度的改善(P＜0.01，P＜0.05＝。该浸膏各剂量组、安宫牛黄丸300mg/kg组的大鼠梗塞程度明显减轻，与模型组相比具有显著差异(P＜0.01，P＜0.05＝。
2、该浸膏对MCAT大鼠脑组织含水量的影响大鼠造模后24h，手术侧脑组织含水量明显增加，该浸膏1.2、0.6g/kg组、安宫牛黄丸0.3g/kg组的大鼠手术侧脑含水量变化率明显少于模型组，与模型组相比具有显著差异(p＜0.05)。
3、该浸膏对MCAT大鼠脑组织形态的影响脑组织病理形态学观察显示，MCAT模型组大鼠损伤侧脑皮层梗塞灶明显，细胞数量明显减少，细胞呈萎缩变形。该浸膏150、0.6g/kg组大鼠损伤侧皮质梗塞灶内细胞数量显著增加，且出现胶质细胞；该浸膏0.3g/kg组大鼠损伤侧皮质同模型组。图像分析表明该浸膏150、0.6g/kg组阳性细胞面密度增大，结合病理照片说明给药组可使神经细胞损失减少，存活细胞数量相对于模型组为多，提示本药具有减轻脑缺血所至的神经损伤作用。
4、该浸膏对MCAT大鼠脑组织乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量的影响大鼠经凝闭大脑中动脉后，其LD、LDH、SOD、MDA均有明显变化，模型组大鼠LD、MDA含量明显高于假手术组，LDH、SOD明显低于假手术组，该浸膏1.2、0.6g/kg可明显降低大鼠手术侧大脑的LD含量，升高SOD、LDH含量(P＜0.05，P＜0.01)。提示本药保护脑组织的作用，与改善脑组织能量代谢，抗自由基损伤有关。
5、该浸膏对MCAT大鼠凝血因子的影响该浸膏各剂量可明显延长MCAT大鼠TT、PT、APTT(P＜0.01，p＜0.05)。
6、该浸膏对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑保护作用采用插线法致局灶性脑缺血再灌注大鼠模型，通过对模型大鼠脑梗塞范围的测定，研究该浸膏对模型大鼠的保护作用。结果显示，术后24h，除假手术组未见脑组织异常改变外，模型组、给药组大鼠均有不同程度梗塞灶，该浸膏各剂量组、安宫牛黄丸300mg/kg组的大鼠梗塞程度明显减轻，与模型组相比具有显著差异(P＜0.01，P＜0.05＝。
7、该浸膏对急性血瘀大鼠血液流变学的影响该浸膏1.2、0.3g/kg可明显降低血瘀症大鼠全血高切粘度(与模型组比较p＜0.05＝，该浸膏0.3g/kg还可明显降低血瘀症大鼠全血中、低各剂量组大鼠切粘度(与模型组比较p＜0.05＝；该浸膏各剂量组可明显增加血液红细胞变形性、该浸膏0.3g/kg可明显降低红细胞聚集性降低，与模型组比较p＜0.05；说明该浸膏对急性应激造成的大鼠血瘀症状有明显的改善作用。
8、该浸膏对双侧颈总动脉结扎(Communal Carotid Artery Occlosion，CCAO)大鼠脑毛细血管通透性的影响双侧颈总动脉结扎造成脑缺血6小时后，模型组大鼠脑组织中伊文思兰(EB)含量明显高于假手术组，给药组EB含量明显低于模型组。说明双侧颈总动脉结扎缺血6小时，可使脑血管对EB通透性明显加大；该浸膏可使缺血造成的血管通透性增加明显减轻，与模型组比较有显著意义(P＜0.05或P＜0.01)。
9、该浸膏对麻醉犬脑血流量等指标的影响该浸膏各剂量组灌胃给药90分钟后犬颈内动脉血流量、颈动脉血压增加，血管阻力下降，该浸膏0.6g/kg灌胃给药90分钟至150分钟，该浸膏0.3、0.15g/kg灌胃给药后90、120分钟变化率与对照组相比均有显著意义(P＜0.05或P＜0.01)。
10、该浸膏对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响该浸膏1.2、0.6g/kg可明显降低血栓湿重，该浸膏1.2g/kg可明显降低血栓干重，与模型组比较p＜0.05，p＜0.01。
11、该浸膏对大鼠血小板聚集性的影响该浸膏3个剂量组对胶原所诱导的血小板聚集均有不同程度的抑制作用(P＜0.05；P＜0.01)，但对ADP诱导诱导的血小板聚集作用不明显。
12、该浸膏口服给药后含药血清体外溶栓作用该浸膏1.2g/kg、0.3g/kg口服给药，其含药血清有明显溶栓作用，溶栓率在10.74％～19.65％，与对照组相比P＜0.01。
目的该浸膏为人工麝香、栀子、猪胆粉、三七、川芎、冰片组成的中药复方制剂，其功效为醒神开窍、解毒通络。临床适用于脑栓塞急性期与恢复早期。根据研究目的，参考《新药审批办法》和《中药新药研究指南》要求(1，2)，拟采用三氯化铁致大鼠大脑中动脉血栓形成缺血损伤模型、双侧颈总动脉结扎所致急性脑缺血模型，观察该浸膏对急性脑缺血的保护作用。并通过麻醉犬血流动力学研究，大鼠血液流变学研究、抗栓、溶栓试验以及对血小板聚集性、凝血因子的影响初步分析其作用机理，为本品主治缺血性脑中风提供药理实验依据。该浸膏与功能主治有关的药效学研究一、该浸膏对大脑中动脉血栓(Middle Cerebral ArteryThrombosis，MCAT)模型大鼠神经症状及脑梗塞范围的影响实验材料1.药品与试剂受试药该浸膏由北京中医药大学实验药厂提供。批号批号20021129。，用饮用水配制。
阳性对照药安宫牛黄丸北京同仁堂制药厂生产，口服，1次/日，1丸/日，每丸含生药3g。功效清热解毒，镇惊开窍。批号1010383。
试剂与药品FeCl3·6H2O(A.R.)，北京化工厂产品，用1mol/L盐酸配制；红四氮唑(TTC)，北京化工厂产品，批号960307。
