专利名称：包含苦瓜和松树萃取物的皮肤美白组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及皮肤美白剂、这些试剂抑制哺乳动物皮肤中黑色素产生的用途以及适于这种用途的组合物。
背景技术：
一些天生皮肤较黑的人希望使整个肤色有一定程度的美白。肤色主要由黑色素的量和类型决定，黑色素为通过存在于表皮内的黑色素细胞在皮肤内产生的物质。黑色素以两种形式存在，即真黑素(dark melanin)和褐黑素(1ight melanin)。如果产生的真黑素降低和/或产生的褐黑素与真黑素比率提高，则皮肤变得美白。
发明概述我们发现蔬菜苦瓜萃取物与松树皮萃取物的组合协同降低真黑素的产生。
因此，本发明提供了一种皮肤美白组合物，所述组合物包含苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
本发明还提供了一种抑制哺乳动物皮肤中黑色素产生的方法，所述方法包括给予所述人有效量的苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
在相关的方面，本发明还提供了用于抑制哺乳动物皮肤中黑色素产生的苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
本发明还提供了一种增加哺乳动物皮肤中褐黑素与真黑素比率的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物有效量的苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
本发明还提供了用于增加哺乳动物皮肤中褐黑素与真黑素比率的苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
本发明的另一方面提供了苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物在生产抑制哺乳动物皮肤中黑色素产生和/或增加褐黑素与真黑素比率的组合物中的用途。
本发明还提供了一种在个体皮肤中抑制黑色素从黑色素细胞向角化细胞输送的方法，所述方法包括给予所述个体有效量的苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
发明详述除非另外说明，否则所有的科技术术语具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
组合物和产品形式本发明的组合物包含整个苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。苦瓜(Momordica charantia)也称为凉瓜。
萃取物与整个植物材料的区别在于，存在于整个蔬菜中的各组分在萃取物中以不同的量存在，或者基本不存在。
植物材料的萃取物通常通过溶剂萃取制备。可将植物材料进行机械处理，例如研磨，随后萃取。溶剂包括极性和非极性有机溶剂、水及其混合物。优选的溶剂为丙酮、水、乙醇及其混合物。萃取过程可包括加热步骤。溶剂萃取出的组分可进行进一步纯化/分离步骤，例如色谱法或分馏。本文使用的“馏分”是指包含一种或多种苦瓜/松树皮成分的溶剂任一分馏部分，例如通过色谱法或通过分馏制得。
优选所述松树皮萃取物为法兰西海岸松(Pinus pinatus)的树皮萃取物。这种优选的萃取物得自商品PycnogenolTM。
本发明的组合物可以局部和/或全身给药形式供给。例如苦瓜和松树皮萃取物可均全身给药，或均局部给药，或者一种全身给药而另一种局部给药，例如苦瓜可全身给药而松树皮萃取物局部给药，或者反之亦然。苦瓜组分可包含两种或多种不同的馏分或两种或多种不同的萃取方法的产物。这些可全部全身给药或全部局部给药，或者各自分开成局部给药和全身给药形式两部分。同样，松树皮萃取物可包含两种或多种不同的馏分或两种或多种不同的萃取方法的产物。这些可全部全身给药或全部局部给药，或者各自分开成局部给药和全身给药形式两部分。优选当苦瓜和松树皮萃取物以单独的剂型供给时，包含松树皮萃取物的剂型没有苦瓜，且反之亦然。
