专利名称：：阿朴棉子酚酮及其用途的制作方法阿朴棉子酚酮及其用途发明背景发明领域本发明为药用化学领域。具体而言，本发明涉及化合物阿朴棉子酚酮(apogossypolone)及其盐和前体药物。阿朴棉子酚酮起Bcl-2家族蛋白抑制剂的作用。本发明还涉及阿朴棉子酚酮用于抑制过度增殖性细胞生长、用于在细胞中诱导细胞凋亡和用于使细胞对细胞凋亡性细胞死亡的诱导敏感的用途。相关技术侵害性的癌细胞表型为导致胞内信号传导途径失调的各种遗传和外遗传改变的结果(Ponder,Nature411:336(2001))。然而，所有癌细胞的共同特性是其衰竭以执行细胞凋亡程序，而因正常细胞凋亡机制中的缺陷导致缺乏适当的细胞凋亡程序是癌症的标志(Lowe等，Carcinogenesis21:485(2000))。目前癌症疗法中的大部分，包括化疗剂、放射和免疫疗法均通过间接诱导癌细胞中的细胞凋亡起作用。于是因正常细胞凋亡机制中的缺陷而导致癌细胞不能执行细胞凋亡程序通常与对化疗、放射或免疫疗法诱导的细胞凋亡产生的抗性增加有关。因细胞凋亡缺陷而导致的不同来源的人癌对目前的治疗方案产生原发性或获得性抗性是目前癌症疗法中的主要问题(Lowe等，Carcinogenesis21:485(2000);Nicholson,Nature407:810(2000))。因此，目前和未来为改善癌症患者存活和生活质量而针对设计和研发新的分子靶-特异性抗癌疗法的努力必须包括特异性把向癌细胞对细胞凋亡产生抗性的策略。在这方面，靶向在直接抑制癌细胞中细胞凋亡中起重要作用的关键负调节物代表了用于新的抗癌药物设计的非常富有希望的治疗策略.已经鉴定了两类细胞凋亡的重要负调节物。笫一类调节物为细胞凋亡蛋白抑制剂(IAPs)(Deveraux等，GenesDev.13:239(1999);Salvesen等，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.3:401(2002))。IAP蛋白有效抑制各种细胞凋亡刺激物，包括化疗剂、放射和免疫疗法在癌细胞中诱导的细胞凋亡。第二类细胞凋亡的重要负调节物为Bcl-2族蛋白(Adams等，Science281:1322(1998);Reed，Adv.Pharmacol.41:501(1997);Reed等，J,Cell.Biochem.60:23(1996))。Bcl-2为该族中的基本成员并且首先作为癌基因产物分离。Bcl-2族目前包括抗-细胞凋亡分子，诸如Bel-2和Bel-xL;以及促细胞凋亡分子，诸如Bax、Bak、Bid和Bad。Bcl-2和Bcl-xL在许多类型的人癌(例如乳腺、前列腺、结肠直肠、肺)中得到超表达，包括因导致Bcl-2超表达的染色体易位(U4，18)引起的非何杰金淋巴瘤。这提示许多癌细胞类型依赖于Bel-2和/或Bcl-xL水平升高以幸免于其它细胞紊乱，其同时定义这些细胞为癌症或前-癌症细胞并且使它们尝试完成细胞凋亡途径。此外，已经将Bcl-2族蛋白表达增加视为是对以不同途径在肿瘤细胞中诱导细胞死亡的癌症治疗药物和放射产生抗性的基础。认为Bcl-2和Bcl-xL在肺瘤细胞迁移和侵入和由此的转移中起作用。(Amberger等，CancerRes.58:149(1998);Wick等，REBSLett，440:419(1998);Mohanam等，CancerRes.53:4143(1993);Pedersen等，CancerRes.，53:5158(1993))。Bc卜2族蛋白看起来为肿瘤细胞提供在新的和非允许环境(例如转移部位)中存活的机制，并且有助于临床转移癌扩散的器官特异性模式.(Rubio,LabInvest.81:725(2001);Fernandez等，CellDeathDiffer.7:350(2000))。还认为抗细胞凋亡蛋白，诸如Bcl-2和/或Bcl-xL例如通过调节细胞表面整联蛋白调节细胞-细胞相互作用。(Reed，Nature387:773(1997);Frisch等，Curr.Opin.CellBiol.9:701(1997);DelBufalo等，FASEBJ.11:947(1997))。已经广泛综述了用于乾向癌症中的Bcl-2和Bcl-xL以恢复癌细胞的敏感性并且克服癌细胞对细胞凋亡的抗性的治疗策略(Adams等，Science281:1322(1998);Reed,Adv.Pharmacol.41:501(1997);Reed等，J.Cell.Biochem.60:23(1996))。目前，Bc卜2反义疗法处于治疗实体瘤和非实体瘤的几个III期临床试验阶段。棉酚为天然存在的来源于粗棉籽油(草棉属)的双重双酚化合物。全性(Wu，Drugs38:333(1989))。近来已经证实棉酚具有抗增殖作用(Flack等，J.Clin.Endocrinol.Metab.76:1019(1993);Bushu謂等，J.Neuro-Oncol.43:79，(1999);VanPoznak等，BreastCancerRes.Treat.66:239(2001))。近来已经证实(-)-棉酚及其衍生物为Bel-2和Bcl-l的有效抑制剂并且具有强抗-癌活性(美国专利申请US2003/0008924)。发明概述通常公认的是癌细胞或其支持细胞不能发生细胞凋亡响应遗传损伤或接触细胞凋亡诱导物(诸如抗癌药和放射)是癌症发作和发展的主要因素.认为诱导癌细胞或其支持细胞(例如肿瘤脉管系统中的新血管细胞)中的细胞凋亡实际上是市售的所有有效癌症治疗药或放疗或当今实践的普遍作用机制。细胞不能发生细胞凋亡的一个原因在于抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白表达增加和蓄积。本发明预期，患有癌症的动物接触抑制抗-细胞凋亡Bc卜2族蛋白功能的治疗有效量的药物(例如，小分子)可以彻底杀灭癌细胞或支持细胞(其持续存活依赖于一种或多种Bcl-2族蛋白的过度活性的那些细胞)和/或使得这类作为群体的细胞对诱导细胞死亡活性的癌症治疗药物或放疗更为敏感。本发明预期，当将抑制依赖于抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白功能的癌细胞中的过度增殖(如，通过诱导细胞凋亡)作为单一疗法给予时，或当以与诱导细胞死亡的其它癌症治疗药物或放疗时间相关给予以使更大比例的癌细胞或支持细胞比仅用癌症治疗药或单独的放疗治疗的动物中相应比例的细胞易于执行细胞凋亡程序时，抗-细胞凋亡的Bcl-2家族蛋白的抑制剂将满足对治疗多种癌症类型尚未满足的需求。在本发明的某些实施方案中，使用治疗有效量的本发明化合物和一系列(acourseof)抗癌药或放射的联合疗法与单独使用上述化合物或抗癌药/放射治疗相比可以在这类动物中产生更大的肿瘤反应和临床有益性。作为另一种方式，因为所述的化合物可降低表达抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白的所有细胞的细胞凋亡阔值，所以成功执行细胞凋亡程序响应诱导细胞凋亡的抗癌药/放射的活性的细胞比例增加。或者，本发明的化合物能够以较低且由此以低毒性和更为可耐受的剂量的抗癌药和/或放射给药，从而产生与单独抗癌药和/或放射的常规剂量相同的肿瘤反应/临床有益性。由于已知所有经批准的抗癌药和放疗的剂量，所以本发明关注它们与本发明化合物的各种组合。此外，由于本发明的化合物至少部分通过抑制抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白起作用，所以将癌细胞和支持细胞接触治疗有效量的所述化合物可以是时间上关联的以与细胞执行细胞凋亡程序响应抗癌药或放疗的尝试相符。因此，在某些实施方案中，与某些时间关联有关给予本发明的组合物可以提供尤其有效的治疗实践。本发明涉及阿朴棉子酚酮(式I)或其药学上可接受的盐或前体药物，其用于抑制抗-细胞凋亡性Bc1-2家族蛋白的活性、抑制细胞过度增殖、在细胞中诱导细胞凋亡、并增加细胞对细胞凋亡诱导剂的敏感性。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>本发明的化合物可用于治疗、改善或预防响应诱导细胞凋亡的疾病，例如特征在于细胞凋亡失调的疾病，包括过度增殖性疾病，诸如癌症。在某些实施方案中，该化合物可以用于治疗、改善或预防特征在于对癌症疗法产生抗性(例如为化学抗性、放射抗性、激素抗性等)的癌症。在额外的实施方案中，该化合物可以用于治疗、改善或预防转移癌。在其它实施方案中，该化合物可以用于治疗特征在于抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白超表达的过度增殖性疾病。与棉酚和阿朴棉子酚酮有关的其它化合物可用于治疗、改善或预防响应i秀导细胞凋亡性细胞死亡的疾病，例如特征在于细胞凋亡调节障碍的疾病，包括过度增殖性疾病如癌症。这类化合物包括棉子酚酸(式V)和gossypolonicacid(式VI)或其药学上可接受的盐或前体药物。本发明提供含有对抑制细胞过度增殖、在细胞中诱导细胞凋亡或使细胞对细胞凋亡诱导剂敏感治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐或前体药物的药物组合物。本发明还提供含有本发明化合物或其药学上可接受的盐或前体药物的试剂盒。该试剂盒可任选地含有用于将化合物和/或其它治疗剂，例如，抗癌剂给予动物的说明。本发明还提供制备本发明化合物或其药学上可接受的盐或前体药物的方法。