2.动物SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK 11-00-0008。
3.仪器XTT实体显微镜，北京电光科学仪器厂产品；SHZ-22型恒温水浴振荡器，江苏太仓医疗器械厂产品；AEG-220型电子分析天平，日本岛津仪器公司产品。
方法与结果1.分组及给药将大鼠随机分为六组，即假手术对照组、MCAT模型组、该浸膏0.3g/kg、0.6g/kg、1.2g/kg组(分别相当于人用量的3倍、6倍、12倍)、安宫牛黄丸300mg/kg组(相当人用量的6倍)，每组12～13只。灌胃给药，一日一次，给药三次后一小时造模，造模后再给药一次，假手术对照组、MCAT模型组给予等量的饮用水(1ml/100g体重)。
2.造模方法大鼠腹腔注射12％水合氯醛溶液(30.6g/kg)麻醉。按Tamura(3)等的方法，稍加改进。大鼠右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，长约1.5cm，夹断颞肌并切除，暴露颞骨，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处靠近口侧1mm处作一直径2.5mm骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉(位于嗅束及大脑下静脉之间)。置一小片中空塑料薄膜保护血管周围组织。将吸有50％氯化铁溶液10μl的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上(4)，30min后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。假手术组，除不滴加氯化铁溶液外，其余手术步骤同模型组。
3.MCAT大鼠神经症状的评定在术后不同时间(6h，24h)，按Bederson等(5)的方法并加以改进，对动物进行行为评分。1.提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或既有腕肘的屈曲又有内旋者，记为1分。2.将动物置于平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力者记为0分；如向手术对侧推动时阻力下降者，记为1分。3.将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。双侧肌张力对等且有力者为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。4.提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停地向手术对侧旋转者，记为1分；否则，记为0分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高，动物的行为障碍越严重。对行为检测打分值进行组间比较，t检验。结果见表1-1。
表1-1该浸膏对MCAT大鼠神经症状的影响(X±SD)
注各组与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
结果显示，假手术组未见行为异常改变，MCAT模型组大鼠在术后6h，24h均出现偏瘫样症状，主要表现为手术对侧前肢内收，肩内旋，前肢肌张力降低，肩抗力下降。除该浸膏0.6、0.3g/kg组在术后6h神经症状改善不明显外，该浸膏各剂量组与安宫牛黄丸组的大鼠在术后6h，24h其神经症状均有不同程度的改善(P＜0.01，P＜0.05)。
4.MCAT大鼠脑梗塞范围的测量动物经末次行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部份在4℃下冠状切成5片。迅速将脑片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％TTC 1.5ml，1M K2HPO40.1ml)，37℃避光温孵30分钟，再取出，置于10％甲醛液中避光保存。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色(6)。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量的百分比作为脑梗塞范围。结果进行组间比较，t检验。结果见表1-2。
表1-2该浸膏对MCAT大鼠脑梗塞范围的影响(X±SD)
注各组与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
结果显示，术后24h，除假手术组未见脑组织异常改变外，模型组、给药组大鼠均有不同程度梗塞灶，该浸膏各剂量组、安宫牛黄丸300mg/kg组的大鼠梗塞程度明显减轻，与模型组相比具有显著差异(P＜0.01，P＜0.05)。
二、该浸膏对MCAT大鼠脑组织含水量的影响实验材料1.药品与试剂受试药、阳性对照药同试验一。
2.动物SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK 11-00-0008。
3.仪器XTT实体显微镜，北京电光科学仪器厂产品；AEG-220型电子分析天平，日本岛津仪器公司产品；Df-206型鼓风干燥箱，北京西城医疗器械厂产品。