因此，在本发明组合物的上下文中使用的术语“组合物”均指包含所有主要成分的整体组合物。但是，该术语还包括这样一种情况，整个组合物的各个组分(即苦瓜和松树皮萃取物)分开在两种不同的组合物形式中一起供给形成产物。例如产品可包含一种全身输送其一种或多种组分的组合物形式和一种局部输送其一种或多种组分的组合物形式。包含这种组合物形式的组合的产品的实例有护肤膏和营养补充片剂。
局部用组合物在一个实施方案中，将本发明的组合物配制成用于局部给药，即所述组合物的形式为局部用组合物。因此，本发明的组合物可局部给药于受验者，即通过直接涂覆或将所述组合物铺展在皮肤上。这种组合物可通过将安全和有效量的活性物质或上述物质与药学上可接受的局部用载体或稀释剂(即皮肤学可接受的载体或稀释剂)混合来制备。
所述组合物通常包含约0.01％-约35％重量的各种活性成分，优选为约0.1％重量-约35％重量，更优选为约1％重量-约35％重量，例如5或10％重量-约25％重量。
用于本发明的局部用组合物可制成多种产品类型。这些类型包括(但不局限于)洗剂、面霜、凝胶、棒剂、喷剂、油膏和糊膏。这些产品类型可包含多种载体体系，包括(但不局限于)溶液、乳液、凝胶和固体。
配制成溶液形式的用于本发明的局部用组合物通常包含药学上可接受的水溶液或有机溶剂。术语“药学上可接受的含水溶剂”和“药学上可接受的有机溶剂”是指能将一种或多种活性物质分散或溶解其中的溶剂，且具有可接受的安全性能(例如刺激和敏化特性)。合适的有机溶剂的实例有丙二醇、聚乙二醇(200-600)、聚丙二醇(425-2025)、聚乙烯基吡咯烷、丙二醇-14丁基醚、甘油、1，2，4-丁三醇、山梨糖醇酯、1，2，6-己三醇、乙醇、异丙醇、丁二醇及其混合物。优选这些溶液包含约0.1％重量-约20％重量，更优选约1％重量-约20％重量，还更优选约1％重量-约10％重量的各种活性物质。
如果用于本发明的局部用组合物配制成气溶胶形式，且通过喷雾涂覆于皮肤，则向溶液组合物中加入推进剂。
局部用组合物可配制成包含润肤剂的溶液形式，润肤剂即用于防止或减轻干燥的物质，同时用于保护皮肤。多种合适的润肤剂为已知的并可用于本文(参见Sagarin，Cosmetics，Science andTechnology(化妆品、科学与技术)，第2版，第1卷，第32-43页(1972))。优选这种组合物包含约2％-约50％的局部用药学上可接受的润肤剂。
如果将所述载体配制成乳液形式，优选包含载体体系的约1％-约10％，更优选约2％-约5％的乳化剂。乳化剂可为非离子、阴离子或阳离子型。合适的乳化剂例如公开于McCutcheon的Detergents andEmulsifers(洗涤剂和乳化剂)，北美版，第317-324页(1986)。
单种乳液皮肤护理制剂，例如水包油型和油包水型洗剂和面霜为化妆品领域公知的。这种乳液可保持稳定并且促进活性物质的渗透。还可使用多相乳液组合物，例如水包油包水型(water-in-oil-in-water)。通常这种单相或多相乳液包含水、润肤剂和乳化剂作为主要成分。
可用的另一种乳液载体体系为微乳液载体体系。这种体系包含约9％-约15％的角鲨烷；约25％-约40％的硅油、约8％-约20％的脂肪醇、约15％-约30％的聚氧乙烯失水山梨糖醇单脂肪酸(商品名为Tweens)或其他非离子表面活性剂和约7％-约20％的水。
