专利名称：一种治疗慢性支气管炎的中药制剂及制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种以从中药麦冬中提取得到的麦冬皂苷D为有效成分的制剂及其制备方法，以及该制剂在制备治疗慢性支气管炎药物中的应用，本发明制剂又称麦冬皂苷D制剂。
背景技术：
目前医学界将慢性支气管炎(简称″老慢支″和肺气肿)称之为慢性阻塞性肺疾病(COPD)，简称″慢阻肺″。这是一种很常见的慢性呼吸道疾病，主要特点是长期反复咳嗽、咳痰、喘息和发生急性呼吸道感染。久而久之演变成肺源性心脏病，甚至发生心、肺功能衰竭。给个人、家庭和社会都带来许多不良影响。世界卫生组织慢性阻塞性肺疾病全球倡议(GOLD)提出该病的特点是一种具有气流受限特征的疾病，气流受限不完全可逆，呈进行性发展，其发病与肺部对有害气体或有害颗粒引起的异常炎症反应有关。吸烟，反复呼吸道感染和大气污染是引起发病的主要原因。而一旦患病后，往往经10～20年而发展至肺气肿，肺源性心脏病，出现严重慢性心，肺功能衰竭。慢阻肺是世界性疾病，患病率和病死率不断增高，世界卫生组织指出20世纪90年代慢阻肺在全球导致伤病的病因中排列第6位，而预计到本世纪20年代将提升到第3位(Murray CJL，Lopez AD.Alternativeprojections of mortality and disability by cause 1990-2020Global Burden of DiseaseStudy.Lancet.1997；3491498-1504)。
慢性阻塞性肺疾病是一个慢性，长期的过程，可以根据症状表现分为急性加重期和稳定期。急性加重期为在疾病过程中，短期内咳嗽、咯痰、气促和(或)喘息加重，痰量增多，呈脓性或黏液脓性，可伴有发热等炎症明显加重的表现；而稳定期相对于急性加重期，咳嗽、咯痰、气促等症状较稳定或较轻。目前往往注重急性加重期的治疗，而对稳定期需要有计划长期治疗未引起足够重视。在慢阻肺的漫长病程中，绝大部分时间病情处于稳定期。而急性加重期的发生平均每年2～4次，每次持续时间亦仅数周。病情处于稳定期，尽管症状较轻，较稳定，但气流受限的基本特点持续存在，如果不作有效治疗其长期作用必然导致肺功能的进行性恶化。另一方面长期咳嗽排痰不畅，容易引起细菌在支气管内聚集和增殖，导致急性加重期发作更频繁和更严重，最终使慢阻肺的病情加速恶化。因此，应重视慢阻肺稳定期的治疗，力争减轻症状和阻止病情发展；减缓或阻止肺功能进行性降低。
鉴于慢阻肺具有气流受限，且呈不完全可逆的基本特点，在综合防治措施中，西医治疗特别强调支气管舒张剂(短效或速效β2受体激动剂、长效β2受体激动剂或茶碱类、抗胆碱药)和抗炎剂的应用，支气管舒张剂和抗炎剂是慢阻肺稳定期长期治疗中最重要的应用药物，有不同的给药方法包括口服和吸入方式，首选吸入疗法，但吸入治疗的常见有咽痛，声嘶和口咽部真菌感染等不良反应。而口服或注射这些化学药物都有一定的副作用，如长期口服或注射糖皮质激素可引起许多不良反应，如骨质疏松，高血压、糖尿病、肥胖、溃疡病，骨坏死和低血钾等，故不能长期使用，仅限于在急性加重期短暂使用，而且反复使用化学药如抗菌素则易产生耐药性而影响疗效。
目前用中医药来治疗慢性支气管炎已经越来越受到重视，也取得了一定成效，但疗效显著者还较少。
在资料检索中未发现麦冬皂苷D制剂的任何报道。
发明内容
通过化学分离和活性筛选相结合，在研究中我们发现，从麦冬中提取分离得到的麦冬皂苷D具有良好的改善气道和支气管炎症反应以及促进气管纤毛运动作用，我们将其与适宜辅料混合，制备成注射制剂，用于慢性支气管炎的治疗。本发明由麦冬皂苷D制备的制剂对慢性支气管炎急性加重期和稳定期都具有较好的疗效，具有标本兼治的作用，且副作用小。药理实验证明本发明制剂具有较好止咳、平喘、抗炎药理作用。
本发明的目的是提供一种疗效较好的治疗慢性支气管炎的麦冬皂苷D制剂。
本发明的另一个目的是提供了上述制剂的制备方法。
本发明还公开了上述制剂在制备治疗慢性支气管炎药物中的应用。
本发明制剂还可用于肺癌放化疗后的辅助治疗。
本发明通过以下技术方案实现一、工艺制法1.提取分离工艺取麦冬药材，低温干燥磨粉，用4-6倍70％-90％乙醇回流提取2次，提取液合并，减压回收乙醇，加2-5倍蒸馏水混悬，用石油醚萃取，石油醚萃取后的水液再用水饱和正丁醇萃取3-5次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，上大孔吸附树脂吸附，分别用水、20％乙醇、70％乙醇洗脱，收集3-5倍70％乙醇洗脱液，回收乙醇，上氧化铝柱吸附，用水洗至无色后，用4-6倍量60％-80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，上高效液相制备色谱用乙醇-水系统梯度分离并检测，收集80％乙醇洗脱部分，即得麦冬皂苷D。