还提供用作合成阿朴棉子盼酮的中间体的化合物。图/附图简述图1表示阿朴棉子酚酮与Bcl-2和Bel-xL的结合。图2表示阿朴棉子酚酮和其它棉酚衍生物对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231(亚克隆2LMP)细胞中细胞生长的抑制.图3表示阿朴棉子酚酮和其它棉酚衍生物对人乳腺癌细胞系TWD细胞中细胞生长的抑制。图4表示阿朴棉子酚酮和其它棉酚衍生物对人乳腺癌细胞系MDA-435细胞中细胞生长的抑制。图5表示阿朴棉子酚酮和X-射线辐射对人前列腺癌细胞系PC-3异种移植棵鼠模型中肿瘤生长的抑制。图6表示不同浓度Flu-Bid-21mer肽对Mc卜l蛋白的结合等温线。图7表示使用荧光-极化结合测定法测定的未标记的BID21mer肽、阿朴棉子酚酮和(-)-棉酚对Mcl-l的竟争性结合曲线。发明详述本发明涉及阿朴棉子酚酮或其药学上可接受的盐或前体药物，其作为抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白抑制剂起作用。通过抑制抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白，阿朴棉子酚酮抑制细胞过度增殖、使细胞对细胞凋亡诱导剂敏感且，在一些情况下，本身诱导细胞凋亡。因此，本发明涉及抑制细胞过度增殖方法、使细胞对细胞凋亡诱导剂敏感的方法和在细胞中诱导细胞凋亡的方法，包括使细胞与单独的阿朴棉子盼酮或其盐或前体药物或和细胞凋亡诱导剂的组合相接触。本发明还涉及治疗、改善或预防动物中响应诱导细胞凋亡的障碍的方法，包括给予动物阿朴棉子酚酮或其盐或前体药物和细胞凋亡诱导剂。这类障碍包括特征在于细胞凋亡调节障碍的那些和特征在于抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白超表达的那些。本发明另一方面涉及与棉酚或阿朴棉子酚酮有关的化合物，其也起抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白抑制剂的作用且其可用于本发明的实践。这类化合物包括棉子酚酸和gossypolonicacid或其药学上可接受的盐或前体药物。此处所用术语"Bcl-2家族蛋白"是指Bcl-2家族的抗-细胞凋亡性成员，包括但不限于Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-l、A1/BFL-1、B00-DIVA、Bcl-w、Bcl-6、Bcl-8和Bcl-y，和Bcl-2家族的促-细胞凋亡性成员，包括但不限于，Bak、Bax、Bad、tBid、Hrk、Bim、Bmf以及含有被阿朴棉子酚酮化合物调节的蛋白的其它Bcl-2同源性结构域3(BH3).本文所用的术语"抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白的超表达"指的是与表达基础水平的编码抗-细胞凋亡Bc1-2族蛋白的mRNAs或具有基础水平的抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白的相似的相应非病理细胞相比，编码抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白的mRMs水平升高(例如水平异常)和/或细胞中抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白水平升高。用于检测细胞中编码抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白的mRNAs水平或抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白水平的方法包括但不限于使用抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白抗体的蛋白质印迹、免疫组织化学法和核酸扩增或直接RNA检测法。与细胞中抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白的绝对水平同样重要的是确定它们超表达抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白，这类细胞中，抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白相对于其它促-细胞凋亡信号传导分子(例如促-细胞凋亡Bcl-2族蛋白)的相对水平同样也是如此。当这两种分子达到平衡，使得并非指抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白的水平时，促-细胞凋亡信号传导分子可足以使细胞执行细胞凋亡程序并且死亡，所述的细胞依赖于抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白才能存活。在这类细胞中，接触抑制有效量的抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白抑制剂足以使得细胞执行细胞凋亡程序并且死亡。因此，术语"抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白的超表达"还指因促-细胞凋亡信号和抗-细胞凋亡信号的相对水平而导致细胞经历细胞凋亡来响应抑制有效量的抑制抗-细胞凋亡Bcl-2族蛋白功能的化合物。本文所用的术语"抗癌药"和"抗癌药物"指的是用于治疗过度增殖性疾病，诸如癌症(例如哺乳动物中)的任意治疗剂(例如化疗化合物和/或分子治疗化合物)、放疗或外科手术。.此处所用术语"前体药物"是指母"药物"分子的药理学非活性衍生物，其需要在靶生理学系统内生物转化(例如，自发的或酶促的)而释放，或将前体药物(例如，酶促地、机械地、电磁地)转化成活性药物。前体药物被设计用于克服与稳定性、毒性、缺少特异性、或生物可利用率有限有关的问题，举例性的前体药物包括本身活性的药物分子和化学掩蔽基团(例如，可逆地抑制药物活性的基团).一些优学转化(辦如，磷酸化、氢化、脱氢化、糖基化)时，举例性的前体药物变成体内或体外药学活性的。前体药物常常提供溶解性、组织相容性或在哺乳动物生物体中延迟释放的益处(JS辨如Bundgard，DesignofProdrugs,pp.7-9,21-24,Elsevier,Amsterdam(1985);和Silverman,TheOrganicChemistryofDrugDesignandDrugAction,pp.352-401，AcademicPress,SanDiego,CA(1992))。常见的前体药物包括酸衍生物如通过阿朴棉子酚酮的羟基与适宜羧酸(例如，低级羧酸如乙酸)反应制备的酯，和通过阿朴棉子酚酮的酮基与胺(例如，低级的一级或二级烷基胺)反应制备的亚胺。此处所用术语"药学上可接受的盐"是指本发明化合物的任意盐(例如，通过与酸或碱反应获得)，其在靶动物(例如，哺乳动物)中是生理学耐受的。本发明化合物的盐可得自无机或有机碱。碱的例子包括但不限于，碱金属(例如，钠和锂)氢氧化物，碱土金属(鄉如，激氢氧化物、氨、和式NW/的化合物等，其中W是Ch坑基。用于治疗用途时，预计本发明化合物的盐是药学上可接受的。然而，发现非-药学上可接受的酸和碱盐业可用于药学上可接受的化合物的制备或纯化。本文所用的术语"治疗有效量"指的是足以使得疾病的一种或多种症状得以改善，或预防疾病发展，或使得疾病退化的治疗剂用量。例如，就治疗癌症而言，治疗有效量优选指的是产生如下效果的治疗剂用量减緩肿瘤生长速率、减小肿瘤块、减少转移病灶的数量、增加至肿瘤进展的时间，或将存活时间增加至少5%，优选至少10%,至少15%，至少20%,至少25%，至少30%，至少35%，至少40%,至少45沐，至少50%，至少55%，至少60%，至少65%,至少70%,至少75%,至少80%,至少85%,至少90%，至少95%或至少100%。本文所用的术语"敏感'，和"致敏"指的是通过给予第一种活性剂(例如通式1的化合物)使得动物或动物体内的细胞对第二种活性剂的生物作用更为敏感或更具反应性(例如促进或阻止细胞功能的方面，包括但不限于细胞生长、增殖、侵入、血管发生或细胞凋亡)。可以将第一种活性剂对靶细胞的致敏作用测定为在给予第二种活性剂并给予或不给第一种活性剂时观察到的指定生物作用(例如促进或阻止细胞功能的方面，包括但不限于细胞生长、增殖、侵入、血管发生或细胞凋亡)的差异。致敏细胞的反应相对于没有第一种活性剂存在下的反应可以增加至少10%，至少20%,至少30%，至少40%，至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，至少100%，至少150%,至少200%，至少350%，至少300%,至少350%,至少400%,至少450%或至少500%。本文所用的术语"细胞凋亡失调"指的是细胞通过细胞凋亡发生细胞死亡的能力上的任何异常(例如遗传缺陷)。细胞凋亡失调与各种病症有关或由其诱导，包括例如自身免疫病(例如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、移植物抗宿主病、重症肌无力或斯耶格伦综合症)、慢性炎症疾病(例如牛皮癣、哮喘或克罗恩病)、过度增殖性疾病(例如肿瘤、B细胞淋巴瘤或T细胞淋巴瘤)、病毒感染(例如疱疹、乳头状瘤或HIV)和其它疾病，诸如骨关节炎和动脉粥样硬化。