还可使用脂质体(liposomal)制剂。这些制剂可稳定活性物质，还可改进不能很好渗透的活性物质的输送。这种组合物可如下制备，首先按照Mezei&Gulasekharam，Journal of Pharmaceutics andPharmacology，第34卷(1982)，第473-474页所述的方法或其变化的方法，将活性物质与磷脂(例如二软脂酰卵磷脂、胆甾醇)与水混合。用于形成脂质体的合适的组合物的表皮类脂可代替磷脂。随后将脂质体制剂掺入一种上述局部用载体体系(例如凝胶或水包油乳液)中，产生脂质体制剂。局部施用的脂质体的其他组合物和化妆品/药物用途见述于Mezei，M.，“Liposomes as a Skin Drug Delivery System(作为皮肤药物输送体系的脂质体)”，Topics in Pharmaceutical Sciences(D.D.Breimer和P.Speiser编辑)，Elsevier Science出版，B.V.，NewYork，N.Y.，1985，第345-358页。
如果所述局部用组合物配制成凝胶或化妆棒形式，可通过向面霜或洗剂制剂中加入适量的增稠剂来配制这种组合物。
局部用组合物还可配制成美容产品形式，例如粉底。粉底为含有适量的增稠剂、颜料和香料的溶液或洗剂基的制剂。
所述组合物中还可存在各种水溶性材料。这些材料包括湿润剂、蛋白质、多肽和防腐剂。此外，本文使用的“局部用组合物”可包含常规的化妆品辅助剂，例如染料、遮光剂(例如二氧化钛)、颜料和香料。
用于本发明的局部用组合物还可包含安全和有效量的渗透促进剂。渗透促进剂的优选用量为所述组合物的约1％-约5％。可用的渗透促进剂的实例见述于美国专利6,068,834。其他常规的皮肤护理产品添加剂也可包含在所述组合物中。例如可使用骨胶原、透明质酸、弹性蛋白、水解产物、樱草油、霍霍巴油、表皮生长因子、大豆皂草苷、粘多糖及其混合物。
最好本发明的组合物中包含一种或多种防晒剂。各种常规的防晒剂例如公开于Cosmetics，Science and Technology(化妆品、科学与技术)，第2版(1972)，第1卷，第VIII章，第189页等。还参见美国专利6,068,834。
所述防晒剂必须与一种或多种活性物相容。优选所述组合物包含约1％-约20％，更优选约2％-约10％的防晒剂。精确的量取决于所选的防晒剂和所需的防晒因子(SPF)。
可向任一本发明的组合物中加入试剂以改进所述组合物的皮肤亲和性，特别是增强其耐水洗或耐摩擦性。提供这种功能的优选的试剂为乙烯和丙烯酸的共聚物。包含这种共聚物的组合物公开于美国专利4,663,157。
本发明涉及抑制哺乳动物皮肤(通常为人)中黑色素产生的方法。在一个实施方案中，这种方法包括向皮肤或皮肤区给予安全和有效量的本发明的组合物。活性试剂的量和施用频率取决于皮肤的初始状况和所需的最终结果。通常应给予足够量所述组合物并持续足够时间，以明显增白皮肤。
可使用任何小于毒性水平的剂量，因此对于某些剂型，特别是局部用剂型考虑其剂量，“剂量”为提供所需效果的量，由于施用的频率和施用量，因此该剂量可能非常大，最大有效量与此不相干。
在局部用组合物中施用安全和有效量的活性物，通常为约1μg-约1mg/cm2皮肤/次施用，优选为约2μg-约800μg/cm2皮肤/次施用，更优选为约30μg-约700μg/cm2皮肤/次施用，最优选为约75μg-约250μg/cm2皮肤/次施用。施用频率通常为约4次/天-约2次/周，更优选为约3次/天-约1次/每隔一天，更优选每天至少2次。通常优选在晚上至少施用1次。
全身用组合物本发明的组合物可与药学上可接受的载体或稀释剂组合使用，生产药物组合物。适用于这种组合物的药学上可接受的稀释剂或载体为药学领域公知的。本发明的组合物通常包含0.1-35％重量的各种活性物，例如1-25％重量的活性物，更优选为至少5或10％重量的活性物。
所述药物组合物可由固体剂型组成，例如片剂、硬胶囊、软胶囊、散装粉末和药物微胶囊。或者所述药物组合物可由液体剂型组成，例如水溶液或非水溶液、乳液或悬浮液。
用于口服给药的固体组合物为本发明优选的组合物。优选本发明的固体组合物以单位剂型制备，例如片剂形式和胶囊。合适的片剂可通过在崩解剂(例如玉米淀粉)和润滑剂(例如硬脂酸镁)存在下，将活性物与惰性稀释剂(例如磷酸钙)混合在一起制备，随后采用已知的方法将混合物制成片剂。如果需要，可采用已知的方法为这种片剂配备肠衣，例如使用醋酞纤维素。同样，可采用常规的方法制备任选为含有或不含添加的赋形剂的珠粒形式的包含活性组合的胶囊，例如硬胶囊或软胶囊，并且如果需要，可采用已知的方法提供肠衣。可采用本领域技术人员已知的方法配制片剂，使得可控释放本发明的化合物。
