专利名称：经粘膜用组合物及提高经粘膜吸收的方法
技术领域：
本发明涉及一种经粘膜用组合物。更具体而言，本发明涉及一种能够改善药理活性肽或蛋白质的经粘膜吸收性的经粘膜用组合物。并且，本发明涉及一种提高药理活性肽或蛋白质的经粘膜吸收的方法。
背景技术：
目前，药理活性肽或蛋白质等药物主要是通过对静脉内或皮下注射进行给药。但是，通过注射给与药物，给患者造成较多的精神负担或肉体痛苦，另外也存在患者难以自己进行给药的便利性问题。因此，近年，作为注射以外的给药方法，通过肺粘膜、鼻粘膜、口腔粘膜、阴道粘膜、胃粘膜、消化道粘膜等粘膜给与药物的方法正受到重视。
但是，一般情况下，由于肽或蛋白质的粘膜吸收性低，所以，有时难以透过粘膜吸收足以发挥所期望药效的药量。因此，迄今为止，已开发了多种用于使肽或蛋白质被高效地经粘膜吸收的吸收促进剂。例如，已公开了使用胞嘧啶核苷酸(cytidine nucleotide)衍生物(专利文献1)或分子量在5千以上的脱乙酰壳多糖(专利文献2)作为吸收促进剂的方法。
虽然已经公开了上述多种方法，但目前，作为改善肽或蛋白质的粘膜难吸收性的手段，仍然期待着开发出通过更加实用有效的方法实现粘膜吸收的技术。
专利文献1特开平6-9424号公报专利文献2特开平11-116499号公报发明内容本发明的目的在于提供一种经粘膜用组合物，所述组合物被设计成为能够使药理活性肽及蛋白质通过肺粘膜、鼻粘膜、口腔粘膜、阴道粘膜、胃粘膜、消化道粘膜等粘膜高效地被吸收。并且，本发明的目的还在于提供一种能够有效地提高药理活性肽及蛋白质的经粘膜吸收的方法。
本发明人等为了解决上述问题进行了潜心研究，结果发现，通过在适用于粘膜的组合物中使聚合度为2～20的壳寡糖(chitosanoligosaccharide)、其衍生物、或葡糖胺与药理活性肽或蛋白质共存，可以提高药理活性肽或蛋白质的经粘膜吸收性，能够得到通过用于粘膜发挥优异药效的组合物。基于上述发现，进一步通过反复改良，从而完成本发明。
即，本发明提供如下所示的经粘膜用组合物项1、一种经粘膜用组合物，其特征为含有下述成分(i)及成分(ii)(i)选自具有药理活性的肽及蛋白质中的至少一种，及(ii)选自聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐中的至少一种。
项2、如项1所述的经粘膜用组合物，其中，成分(i)为选自抗生素、造血剂、传染病治疗剂、抗痴呆剂、抗病毒剂、抗肿瘤剂、解热剂、镇痛剂、消炎剂、抗溃疡剂、抗过敏剂、抗抑郁剂、精神治疗药物、强心剂、心律失常治疗剂、血管扩张剂、降压剂、糖尿病治疗剂、抗凝血剂、降胆固醇剂、骨质疏松症治疗剂、激素制剂及疫苗中的至少一种。
项3、如项1所述的经粘膜用组合物，其中，成分(i)为选自细胞因子、肽激素、生长因子、作用于心血管系统的因子、细胞粘附因子、作用于中枢及末梢神经系统的因子、作用于体液电解质及血液有机物质的因子、作用于骨及骨骼的因子、作用于消化系统的因子、作用于肾及泌尿系统的因子、作用于结缔组织及皮肤的因子、作用于感觉器官的因子、作用于免疫系统的因子、作用于呼吸系统的因子、作用于生殖系统的因子及酶中的至少一种。
项4、如项1所述的经粘膜用组合物，其中，成分(i)为选自干扰素、白细胞介素、胰岛素、生长激素(growth hormones)、降钙素、黄体生成素释放激素、肾上腺皮质激素、黄体生成素、甲状旁腺激素、及甲状旁腺激素的活性片段中的至少一种。
项5、如项1所述的经粘膜用组合物，其中，成分(ii)为选自聚合度为2～15的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐中的至少一种。
项6、如项1所述的经粘膜用组合物，所述组合物相对于100重量份的成分(i)，以0.001～1×106重量份的比例含有所述成分(ii)。
项7、如项1所述的经粘膜用组合物，所述组合物是以1×10-6～30w/v％的比例含有成分(i)的液体状组合物。