本发明制剂处方含麦冬皂苷D有效成分1-50重量份，优选含麦冬皂苷D有效成分1-10重量份。
2.制剂的制备水针制剂的制备取处方量麦冬皂苷D，用注射用水溶解并加至全量，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明麦冬皂苷D水针制剂；输液制剂的制备取处方量麦冬皂苷D，用注射用水溶解并加至全量，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明麦冬皂苷输液制剂；粉针制剂的制备取处方量麦冬皂苷D，用注射用水溶解，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，喷雾干燥或冷冻干燥，制备成本发明麦冬皂苷D粉针制剂。
本发明根据麦冬皂苷D的结构及性质，从麦冬中经乙醇提取、萃取、大孔树脂吸附，氧化铝柱层析分离，再用高效液相制备色谱制备得到，其特征在于麦冬皂苷D有效成分百分含量大于90％。根据本发明方法提取分离得到的麦冬皂苷D可制备成注射液、输液剂、粉针剂，本发明麦冬皂苷D有效成分用于制备成一类中药新药。
本发明制剂所用麦冬皂苷D也可以通过以下方法制备得到取麦冬，低温干燥粉碎，用4-6倍量甲醇加热回流提取，甲醇提取液减压回收，残留物加2-5倍量水混悬，用乙醚萃取，萃取后的水液用正丁醇萃取3-5次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，残留物上微晶纤维素，分别用氯仿、氯仿-甲醇-水(7∶1∶1)、氯仿-甲醇-水(7∶1.5∶1)、氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)依次梯度洗脱，收集氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)洗脱部分，洗脱液回收溶剂后上硅胶柱，用氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.4)洗脱，洗脱液上葡萄糖凝胶LH-20柱，用甲醇洗脱，洗脱液回收甲醇，重结晶即得本发明麦冬皂苷D(溶剂洗脱用量根据薄层色谱结果确定)。
本发明制剂所用麦冬皂苷D还可以采用其它相类似方法提取分离纯化后得到。
二、提取物中麦冬皂苷D含量测定用高效液相色谱蒸发光检测法测定1.1实验仪器Waters高效液相色谱仪(600泵)，Alltech ELSD-500蒸发光检测器，Millinium32色谱处理软件；1.2实验药品本发明提取物(，根据本发明方法制备，由广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)。
1.3色谱条件Diamonsil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相乙腈-水(55∶45)，流速1.0ml/min，柱温30℃，ELSD参数漂移管温度98℃，气体流量2.8ml/min，理论塔板数按麦冬皂苷D计算不低于3000。
1.4实验方法精密称取对照品适量，加甲醇配制成0.25mg/ml的对照品溶液；取样品，加甲醇超声溶解，滤过，配制成与对照品溶液浓度相近的溶液，取对照品溶液和样品溶液各20μl，注入液相色谱仪，进样并计算，结果见表1。
表1 提取物中麦冬皂苷D含量
含量测定结果表明根据本发明制备工艺制备得到麦冬皂苷D提取物中的麦冬皂苷D含量都大于90％以上，符合本发明制剂制备的需要。
三、药理实施例试药与动物本发明麦冬皂苷D制剂(按本发明制备工艺制备，均由广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；生理盐水由广东天之骄药物开发有限公司实验室提供；磷酸可待因注射液组(东北制药集团公司沈阳第一制药厂)；氨茶碱注射液(山东新华制药股份有限公司)；新鱼腥草素钠注射液(广东永康药业有限公司)；健康昆明系小鼠，体重18-22g；Wistar大鼠，180-220g；荷兰豚鼠，体重380-420g；(以上动物均由广东省实验动物中心提供)。
1.对“气管炎”小鼠氨水引咳的镇咳作用取小鼠若干，每次取3-4只置密闭容器内，以氨水熏蒸(每次2min，每隔15min熏1次，连续7次)；48h后，将小鼠置于铁丝笼内，旋转10次，之后，计数3min内动物的咳嗽次数，以咳嗽次数的多少，按均一性原则分成5组，即对照组、磷酸可待因注射液组、本发明注射液组、本发明输液组、本发明粉针剂组，每组10只，磷酸可待因注射液组腹腔注射给药，给药剂量为10mg/kg，本发明制剂组每天给动物腹腔注射1次药物，给药剂量为2mg/kg，给药容积都为0.2ml，连续3d，对照组给予等量生理盐水，动物分别于第1和第3d投药后30min，按上法进行咳嗽次数的检测，所得结果见表2。