本发明的药物组合物的控释形式包括快速释放制剂(例如可溶颗粒或熔融填充的快速释放胶囊)、缓释制剂(例如配备肠衣(例如醋酐纤维素)的片剂，特别优选缓释制剂。缓释制剂的许多类型为本领域技术人员已知的。通常可将活性物组合包封在缓释涂层(例如纤维素醚和丙烯酸酯的共聚物)中，或者例如可与小颗粒(例如离子交换树脂珠粒)结合。或者可将活性物组合掺入包含缓释剂的基质中，例如亲水树胶(例如黄原胶)、纤维素衍生物(例如羟丙基甲基纤维素)或多糖、蜡或塑料材料。
可将活性物组合配制成固体剂型，其中将两种活性物成分隔开。例如，所述剂型可双层片剂，其中各种活性物成分包含在不同的层中。可配制不同的层，使得每种药物最佳释放。
液体填充组合物(例如粘稠的液体填料、液体糊膏填料或触变流体填料)也适于口服给药。熔体填充的组合物可如下制得，将活性物组合与莱些天然植物油脂肪酸酯(例如GelucireTM级，购自Gattefosse)混合，得到各种释放速率。合适的熔体填充的胶囊包含10-80％的总活性物和20-90％的脂肪酸酯赋形剂，所述赋形剂包含一种或多种多元醇酯和天然植物油脂肪酸的甘油三酯。
优选口服液体组合物包含1-5％重量的各种活性物以及1-50％重量的稀释剂，余量用无菌水补充。任选所述组合物可包含悬浮剂、增稠剂、共溶剂(例如醇)和/或防腐剂。合适的稀释剂包括甜味剂，例如山梨糖醇、木糖醇或蔗糖。合适的悬浮剂或增稠剂包括纤维素树胶、琼脂或天然树胶，例如黄原胶。可加入本领域技术人员已知的调味剂或其他味道遮蔽剂，例如糖精、糖精钠、合成糖精或天冬甜素。
适于胃肠外给药的本发明的组合物可通过活性物与用于这种给药的已知药物形式组合来制备，例如活性物在合适的溶剂(例如盐水)中的无菌悬浮液或无菌溶液。
优选的给药方式为口服给药。
通常应给予足够量的所述组合物并持续足够时间，以明显增白皮肤。
化合物的给药量取决于药物组合物中该化合物的生物利用率，特别是在口服给药时。但是，通常本发明化合物的剂量为约0.01-约100mg/kg体重，优选为约0.1-约30mg/kg体重。药物组合物的量取决于该制剂中化合物在的百分含量，随每剂量所需化合物的量、其稳定性、释放特性和其他药物参数而变。通常的给药剂量为每周1次或2次至每天1次或2次。
所述给药方法和剂量仅作为指导，而专业人员可很容易地对任何具体的个体确定最佳给药方法和剂量。
另一种全身给药方法包括在食品中给予任一上述组合物，因此无需使用药学上可接受的载体。
本文使用的术语“食品”包括食品本身和饮料。合适的食品包括涂抹食品(spread)、乳制品(包括牛奶和酸奶)、点心、方便食品/快餐、早餐谷类食品和谷物棒、快煮麦片、面包和冷冻糖果(例如冰淇淋、水冰、果冻汁和酸奶冰淇淋)。食品还包括饮食/营养补充品。合适的饮料包括茶、茶味饮料、咖啡、软饮料(例如充了碳酸气的果汁饮料等)和果汁。
所述食品通常添加了本发明的活性成分，使得比正常情况下包含更高量的一种或多种活性成分。
当苦瓜或其萃取物和/或松树皮萃取物各自分开成局部给药和全身给药形式两部分时，最佳日剂量的最高值和最低值与局部和全身给药两种给药方式间的分配成比例。
用途本发明的组合物可用于调节哺乳动物皮肤(特别是人)中黑色素的产生。更具体地讲，本发明的组合物可用于提高皮肤中褐黑素与真黑素的比率，例如通过抑制在皮肤中产生真黑素(正常黑色素)。优选将褐黑素与真黑素的比率提高至对照物的至少1.5倍(与对照物相比褐黑素的百分含量除以与对照物相比真黑素的百分含量，例如如果褐黑素提高至对照物的150％，而真黑素降低至对照物的50％，则相对于对照物，该比率为3∶1)。因此本发明的组合物可用于使哺乳动物(例如人)的皮肤美白。提高皮肤中褐黑素与真黑素的比率比简单地抑制产生两种类型的黑色素的优势在于得到的皮肤色调较好。
参考以下实施例来进一步说明本发明，这些实施例仅用于说明的目的，而非要限制本发明。