应注意当失调由病毒感染诱导或与之相关时，病毒感染在失调发生或观察到失调时可能检测到，也可能无法检测到。即病毒诱导的失调甚至可能在病毒感染症状消失后发生。本文所用的术语"过度增殖性疾病"指的是动物体内增殖细胞的局部群体不受通常正常生长限制的任意病症。过度增殖性疾病包括肿瘤、赘生物、淋巴瘤等。如果赘生物不发生侵入或转移，那么认为赘生物为良性的，而如果它出现上述情况之一，那么认为赘生物是恶性的。"转移性"细胞指的是细胞可以侵入和破坏附近的身体结构.超常增生为细胞增殖的形式，包括组织或器官中细胞数量的增加，而结构或功能没有显著改变。组织变形为细胞生长受控的形式，其中一种类型的完全分化的细胞取代了另一种类型的分化的细胞。活化的淋巴样细胞的病理性生长通常导致自身免疫病或慢性炎症病症.本文所用的术语"自身免疫病"指的是生物体产生识别生物体自身分子、细胞或组织的抗体或免疫细胞的任何疾病。自身免疫病的非限制性实例包括自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、贝格尔病或IgA肾病、口炎性腹泻、慢性疲劳综合征、克罗恩病、皮肌炎、纤维肌痛、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、特发性血小板减少性紫癜、扁平苔癣、多发性硬化、重症肌无力、牛皮癣、风湿热、风湿性关节炎、硬皮病、斯耶格伦综合征、系统性红斑狼裔、1型糖尿病、溃疡性结肠炎、白癜风等。本文所用的术语"胂瘤性疾病"指的是良性(非-癌性)或恶性(癌性)的细胞的任何异常生长。本文所用的术语"抗肿瘤药"指的是阻止靶向的(例如恶性)赘生物增殖、生长或扩散的任意化合物。本文所用的术语"预防(prevent)"、"预防(preventing)"和"预防(prevention)"指的是减少动物体内病理细胞(例如过度增殖性或赘生性细胞)的出现。预防可以是完全的，例如在受试者体内病理细胞总体上不存在。预防还可以是部分的，使得受试者体内出现的病理细胞少于在不使用本发明时出现的病理细胞。本文所用的术语'，协同作用"指的是当共同给予(例如同时或依次)阿朴棉子酚酮和第二种活性剂时获得大于分別给予阿朴棉子酚酮和第二种活性剂时的累加作用的作用。这种协同作用使得阿朴棉子酚酮和/或第二种活性剂的给药剂量较低或提供相同剂量下更大的功效。获得的协同作用可以大于阿朴棉子酚酮化合物和第二种活性剂分别给药时的累加作用的至少10%,至少20%，至少30%，至少40%,至少50%，至少60%，至少70%，至少80°/。，至少90°/。，至少100%，至少125%，至少150%,至少175%,至少200%,至少250%，至少300%，至少350%,至少400%或至少500%。例如，就治疗癌症而言，协同作用可以是肿瘤生长速率的降低、肿瘤块的减小、转移病灶数量的减少、达到肿瘤发展的时间增加或存活时间增加。正如此处所述，当分别给药时，阿朴棉子酚酮化合物和抗癌剂常常仅抑制肿瘤细胞增殖，而不会引起肿瘤块消退.根据本发明，阿朴棉子酴酮化合物与抗癌剂的给药用于引起肿瘤块实际消退.共同给予阿朴棉子酚酮和抗癌药可以使得较低剂量的阿朴棉子酚酮和/或抗癌药的应用成为可能，从而使得癌症得到有效治疗同时避免了任何对受试者的实质性毒性。本发明抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白的抑制剂包括阿朴棉子酚酮(式I)或其药学上可接受的盐或前体药物。本发明抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白的其它抑制剂包括棉子酚酸(式V)和gossypolonicacid(式VI)或其药学上可接受的盐或前体药物。本发明的某些化合物可以立体异构体包括旋光异构体的形式存在，例如，(+)-阿朴棉子酚酮、(-)-阿朴棉子酚酮、(+)-棉子酚酸、(-)-棉子酚酸、(+)-gossypolonicacid、和(-)-gossypolonicacid。优选，各自具有1%-100%对映异构体过量的(+)-阿朴棉子酚酮、(-)-阿朴棉子酚酮、(+)-棉子酚酸、(-)-棉子酚酸、(+)-gossypolonicacid、和(-)-gossypolonicacid。在其中一个实施方案中,(+)-阿朴棉子酚酮、(-)-阿朴棉子酚酮、(+)-棉子酚酸、(-)-棉子盼酸、(+)-gossypolonicacid、和(-)-gossypolonicacid各自具有至少10%，20%，30%，40%，50%,60%，70%,80%，90%，91%，92°yi，93%，94%,95%,96%，97%,98%,99%或100%的对映异构体过量.本发明包括所有立体异构体和这类立体异构体的外消旋混合物以及各自的对映异构体，其可按照本领域技术人员熟知的方法制备。本发明的化合物可使用本领域技术人员已知的和实施例中公开的方法制备。在其中一个实施方案中，阿朴棉子盼酮是通过流程I所示方法，从棉酚合成的，其中P是保护基团。在选择性实施方案中，手性HPLC柱可用于将(±)-阿朴棉子酚酮分离成其(+)和(-)对映异构体。流程I在其中一个实施方案中，gossypolonicacid通过流程II所示方法，从棉酚合成。本发明还涉及制备阿朴棉子酚酮的方法，包括(a)使棉酚脱羰基，从而产生式II的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>(b)保护式II化合物的羟基，从而产生式III的化合物，其中P是保护基团<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>(c)氧化式III的化合物，从而产生式IV的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>(d)使式IV的化合物脱保护，从而产生阿朴棉子酚酮。棉酴可通过在碱性条件下，与溶剂中加热棉酚而脱羰基。棉酚还可通过与HSCH2CH2SH在有BF3/Et20存在的条件下反应而脱羰基。例如，约40-150iC，更优选约85X:下在NaOH或KOH水溶液中加热棉酚。该反应优选在惰性气体(例如，氩或氮气)下进行。保护基团"P"包括任意适合的保护基团，如低级烷酰基、芳烷酰基、苯甲酰基和烷基/芳基曱硅烷基，例如，叔-丁基二甲基曱硅烷基.烷酰基的例子包括乙酰基、丙酰基、叔-丁酰基等，芳烷酰基的例子包括苯乙酰基和l-苯基-l-甲基乙酰基。式III羟基保护的化合物可通过使式11化合物与适宜试剂如相应烷酸、芳烷酸或苯甲酸的酸酐或酰基卣反应而制备。当保护基团是烷基或烷基/芳基甲硅烷基时，可使用相应的甲硅烷基氯试剂。该反应在有有机碱如N，N'-二异丙基乙胺、吡啶或二曱氨基吡啶存在的条件下，于室温下并适宜的惰性溶剂中进行长达12小时。式IV化合物可通过用适宜氧化试剂如高碘酸或氧化铬(VI)，在适宜溶剂如二嚙烷、乙腈或乙酸中，在约40-i5or:，优选约8o-i2or;下氧化式III化合物共10-600分钟而制备。式IV化合物的分离可通过任意常规方法如萃取和色旙法实现。然后，阿朴棉子酚酮可通过除去式IV化合物的保护基团而制备。当保护基团是烷酰基、芳烷酰基或苯甲酰基时，它们可通过使式IV化合物与碱在适宜溶剂中反应而除去。碱的例子包括碳酸钠和钾，和氢氧化锂、钠和钾，适宜溶剂包括瞇如二嚙烷和极性非-质子溶剂如二甲基甲酰胺和二甲亚砜。然后，可酸化阿朴棉子酚酮并通过提取分离，然后通过结晶/重结晶纯化而提供纯化阿朴棉子酚酮。本发明还涉及用作阿朴棉子酚酮，包括式n、III和IV化合物的合成中的中间体的化合物。本发明的重要方面在于阿朴棉子酚酮按照与棉酚相同的方式结合并抑制抗-细胞凋亡性Bcl-2蛋白。然而，阿朴棉子酚酮较之棉酚结合更紧密且为更有效的抑制剂，同时毒性较低。因此，阿朴棉子酚酮或其药学上可接受的盐或前体药物可抑制过度增殖、诱导细胞凋亡并加强响应细胞凋亡诱导信号的细胞凋亡的诱导。预计这些化合物使细胞，包括耐这种诱导剂的细胞对细胞凋亡的诱导剂敏感.本发明的抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白抑制剂可用于在被细胞凋亡诱导治疗、改善或预防的任意疾病中诱导细胞凋亡。因此，本发明提供用于靶向表现为超表达抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白的动物的组合物和方法。在其中一些实施方案中，细胞(辦如，^勿應)显示出与非-病理学样品(例如，非-癌细胞)更高水平的一种或多种抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白.在其它实施方案中，细胞操作上表现出更高表达水平的抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白，这是由于实行细胞凋亡程序并在响应抑制有效量的阿朴棉子酚酮时死亡，所述响应发生至少部分是由于在这类细胞中，它们的存活取决于抗-细胞凋亡性Bcl-2家族蛋白功能。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法用于治疗动物(例如哺乳动物受试者，包括但不限于人和兽类动物)患病的细胞、组织、器官或病理情况和/或疾病状态。在这方面，使用本发明的方法和组合物易于治疗或预防各种疾病和病理情况。