方法与结果分组、给药及手术同试验1。术后24小时断头取脑，左右分开，用滤纸吸干表面水分，分别称量左右脑湿重。再置于烘箱中，105℃烘烤48小时至恒重，精确称量干重，计算含水量(7)，并以此计算右侧半脑肿胀率，与模型组比较，进行t检验。结果见表2-1。
表2-1该浸膏对MCAT大鼠脑组织含水量变化率的影响(X±SD)
注与模型组相比**P＜0.01，*P＜0.05；结果显示，术后24h，假手术组未见左右两侧大脑含水量异常改变，模型组大鼠手术侧脑组织含水量明显增加，该浸膏1.2、0.6g/kg组、安宫牛黄丸0.3g/kg组的大鼠手术侧脑含水量变化率明显少于模型组，与模型组相比具有显著差异(p＜0.05)。
三、该浸膏对MCAT大鼠脑组织形态的影响实验材料1.药品与试剂受试药、阳性对照药同试验一2.动物SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合大剂量组的药理作用大大强于胶囊剂。
表1本发明对大鼠局部脑缺血损伤的影响(x±SD，n＝10)
与模型对照组比较；*P＜0.05 **P＜0.01，二、对大鼠体内血栓形成的影响取大鼠50只，随机分为空白对照组(PEG400)，原发明胶囊组(1.6g生药/kg)，本发明微丸小剂量组(1.0g生药/kg)、本发明微丸中剂量组(1.6g生药/kg)、本发明微丸大剂量组(3g生药/kg)，每组10只。连续灌胃给药3天，第2天给药后禁食16小时，末次给药90分钟后，水合氯醛麻醉(360mg/kg，ip)，分离右侧颈总动脉及左颈外静脉，在聚乙烯管中放入一根长5cm已称重的七号丝线。以含肝素钠(50U/ml)的生理盐水溶液充满聚乙烯管，聚乙烯管的一端插入左颈外静脉，另一端插入右颈总动脉。打开夹闭血管的动脉夹，使血流从右总颈动脉流经聚乙烯管后，返回左颈外静脉。开放血流15min后立即取出棉线称重，减去丝线重量即得血栓湿重。
数据以x±SD表示，并与空白对照组比较，T-test检验。
表2本发明对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响(x±SD，n＝10)
与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01与本发明胶囊比较#P＞0.05结果如表2所示，开放血流15min后丝线上有明显的血栓黏附，原发明胶囊组、本发明微丸组均可明显抑制血栓的形成，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)；本发明微丸小剂量组与原发明胶囊组作用强度相当(P＞0.05)；而中剂量组、大剂量组的药理作用大大强于胶囊剂。
2.动物SD大鼠，雌雄各半，体重230-250g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号为SCXK(京)2002-0003。
3.仪器XTT实体显微镜，北京电光科学仪器厂生产；恒温水浴振荡器SHZ-22型，江苏大仓医疗器械厂生产；电子分析天平，AEG-220型，日本岛津产；722型分光光度计，上海第三分析仪器厂生产；400R低温离心机，德国Heraeus产品。
方法与结果分组、给药、手术方法同实验一。造模后24小时断头取脑，去小脑、嗅球及低位脑干，取手术侧大脑，加9倍生理盐水制备10％脑匀浆，至-20℃冰箱冻存备用。
1.乳酸(LD)的测定将10％脑匀浆，4000rpm离心10min，取上清20μl，按LD测定试剂盒说明测定LD含量。取上清50μl用双缩脲法测定蛋白含量。计算每克蛋白中含SOD的含量。结果见表4-1。
2.乳酸脱氢酶(LDH)的测定将10％脑匀浆用生理盐水稀释成2％的组织匀浆，4000rpm离心10min，取上清20μl，按LDH测定试剂盒说明测定LDH含量。取上清50μl用双缩脲法测定蛋白含量。计算每毫克蛋白中含LDH的含量。结果见表4-1。
3.超氧化歧化酶(SOD)的测定将10％脑匀浆用生理盐水稀释成1％的组织匀浆，4000rpm离心10min，取上清30μl，按SOD测定试剂盒说明测定SOD含量。取上清50μl用双缩脲法测定蛋白含量。计算每毫克蛋白中含SOD的含量。结果见表4-2。
4.过氧化脂质(LPO)的测定将10％脑匀浆4000rpm离心10min，取上清100μl，按MDA测定试剂盒说明测定MDA含量。取上清50μl用双缩脲法测定蛋白含量，计算每毫克蛋白中含MDA的nmol数。结果见表4-2。
表4-1该浸膏对MCAT大鼠脑组织LD及LDH含量的影响(x±SD)
**P＜0.01，*P＜0.05 vs MCAT模型组表4-2该浸膏对MCAT大鼠脑组织SOD及MDA含量的影响(x±SD)
**P＜0.01，*P＜0.05 vs MCAT模型组结果显示，大鼠经凝闭大脑中动脉后，其LD、LDH、SOD、MDA均有明显变化，模型组大鼠LD、MDA含量明显高于假手术组，LDH、SOD明显低于假手术组，该浸膏1.2、0.6g/kg可明显降低大鼠手术侧大脑的LD含量，升高SOD、LDH含量(P＜0.05，P＜0.01)。提示本药保护脑组织的作用，与改善脑组织能量代谢，抗自由基损伤有关。
五、该浸膏对MCAT大鼠凝血因子的影响实验材料1.药品与试剂受试药、阳性对照药同试验一。