项8、如项1所述的经粘膜用组合物，所述组合物是以0.01～30w/v％的比例含有成分(ii)的液体状组合物。
项9、如项1所述的经粘膜用组合物，所述组合物是以1×10-5～99重量％的比例含有成分(i)的固态组合物。
项10、如项1所述的经粘膜用组合物，所述组合物是以0.1～50重量％的比例含有成分(ii)的固态组合物。
项11、如项1所述的经粘膜用组合物，所述组合物为适用于鼻腔粘膜、消化器官粘膜、肺粘膜、口腔粘膜、眼或阴道粘膜的组合物。
另外，本发明提供了如下所述的提高粘膜吸收的方法项12、一种提高经粘膜吸收的方法，所述方法能够提高哺乳动物对选自具有药理活性的肽及蛋白质中的至少一种的经粘膜吸收，其特征为，对哺乳动物的粘膜给与(i)选自具有药理活性的肽及蛋白质中的至少一种，和(ii)选自聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐中的至少一种。
项13、如项12所述的方法，其中，成分(i)为选自抗生素、造血剂、传染病治疗剂、抗痴呆剂、抗病毒剂、抗肿瘤剂、解热剂、镇痛剂、消炎剂、抗溃疡剂、抗过敏剂、抗抑郁剂、精神治疗药物、强心剂、心律失常治疗剂、血管扩张剂、降压剂、糖尿病治疗剂、抗凝血剂、降胆固醇剂、骨质疏松症治疗剂、激素制剂及疫苗中的至少一种。
项14、如项12所述的方法，其中，成分(i)为选自细胞因子、肽激素、生长因子、作用于心血管系统的因子、细胞粘附因子、作用于中枢及末梢神经系统的因子、作用于体液电解质及血液有机物质的因子、作用于骨及骨骼的因子、作用于消化系统的因子、作用于肾及泌尿系统的因子、作用于结缔组织及皮肤的因子、作用于感觉器官的因子、作用于免疫系统的因子、作用于呼吸系统的因子、作用于生殖系统的因子及酶中的至少一种。
项15、如项12所述的方法，其中，成分(i)为选自干扰素、白细胞介素、胰岛素、生长激素、降钙素、黄体生成素释放激素、肾上腺皮质激素、黄体生成素、甲状旁腺激素、及甲状旁腺激素的活性片段中的至少一种。
项16、如项12所述的方法，其中，成分(ii)为选自聚合度为2～15的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及其盐中的至少一种。
项17、如项12所述的方法，所述方法为在给与成分(i)的同时，给与相对于100重量份的成分(i)比例为0.001～1×106重量份的成分(ii)。
项18、如项12所述的方法，所述方法为给与哺乳动物粘膜一种液体状组合物，该液体状组合物含有成分(i)及成分(ii)，其中成分(i)的比例为1×10-6～30w/v％。
项19、如项12所述的方法，所述方法为给与哺乳动物粘膜一种液体状组合物，该液体状组合物含有成分(i)及成分(ii)，其中成分(ii)的比例为0.01～30w/v％。
项20、如项12所述的方法，所述方法为给与哺乳动物粘膜一种固体状组合物，该固体状组合物含有成分(i)及成分(ii)，其中成分(i)的比例为1×10-5～99重量％。
项21、如项12所述的方法，所述方法为给与哺乳动物粘膜一种固体状组合物，该固体状组合物含有成分(i)及成分(ii)，其中成分(ii)的比例为0.1～50重量％。
项22、如项12所述的方法，其中给药的粘膜为鼻腔粘膜、消化器官粘膜、肺粘膜、口腔粘膜、眼或阴道粘膜。
项23、如项12所述的方法，所述方法为对哺乳动物粘膜给与权利要求1至11中任一项所述的经粘膜用组合物。
并且，本发明提供如下所述的用途。
项24、(i)选自具有药理活性的肽及蛋白质中的至少一种，及(ii)选自聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及其盐中的至少一种，在制备经粘膜用组合物中的用途。
表示在试验例1中，将各组合物(实施例1-4及比较例1-2)给与大鼠气管内时血清中IFNα的平均浓度的经时变化。
具体实施例方式