这些疾病和病症的非限制性典型实例包括但不限于乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤、皮肤癌、胰腺癌、结肠癌、黑素瘤、恶性黑素瘤、卵巢癌、脑癌、原发性脑癌、头颈癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、肝癌、膀胱癌、非小细胞肺癌、头或颈癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、小细胞肺癌、维尔姆斯肿瘤、宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、泌尿生殖器癌、甲状腺癌、食道癌、骨髄瘤、多发性骨髄瘤、肾上腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌瘤、绒毛膜癌、蕈样霉菌病、恶性血钙过多、宫颈超常增生、白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性髄细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、成神经细胞瘤、横紋肌肉瘤、卡波西肉瘤、真性红细胞增多、特发性血小板增多症、何杰金病、非何杰金淋巴瘤、软组织肉瘤、骨肉瘤、原发性巨球蛋白血症和视网膜成神经细胞瘤等；T和B细胞介导的自身免疫病、炎性疾病、感染、过度增殖性疾病、AIDS、变性疾病、血管疾病等。在某些实施方案中，所治疗的癌细胞为转移性的.在其它实施方案中，所治疗的癌细胞对抗癌药产生耐药性。在某些实施方案中，适合于用本发明组合物和方法治疗的感染包括但不限于由病毒、细菌、真菌、支原体、阮病毒导致的感染。本发明的某些实施方案提供了给予有效量的阿朴棉子酚酮和至少一种额外的治疗剂(包括但不限于化疗剂、抗肿瘤药、抗微生物剂、抗病毒药、抗真菌药和抗炎药)和/或治疗技术(例如外科手术和/或放疗)的方法.在某些实施方案中，预计阿朴棉子酚酮与一种或多种治疗剂的组合比单独的每种化合物的给药具有更大的作用。在其它实施方案中，预计阿朴棉子酚酮与一种或多种治疗剂的组合与单独的每种化合物的给药相比可以产生协同作用(即大于累加作用)。预期许多合适的抗癌药用于本发明方法。实际上，本发明预期但不限于许多抗癌药的给药，诸如诱导细胞凋亡的活性剂；多核苷酸(例如反义物、核酶、siRNA);多肽类(例如酶和抗体)；生物模拟物(例如棉酚或BH3模拟物)；与Bcl-2族蛋白、诸如Bax结合的活性剂(例如寡聚物或复合物)；生物碱类；烷化剂；抗肿瘤抗生素；抗代谢物；激素；铂化合物；单克隆或多克隆抗体(例如与抗癌药、毒素、防卫素缀合的抗体)、毒素；放射性核素；生物学反应修饰剂(例如干扰素(例如IFN-a)和白细胞介素(例如IL-2));过继免疫治疗剂；造血生长因子；诱导肿瘤细胞分化的活性剂(例如全反式视黄酸)；基因疗法试剂(例如反义疗法试剂和核苷酸)；肺瘤疫苗；血管发生抑制剂；蛋白体抑制剂；NF-KB调节剂；抗-CDK化合物；HDAC抑制剂等。适合于与所披露的化合物共同给药的化疗化合物和抗癌疗法的大量其它实例为本领域技术人员所公知。在优选的实施方案中，抗癌药包括诱导或刺激细胞凋亡的活性剂。诱导细胞凋亡的活性剂包括但不限于放射(例如x-射线、y射线、UV);激酶抑制剂(例如表皮生长因子受体(EGFR)激酶抑制剂、血管生长因子受体(VGFR)激酶抑制剂、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)激酶抑制剂、血小板衍生的生长因子受体(PDGFR)激酶抑制剂和Bcr-Abl激酶抑制剂(诸如GLEEVEC));反义分子；抗体(例如HERCEPTIN、RITUXAN、ZEVALIN、和AVASTIN);抗雌激素药(例如雷洛昔芬和他莫昔芬)；抗雄激素药(例如氟他胺、比卡鲁胺、非那雄胺、氨鲁米特、酮康唑和皮质类固醇)；环加氧酶2(C0X-"抑制剂(例如塞来考昔、美洛昔康、NS-398和非类固醇抗炎药)；抗炎药(例如保泰松、DECADRON、DELTASONE、地塞米松、dexamethasoneintensol、DEX0NE、HEXADR0L、羟氯会、METICORTEN、0RADEX0N、0RAS0NE、羟布宗、PEDIAPRED、保泰松、PLAQUENIL、泼尼松龙、泼尼松、PREL0NE和TANDEARIL);和癌症化疗药(例如伊立替康(CAMPTOSAR)、CPT-ll、氟达拉滨(FLUDARA)、达卡巴溱、地塞米松、米托蒽醌、MYL0TARG、VP-16、顺铂、卡铂、奥沙利铂、5-FU、多柔比星、吉西他滨、bortezomib、gefitinib、贝伐单抗、TAX0TERE或TAX0L);细胞信号传导分子；神经酰胺类和细胞因子；十字孢碱等。在其它实施方案中，本发明的组合物和方法提供了式(I)化合物和至少一种抗过度增殖药或抗胂瘤药；例如选自烷化剂、抗代谢物和天然产物(例如草药和其它植物和/或动物来源的化合物)。适用于本发明组合物和方法的烷化剂包括但不限于1)氮芥(例如双氯乙基甲胺、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑(L-沙可来新)；和苯丁酸氮芥)；2)氮丙啶类和甲基蜜胺类(例如六甲蜜胺和塞替派)；3)磺酸烷基酯类(例如白消安)；4)亚硝基脲类(例如卡莫司汀(BCNU);环己亚硝脲(CCNU);司莫司汀(曱基-CC冊)；和链佐星(链唑霉素))；和5)三氮烯类(例如达卡巴溱(二甲基-三氮烯-咪唑羧酰胺)。在某些实施方案中，适用于本发明组合物和方法的抗代谢物包括但不限于1)叶酸类似物(例如曱氨蝶呤(methotrexate)(甲氨蝶呤(amethopterin)));2)嘧啶类似物(例如氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶脱氧核苷(floxuridine)(氟尿嘧啶脱氧核苷(fluorode-oxyuridine))和阿糖胞苷(cytarabine)(阿糖胞普(cytosinearabinoside)));和3)噪呤类似物(例如巯噪呤(6-巯噪呤)、硫鸟嘌呤(6-硫鸟嘌呤)；和喷司他丁(2'-脱氧考福霉素(coformycin)))。在其它实施方案中，适用于本发明组合物和方法的化疗药包括但不限于l)长春花生物碱(例如长春碱、长春新碱)；2)表鬼臼毒素(例如依托泊苷和替尼泊苷)；3)抗生素(例如更生霉素(放线菌素D)、柔红霉素(道诺霹素；柔红霉素)、多柔比星、博来審素、普卡霉素(光辉霉素)和丝裂霉素(丝裂霉素C));4)酶(例如L-天冬酰胺酶)；5)生物学反应修饰剂(例如干扰素-a);6)铂配位配合物(例如顺铂和卡铂)；7)蒽二酮类(例如米托蒽醌)；8)取代的脲类(例如羟基脲)；9)丙卡巴肼衍生物(例如丙卡巴肼(N-丙卡巴肼))；10)肾上腺皮质抑制剂(例如米托坦(o，p'-DDD)和氨鲁米特)；11)肾上腺皮质类固醇(例如泼尼松)；12)黄体酮(例如己酸羟孕酮、醋酸曱羟孕酮和醋酸甲地孕酮)；13)雌激素(例如己烯雌酚和乙炔雌二醇)；14)抗雌激素药(例如他莫昔芬)；15)雄激素(例如丙酸睾丸酮和氟甲睾酮)；16)抗雄激素药(例如氟他胺)；和17)促性腺激素释放激素类似物(例如亮丙瑞林)。常用于癌症疗法环境(context)中的任意溶瘤细胞药应用于本发明的组合物和方法中。例如，美国食品与药品监督管理局保存有批准应用于美国的溶瘤细胞药的处方集(formulary)。U.S.F.D.A.的国际对应机构保存有类似的处方集。表l中提供了批准在美国使用的典型的抗肿瘤药。本领域技术人员可以理解有关全部美国批准的化疗药所需的"产品标签"描述了典型的活性剂的批准的适应症、给药信息、毒性数据等。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>([D"Ser(But)6，Azgly'。歸H的乙酸盐；焦"Glu-His-Trp~Ser-Tyr-D~Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2乙蜘旨[(yW^0"■(CA0^)ZoladexI卿lantAstraZenecaPharmaceuticals羟MHydr6aBristol-MyersSquibb棘莫林(由单克隆脉Ibritumomab与连接物-螯合物tiuxetan[N-[2-双(羧甲基)氨基]-3-(对异硫氰酸根合苯基)-丙基]-[N-[2-双傲曱基)絲]-2-(曱^)-乙基]甘氨酸之间的疏^#形成的免疫缀#)ZevalinBiogenIDEC,Inc.,CambridgeMA伊达比星(5,12-萘二酮，9-乙絲-7-[(3-絲-2，3,6-三脱氧-(a)-L-来苏-六吡喃糖基)氧基]-7,8,9，10-四氬-6，9,11-三羟基盐紗，(7S-顺^))IdamycinPharmacia&UpjohnCompany异Jf^t^(3-(2-氯乙勤-2-[(2-氯乙^)#JJ四氢-2H-l，3,2-氧杂氮#^环己烯2-氧^#■Bristol~MyersSquibb甲磺酸I腿Unib(4-[(4-甲基-1-哌溱基)甲基〗-N-[4-甲基-3-[[4-(3—比<^0-2-嘧錄]氨基]一苯基]苯曱,曱^Jt)GleevecNovartisAG,Basel,Switzerland干扰素a-2a(重)Roferon-AHoff腿nn-LaRoche,Inc.,Nutley,NJ干扰素a-2b(重舰)IntronA(冻干的重组干扰素j3-lb)ScheringAG，Ber1