试剂ADP为Boehringer产品，凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、部分凝血酶时间(APTT)为北京市世帝科学仪器公司配套产品。
2.动物SD大鼠，雄性，体重200～220g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK11-00-0006。
3.仪器LG-PABER-1型血小板聚集/凝集仪，产品；400R低温离心机，德国Heraeus产品。
方法与结果1.分组与给药将大鼠随机分为六组，即MCAT模型组、对照组、该浸膏0.3g/kg、0.6g/kg、1.2g/kg组(分别相当人用量的2倍、6倍、18倍)、安宫牛黄丸组0.3g/kg组。灌胃给药，一次/日，共给药三次，MCAT模型组、对照组给予等量的饮用水(1ml/100g体重)。
2.凝血因子测定于末次给药后1h颈总动脉放血，以3.8％枸橼酸钠(V/V为1∶9)抗凝，以1500g离心10min，取血浆100μl放于比浊管中，按试剂说明分别加入TT、PT和APTT试剂，在血小板聚集/凝集仪上分别测定凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)和部分凝血活酶时间(APTT)值。结果组间比较，进行t检验，结果见表5-1。
表5-1该浸膏对MCAT大鼠凝血因子的影响(X±SD)
注各组与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
该浸膏各剂量可明显延长MCAT大鼠TT、PT、APTT(P＜0.01，p＜0.05)。
六、该浸膏对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑保护作用(10-12)实验材料动物SD大鼠，雄性，体重260-280g，由北京维通利华实验动物中心提供，合格证号为SCXK(京)2002-0003。
药品与试剂受试药、阳性对照药同实验一。
红四氮唑(TTC)，为淡黄色粉末，北京化学试剂公司产品，批号030227。
仪器AEG-220电子分析天平，日本Shimadzu公司产品。HZQ-C空气浴振荡器，哈尔滨市东明医疗仪器厂产品。
方法与结果一、分组及给药将大鼠随机分为六组，即假手术对照组、模型组、该浸膏0.3g/kg、0.6g/kg、1.2g/kg组(分别相当于人用量的3倍、6倍、12倍)、安宫牛黄丸300mg/kg组(相当人用量的6倍)，每组12～13只。灌胃给药，一日一次，给药三次后一小时造模，造模后再给药一次，假手术对照组、MCAT模型组给予等量的饮用水(1ml/100g体重)。
二、造模方法大鼠麻醉后，将其仰卧固定。分离右侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA)，结扎ECA与CCA，用动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于ECA与ICA分叉处作一切口，插入一端加热成光滑球形并涂了多聚赖氨酸的尼龙线(直径为0.25mm，距球端18mm处作标记)，插入深度为18mm，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。结扎入口处，尼龙线外留约1cm，缝合皮肤，用电热毯维持大鼠的体温。2小时后轻轻提拉所留线头至略有阻力，实现大脑中动脉再灌注，造模完成。假手术只结扎CCA与ECA。
三、脑梗塞范围的测定方法模型大鼠再灌注24h，行为学评分后，断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部分在-20℃冰箱冷冻10min，在冰盘上冠状切成6片，迅速将脑片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％TTC 1.5ml，1M K2HPO40.1ml，其余加蒸馏水至刻度)，37℃避光温孵1h，取出后置于10％甲醛液中避光保存24h。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量百分比作为脑梗塞范围。
四、结果结果见表6-1。
表6-1该浸膏对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑保护作用的影响(X±SD)
注各组与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
结果显示，术后24h，除假手术组未见脑组织异常改变外，模型组、给药组大鼠均有不同程度梗塞灶，该浸膏各剂量组、安宫牛黄丸300mg/kg组的大鼠梗塞程度明显减轻，与模型组相比具有显著差异(P＜0.01，P＜0.05)。
七、该浸膏对急性血瘀大鼠血液流变学的影响试验材料1.药品与试剂受试药同试验一。
天保宁康恩贝集团制药有限公司生产，口服，3次/日，1～2次/日，每片含银杏叶精提物40mg。批号020108-4。
红细胞变形试剂北京市世帝科学仪器公司提供，批号0009。盐酸肾上腺素注射液，1mg/ml，北京永康制药厂生产，批号000526。肝素，140μ/mg，北京双旋微生物培养基制品厂生产，批号980428。
2.动物SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK 11-00-0008。