实施例在这些实施例中，使用市售的MelanodermTM体系测试评价苦瓜和Pycnogenol对真黑素和褐黑素水平的影响能力。
将试样冷冻至-80℃，随后在咖啡研磨机中研磨，制备苦瓜萃取物。随后将试样冻干过夜，采用Soxhlet萃取装置使用200ml丙酮萃取16小时。随后将萃取物于40℃下旋转蒸发，浓缩的残余物在氮气流下干燥。随后将试样储存于-20℃的氮气中。
Pycnogenol得自Solgar(Pycnogenol30mg)。
MelanodermsTM处理方法MelanoDermTMMatTeks体系由正常的人衍生的表皮角化细胞(NHEK)和黑色素细胞(NHM)组成，经培养形成多层、高度分化的人表皮模式。共培养的NHM进行自发黑色素生成，产生不同水平着色的组织。使用不含人造黑色素生成刺激物(例如TPA和IBMX)的无血清培养基产生组织。培养物在空气-液体界面的细胞培养插片上生长，模拟待测试试剂的局部施用。将试剂引入培养基，模拟全身施用。因此，该模式提供了一种有用的评价设计用于调节皮肤着色的试剂的体外方法。
在输送方面，将melanoderms(MatTek MEL-300-B)放置在包含5ml预热维持液(EPI-100-MM-PRF)的6孔盘的金属环载体上，使用MatTek程序的无菌技术。于37℃和4％的CO2下温育过夜，使得melanoderms完全复原和平衡。一旦置于这些条件下，MEL-300组织进行黑色素原生成和分化。
次日早晨开始处理。将待测试的试剂溶解于合适的溶剂中，随后以最终的浓度加至已弄热的培养基中，预评定黑色素细胞的毒性。每次更换培养基，将用过的培养基从melanoderms中抽出，保留用于测试毒性(使用乳酸脱氢酶(Promega))，释放Interleukin-1(R&D体系)，用新鲜剂量的培养基加上测试试剂(不管是否在melanoderm的培养基中)替代。将Melanoderms返回温育器。每48小时重复一次该处理方法，直至在对照物和测试试剂之间观察到色深的相对差异。
在观察色深的差异时，用照相的方法记录微观和宏观色深。收获melanoderm组织的方法包括将该组织从其塑料载体上切割开，随后对存在的处理后的黑色素与未经处理的黑色素进行定量测定。
从Melanoderm组织选择性溶解黑色素(1)碱溶性黑色素(褐黑素)的定量测定从塑料支架上切取Melanoderm试样，测定组织的湿重。将200μl1M NaOH/8M尿素加至该melanoderm试样，在microfuge管中均化该组织。将试样于室温下断断续续地旋混30分钟，以释放溶解的黑色素。将试样于13,000rpm下离心分离10分钟，将包含溶解的黑色素的上清液移至新的管中。
加入200μl氯仿，从上清液中萃取蛋白质，随后剧烈搅拌1分钟。于13,000rpm下离心分离10分钟，将各相分离。将150μl上清液加至微量滴定板中(双份)，确定于340nm下的光学密度(OD)。
(2)碱不溶的黑色素(真黑素)的定量测定将1M的NaOH加至包含不溶黑色素的剩余小粒中，随后将试样涡流1分钟。随后将试样于37℃水浴中温育96小时，每日混合，以释放不溶的黑色素。将试样与200μl氯仿一起于13,000rpm下离心分离10分钟，将190μl上清液移至新的管中。将上清液再次离心分离，将150μl上清液移至微量滴定板中，分析于340nm下的吸收。
计算黑色素绝对浓度绝对黑色素为实际的黑色素量，从先前测定的褐黑素标准曲线计算得到x＝(y-0.003)/4.76423(其中x＝黑色素的浓度，y＝于340nm下的光学密度)。
对于真黑素，该曲线为x＝(y-0.00553)/3.70312。
结果
与单独的每种成分相比，使用苦瓜和Pyconogenol的组合进行处理在更大程度上降低了melanoderm产生的总黑色素。与单独的每种成分相比，使用苦瓜和Pyconogenol的组合进行处理，在所有的情况下增加了溶解的黑色素，而不溶的黑色素有较大程度地下降。当计算溶解的黑色素与不溶的黑色素的比率时，当苦瓜和Pycnogenol组合使用时，该比率比对照物提高50％。