下面，更加详细地说明本发明。
I经粘膜用组合物成分(i)本发明的经粘膜用组合物含有选自具有生理活性的肽及蛋白质中的至少一种作为成分(i)。
本发明中，可以使用由2个以上的氨基酸构成的肽及其衍生物作为具有生理活性的肽及蛋白质。具体而言，作为该肽及蛋白质，除了仅由氨基酸构成的物质之外，还可以使用例如被半乳糖、甘露糖等糖、或糖链修饰的物质；用聚乙二醇等合成聚合物、或硫酸软骨素、透明质酸等天然聚合物修饰的物质；被其他非肽性化合物修饰的物质等。也可以使用在用于呈现生理活性所必须的氨基酸序列中加入具有其他功能的肽得到的杂合肽。另外，也可以为已知药理活性的肽及蛋白质的片段，只要该片段保持了药理活性即可。
对于该肽及蛋白质的分子量，没有特殊的限制，例如可以举出200～200000，优选200～100000，更优选约200～50000。
对本发明使用的肽及蛋白质的粘膜吸收特性没有特殊的限制，可以为粘膜易吸收性物质，也可以为粘膜难吸收性物质。此处，所谓“粘膜易吸收性”是指即使没有其他的粘膜吸收促进剂，在通常的给药量下，肽及蛋白质也能通过粘膜吸收可发挥药效作用的量，所谓“粘膜难吸收性”是指如果没有与其他的粘膜吸收促进剂共存，则在通常的给药量下，肽及蛋白质不能通过粘膜吸收可发挥药效作用的量。鉴于本发明的效果，即能够提高肽及蛋白质的粘膜吸收性，作为优选的肽及蛋白质，可以举出粘膜难吸收性物质。
该肽及蛋白质可以为来自天然的物质、通过基因重组技术制备的物质、通过化学合成制备的物质中的任意一种。
作为具有生理活性的肽及蛋白质，例如可以举出作为抗生素、造血剂、传染病治疗剂、抗痴呆剂、抗病毒剂、抗肿瘤剂、解热剂、镇痛剂、消炎剂、抗溃疡剂、抗过敏剂、抗抑郁剂、精神治疗药物、强心剂、心律失常治疗剂、血管扩张剂、降压剂、糖尿病治疗剂、抗凝血剂、降胆固醇剂、骨质疏松症治疗剂、激素制剂及疫苗等使用的成分。
作为该肽及蛋白质的具体例，例如可以举出细胞因子、肽激素、生长因子、作用于心血管系统的因子、细胞粘附因子、作用于中枢及末梢神经系统的因子、作用于体液电解质及血液有机物质的因子、作用于骨及骨骼的因子、作用于消化系统的因子、作用于肾及泌尿系统的因子、作用于结缔组织及皮肤的因子、作用于感觉器官的因子、作用于免疫系统的因子、作用于呼吸系统的因子、作用于生殖系统的因子及酶。其中，作为优选例可以举出细胞因子、肽激素、生长因子、作用于心血管系统的因子、作用于中枢及末梢神经系统的因子、作用于体液电解质及血液有机物质的因子、作用于骨及骨骼的因子、作用于消化系统的因子、作用于免疫系统的因子、作用于呼吸系统的因子、作用于生殖系统的因子及酶。
下面，举出该肽及蛋白质的具体例。但本发明并不限定于这些肽及蛋白质。
细胞因子例如干扰素(干扰素-α、β、γ)、白细胞介素(白细胞介素-1～11)、肿瘤坏死因子(TNF-α、β)、恶性白细胞抑制因子(LIF)、红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、血小板生成素、血小板生长刺激因子(platelet growth stimulatingfactor)、巨核细胞生长刺激因子(megakaryocyte growth stimulatingfactor)等。
肽激素例如胰岛素、生长激素、黄体生成素释放激素(LH-RH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、淀粉不溶素(amylins)、催产素、黄体生成素等。
生长因子例如神经生长因子(NGF、NGF-2/NT-3)、表皮细胞生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、转化生长因子(TGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、肝细胞生长因子(HGF)等。