3.器材RBC变形/聚集测试仪，型号LG-B-190，北京市世帝科学仪器公司产品；血粘度仪，型号R-80，北京市世帝科学仪器公司产品；400R低温离心机，德国Heraeus产品。
方法与结果1.分组与给药实验用大鼠，按体重随机分为6组空白对照组；血瘀模型对照组；该浸膏0.3g/kg、0.6g/kg、1.2g/kg组，天保宁24mg/kg组。按上述药物剂量灌胃给予，一次/一日，第三次给药后一小时造模，造模后给药一次，末次给药后一小时取血。
2.造模方法根据文献[9]，实验用大鼠，于第三次给药后1h，皮下注射肾上腺素0.1ml/100g体重(0.1mg/kg)，共2次，间隔4h，中间(前后各间隔2h)将大鼠浸入冰水内(4℃)5min，次日晨末次给药后1h，将大鼠以25％乌拉坦1.5g/kg腹腔注射麻醉，颈总动脉插管放血，肝素(20u/ml血)抗凝。
3.红细胞变形性和聚集性的测定取抗凝血40μl加红细胞变形液1ml，混匀，取样0.8ml用红细胞变形/聚集测试仪测试，以红细胞最大变形指数(MAXDI)和曲线下面积(SSS)表示红细胞变形性；另取抗凝血0.8ml用红细胞变形/聚集测试仪进行测试，以红细胞最大聚集指数(MAXD)和曲线下面积(SS)表示红细胞聚集性。结果进行组间比较，进行t检验，结果见表7-1。
4.血液粘度的测定取抗凝血0.8ml用血液粘度仪进行检测，以高切(200S-1)、中切(30S-1)和低切(5S-1、1S-1)时血液粘度表示全血粘度；另取抗凝血以2000转离心8min，其上清液即为血浆，取0.8ml血浆用血液粘度仪测试100S-1时的血浆粘度。结果进行组间比较，进行t检验，结果见表7-2。
表7-1该浸膏对急性血瘀大鼠红细胞变形性和聚集性的影响(X±SD)
注与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01表7-2该浸膏对急性血瘀大鼠全血粘度的影响(X±SD)
注与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01结果显示模型组与对照组比较，各切变率下的全血粘度与血浆粘度均明显增高，红细胞聚集性增高，表现出明显的浓、凝、粘、聚的血瘀症状(与对照组比较p＜0.05，p＜0.01)。该浸膏1.2、0.3g/kg可明显降低血瘀症大鼠全血高切粘度(与模型组比较p＜0.05)，该浸膏0.3g/kg还可明显降低血瘀症大鼠全血中、低各剂量组大鼠切粘度(与模型组比较p＜0.05)；该浸膏各剂量组可明显增加血液红细胞变形性、该浸膏0.3g/kg可明显降低红细胞聚集性降低，与模型组比较p＜0.05；说明该浸膏对急性应激造成的大鼠血瘀症状有明显的改善作用。
八、该浸膏对双侧颈总动脉结扎(Communal Carotid ArteryOcclosion，CCAO)大鼠脑毛细血管通透性的影响实验材料1.药品与试剂受试药、阳性对照药同试验一伊文思兰，进口分装，上海化学试剂供应站经销，批号821102。
2.动物SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK 11-00-0008。
3.仪器722型分光光度计，上海第三分析仪器厂产品。
方法与结果1.分组及给药实验用大鼠，按体重随机分为6组空白对照组；CCAO对照组；该浸膏0.3g/kg、0.6g/kg、1.2g/kg组，天保宁24mg/kg组。按上述药物剂量灌胃给予，一次/一日，第三次给药后一小时造模。
2.造模方法实验用大鼠，以10％水合氯醛0.35g/kg腹腔注射麻醉，分离双侧颈总动脉并埋线、结扎，结扎后舌下静脉注入2.5％伊文思兰(Evans Blue，EB)生理盐水溶液0.1ml/100g。
3.检测术后6小时，断头取脑，剔除小脑及脑干，将脑组织称重后置于5ml甲酰胺中，37℃水浴24小时后取上清液，在722分光光度计上比色，波长620nm，记录OD值。
4.计算及统计处理将所得OD值代入标准曲线回归方程，计算EB量，再除以脑组织湿重求得每克脑组织湿重所含EB的量。试验结果组间比较，进行t检验。结果见表8-1。
表8-1该浸膏对CCAO大鼠血脑屏障通透性的影响(X±SD)
注各组与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
结果显示，模型组大鼠脑组织中伊文思兰(EB)含量明显高于假手术组，给药组EB含量明显低于模型组。说明双侧颈总动脉结扎缺血6小时，可使脑血管对EB通透性明显加大；该浸膏可使缺血造成的血管通透性增加明显减轻，与模型组比较p＜0.05，p＜0.01。
九、该浸膏对麻醉犬脑血流量等指标的影响实验材料1.动物健康犬30只，雌雄兼用，体重14～16kg，由北京市海淀区通利实验动物养殖场提供，动物合格证编号京动管犬字(96)第024号。
2.药物受试药该浸膏，由北京中医药大学实验药厂提供，批号20021129。
阳性对照药天保宁康恩贝集团制药有限公司生产，口服，3次/日，1～2次/日，每片含银杏叶精提物40mg。批号020108-4。
3.实验仪器MacLab 400生理数据纪录系统，澳大利亚ADInstruments公司产品。MF-1200电磁流量计，日本光电公司产品。
方法与结果1.分组与给药犬30只，分为5组，分别为正常对照组、该浸膏0.6g/kg、0.3g/kg、0.15g/kg(分别相当于人用量的6、3和1.5倍)及天保宁10mg/kg组(相当人用量的2.5倍)。实验前禁食12h。手术后经胃管给药一次。