in，Germany伊立替康HC1((4S)"4，11-二乙基-4-轻基-9-[(4-哌啶子基哌啶子基)羰基氧基]-lH-吡喃并[3，，4，6,7]吲噢并[l，2-b〗^^-3，14(4H，12H)CamptosarPharmacia&UpjohnCompany来曲唑(4，4，-(1K"1，2，4-三峻-l-基亚甲^二怖FemaraNovartis亚叶酸(L-谷氨酸，N[4[[(2氛基-5-甲酰基-1，4，5，6，7，8六氩4氧代6-喋，甲^^〗苯甲酰基]，钙盐(l:l))Wellcovorin,LeucovorinI咖unex，Corp,，Seattle,WA左旋咪峻HC1((-)-(S)-2，3，5,6-四氢-6-^^咪峻并[2，l-b]汆峻一盐妙(yy^sHC1)Erg咖isolJ咖senResearchFoundation,Titusville,NJ洛莫司汀(1-(2-氯-乙基)-3-环己基-l-亚辟基脲)CeeNUBristol~MyersSquibbMeclorethamine，氮芥(2-氯-N-(2-氯乙J0-N-曱基乙胺盐)MustargenMerck<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>抗癌药进一步包括那些已经鉴定具有抗癌活性但目前尚未被美国食品和药品管理局或其它类似机构批准的化合物，或正在进行新用途评价的化合物，实例包括但不限于3-AP，12-0-四癸酰基佛波醇-13-乙酸酯，17AAG，852A,ABI-007,ABR-217620，ABT-751,ADI-PEG20，AE-941,AG-013736，AGRO100,阿拉诺新，AMG706，抗体G250，抗癌肽类，AP23573，apaziquone，APC8015，阿替莫德，ATN-161，atrasenten，阿扎胞苷，BB-10901，BCX-1777，贝伐单抗，BGOOOOl，比卡鲁胺，BMS247550，bortezomib，莒藓抑制素-1，布舍瑞林，钓三醇，CCI-779,CDB-2914，头孢克將，西妥昔单抗，CG0070,西仑吉肽，氯法拉滨(clofarabine),考布他汀A4磷酸酯，CP-675，206，CP-724，714，CpG7909，姜黄，地西他滨，DENSPM，度骨化醇，E7070,E7389,ecteinascidin743，乙丙昔罗(efaproxiral)，依氟鸟氨酸，EKB-569，enzastaurin，埃罗替尼(erlotinib),依昔舒林，芬维A胺，flovopiridol,氟达拉滨，氟他胺，福莫司汀，FR901228,G17DT，galiximab，吉非替尼(gefitinib)，染料木黄酮，葡磷酰胺，GTI-2040，组氨瑞林，HKI-272，高三尖杉酯碱，HSPPC-96，hul4,18-白介素-2融合蛋白，HuMax-CD4，伊洛前列素，咪喹莫特，英夫利昔单抗，白介素-12，IPI-504，伊罗夫文，ixabepilone，拉帕替尼(lapatinib)，来那度胺(lenalidomide)，lestaurtinib，醋酸亮丙瑞林，LMB-9免疫毒素，lonafarnib，luni1iximab，马磷酰胺，MB07133,MDX—010，MLN2704，单克隆抗体3F8，单克隆抗体J591，莫特沙芬，MS-275，MVA-MUC1-IL2，尼鲁米特，硝基喜树碱，诺拉曲塞二盐酸化物，他莫昔芬，NS-9，06-苄基鸟嘌呤，利奥默森钠(oblimersensodium)，ONYX-015，oregovomab，OSI-774，panitumumab，卡柏，PD-0325901，培美曲塞，PHY906,匹格列酮，吡非尼酮，pixantrone，PS-341，PSC833，PXDIOI，吡唑啉吖啶，R115777，RADOOl，豹蛙酶，蝴蝶霉素(rebeccamycin)类似物，rhu血管他汀蛋白，rhuMab2C4，罗格列酮，卢比替康，S-l，S-8184，沙粕，SB-15992,SGN-OOIO，SGN-40,sorafenib,SR31747A，ST1571，SU011248,辛二酰苯胺异羟肟酸，苏拉明，talabostat，他仑帕奈，tariquidar，temsirolimus,TGFa-PE38免疫毒素，沙利度胺，胸腺法新，tipifarnib，替拉扎明，TLK286，trabectedin，三甲曲沙，葡糖醛酸酯，TroVax，UCN-l，丙戊酸，长春氟宁，VNP40101M，volociximab，vorinostat，VX-680,ZD1839,ZD6474,齐留通，和zosuquidar三盐酸化物.用于与本发明化合物给药的优选常用抗癌药包括但不限于阿霉素、5-氟尿嘧啶、依托泊苷、喜树碱、放线菌素D、丝裂霉素C、顺铂、多西他赛、吉西他滨、卡柏、奥沙利柏、bortezomib、gefitinib和贝伐单抗。可以制备这些活性剂并且将其单独、在联用的治疗组合物中、在药盒中使用或与免疫治疗剂联用等。为了更为详细的描述抗癌药和其它治疗剂，本领域技术人员参考了大量指导性手册，包括但不限于Physician'sDeskReference和Goodman和Gilman的"PharmaceuticalBasisofTherapeutics"第9版，Eds.Hardman等，1996。本发明提供了用于给予阿朴棉子酚酮或其药学上可接受的盐或前体药物与放疗的方法。本发明并不限于用于给动物递送治疗剂量的放射的类型、用量或递送和给药系统。例如，动物可以接受光子放疗、粒子束放疗、其它类型的放疗及其组合。在某些实施方案中，使用线性加速器将放射递送给动物，在其它实施方案中，使用Y刀递送放射。放射源可以在动物体外或体内。外部放射治疗是最常用的并且涉及使用例如线性加速器将高能辐射束通过皮肤定向于肿瘤部位.尽管射线束可以局限于肿瘤部位，但是它几乎不可能避免正常健康组织的暴露。然而，外部放射通常可以被患者很好耐受。内部射疗法包括将射线发射源，诸如珠、金属线、丸粒、胶嚢、颗粒等植入体内的肿瘤部位或接近胂瘤部位，包括使用特异性靶向癌细胞的递送系统(例如使用附着在与癌细胞结合配体上的颗粒).可以在治疗后将这类植入物取出，或将其以非活性状态保留在体内。内部放射疗法的类型包括但不限于近距离放射疗法、间质照射、腔内照射、放射免疫疗法等。动物可以任选地接受放射致敏剂(例如双唑泰栓、米索硝唑、动脉内Budr、静脉内碘去氧尿苷(IudR)、硝基咪唑、5-取代的-4-硝基咪唑类、2H-异吲哚二酮类、[[(2-溴乙基)-氨基]甲基]-硝基-lH-咪唑-l-乙醇、硝基苯胺衍生物、DNA-亲和性低氧选择性细胞毒素、面化DNA配体、1,2,4苯并三溱氧化物、2-硝基咪唑衍生物、含氟硝基吡咯衍生物、苯甲酰胺、烟酰胺、吖啶-嵌入剂、5->5克代四唑衍生物、3-硝基-1，2，4-三唑、4,5-二硝基咪唑矛汙生物、羟基化texaphrins、顺铀、丝裂霉素、tiripazamine、亚硝脲、巯嘌呤、氨甲蝶呤、氟尿嗜咬、博来霉素、长春新碱、卡铂、表柔比星、多柔比星、环磷酰胺、长春地辛、依托泊苷、紫杉醇、热(过高热)等)、辐射防护剂(例如巯乙胺、氨基烷基二氢硫代磷酸酯、氨磷汀(WR2721)、IL-1、IL-6等)。放射致敏剂促进肿瘤细胞的杀伤。辐射防护剂保护健康组织免受放射有害作用。可以对患者给予任意类型的放射，只要该放射剂量是患者可耐受的并没有不可接受的不良副作用。放疗的合适类型包括例如电离(电磁)放疗(例如x-射线或y线)或粒子束放疗(例如高线能量放射)。将电离放射定义为包括具有产生电离，即得电子或失电子的足够能量的粒子或光子的放射(例如，如US5，770，581中所述，将该文献的全部内容引入本文作为参考)。放射的作用至少可以部分受到临床医师控制。针对最大靶细胞暴露并且降低毒性优选分次给予放射剂量。对动物给予的总放射剂量优选约为.Ol戈瑞(Gy)-约100Gy。更优选在治疗过程中给予约10Gy-约65Gy(例如约15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy或60Gy).尽管在某些实施方案中，可以在1天的过程中给予完全放射剂量，但是理想的情况是将总剂量分次在几天内给予。理想的情况是，在至少约3天，例如至少5、7、10、14、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52或56天(约l-8周)过程中给予放疗.因此，每日放射剂量约为1-5Gy(例如约lGy、1.5Gy、1.8Gy、2Gy、2.5Gy、2.8Gy、3Gy、3.2Gy、3.5Gy、3.8Gy、4Gy、4.2Gy或4.5Gy)，优选1-2Gy(例如1.5-2Gy)。每日放射剂量应足以诱导靶向的细胞破坏。如果延长期限，优选非每天给予放射，由此使动物休息并且实现疗法的效果。例如，理想的是在每周的治疗中，连续5天给予放射并且在2天不给予，由此使每周有2天休息。然而，可以1天/周，2天/周，3天/周，4天/周，5天/周，6天/周或全部7天/周给予放射，这取决于动物的反应性和任何可能的副作用。可以在治疗期中任意时间开始放疗。优选在第l周或第2周中开始放射，并且在剩余的治疗期间给予放射。例如，在包括6周的治疗期的第1-6周或2-6周中给予放射，例如用于治疗实体瘤。或者，在包括5周的治疗期的第1-5周或2-5周中给予放射。不过，本发明并不限于这些可仿效的放疗给药方案。抗微生物治疗剂也可以用作本发明中的治疗剂。可以使用能够杀伤、抑制微生物，或使微生物减毒的任何活性剂以及预期具有这类活性的任意活性刑。