作用于心血管系统的因子例如内皮素、内皮素抑制剂、内皮素拮抗剂、内皮素生成酶抑制剂、加压素、肾素、血管紧张素I、血管紧张素II、血管紧张素III、血管紧张素I抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、心房利尿钠肽(ANP)、抗心律失常肽等。
细胞粘附因子例如层粘连蛋白、细胞间粘附分子1(ICAM1)等。
作用于中枢及末梢神经系统的因子例如脑啡肽、内啡肽、京都啡肽(kyotorphin)、神经营养因子(NTF)、降钙素基因相关肽(CGRP)、腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)、促甲状腺激素释放激素(TRH)、神经降压素等。
作用于体液电解质及血液有机物质的因子例如降钙素、脱辅基蛋白质E、水蛭素等。
作用于骨及骨骼的因子例如甲状腺激素、甲状腺激素的活性片段、组蛋白H4-相关的成骨生长肽(Histone H4-related osteogenicgrowth peptide)等。
作用于消化系统的因子例如分泌素、胃泌素等。
作用于肾及泌尿系统的因子例如脑钠利尿肽、硬骨鱼紧张肽(urotensin)等。
作用于感觉器官的因子例如P物质等。
作用于免疫系统的因子例如趋化肽、缓激肽等。
作用于呼吸系统的因子例如控制哮喘反应的因子等。
在上述成分(i)中，作为优选使用的物质，可以举出干扰素、白细胞介素、胰岛素、生长激素、黄体生成素释放激素、促肾上腺皮质激素、黄体生成素、降钙素、甲状腺激素、甲状腺激素的活性片段。作为特别优选的成分(i)，例如可举出干扰素。
上述成分(i)的每日给药量，根据该成分(i)的种类、患者的年龄或性别等的不同而有所差异，但可以设定成人每日通常为0.001～100mg、优选0.01～10mg作为标准。
成分(ii)本发明的经粘膜用组合物，含有选自聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐中的至少一种作为成分(ii)。
本发明中，所谓聚合度为2～20的壳寡糖是指2～20个葡糖胺残基通过β1-4键结合形成的寡糖。
本发明中，作为聚合度为2～20的壳寡糖的衍生物，只要是药学上允许的衍生物即可，没有特殊的限制。作为上述衍生物，具体而言可以举出上述壳寡糖的羧甲基化物、羧乙基化物、羟乙基化物、二羟丙基化物、甲基化物、乙基化物、甘醇化物、酰化物、甲苯磺酰化物、硫酸化物等。
另外，对于作为成分(ii)使用的聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物及葡糖胺的盐，只要为药学上允许的物质即可，无特殊的限制。作为上述盐，具体而言，可以举出由无机酸(例如盐酸、硫酸、磷酸等)形成的盐；及有机酸(例如乙酸、酒石酸、乳酸、谷氨酸、马来酸、藻酸、柠檬酸等)形成的盐。
作为该成分(ii)，可以优选举出聚合度为2～15的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐，更优选聚合度为2～10的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐。
用作成分(ii)的上述壳寡糖，可以通过使用酶(chitonase等)或酸等水解脱乙酰壳多糖进行制备。另外，上述壳寡糖也可以通过在使用酶(壳多糖酶等)或酸等水解甲壳质后，在强碱溶液中使其脱乙酰化的方法进行制备。
经粘膜用组合物本发明的经粘膜用组合物中，作为上述成分(i)及(ii)的配合比例没有特殊的限定，通常相对于100重量份上述成分(i)，上述成分(ii)的比例为0.001～1×106重量份，优选为0.01～1×105重量份，更优选为0.1～1×104重量份。通过满足上述比例，能够显著地提高成分(i)的经粘膜吸收。