表2 对“气管炎”小鼠的镇咳作用
与对照组及给药前比较**p＜0.01以上实验结果表明本发明制剂具有显著的镇咳作用，给药1d时与可待因组相当，连续后3d作用更强，而可待因组给药3d后由于耐药性作用反而减弱。
2.对组胺引发支气管痉挛性哮喘的平喘作用取给药前经过筛选的豚鼠，分成4组，每组8只，即对照组、氨茶碱注射液组、本发明注射液组、本发明输液组、本发明粉针剂组，动物分开饲养，氨茶碱注射液组腹腔注射给药，给药剂量为0.1g/kg，本发明制剂组每天给动物腹腔注射1次药物，给药剂量为1.5mg/kg，给药容积都为0.2ml，对照组给予等量生理盐水，连续用药5d，给药结束第2d进行实验，实验时，每组各取1只豚鼠放入喷雾箱中(隔开)，用0.5％磷酸绷安溶液，在0.5kg/cm2气压下进行喷雾吸入(15s)；之后，记录动物发生抽搐、翻滚的潜伏期；凡6min仍不见搐者即作为阴性反应。结果见表3。
表3 对豚鼠“哮喘”的作用
与对照组比较**p＜0.01以上实验结果表明本发明麦冬皂苷D制剂具有显著的平喘作用，与氨茶碱注射液相比作用相当或略强。
3.抗炎作用取大鼠50只，均分成5组，每组10只，即对照组、新鱼腥草素钠注射液组、本发明注射液组、本发明输液组、本发明粉针剂组，新鱼腥草素钠注射液腹腔注射给药，给药剂量为3mg/kg，本发明制剂组每天给动物腹腔注射1次药物，给药剂量为1.6mg/kg，给药容积都为0.2ml，对照组给予等量生理盐水，连续用药5d，每天给药1次，最后1次给药后1h进行实验，用窄带尺测量右后肢踩关节与足周长之和(mm)，然后从大鼠右后肢足背键膜下向踩关节附近注入新鲜鸡蛋清0.1ml，使之形成水肿。肿胀程度则用注入蛋清后足、踝周长之和减去注入前足、踝周长之和所得之差表示。结果见表4。
表4 抗炎实验结果
与对照组比较**p＜0.01以上实验结果表明本发明制剂具有良好的抗炎作用，与新鱼腥草素钠相比作用相当或略好。
结论以上各药理实验证明，本发明麦冬皂苷D制剂具有良好的药理作用，说明根据本发明制备工艺制备的麦冬皂苷D制剂具有实际意义。
四、制备实施例实施例1(1)取麦冬药材，低温干燥磨粉，用4倍量70％乙醇回流提取2次，每次1小时，回流液合并，减压回收乙醇，加4倍量蒸馏水混悬，用石油醚萃取，水液再用水饱和正丁醇萃取3次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，上大孔吸附树脂吸附，分别用水、20％乙醇、70％乙醇洗脱，收集5倍量70％乙醇洗脱液，回收乙醇，上氧化铝柱吸附，用水洗至无色后，用6倍量60％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，上高效液相制备色谱用水-乙醇系统梯度分离并检测，收集80％乙醇洗脱部分，即得本发明麦冬皂苷D；(2)取麦冬皂苷D 5g，用注射用水溶解并加至1000ml，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明麦冬皂苷D注射液。
实施例2
(1)取麦冬药材，低温干燥磨粉，用5倍量80％乙醇回流提取2次，每次1小时，回流液合并，减压回收乙醇，加3倍量蒸馏水混悬，用石油醚萃取，水液再用水饱和正丁醇萃取4次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，上大孔吸附树脂吸附，分别用水、20％乙醇、70％乙醇洗脱，收集4倍量70％乙醇洗脱液，回收乙醇，上氧化铝柱吸附，用水洗至无色后，用4倍量80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，上高效液相制备色谱用水-乙醇系统梯度分离并检测，收集80％乙醇洗脱部分，即得本发明麦冬皂苷D；(2)取麦冬皂苷D 10g，用注射用水溶解并加水至50000ml，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明麦冬皂苷输液制剂。
实施例3(1)取麦冬药材，低温干燥磨粉，用6倍量90％乙醇回流提取2次，每次1小时，回流液合并，减压回收乙醇，加4倍量蒸馏水混悬，用石油醚萃取，水液再用水饱和正丁醇萃取5次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，上大孔吸附树脂吸附，分别用水、20％乙醇、70％乙醇洗脱，收集3倍量70％乙醇洗脱液，回收乙醇，上氧化铝柱吸附，用水洗至无色后，用5倍量70％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，上高效液相制备色谱用水-乙醇系统梯度分离并检测，收集80％乙醇洗脱部分，即得麦冬皂苷D；(2)取处方量麦冬皂苷D 1g，用注射用水溶解，加入甘露醇，加注射用水调整浓度，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，制备成本发明麦冬皂苷D粉针制剂500支。