抗微生物剂包括但不限于天然和合成抗生素、抗体、抑制蛋白(例如防卫素)、反义核酸、膜破裂剂等，可以将它们单独使用或联用。实际上，可以使用任意类型的抗生素，包括但不限于抗菌药、抗病毒药、抗真菌药等。在本发明的某些实施方案中，可以在下列条件中的一种或多种下对动物给予抗-细胞凋亡性Bc1-2家族蛋白，如阿朴棉子酚酮或其药学上可接受的盐或前体药物和一种或多种治疗剂或抗癌药以不同的周期；以不同的期限；以不同的浓度；通过不同的给药途径等。在某些实施方案中，在治疗剂或抗癌药之前，例如在给予治疗剂或抗癌药之前0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小时、1、2、3、4、5或6天、1、2、3或4周给予阿朴棉子酚嗣。在某些实施方案中，在治疗剂或抗癌药之后，例如在给予抗癌药之后0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小时、1、2、3、4、5或6天、1、2、3或4周给予阿朴棉子酚酮。在某些实施方案中，同时，但以不同的时间表给予阿朴棉子酚酮或其盐或前体药物和治疗剂或抗癌药，例如，每日给予阿朴棉子酚酮或其盐或前体药物，而每周1次、每2周1次、每3周1次或每4周1次给予治疗剂或抗癌药。在其它实施方案中，每周1次给予阿朴棉子酚酮或其盐或前体药物，而每天、每周1次、每2周1次、每3周1次或每4周1次给予治疗剂或抗癌药。本发明化合物可与载体分子相连，从而提高化合物的细胞摄取。这类载体分子的例子包括载体肽如Fulda等人.，^fwre《:808(2002)，Arnt"a/.，/.C力e迈.277:44236(2002)和Yang等人.，Ca/ceryes.W:831(2003)描述的那些，融合肽(见例如U.S.Pat.5，965，404)和病毒和病毒的部分如空的壳体和病毒血细胞凝集素(见例如U.S.Pat.No.5,547,932)。其它载体分子包括细胞表面受体的配体如脱唾液酸糖蛋白(其结合脱唾液酸糖蛋白受体，见U.S.Pat.No.5，166，320)和细胞表面受体的抗体如T-细胞特异性抗体，例如抗-CD4抗体(见U.S.Pat.No.5,693,509)。本发明范围内的组合物包括所有的组合物，其中本发明的组合物以有效实现其指定目的的用量被包含。尽管个体需要不同，但是每种成分的有效量的最佳范围的确定属于本领域技术人员能力的范围。一般来说，对于响应诱导细胞凋亡的疾病，可以每天口服给予哺乳动物、例如人0.0025—50mg/kg接受治疗的哺乳动物体重的组合物或等量的其药学上可接受的盐。优选口服给予约0.01-约10mg/kg以便治疗、改善或预防这类疾病。就肌内注射而言，剂量一般约为口服剂量的一半。例如，合适的肌内剂量约为0.0025-约25mg/kg，并且最优选约0.01-约5mg/kg。单位口服剂量可以包括约0.01-约50mg、优选约0.1-约10fflg化合物。可以以各自含有约0.1-约10mg、便利的是0.25-50mg化合物或其溶剂化物的1片或多片片剂或l粒或多粒胶嚢每天l次或多次给予单位剂量。在局部用制剂中，化合物的存在浓度约为0.01-100mg/g载体。在优选的实施方案中，化合物的存在浓度约为0.07-1.Omg/ml，更优选约0.1-0.5mg/ml,最优选约0.4mg/ml,除作为原料药(rawchemical)给予阿朴棉子酚酮或其盐或前体药物或抗-细胞凋亡性Be1-2家族蛋白的抑制剂外，还可以将本发明的化合物作为含有合适的药学上可接受的载体的药物制剂的组成部分给予，所述的载体包括有利于将化合物加工成可以在药物上使用的制剂的赋形剂和助剂。优选制剂、特别是那些可以通过口服或局部给药并且可以用于优选给药类型的制剂，诸如片剂、锭剂、緩释锭剂和胶嚢、口腔清洗剂和漱口剂、凝胶、液体混悬液、润发剂、发胶、香波且还有可以通过直肠给药的制剂，诸如栓剂以及适合于通过注射、局部或口服给药的适宜的溶液含有约0.01-99%、优选约0.25-75%的活性化合物，还含有赋形剂。可以将本发明的药物组合物给予可能体验本发明化合物有益作用的任意动物。在这类动物中排在最前列的是哺乳动物，例如人，不过本发明并不限于此。其它动物包括兽类动物(牛、绵羊、猪、马、狗、猫等)。可以通过实现其指定目的的任意方式给予化合物及其药物组合物。例如，可以通过非肠道、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、透皮、颊、鞘内、颅内、鼻内或局部途径进行给药。或者，或同时，可以通过口服途径进行给药。给药剂量取决于接受者的年龄、健康和体重、同时治疗的类型(如果有的话)、治疗频率和所需作用的性质。可以按照自身已知的方式，例如通过常规的混合、制粒、制锭、溶解或冻千法制备本发明的药物制剂。因此，可以通过下列步骤获得口服应用的药物制剂将活性化合物与固体赋形剂混合，任选地研磨所得混合物，并且如果需要或必要，在加入合适的助剂后加工颗粒混合物得到片芯或锭芯。特别地，合适的赋形剂为填充剂，诸如糖类，例如乳糖或蔗糖；甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制品；和/或磷酸钙，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；以及粘合剂，诸如淀粉糊(例如使用玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉)、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，如果需要，可以加入崩解剂，诸如上述淀粉，且还有羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐，诸如藻酸钠。助剂首先为流动调节剂和润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸或其盐，诸如硬脂酸镁或硬脂酸钓，和/或聚乙二醇。如果需要，可以给锭芯包耐胃液的合适的包衣层。为了这一目的，可以使用浓糖溶液，它可以任选地含有阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了生产耐胃液的包衣层，使用合适的纤维素制品、诸如邻苯二甲酸乙酰纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素的溶液。例如，为了鉴定或表征活性化合物剂量的组合，可以向片剂或锭剂包衣层中加入染料(dyestuff)或色素。可以口服使用的其它药物制剂包括由明胶制成的推入配合式胶嚢和由明胶和增塑剂、诸如甘油或山梨醇制成的密封软胶嚢。推入配合式胶嚢可以含有颗粒形式的活性化合物，所述的颗粒中可以混合有填充剂、诸如乳糖；粘合剂、诸如淀粉；和/或润滑剂、诸如滑石粉或硬脂酸镁；和任选的稳定剂。在软胶嚢中，优选将活性化合物溶于或悬浮于合适的液体中，诸如脂肪油或液体石蜡。此外，可以加入稳定剂。可以通过直肠使用的可能的药物制剂包括例如，由一种或多种活性化合物与栓剂基质的组合组成的栓剂。合适的栓剂基质为例如天然或合成甘油三酯类或链烷烃类。此外，还能够使用由活性化合物与基质的组合组成的直肠用明胶胶嚢。可能的基质材料包括例如液体甘油三酯类、聚乙二醇类或链烷烃类。用于非肠道给药的合适的制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液，例如水溶性盐和碱性溶液。此外，可以给予作为合适的油注射混悬液的活性化合物的混悬液，合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油，例如芝麻油；或合成脂肪酸酯类，例如油酸乙酯或甘油三酯类或聚乙二醇-400。含水注射混悬液可以含有增加该混悬液粘度的物质，包括例如羧曱基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖，该混悬液中还可以任选地含有稳定剂，优选通过选择合适的载体将本发明的局部用组合物配制成油、霜剂、洗剂、软骨剂等。合适的载体包括植物油或矿物油、白凡士林(白软石蜡)、支链脂肪或油、动物脂肪和高分子量醇(大于c12)。优选的载体为那些活性组分于其中可溶的载体。如果需要，还可以包括乳化剂、稳定剂、湿润剂和抗氧化剂以及赋予(impart)颜色或香味的试剂。另外，还可以在这些局部用制剂中使用透皮渗透增强剂。这类增强剂的实例可以在美国专利US3，989，816和US4，444，762中找到。优选由矿物油、自乳化蜂蜡和水的混合物配制霜剂，在该混合物中混合有溶于少量油、诸如杏仁油的活性组分。这类霜剂的典型实例为包括约40份水、约20份蜂蜡、约40份矿物油和约l份杏仁油的霜剂。可以通过将活性组分在植物油、诸如杏仁油中的溶液与温热的软石蜡混合并且使该混合物冷却来配制软骨剂。这类软骨剂的典型实例为包括按重量计约30%杏仁油和约70%白软石蜡的软骨剂。可以通过将活性成分溶于合适的高分子量醇、诸如丙二醇或聚乙二醇中便利地制备洗剂。下列实施例用于解释本发明的方法和组合物，但不限于它们。临床疗法中通常遇到并且对本领域技术人员而言显而易见的条件和参数种类的其它合适的变型和修改属于本发明的实质和范围。实施例1荧光极化结合测定法使用重组人Bcl-2和Bcl-xL蛋白，用6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(FAM)标记的BidBH3肽和用6-(荧光素-5(6)-羧酰氨基(carboxamido))己酸(Flu)标记的BakBH3肽研究并优化Bel-2和Bcl-xL的荧光极化(FP)结合测定法。