对于本发明的经粘膜用组合物中上述成分(i)的配合量，只要为用于粘膜可发挥药理效果的有效量即可，可以根据患者的性别或年龄、给药方式、制剂的形状或剂型、所使用的成分(i)的种类或每日给药量、成分(ii)的种类、期待的药效效果等适当地设定。作为经粘膜用组合物中上述成分(i)的配合比例之一例，可以举出成分(i)相对于该组合物的总重量为1×10-7～99重量％的比例。具体而言，配制液体状组合物时，例如成分(i)的比例通常可以为1×10-6～30w/v％，优选为1×10-5～10w/v％，更优选为1×10-4～1w/v％。此处，单位“w/v％”与“g/100ml”意思相同。另外，例如配制固体状组合物时，相对于该组合物的总重量，成分(i)的比例通常可以为1×10-5～99重量％，优选为1×10-4～50重量％，更优选为1×10-3～10重量％。
对于本发明的经粘膜用组合物中上述成分(ii)的配合量，只要为能够提高上述成分(i)的粘膜吸收的有效量即可，可以根据上述成分(i)及(ii)的配合比例和上述成分(i)的配合量适当地设定。作为经粘膜用组合物中上述成分(ii)的配合比例之一例，可以举出相对于该组合物的总重量，成分(ii)的比例为0.001～50重量％。具体而言，配制液体状组合物时，成分(ii)的比例通常可以为0.01～30w/v％，优选0.1～10w/v％，更优选0.5～5w/v％。另外，例如配制固体状组合物时，相对于该组合物的总重量，成分(ii)的比例通常为0.1～50重量％，优选0.5～30重量％，更优选1～10重量％。
本发明的经粘膜用组合物，除上述成分(i)及(ii)之外，还可以含有在经粘膜用组合物中通常使用的各种药效成分。
另外，本发明的经粘膜用组合物中，除上述成分之外，根据该组合物的用途或形状等，也可以适当地配合在经粘膜用组合物中通常使用的载体或添加剂。对于该载体或添加剂的配合比例，可以根据本领域通常采用的范围适当地设定。作为能够配合的载体或添加剂没有特殊的限制，例如可以举出水、生理盐水、及其他水性溶剂、水性或油性基剂等各种载体；赋形剂、粘合剂、pH调节剂、崩解剂、吸收促进剂、润滑剂、着色剂、矫味剂、香料等各种添加剂。
作为上述添加剂，具体而言可以举出乳糖、白糖、甘露醇、氯化钠、葡萄糖、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素、硅酸盐等赋形剂；水、乙醇、单糖浆、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明胶液、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、明胶、糊精、支链淀粉等粘合剂；柠檬酸、柠檬酸酐、柠檬酸钠、二水合柠檬酸钠、无水磷酸一氢钠、无水磷酸二氢钠、磷酸氢钠、磷酸二氢钠等pH调节剂；羧甲基纤维素钙、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、聚乙烯聚吡咯烷酮、聚山梨脂80等崩解剂；季铵盐、月桂基硫酸钠等其他吸收促进剂；精制滑石粉、硬脂酸盐、聚乙二醇、胶态硅酸、蔗糖脂肪酸酯类等润滑剂；黄色氧化铁、黄色三氧化二铁、三氧化二铁、β胡萝卜素、氧化钛、食用色素(例如，食用蓝色1号等)、铜叶绿素(copper chlorophyllin)、核黄素等着色剂；以及抗坏血酸、天冬甜素、甘茶(Hydrangeae Dulcis Folium)、氯化钠、果糖、糖精、粉糖等矫味剂等。
并且，除上述成分之外，在本发明的经粘膜用组合物中，可以使用生物降解性合成高分子作为基剂。作为上述生物降解性合成高分子的代表例，例如可以举出聚乳酸、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、聚羟基丁酸、聚(羟基丁酸-乙醇酸)共聚物、及上述物质的混合物等，但并不仅限定于上述物质。
本发明的经粘膜用组合物的形态只要适用于粘膜即可，没有特殊的限制，可以为固体状、液体状、半固体状、悬浊状、粉末状、微粒状中的任一种形态。另外，本发明的经粘膜用制剂，可以根据公知的方法成型为微胶囊(微球)等粒子。