2.手术及指标测定动物称重后腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg，麻醉后背位固定，颈部切口，分离右颈总动脉，插管直接记录颈动脉血压。分离左颈内动脉，将电磁流量计探头(2.5～4mm)嵌入颈内动脉，垂直于颈内动脉固定，备测颈内动脉血流量用。经口腔插入胃管，以备给药用。手术后稳定30min记录各项指标，作为给药前对照。经胃管灌胃分别给予低、中、高浓度的该浸膏及天保宁溶液，10ml/kg体重，给药后开始测定，观察记录药物作用3h，并记录给药后30min、60min、90min、120min、150min、180min时的颈内动脉血流量、平均动脉血压，按下列公式计算脑血管阻力 实验结果分别计算各时间点给药后血流量、动脉血压、血管阻力变化率，与正常对照组比较，经t检验确定作用是否有显著性意义。结果见表9-1、9-2、9-3、9-4、9-5、9-6。
实验结果显示，该浸膏各剂量组灌胃给药90分钟后犬颈内动脉血流量、颈动脉血压增加，血管阻力下降，该浸膏0.6g/kg灌胃给药90分钟至150分钟，该浸膏0.3、0.15g/kg灌胃给药后90、120分钟变化率与对照组相比均有显著意义(P＜0.05或P＜0.01)。
表9-1该浸膏对麻醉犬脑血流量的影响
注与对照组相比*P＜0.05表9-2该浸膏对麻醉犬平均动脉压的影响
注与对照组相比*P＜0.05表9-3该浸膏对麻醉犬血管阻力的影响
表9-4该浸膏对麻醉犬脑血流量变化率的影响
注与对照组相比*P＜0.05**，P＜0.01表9-5该浸膏对麻醉犬血压变化率的影响
注与对照组相比*P＜0.05**，P＜0.01表9-6该浸膏对麻醉犬脑血管阻力变化率的影响
注与对照组相比*P＜0.05**，P＜0.01
十、该浸膏对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响实验材料1.药品与试剂受试药同试验一阳性对照药天保宁，康恩贝集团制药有限公司生产，口服，3次/日，1～2次/日，每片含银杏叶精提物40mg。批号980902.。
2.动物SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK11-00-0008。
3.仪器AEG-220型电子分析天平，日本岛津仪器公司产品；Df-206型鼓风干燥箱，北京西城医疗器械厂产品。
方法与结果1.分组与给药将大鼠随机分为五组，即对照组、该浸膏0.3g/kg、0.6g/kg、1.2g/kg组(分别相当人用量的2倍、6倍、18倍)、天保宁24mg/kg组。灌胃给药，一次/日，共给药三次，对照组给予等量的饮用水(1ml/100g体重)，末次给药后1小时手术。
2.造模方法根据文献(9)，略加改进，实验用大鼠，10％水合氯醛0.35g/kg腹腔注射麻醉，仰卧位固定，手术，分离右颈总动脉和左颈外静脉。将三段聚乙烯管相连，一端插入右颈总动脉，另一端插入左颈外静脉，中间段放入一根长8cm的7号手术用丝线，重约8mg，管内注满生理盐水溶液，建立动、静脉旁路。10min后取下套管，取出血栓，在湿润的滤纸上滚动，除去多余浮血，称重得血栓湿重；然后置60℃烘箱烘干1小时至恒重，冷却后称重得血栓干重，结果组间比较，进行t检验，结果见表10-1。
表10-1该浸膏对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响(X±SD)
注各组与血栓模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01结果显示该浸膏1.2、0.6g/kg、阳性对照药天保宁24mg/kg可明显降低血栓湿重，该浸膏1.2g/kg可明显降低血栓干重，与模型组比较p＜0.05，p＜0.01。
十一、该浸膏对大鼠血小板聚集性的影响实验材料1.药品与试剂受试药同试验一。
阳性对照药天保宁，康恩贝集团制药有限公司生产，口服，3次/日，1～2次/日，批号020108-4，受试剂量24mg/kg。。
试剂ADP为Boehringer产品。
2.动物SD大鼠，雄性，体重200～220g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK11-00-0006。
3.仪器LG-PABER-1型血小板聚集/凝集仪，产品400R低温离心机，德国Heraeus产品。
方法与结果1.分组与给药将大鼠随机分为六组，即MCAT模型组、对照组、该浸膏0.3g/kg、0.6g/kg、1.2g/kg组(分别相当人用量的2倍、6倍、18倍)、天保宁24mg/kg组。灌胃给药，一日剂量分两次给予，共给药三次，对照组给予等量的饮用水(1ml/100g体重)。
2.胶原制备取大鼠尾一条，剥下外皮，刮除鳞片及内部脂肪，并剪碎。称重，按1∶9加入生理盐水后在4℃下研磨，至乳白色，4℃ 1500g离心10min，取上清即10％胶原。
3.ADP和胶原诱导的血小板聚集的测定(Born比浊法)(9)于末次给药后1h颈总动脉放血，以3.8％枸橼酸钠(V/V为1∶9)抗凝，150g离心10min，上清为富血小板血浆(PRP)，剩余血浆继续以1500g离心10min，上清为贫血小板血浆(PPP)。以PPP调零，取PRP 300μl加入比浊管，37℃温育5min，分别加入诱导剂20μmol/L的ADP 5μl和10％的胶原20μl，分别聚集5min、10min，记录最大聚集率。结果见表11-1。