实施例4(1)取麦冬药材，低温干燥磨粉，用5倍量85％乙醇回流提取2次，每次1小时，回流液合并，减压回收乙醇，加3倍量蒸馏水混悬，用石油醚萃取，水液再用水饱和正丁醇萃取4次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，上大孔吸附树脂吸附，分别用水、20％乙醇、70％乙醇洗脱，收集5倍量70％乙醇洗脱液，回收乙醇，上氧化铝柱吸附，用水洗至无色后，用5倍量60％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，上高效液相制备色谱用水-乙醇系统梯度分离并检测，收集80％乙醇洗脱部分，即得本发明麦冬皂苷D；(2)取麦冬皂苷D 2g，用注射用水溶解，加入乳糖，加注射用水调整浓度，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，喷雾干燥，制备成本发明麦冬皂苷D粉针制剂500支。
实施例5(1)取麦冬药材，低温干燥磨粉，用4倍量90％乙醇回流提取2次，每次1小时，回流液合并，减压回收乙醇，加5倍量蒸馏水混悬，用石油醚萃取，水液再用水饱和正丁醇萃取3次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，上大孔吸附树脂吸附，分别用水、20％乙醇、70％乙醇洗脱，收集4倍量70％乙醇洗脱液，回收乙醇，上氧化铝柱吸附，用水洗至无色后，用4倍量70％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，上高效液相制备色谱用水-乙醇系统梯度分离并检测，收集80％乙醇洗脱部分，即得本发明麦冬皂苷D；(2)取麦冬皂苷D 3g，用注射用水溶解，加入低分子右旋糖酐，调pH值为5.0-7.0，加注射用水调整浓度，用0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，制备成本发明麦冬皂苷D粉针制剂500支。
实施例6(1)取麦冬药材，低温干燥磨粉，用5倍量75％乙醇回流提取2次，每次1小时，回流液合并，减压回收乙醇，加5倍量蒸馏水混悬，用石油醚萃取，水液再用水饱和正丁醇萃取5次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，上大孔吸附树脂吸附，分别用水、20％乙醇、70％乙醇洗脱，收集3倍量70％乙醇洗脱液，回收乙醇，上氧化铝柱吸附，用水洗至无色后，用4倍量80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，上高效液相制备色谱用水-乙醇系统梯度分离并检测，收集80％乙醇洗脱部分，即得本发明麦冬皂苷D；(2)取麦冬皂苷D 3g，用注射用水溶解并加水至1000ml，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明麦冬皂苷D注射液。
实施例7(1)取麦冬药材，低温干燥磨粉，用5倍量90％乙醇回流提取2次，每次1小时，回流液合并，减压回收乙醇，加3倍量蒸馏水混悬，用石油醚萃取，水液再用水饱和正丁醇萃取4次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，上大孔吸附树脂吸附，分别用水、20％乙醇、70％乙醇洗脱，收集5倍量70％乙醇洗脱液，回收乙醇，上氧化铝柱吸附，用水洗至无色后，用5倍量70％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，上高效液相制备色谱用水-乙醇梯度分离并检测，收集80％乙醇洗脱部分，即得本发明麦冬皂苷D；(2)取麦冬皂苷D 4g，用注射用水溶解，加入甘露醇，加注射用水调整浓度，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，制备成本发明麦冬皂苷D粉针制剂500支。