另外，对作为本发明的经粘膜用组合物的适用对象的粘膜没有特殊的限制。作为本发明经粘膜用制剂的适用对象粘膜，具体而言，可以举出鼻粘膜、消化器官粘膜(胃肠粘膜)、肺粘膜、阴道粘膜、口腔粘膜、眼粘膜、气管粘膜等。其中，出于患者的顺应性(compliance)等方面的原因，可以优选举出鼻粘膜、消化器官粘膜、肺粘膜及阴道粘膜。
本发明的经粘膜用组合物，根据其形状或适用对象粘膜，可以配制成各种剂型。另外，本发明的经粘膜用组合物可以用作药物组合物，按照与其适用对象粘膜或剂型相应的给药方式，施用于患者的粘膜。
II提高经粘膜吸收的方法如上所述，上述成分(ii)能够提高具有药理活性的肽及蛋白质的经粘膜吸收。所以，本发明进一步提供了一种提高哺乳动物对选自具有药理活性的肽及蛋白质中的至少一种的经粘膜吸收的方法。该方法的特征为，在对人等哺乳动物的粘膜给与(i)选自具有药理活性的肽及蛋白质中的至少一种的同时，给与(ii)选自聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐中的至少一种。
该方法中，对于成分(i)的种类或给药量、成分(ii)的种类或给药量、成分(i)与成分(ii)的比例、给药对象粘膜等，与上述“I经粘膜用组合物”的情况相同。
该方法优选通过对哺乳动物粘膜给与上述经粘膜用组合物而实施。
实施例下面，给出实施例及试验例详细地说明本发明，但本发明并不限定于此。需要说明的是，实施例4及比较例1中使用的壳寡糖或脱乙酰壳多糖的平均分子量，按照“甲壳质、脱乙酰壳多糖手册”(甲壳质、脱乙酰壳多糖研究会编，技报堂出版)第8章甲壳质、脱乙酰壳多糖分析法中记载的使用高效液相色谱(HPLC)的GPC(凝胶渗透色谱)模型的方法进行计算。
实施例1用注射用水(制备序号2D71N，经销商大塚制药株式会社)溶解脱乙酰壳多糖六聚物(6个葡糖胺残基通过β1-4键结合形成的寡糖；制品名脱乙酰壳多糖六聚物，分子量1204，编号No.400436，购入地生化学工业株式会社)，配制5mg/mL的脱乙酰壳多糖六聚物溶液。向含有1000万IU干扰素α(IFNα)的小瓶(天然型干扰素α制剂，商品名OIF，制造序号3G86F10，制备经销商大塚制药株式会社)中加入0.5mL上述溶液，轻轻振摇混合使小瓶内的冷冻干燥物溶解，配制IFNα浓度为2000万IU/mL(约0.01w/v％)的组合物。
实施例2除使用等量的脱乙酰壳多糖二聚体(6个葡糖胺残基通过β1-4键结合形成的寡糖；制品名脱乙酰壳多糖二聚体，分子量413、编号No.400432、购入地生化学工业株式会社)代替脱乙酰壳多糖六聚物之外，按照与上述实施例1相同的方法，配制IFNα浓度为2000万IU/mL(约0.01w/v％)的组合物。
实施例3除使用等量的D-(+)-葡糖胺(分子量216，编号No.101782、购入地和光纯药工业株式会社)代替脱乙酰壳多糖六聚物之外，按照与上述实施例1相同的方法，配制IFNα浓度为2000万IU/mL(约0.01w/v％)的组合物。
实施例4除使用等量的脱乙酰壳多糖(制品名水溶性脱乙酰壳多糖，平均分子量1800、制品No.037-14303，购入地和光纯药工业株式会社)代替脱乙酰壳多糖六聚物之外，按照与上述实施例1相同的方法，配制IFNα浓度为2000万IU/mL(约0.01w/v％)的组合物。
实施例5用等渗磷酸缓冲液溶解脱乙酰壳多糖六聚物(6个葡糖胺残基通过β1-4键结合形成的寡糖；制品名脱乙酰壳多糖六聚物，分子量1204，编号No.400436，购入地生化学工业株式会社)，配制10mg/mL的脱乙酰壳多糖六聚物溶液。另外，用等渗磷酸缓冲液溶解鲑鱼降钙素(编号No.T3660，购入地Sigma-Aldrich Japan株式会社)，配制2μg/mL的鲑鱼降钙素溶液。将0.5mL此鲑鱼降钙素溶液与0.5mL脱乙酰壳多糖六聚物溶液混合，配制鲑鱼降钙素浓度为1μg/mL的组合物。