表11-1该浸膏对ADP和胶原诱导的血小板聚集的影响(X±SD)
注各组与对照组相比，*P＜0.05；**P＜0.01ADP和胶原均可使对照组血小板最大聚集率达到50％左右。天保宁组24mg/kg对ADP和胶原所诱导的血小板聚集有明显的抑制作用。该浸膏3个剂量组对胶原所诱导的血小板聚集均有不同程度的抑制作用(P＜0.05；P＜0.01)，但对ADP诱导诱导的血小板聚集作用不明显。
十二、该浸膏口服给药后含药血清体外溶栓作用实验材料1.动物SD大鼠，雌雄各半，体重230-250g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号为SCXK(京)2002-0003。
2.药品受试药同试验一。
阳性对照药洛欣(注射用尿激酶)，由广东天普生化医药股份有限公司生产。批号20020302。
3.仪器电子分析天平，AEG-220型，日本岛津仪器公司产品。
实验方法1.分组及给药将实验用大鼠随机分为五组，对照组，阳性对照尿激酶1万单位/kg组，该浸膏1.2g/kg、0.6g/kg、0.3g/kg组。连续灌胃给药3天，对照组给予等量的饮用水(1ml/100g)，末次给药后一小时进行实验。阳性对照引激酶组不用预先灌胃给药，末次腹腔注射给药后半小时进行实验。
2.血块的制备取230～250g大鼠，10％水合氯醛30.6g/kg腹腔注射，麻醉，经颈总动脉放血至1米长，直径3mm的塑料管中，夹闭两端，室温(25℃)垂直放置24小时后取出血块，精密称量放入已制备好的药液中。
3.实验方法大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(30.6g/kg)麻醉，仰位固定，颈总动脉放血，2500转离心10分钟，取出血清1ml加入小瓶中，56℃灭活30分钟即得到含药血清。称取新鲜制备的血块50mg，放入制备好的血清中，37℃温浴24小时后取出血块称重，计算。结果表12-1表12-1该浸膏口服给药后含药血清的溶栓作用(X±SD)
注与对照组相比，**P＜0.01结果表明，该浸膏1.2g/kg、0.3g/kg口服给药，其含药血清有明显溶栓作用，溶栓率在10.74％～19.65％，与对照组相比P＜0.01。
讨论与结论本研究观察了该浸膏对局灶性脑缺血的保护作用。试验采用了三氯化铁致大脑中动脉血栓形成大鼠模型，造模后给药1.2、0.6g/kg可明显改善其神经症状、减轻脑水肿、降低脑梗塞比，病理损伤也有明显减轻。麻醉犬脑血流量测定结果表明，该浸膏0.6、0.3和0.15g/kg组于给药后不同时间与给药前相比能增加颈内动脉血流量；与同时间点正常对照组结果相比较，该浸膏0.6、0.3和0.15g/kg组在给药后90分钟、120分钟、150分钟颈内动脉血流量明显增加(P＜0.05，P＜0.01)。采用双侧颈总动脉结扎脑缺血模型观察该浸膏能降低大鼠脑毛细血管通透性。抗栓、溶栓试验结果显示本品具有抗血栓形成作用并有一定溶栓作用。进一步研究表明该浸膏能明显改善血液流变学特性、抑制血小板聚集和红细胞聚集性。MCAT大鼠脑组织生化指标测定结果显示缺血损伤后乳酸、过氧化脂质的产生明显增多，该浸膏可明显降低手术侧大脑的MDA、LD含量，升高SOD、LDH含量，与该方的脑保护作用密切相关。药效学研究结果为该方临床治疗缺血性中风提供了试验依据。
参考文献1.国家药品监督局令第2号《新药审批办法》局长郑筱萸签发1999年4月22日2.中药新药研究指南(药学药理学毒理学)中华人民共和国卫生部药政管理局，199466-673.Tamura A，Graham DI，McCulluoch J et al.Focal Cerebral ischemia in the rat.1.Description Of techniqueand early neuropathological consequences following middle Cerebral artery occlusion.J Cereb Blood FlowMetab，1981；1534.刘小光，徐理钠，一种能评价溶拴药和抗栓药的大鼠大脑中动脉血栓模型。药学学报，1995，306625.Bederson JB，Pitts LH，Tsuji M et al.Rat middle Cerebral artery occlusionevaluation of the mode anddevelopment of a neurologic examination.Stroke，1986，174726.Lundy EF.Solik BS，Frank RS et al Morphometric evaluation of brain infarcts in rats and gerbils.JPhamacol Method，1986；162017.Hallenbeck JM，et al.The amount of circumscribed brain edema and the degree of post-ischemic neuonalrecovery do not correlative well.Stroke 1982，137978.冯亦璞、闫超华、种兆忠，氢清除法测定局部脑血流量，《现代药理实验方法》下册，北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，199812509.