这些结果表明，该组合以协同的方式抑制产生真黑素，而不抑制产生褐黑素-实际上在所有的情况下提高了褐黑素的产生。
在细节上作出必要修改后，称作上述各部分的本发明的各种特征和实施方案在适当的情况下可用于其他部分。因此，在适当的情况下，在一部分中详细说明的特征可与在其他部分详细说明的特征结合使用。
在以上说明书中，所有提及的出版物通过引用结合到本文中来。在不偏离本发明范围的情况下，所述方法的各种修改和变化以及本发明的产物对本领域技术人员来说是显然的。虽然结合具体的优选的实施方案来描述本发明，但应理解的是，要求保护的本发明不应过分局限于这些具体的实施方案。实际上，实施本发明的所述方式的各种变化包括在以下的权利要求的范围内，这点对相关领域技术人员来说是显然的。
权利要求
1.一种皮肤美白组合物，所述组合物包含苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
2.权利要求1的皮肤美白组合物，其中配制所述组合物用于全身给药。
3.权利要求2的皮肤美白组合物，其中所述苦瓜或其萃取物占所述组合物重量的10-35％。
4.权利要求2或权利要求3的皮肤美白组合物，其中所述松树皮萃取物占所述组合物重量的10-35％。
5.权利要求1的皮肤美白组合物，其中配制所述组合物用于局部给药。
6.权利要求5的皮肤美白组合物，其中所述苦瓜或其萃取物占所述组合物重量的1-35％。
7.权利要求5或权利要求6的皮肤美白组合物，其中所述松树皮萃取物占所述组合物重量的1-35％。
8.一种皮肤美白产品，所述产品包含(i)包含有效量的苦瓜或其萃取物的固体剂型和(ii)包含有效量的松树皮萃取物的局部用组合物。
9.一种皮肤美白产品，所述产品包含(i)包含有效量的松树皮萃取物的固体剂型和(ii)包含有效量的苦瓜或其萃取物的局部用组合物。
10.一种抑制哺乳动物皮肤中黑色素产生的方法，所述方法包括给予所述人有效量的苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
11.权利要求10的方法，其中将所述苦瓜或其萃取物和/或松树皮萃取物全身给药。
12.权利要求10的方法，其中将所述苦瓜或其萃取物和/或松树皮萃取物局部给药。
13.一种组合物，所述组合物包含用于抑制哺乳动物皮肤中黑色素产生的苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
14.苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物在生产用于抑制哺乳动物皮肤中黑色素产生的组合物中的用途。
15.一种增加哺乳动物皮肤中褐黑素与真黑素比率的方法，所述方法包括给予所述人有效量的苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
16.权利要求15的方法，其中将所述苦瓜或其萃取物全身给药，将所述松树皮萃取物局部给药，或者反之亦然。
17.一种组合物，所述组合物包含用于增加哺乳动物皮肤中褐黑素与真黑素比率的苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
18.苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物在生产用于增加哺乳动物皮肤中褐黑素与真黑素比率的组合物中的用途。
19.一种在个体皮肤中抑制黑色素从黑色素细胞传输至角化细胞的方法，所述方法包括给予所述个体有效量的苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物。
全文摘要
本发明提供了一种包含苦瓜或其萃取物以及松树皮萃取物的皮肤美白组合物。
文档编号A61K31/78GK1956704SQ200580016575
公开日2007年5月2日 申请日期2005年2月18日 优先权日2004年3月29日
发明者R·L·查利斯尼纽沙姆, P·R·亚特斯 申请人:荷兰联合利华有限公司