实施例8(1)取麦冬，低温干燥粉碎，用4倍量甲醇加热回流提取，甲醇提取液减压回收，残留物加2倍量水混悬，用乙醚萃取，萃取后的水液用正丁醇萃取3次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，残留物上微晶纤维素，分别用氯仿、氯仿-甲醇-水(7∶1∶1)、氯仿-甲醇-水(7∶1.5∶1)、氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)依次梯度洗脱，收集氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)洗脱部分，洗脱液回收溶剂后上硅胶柱，用氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.4)洗脱，洗脱液上葡萄糖凝胶LH-20柱，用甲醇洗脱，洗脱液回收甲醇，重结晶即得本发明麦冬皂苷D(2)取麦冬皂苷D4g，用注射用水溶解并加水至1000ml，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明麦冬皂苷D注射液。
实施例9(1)取麦冬，低温干燥粉碎，用6倍量甲醇加热回流提取，甲醇提取液减压回收，残留物加5倍量水混悬，用乙醚萃取，萃取后的水液用正丁醇萃取5次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，残留物上微晶纤维素，分别用氯仿、氯仿-甲醇-水(7∶1∶1)、氯仿-甲醇-水(7∶1.5∶1)、氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)依次梯度洗脱，收集氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)洗脱部分，洗脱液回收溶剂后上硅胶柱，用氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.4)洗脱，洗脱液上葡萄糖凝胶LH-20柱，用甲醇洗脱，洗脱液回收甲醇，重结晶即得本发明麦冬皂苷D(2)取麦冬皂苷D 5g，用注射用水溶解，加入甘露醇，加注射用水调整浓度，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，制备成本发明麦冬皂苷D粉针制剂500支。
权利要求
1.一种治疗慢性支气管炎的中药制剂，其特征在于该药物是由下述重量份的有效成分制成的麦冬皂苷D 1-50份。
2.根据权利要求1所述的治疗慢性支气管炎的中药制剂，其特征在于由下述重量份的有效成分制成的麦冬皂苷D 1-10份。
3.根据权利要求1、2的治疗慢性支气管炎的中药制剂，其特征在于按常规方法制备成临床可接受的水针剂、输液制剂、粉针剂。
4.根据权利要求1、2的治疗慢性支气管炎的中药制剂，其特征在于有效成分麦冬皂苷D的含量大于90％。
5.根据权利要求1、2的治疗慢性支气管炎的中药制剂，其制备方法为(1)提取分离工艺取麦冬药材，低温干燥磨粉，用4-6倍量70％-90％乙醇回流提取2次，回流液合并，减压回收乙醇，加2-5倍量蒸馏水混悬，用石油醚萃取，水液再用水饱和正丁醇萃取3-5次，正丁醇萃取液减压回收正丁醇，上大孔吸附树脂吸附，分别用水、20％乙醇、70％乙醇洗脱，收集3-5倍70％乙醇洗脱液，回收乙醇，上氧化铝柱吸附，用水洗至无色后，用4-6倍量60％-80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，上高效液相制备色谱用乙醇-水系统梯度分离并检测，收集80％乙醇洗脱部分，即得本发明麦冬皂苷D；(2)制剂的制备水针制剂的制备取处方量麦冬皂苷D，用注射用水溶解并加至全量，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明麦冬皂苷D水针制剂；输液制剂的制备取处方量麦冬皂苷D，用注射用水溶解并加至全量，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明麦冬皂苷输液制剂；粉针制剂的制备取处方量麦冬皂苷D，用注射用水溶解，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，喷雾干燥或冷冻干燥，制备成本发明麦冬皂苷D粉针制剂。
6.根据权利要求1、2所述的中药制剂在制备治疗慢性支气管炎的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种治疗慢性支气管炎的中药制剂及其制备方法和应用，其特征在于由从麦冬中提取分离得到的麦冬皂苷D和药用辅料混合，制备成水针剂、输液剂、粉针剂，其中麦冬皂苷D百分含量大于90％，本发明制剂具有良好的治疗慢性支气管炎作用。
文档编号A61K31/704GK1686152SQ200510069530
公开日2005年10月26日 申请日期2005年5月13日 优先权日2005年5月13日
发明者张海峰 申请人:张海峰