比较例1除使用等量的脱乙酰壳多糖(制品名CHITOSAN EF，平均分子量48000、LOT0302190，购入地日本油脂株式会社)代替脱乙酰壳多糖六聚物之外，按照与上述实施例1相同的方法，配制IFNα浓度为2000万IU/mL(约0.01w/v％)的组合物。
比较例2除不使用脱乙酰壳多糖六聚物之外，按照与上述实施例1相同的方法，配制IFNα浓度为2000万IU/mL(约0.01w/v％)的组合物。
比较例3除不使用脱乙酰壳多糖六聚物之外，按照与上述实施例5相同的方法，配制鲑鱼降钙素浓度为1μg/mL的组合物。
试验例1为了研究上述实施例1-4及比较例1-2的组合物的粘膜吸收特性，特别是在肺粘膜的吸收特性，进行以下试验。
使用禁食约18小时的Wistar系雄性大鼠(体重约200g)作为实验动物。在异氟烷麻醉的状态下固定大鼠，将聚四氟乙烯管(内径0.8mm，外径1.6mm)从口腔插入气管内约5cm。通过此聚四氟乙烯管以0.5mL/kg的剂量向气管内给与上述实施例1-4及比较例1-2的组合物。气管内给药后，于第30分钟、1、2、3、4、5、6、8、10小时从锁骨下静脉采血0.2mL，通过以1800g离心10分钟，得到血清。使用采用酶联免疫法(ELISA)的人IFNα测定试剂盒(制造经销商株式会社日本抗体研究所)测定所得血清中的IFNα浓度。
所得结果如图1及表1所示。图1表示血清中IFNα的平均浓度的经时变化(n＝4)。表1表示药代动力学参数的平均值(n＝4)。需要说明的是，表1中的各参数表示如下含义。
AUC10hr至给药后10小时的血清中浓度-时间曲线下面积(IU·hr/mL)AUCinf至给药后无限长时间的血清中浓度-时间曲线下面积(IU·hr/mL)Cmax最高血中浓度(IU/mL)Tmax达到最高血中浓度的时间(hr)通过此结果可以确认，将脱乙酰壳多糖六聚物、脱乙酰壳多糖二聚体、分子量为1800的壳寡糖、或葡糖胺与IFNα共同配合形成的组合物(实施例1-4)，与配合脱乙酰壳多糖(分子量48000)的组合物(比较例1)或只含有IFNα的组合物(比较例2)相比，最高血中浓度(Cmax)及至给药后10小时的血清中浓度-时间曲线下面积(AUC10hr)都增加。
从以上结果可知，通过同时配合生理活性肽或蛋白质和聚合度为2～20的壳寡糖或葡糖胺，能够提高组合物中的生理活性肽或蛋白质的经粘膜吸收性，显著地改善生物利用度(生物学的利用能力)。
试验例2为了研究上述实施例5及比较例3的组合物的粘膜吸收特性，特别是在肺粘膜的吸收特性，进行以下试验。
使用禁食约18小时的Wistar系雄性大鼠(体重约200g)作为实验动物。在异氟烷麻醉的状态下固定大鼠，分别向气管内给与0.1mL上述实施例5及比较例3的组合物。于给药后第10分钟、30分钟、1、2、3、4、5、6小时从锁骨下静脉采血0.2mL，通过以1800g离心10分钟，得到血清。使用采用甲基二甲苯酚蓝(MXB)法的钙测定试剂盒(制造经销商和光纯药株式会社)测定所得血清中的钙浓度。
通过此结果可以确认，同时配合鲑鱼降钙素与脱乙酰壳多糖六聚物形成的组合物(实施例5)，与只含有鲑鱼降钙素的组合物(比较例3)相比，血清中钙降低作用高3.8倍，给与实施例5的组合物产生的该作用在给药后至少可持续6小时。
产业上的可利用性本发明的经粘膜用组合物，通过使分子量在3000以下的聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐与具有生理活性的肽或蛋白质共存，能够改善具有生理活性的肽或蛋白质的经粘膜吸收特性。所以，本发明的经粘膜用组合物能够有效地发挥以具有生理活性的肽或蛋白质为基础的药效作用。
另外，本发明的经粘膜用组合物，与给患者带来痛苦的注射不同，由于能够自己对鼻粘膜、肺粘膜、阴道粘膜、消化道粘膜等粘膜给药，因此作为必须长时间反复给药的生理活性肽或蛋白质的经粘膜用制剂极其有用。
权利要求