中药药理研究方法学，陈奇主编，人民卫生出版社，1993564，571，581参考文献10.Koizumi J，Yoshida Y，Nakazawa T， Ooneda G.Experimental studies of ischemic brain edema，IA newexperimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.Jpn J Stroke，1986；81-811.Nagasawa H，Kogure K.Correlation between cerebral blood flow and histologic changes in a new ratmodel of middle cerebral artery occlusion.Stroke，1989；20(8)1037-104312.Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，Cummins R.Reversible middle cerebral artery occlusion.Stroke.1989；2084-91具体实施方式
实施例1按下述配比称取原料栀子2000份广霍香5000份川芎12000份麝香100份生产方法如下川芎，广藿香提取挥发油，备用，药渣水提醇沉，栀子乙醇同流，川芎、广藿、栀子提取物合并，加入人工麝香、挥发油、加水调整至一定体积，加入甜味剂，调pH值，灌装，灭菌，即得。
实施例2按下述配比称取原料栀子8000份广霍香2000份川芎12000份麝香130份生产方法如下川芎，广藿香提取挥发油，备用，药渣水提醇沉，栀子乙醇回流，川芎、广藿、栀子提取物合并，加入人工麝香、挥发油、加水调整至一定体积，加入甜味剂，调pH值，灌装，灭菌，即得。
实施例3按下述配比称取原料栀子2500份 广霍香2500份川芎2500份麝香40份生产方法如下川芎，广藿香提取挥发油，挥发油包结备用；药渣水提醇沉；栀子加乙醇回流提取；挥发油包结物、药材提取物细粉以及人工麝香、甜味剂加适量糊精混匀，制粒，干燥，整粒，分装即得。
实施例4按下述配比称取原料柴栀子10000份广霍香6000份川芎6000份麝香38份。
生产方法如下川芎，广藿香提取挥发油，挥发油包结备用；药渣水提醇沉；栀子加乙醇回流提取；挥发油包结物、药材提取物细粉以及人工麝香、甜味剂加适量糊精混匀，制粒，干燥，整粒，分装即得。
实施例5按下述配比称取原料栀子5000份 广霍香12000份 川芎2000份麝香60份生产方法同实施例4。
权利要求
1.一种治疗缺血性脑中风的药物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制成的口服药剂栀子2000-12000份 广霍香2000-12000份 川芎2000-12000份 麝香30-150份
2.根据权利要求1所述的治疗缺血性脑中风的药物，其中各原料的重量配比可以是栀子2000份 广霍香5000份 川芎12000份 麝香100份
3.根据权利要求1所述的治疗缺血性脑中风的药物，其中各原料的重量配比可以是栀子2500份 广霍香2500份 川芎2500份 麝香40份
4.根据权利要求1所述的治疗缺血性脑中风的药物，其中各原料的重量配比可以是栀子5000份 广霍香12000份 川芎2000份 麝香60份
5.根据权利要求1所述的治疗缺血性脑中风的药物，其中各原料的重量配比可以是栀子8000份 广霍香2000份 川芎12000份 麝香130份
6.根据权利要求1所述的治疗缺血性脑中风的药物，其中各原料的重量配比可以是栀子10000份 广霍香6000份 川芎6000份 麝香38份
7.根据权利要求1所述的治疗缺血性脑中风的药物，其中各原料的重量配比可以是栀子10000份 广霍香6000份 川芎6000份 麝香38份
8.根据权利要求1-7任一所述的治疗缺血性脑中风的药物，其特征在于所说的药物是合剂或颗粒剂。
9.根据权利要求8所述的治疗缺血性脑中风的合剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)川芎，广藿香提取挥发油，备用；(2)步骤(1)药渣水提醇沉；(3)栀子乙醇回流；(4)川芎、广藿、栀子提取物合并，加入人工麝香、挥发油、加水调整至一定体积，加入甜味剂，调pH值，灌装，灭菌，即得。
10.根据权利要求8所述的治疗缺血性脑中风的颗粒剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)川芎，广藿香提取挥发油，挥发油包结备用；(2)步骤(1)药渣水提醇沉；(3)栀子加乙醇回流提取；(4)挥发油包结物、药材提取物细粉以及人工麝香、甜味剂加适量糊精混匀，制粒，干燥，整粒，分装即得。
全文摘要
本发明公开了一种新的治疗缺血性脑中风的药物，它是以麝香、广霍香、川芎、栀子为原料，根据每味中药不同的特性，分别以提取挥发油、水煮醇沉、真空干燥等预处理后，按一定比例配制。本发明配方及制作方法独特，治疗效果显著。
文档编号A61P9/00GK1861132SQ200510069489
公开日2006年11月15日 申请日期2005年5月12日 优先权日2005年5月12日
发明者杨抒宁 申请人:北京中医药大学药厂