FP-结合测定法可测量抑制剂分别来自Bcl-2或Bel-xL蛋白替换Bid-FAM或Bak-Flu肽的能力。剂量-依赖性结合实验是在DMSO中连续稀释试验化合物进行的。进行Bcl-2结合测定时，将抑制剂和预培养的重組His-融合可溶性Bcl-2蛋白(120nM)与Bid-FAM肽(10nM)溶于测定緩沖液(100mM磷酸钾，pH7.5;100jag/ml牛y球蛋白；0.02%叠氮化钠，购自Invitrogen，LifeTechnologies)中的5yl样品加入到Dynex96-孔、黑色、圆底平板(FisherScientific)中，从而产生125|i1终体积。总共15种不同浓度的抑制剂通常用于确定绘图的ICs。值，其中使用非线性最小平方分析，并使用GraphPadPrisii^软件进行曲线拟合。培养3-4小时后，使用ULTRAREADER(TecanU.S.Inc.,ResearchTrianglePark,NC测量极化值。L值是基于Bid-FAM肽与Bc卜2的L值，测量的ICs。值，和蛋白与Bid-FAM的浓度，使用改进的Cheng-Prusoff方程式计算的。进行Bcl-xL结合测定时，使用与没有C-末端疏水尾部的His-tag融合的重组人Bcl-xL和Bak-Flu肽。按照与Bcl-2测定类似的方式进行Bcl-xL测定，区别之处在于将60nMBcl-xL和5nMBak-Flu肽用于测定緩沖液(50mMTris-Bis，pH7.4;0.01%牛y球蛋白)中。未标记的Bid和Bak肽，(-)-棉酚和阿朴棉子酚酮用作阳性对照。棉盼的非活性类似物用作阴性对照。实施例2棉酚类似物的设计(-)-棉酚已经显示出可在BH3结合槽位置结合Bcl-2和Bcl-xL并具有显著的抗癌活性(U.S.PatentApplicationNo.2003/0008924)。(-)-棉酚的结构中含有两个反应性醛。这两个反应性基团与蛋白中的赖氨酸残基形成Schiff's碱并导致棉酚在动物和人中的毒性。这种毒性尽管较轻，仍然限制了可给予患者的最大剂量。已经进行了广泛的努力来鉴定毒性较小且更紧密结合Bcl-2的棉酚类似物。设计两种类似物，棉子酚酸(V)和gossypolonicacid(VI)来维持眵基团和Bcl-2和Bcl-xL中精氨酸残基(分别为Arg-139和Arg-141)之间的相互作用。经测定，这两个化合物分别具有120nM和280nM的Ki值，即较之(-)-棉酚些微更有效。然而，这些化合物中的两个酸基团在生理学。11=7.4)条件下带负电荷，且可阻止进入细胞，在PC-3细胞的细胞生长抑制的测定中，两个化合物均具有大于10HM的IC5。值为了克服棉子酚酸和gossypolonicacid的低细胞-渗透性，，没计并合成了更多化合物，阿朴棉子酚(VII)和阿朴棉子酚酮(I),其中棉酚的两个醛基被完全除去。经测定，阿朴棉子酚和阿朴棉子酚酮分别具有200nM和76nM的K;值。阿朴棉子酚酮与Bcl-2的结合曲线在图1中表示。经测定阿朴棉子酚酮与Bcl-xL的Ki值为1.27pM(图1)。因此，阿朴棉子酚酮代表一种有效的小-分子抑制剂。ohho00vh，实施例3阿朴棉子酚酮的细胞生长抑制活性在PC-3和LnCap前列腺癌细胞系中进行(-)-棉酚、阿朴棉子酚和阿朴棉子酚酮抑制细胞生长的活性的直接比较。3-5个独立实验中，有关PC-3细胞系中4-6天MTT测定法中的细胞生长抑制，阿朴棉子酚与(-)-gossypol同样有效，而阿朴棉子酚酮(ICs。==2.2jjM)始終比(-)-棉酚更有效达3-4倍(ICs。=6.5mM)。类似的结果在LnCap细胞系(阿朴棉子酚酮IC5。=1.3|iM，(-)-棉酚IC5。=4.7jaM)中发现.然而，阿朴棉子酚非常不稳定且样品甚至在-201C和氮气条件下贮存时，也在l周内迅速分解.相反，阿朴棉子酚酮非常稳定，当在室温下贮存几周而没有氮气保护时，也没有检测到分解。使用MDA-MB-231(亚克隆2LMP)、T47D、和MDA-MB-435乳腺癌细胞系进行其它细胞生长抑制研究。如上所述，试验外消旋棉酚、阿朴棉子酚、阿朴棉子酚酮、(+)-阿朴棉子酚、(-)-阿朴棉子酚和四-乙酰基阿朴棉子酚酮(式VIII)。结果的概括在表2中提供。在MDA-MB-231细胞系中，阿朴棉子酚较之棉酚更有效约5-倍，而阿朴棉子酚酮较之棉酚更有效约9-倍(图2)。在T47D细胞系中，阿朴棉子酚较之棉酚更有效约2.5-倍，而阿朴棉子酚酮较之棉酚更有效约2-倍(图3)。在MDA-MB-435细胞系中，阿朴棉子酚较之棉酚更有效约3-倍，而阿朴棉子酚酮较之棉酚更有效约2-倍(图4)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>表2.<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>实施例4阿朴棉子酚酮的毒性在本发明的研究过程中，预计棉酚在动物和人中的主要毒性与其两个反应性醛基团有关且这些醛的除去应当能够显著降低毒性。为了证实这种预测，使用两种不同的给药途径(口服和静脉内)，在小鼠中评价阿朴棉子酚酮和(-)-棉酚的最大耐受剂量(MTD)。口服给药时(口服管饲5天/周)，阿朴棉子酚酮的MTD高于240mg/kg,而(-)-棉酚的MTD为约50mg/kg。静脉内给药时(每隔一天，3天/周)，阿朴棉子酚酮的MTD为约80mg/,而(-)-棉酚的MTD为约10mg/kg。在两种给药途径中，阿朴棉子酚酮的MTD较之(-)-棉酚高8-倍。因此，小鼠可很好地耐受阿朴棉子酚酮且其毒性较之(-)-棉酚要低。实施例5阿朴棉子酚酮的抗肿瘤活性使用棵鼠的PC-3异种移植模型进行阿朴棉子酚酮的体内研究，从而评价单独或与X-射线辐射组合的阿朴棉子酚酮的抗肿瘤活性。使用(l)阿朴棉子酚酮200mg/kgp.o.q.d.5x4周；(2)仅对肿瘤分别进行X-射线辐射，将动物身体屏蔽起来，剂量为2Gyq.d.5x3周，共30Gy;和(3)阿朴棉子酚酮与放疗的组合治疗具有已确定的PC-3异种移植物(150mm3大小)棵鼠。如图5所示，单独的阿朴棉子酚酮对肿瘤的作用有限。然而，阿朴棉子酚酮可显著提高放疗-介导的肿瘤抑制(P".0001，双道ANOVA，n-10)。更显著地，在第57天，阿朴棉子酚酮加放疗可在IO个肿瘤的7个中实现完全的肿瘤消退，而单独治疗导致10个中有0个完全消退。数据表明阿朴棉子酚酮是有效的放射致敏剂且发现可用作治疗深度的、激素不应性前列腺癌和其它疾病的治疗剂.实施例6阿朴棉子酚酮的合成(士)-阿朴棉子酚酮是如上面流程I所示从棉酚乙酸制备的。(±)-5，5'-二异丙基-3，3'-二甲基-[2，2'〗联萘基一l，6，7，r,6',7'-六醇(hexaol)(II)氮气、85X:条件下，在氢氧化钠水溶液(40ml)中加热棉酚乙酸(6.Og，10.4mmol)2h。将反应混合物倾倒在含浓硫酸的水上。用醚萃取所得沉淀，并用水洗涤结合萃取物，真空浓缩得到粗产物II，其在不进一步纯化的条件下直接用于下一步。乙酸1，7，1'，，7'-五乙酰氧基-5，5'-二异丙基-3，-二甲基-[2，]联萘-6-基酯(in)将乙酸酐(7.8ml，83.2mmol)加入到粗产物II溶液二氯甲烷(100ml)的溶液中，接着加入iV,iV，-二异丙基乙胺(14.5ml，83.2mmo1)。室温搅拌反应混合物12小时。通过加入结束反应。加入氯仿，分层，并用氯仿萃取水相两次。用盐水洗涤结合萃取物，干燥，并真空浓缩。闪烁凝胶柱色谱(2%丙酮/氯仿)提供6.lg浅黄色固体的III，两步产率82%。乙酸6，6',7'-三乙酰氧基-5，5'-二异丙基-3，3'-二甲基-l，4，1'，4'-四氧代-l，4，l'，4'-四氢-[2，2']联萘-7-基酯(IV)将过碘酸(20g，87.7mmol)加入到111(2.0g，2.8mmol)溶于二-恶烷(30ml)的溶液中并于95X:搅拌反应混合物15min。加入碎水终止反应。加入乙酸乙酯，分层，并用乙酸乙酯萃取水相两次。用盐水洗涤结合萃取物，干燥，并真空浓缩.闪烁凝胶柱色谦(2%丙酮/氯仿)提供0.65g量黄色固体的IV，产率35%.6，7，6'，7'-四羟基-5，5'-二异丙基-3，3'-二甲基-[2，2']联萘基-1，4，l'，4'-四酮，阿朴棉子酚酮(I)将10%碳酸钾溶液(10ml)加入到IV(0.6g，0.91咖ol)溶于二喵烷(15ml)的溶液中，并于70t:搅拌反应混合物5h。冷却后，将4MHC1加入到溶液中，并调节pH至5。加入乙酸乙酯，分层，并用乙酸乙酯萃取水相两次。用盐水洗涤结合萃取物，干燥，并真空浓缩。从乙酸乙酯/己烷中重结晶得到0.44g棕黄色固体的阿朴棉子酚酮(1)，产率98°/。。实施例7GossypolonicAcid的合成(土)-Gossypolonicacid是如上面流程III所示，通过已经才艮道过的方法(Rogers爭乂，/.J迈.C力e瓜^"ft2170(1938))从棉酚乙酸制备的。在有曱醇和氢氧化钾存在的条件下，使用硫酸二曱酯将外消旋棉酚转化成六甲醚。利用稀硝酸，六甲醚被氧化成gossypolonicacid四甲酸。甲酯是通过在有碳酸钾存在的条件下，利用回流丙酮中的硫酸二曱酯获得。全部六个甲基是在-20。C下，利用二氯甲烷中的三溴化硼而除去的，接着利用稀乙酸水溶液产生黄色固体的gossypolonicacid。'