1.一种经粘膜用组合物，其特征为含有下述成分(i)及(ii)(i)选自具有药理活性的肽及蛋白质中的至少一种，及(ii)选自聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及这些物质的盐中的至少一种。
2.如权利要求1所述的经粘膜用组合物，其中，成分(i)为选自抗生素、造血剂、传染病治疗剂、抗痴呆剂、抗病毒剂、抗肿瘤剂、解热剂、镇痛剂、消炎剂、抗溃疡剂、抗过敏剂、抗抑郁剂、精神治疗药物、强心剂、心律失常治疗剂、血管扩张剂、降压剂、糖尿病治疗剂、抗凝血剂、降胆固醇剂、骨质疏松症治疗剂、激素制剂及疫苗中的至少一种。
3.如权利要求1所述的经粘膜用组合物，其中，成分(i)为选自细胞因子、肽激素、生长因子、作用于心血管系统的因子、细胞粘附因子、作用于中枢及末梢神经系统的因子、作用于体液电解质及血液有机物质的因子、作用于骨及骨骼的因子、作用于消化系统的因子、作用于肾及泌尿系统的因子、作用于结缔组织及皮肤的因子、作用于感觉器官的因子、作用于免疫系统的因子、作用于呼吸系统的因子、作用于生殖系统的因子及酶中的至少一种。
4.如权利要求1所述的经粘膜用组合物，其中，成分(i)为选自干扰素、白细胞介素、胰岛素、生长激素、降钙素、黄体生成素释放激素、肾上腺皮质激素、黄体生成素、甲状旁腺激素及甲状旁腺激素的活性片段中的至少一种。
5.如权利要求1所述的经粘膜用组合物，其中，成分(ii)为选自聚合度为2～15的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐中的至少一种。
6.如权利要求1所述的经粘膜用组合物，其中，相对于100重量份的成分(i)，以0.001～1×106重量份的比例含有所述成分(ii)。
7.如权利要求1所述的经粘膜用组合物，是以1×10-6～30w/v％的比例含有成分(i)的液体状组合物。
8.如权利要求1所述的经粘膜用组合物，是以0.01～30w/v％的比例含有成分(ii)的液体状组合物。
9.如权利要求1所述的经粘膜用组合物，是以1×10-5～99重量％的比例含有成分(i)的固体状组合物。
10.如权利要求1所述的经粘膜用组合物，是以0.1～50重量％的比例含有成分(ii)的固体状组合物。
11.如权利要求1所述的经粘膜用组合物，所述组合物是经鼻用组合物、经消化器官用组合物、经肺用组合物、经口腔粘膜用组合物、经眼粘膜用组合物或经阴道粘膜用组合物。
12.一种提高经粘膜吸收的方法，所述方法能够提高哺乳动物对选自具有药理活性的肽及蛋白质中的至少一种的经粘膜吸收，其特征为，对哺乳动物的粘膜给与(i)选自具有药理活性的肽及蛋白质中的至少一种，及(ii)选自聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐中的至少一种。
13.如权利要求12所述的方法，所述方法对哺乳动物粘膜给与权利要求1至11中任一项所述的经粘膜用组合物。
14.含有下述成分(i)和(ii)的组合物在制备经粘膜用组合物中的用途，成分(i)为选自具有药理活性的肽及蛋白质中的至少一种，成分(ii)为选自聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐中的至少一种。
全文摘要
本发明的目的在于提供一种经粘膜用组合物，所述组合物被设计成为能够使药理活性肽及蛋白质透过肺粘膜、鼻粘膜、口腔粘膜、阴道粘膜、眼粘膜、胃粘膜、消化道粘膜等粘膜有效地被吸收。通过配合下述成分(i)及(ii)配制经粘膜用组合物(i)选自具有生理活性的肽及蛋白质中的至少一种，及(ii)选自聚合度为2～20的壳寡糖、其衍生物、葡糖胺及上述物质的盐中的至少一种。
文档编号A61K47/36GK101018560SQ20058003086
公开日2007年8月15日 申请日期2005年9月12日 优先权日2004年9月15日
发明者山本昌, 山田圭吾 申请人:大塚制药株式会社