HNMR(300MHz，CDC13)57.62(s，2H)，6.04(s，2H)，4.26(m，J=6.9Hz，2H)，2.00(s，6H)，1.39(m，12H).实施例8Mcl-l蛋白的荧光极化结合测定人Mc卜l蛋白的表达和纯化人Mcl-lcDNA购自0rigene。通过BamHI和EcoRI位点，使用oligos:5，-CGGGATCCGAGGACGAGTTGTACCGGCAG-3,(SEQIDNO:1)和5，-GGAATTCCTAGCCACCTTCTAGGTCCTCTAC-3，(SEQIDNO:2)将编码氨基酸171-327的片段克隆到pHis-TEV栽体(一种修饰过的pBT栽体)。具有N-末端8xHis标记的Mcl-l171-327aa蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中产生。37匸下，细胞在含抗生素的2xYT中生长至0.6的0D6。。密度。37"C下，利用0.4mMIPTG诱导蛋白表达共4小时.在含500mMNaCl，0.1%bME和40mLeupectin/Aprotin的50mMTrisPH8.O緩冲液中溶解细胞.使用Ni-NTA树脂(QIAGEN)，按照制造商的说明，从可溶性部分中纯化Mcl-l171-327aa蛋白.在25mMTrispH8.O緩沖液中，使用NaCl梯度，在SourceQ15柱(树脂和柱子均来源于AmershamBiosciences)上进一步纯化该蛋白。将纯化蛋白等分，并在有25%甘油存在的条件下，-80°0贮存。荧光极化结合测定优化灵敏且定量的体外荧光极化(FP)结合测定法并用于测定阿朴棉子酚酮对Mcl-l蛋白，一种Bcl-2家族蛋白成员的体外结合亲和性。^//￥c/-7潜合浙定.确立并优化基于FP的方法，从而试验阿朴棉子酚酮对Mcl-l蛋白的结合亲和性。进行该测定时，将N-末端用6-羧基荧光素琥珀酰亚胺基酯(FAM)标记的21-残基BidBH3肽(QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR(SEQIDN0:3))用作荧光标记(Flu-Bid-21)。使用恒定的探针浓度，lnM，并以逐渐增加、显著高于蛋白-探针对预期iTd的浓度滴定，从而测定复合Flu-Bid-21探针和Mc卜l蛋白的解离常数(iQ。图6举例说明饱和实验中，单一-位点结合模型的非线性最小平方拟合，其中Mcl-l蛋白浓度从0变化到2nM,探针浓度恒定。荧光探针，Flu-Bid-21，显示出对Mcl-l蛋白的较高结合亲和性，K产O.83nM，动态范围AmP=122mP(AmP=结合肽的mP—游离肽的mP)。当探针浓度降低时，研究A值变化的可能性。原则上，当探针浓度高于真实的^值时，较高的探针浓度将导致更高的表观/d值(Kenakin,PharmacologicalAnalysisofDrug-ReceptorInteraction,Lippincott-Raven，Philadelphia(1997))*在探针Flu-Bid-21的四种浓度下(5，2.5，1和0.5nM),相对于荧光探针获得分别为l.32,1.05，0.83和0.70nM的表观&值(图6)。这些结果因此表明在寺中浓度下获得的探针的表观&值接近真实的A值。测定法的特异性通过用具有Ki=5.7±1.1nM的未标记的Bid21mer肽竟争性替换与Mcl-l结合的标记过的Flu-Bid21mer加以证实，其与测定出的L(图7)很一致，使用在MDS0中连续稀释的试验化合物进行剂量-依赖性竟争性结合实验。将溶于测定緩冲液(IOOmMpotassiumphosphate,pH7.5;100ing/mlbovinegammaglobulin;0.02%sodiumazide，purchasedfromInvitrogenLifeTechnology)中的试验样品和预培养的Mcl-1蛋白(5nM)和Flu-Bid-21mer肽(1nM)的5|nl样品加入到Dynex96-孔、黑色、圆-底平板(FisherScientific)中，产生125pl终体积。各自测定时，对照组包括Mcl-1蛋白和Flu-Bid-21mer肽(等于0%抑制)和仅有的Flu-Bid-21mer肽(等于100%抑制)。培养3小时后，使用ULTRAREADER(TecanU.S.Inc.,ResearchTrianglePark,NC)测量极化值。ICs。值，即50%结合肽被替换的抑制剂浓度，是使用非线性最小平方分析从图中测定的。曲线拟合使用GRAPHPADPRISM软件(GraphPadSoftware,Inc.,SanDiego,CA)进行。4吏用我们4目对于FP测定法研究出来的方程式，包括过量蛋白在竟争性结合测定法中的影响，计算Ki值&=W5。/(I4。A^+[4/^+i)其中[I]s。表示50%抑制时自由抑制剂的浓度，[L]s。是50y。抑制时自由标记探针的浓度，[P]。是0%抑制时自由蛋白的浓度，且Ka是蛋白-配体复合物的解离常数。该方程式源于竟争性结合测定的基础原则且它还可衍生用于准确计算抑制剂Ki值的该新方程式中所需的溶液所有参数(Nikolovska-Coleska爭入.，ha/.》/oc力e迈.332:261(2004))。使用基于FP的测定法测定阿朴棉子酚酮的结合亲和性。经测定，阿朴棉子盼酮与Mcl-l的Ki值为0.051±0.02nM，结合曲线在图7中表示，作为一种棉酚类似物，阿朴棉子酚酮显示出与(-)-棉盼相比好3.5倍的结合亲和性，K产O.18±0.01(图7)。由于完整地描述了本发明，所以本领域技术人员可以理解，可以在不影响本发明范围或其任意实施方案的情况下，可在较宽和等同的条件、表述(formulation)和其它参数范围内实施本发明.将本文中引述的所有专利、专利申请和出版物的全部内容完整地？I入本文作为参考。权利要求1.式I的化合物或其药学上可接受的盐或前体药物。2.权利要求l的化合物，其是(-)-阿朴棉子酚酮或其药学上可接受的盐或前体药物。3.权利要求1的化合物，其是(+)-阿朴棉子酚酮或其药学上可接受的盐或前体药物。4.式VIII的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>或其药学上可接受的盐或前体药物。5.含有权利要求1的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。6.制备阿朴棉子酚酮的方法，包括(a)使棉酚脱羰基，从而产生式II的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(c)使式III的化合物氧化，从而产生式IV的化合物:lv;并<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(d)使式IV的化合物脱保护，从而产生阿朴棉子酚酮。7.制备阿朴棉子酚酮的方法，包括使式IV的化合物脱保护，从而产生阿朴棉子酚酮，其中P是保护基团，8.在细胞中诱导细胞凋亡的方法，包括使细胞与权利要求1的化合物相接触。9.使细胞对细胞凋亡诱导剂敏感的方法，包括使细胞与权利要求1的化合物相接触。10.权利要求9的方法，还包括使细胞与细胞凋亡诱导剂相接触。11.权利要求10的方法，其中所述细胞凋亡诱导剂是化疗剂。12.权利要求10的方法，其中所述细胞凋亡诱导剂是辐射。13.治疗、改善或预防动物中响应诱导细胞凋亡的疾病的方法，包括给予所述动物治疗有效量的权利要求1的化合物。14.权利要求13的方法，还包括给予所述动物细胞凋亡诱导剂。15.权利要求14的方法，其中所述细胞凋亡诱导剂是化疗剂。16.权利要求14的方法，其中所述细胞凋亡诱导剂是辐射。17.权利要求14的方法，其中所述响应诱导细胞凋亡的疾病是过度增殖性疾病。18.权利要求17的方法，其中所述过度增殖性疾病是癌症。19.权利要求14的方法，其中所述权利要求1的化合物在所述细胞凋亡诱导剂之前给予。20.权利要求14的方法，其中所述权利要求1的化合物与所述细胞凋亡诱导剂同时给予。21.权利要求14的方法，其中所述权利要求1的化合物在所述细胞凋亡诱导剂之后给予。22.治疗、改善或预防动物中过度增殖性疾病的方法，包括给予所述动物治疗有效量的权利要求1的化合物。23.权利要求22的方法，其中所述过度增殖性疾病是癌症。24.权利要求22的方法，还包括给予所述动物细胞凋亡诱导剂。25.权利要求24的方法，其中所述细胞凋亡诱导剂是化疗剂。26.权利要求24的方法，其中所述细胞凋亡诱导剂是辐射。27.含有权利要求1的化合物的试剂盒。28.权利要求27的试剂盒，还含有细胞凋亡诱导剂。29.权利要求27的试剂盒，其中所述细胞凋亡诱导剂是化疗剂。30.权利要求27的试剂盒，还含有将所述化合物给予动物的说明书。31.权利要求30的试剂盒，其中所述说明书是用于将所述化合物给予患有过度增殖性疾病的动物。32.权利要求31的试剂盒，其中所述过度增殖性疾病是癌症。全文摘要本发明涉及化合物阿朴棉子酚酮及其盐和前体药物。阿朴棉子酚酮起Bc1-2家族蛋白抑制剂的作用。本发明还涉及阿朴棉子酚酮用于抑制过度增殖性细胞生长、用于在细胞中诱导细胞凋亡和用于使细胞对细胞凋亡性细胞死亡的诱导敏感的用途。文档编号A61K31/12GK101132783SQ200580045303公开日2008年2月27日申请日期2005年11月2日优先权日2004年11月2日发明者D·杨,J·陈,S·王,Z·尼科洛夫斯卡-科莱斯卡申请人:密执安州立大学董事会