专利名称：：在其中包封有抗结核药物的聚dl-丙交酯-共-乙交酯纳米微粒的制备方法在其中包封有抗结核药物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯纳米微粒的制备方法发明领域本发明涉及一种聚DL-丙交酯-共-乙交酯纳米微粒(PLG-NP)制品，该纳米微粒中包封有一种或多种活性物质(ATD)，并且使得所述包封的物质相对于彼此是稳定的。尤其，本发明涉及一种制品，该制品含有稳定的第一包封活性物质和相对于所述第一物质而言不稳定的第二包封活性物质。提到活性物质旨在包括治疗性和/或生物活性物质。因此，例如，该纳米微粒可用于包封抗结核药物(ATD)。
背景技术：
：需要为期6-9个月每天施用多种ATD是造成患者不依从性以及与药物相关的肝毒性的原因，而所述不依从性和肝毒性导致治疗的失败。不完全/不规则治疗的另一个结果是抗药性的出现。基于纳米技术的药物递送系统使用生物可降解的聚合物，在过去十年中被广泛研究。可用于制备纳米微粒的若干方法例如双乳剂溶剂蒸发法、油中溶剂扩散法、微乳液法、气体抗溶剂沉淀法、阴离子多糖胶凝法等等中，没有一种在颗粒大小、药物包封效率和药物释放动力学方面是完美的。进一步地，在单一制剂中包封多种药物还未见报道。最常用的双乳剂溶剂蒸发法包括2个主要步骤-在初级乳剂中形成小滴以及随后从次级乳剂小滴中去除溶剂，然后进行聚合物沉淀。颗粒稳定性以及药物释放动力学通过使用乳化剂/稳定剂例如聚乙烯醇(PVA)而得到控制。公知INH、PZA和RIF是用于治疗结核病的活性物质或药物。因此，专利申请号765/Del/2003提出了一种将上述药物中的两种或多种同时或共同包封的方法，但所述药物相对于彼此是稳定的。除了上述三种药物或活性物质之外，还已知EMB是也用于治疗结核病的药物。然而，EMB在INH、PZA或RIF存在时不稳定，尤其是在INH存在时。从而，发现EMB不能与INH同时共同包封，因为任何这样的共同包封将导致EMB的降解。例如，专利申请号765/Del/95具有共同包封就稳定性而言彼此相容的活性物质或药物的有用应用。对EMB的包封迄今仍是未知的。发明目的本发明的一个目的是提出一种含有包封的活性物质的制品及其制备方法，所述活性物质相对于彼此不稳定。本发明的另一个目的是提出一种其中包封有ATD并且消除了现有技术相关不足的制品及其制备方法，其中ATD包含利福平(RIF)+异烟肼(INH)+吡溱酰胺(PZA)+乙胺丁醇(EMB)或利福平(RIF)+异烟肼(INH)的组合。本发明的另一个目的是提出一种其中包封有ATD的制品及其制备方法，其提供延长和持续的药物释放。本发明还有另一个目的是提出一种其中包封有ATD的制品及其制备方法，其能够被调节以包封最多药物。本发明的另一个目的是提出一种其中包封有ATD的制品及其制备方法，其能够使药物均匀地分布于结核菌存在的不同器官。本发明还有另一个目的是提出一种其中包封有ATD的制品及其制备方法，其可以被冻干并且重配以用作口服制剂。而本发明的另一个目的是提出一种其中包封有ATD的制品及其制备方法，其不呈现肝毒性。发明简述根据本发明，提供了一种其中包封有抗结核药物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯纳米微粒的制备方法，其包括(i)在DW/NS/PBS中制备稳定的水溶性药物的水溶液，(ii)在DW/NS/PBS中制备不稳定药物，(iii)在有机溶剂中制备聚合物和疏水药物溶液，(iv)将步骤(i)和(U)的溶液分别与步骤(iii)的溶液混合并且在低温条件下超声处理，(v)将上述乳剂加入PVA水溶液并且在低温条件下再次超声处理，(vi)搅拌该乳剂并对其进行离心，(vii)洗涤所述微粒，对其进行重配并冻干。根据本发明，亲水药物的水溶液在DW/NS/PBS中以1:0.1-100的重量/体积比制备。聚合物溶液在有机溶剂优选二氯甲烷(DCM)中以1:0.3-1的重量/体积比制备，还含有重量/体积比为1:0.5-5的疏水药物。将水溶液按1:5-20的体积/体积比倒入有机溶液并在4°-15°C下超声处理45-120秒。将初级乳剂倒入0.8-2.5%PVA溶液，保持DCM:PVA的比例在1:0.5-1.5，在4。-15。C下超声处理2-5分钟并搅拌18-30小时。将经搅拌的混合物在4。-20。C下以8000-U000rpm离心15-30分钟以获得沉淀并用DW/NS/PBS洗涤3-4次，重悬在其中并冻干。药物和聚合物之比保持在1:lw/w。用这种方式，制得三种类型的制剂，即PLG-NP包封RIF+INH+PZA,PLG-NP包封RIF+INH，和PLG-NP包封醒。已发现乙胺丁醇在异烟肼存在时非常不稳定。从而，如果需要包5昏一种活性物质时，本来便利的是将乙醇丁胺联合其它活性物质共同包封，并采用同时待审的专利申请号765/Del/2003中所述的方法。然而，与之相关的不足是乙醇丁胺将会由于其不稳定特性而降解。从而，为了消除这样的不足，乙醇丁胺被分开单独包封。如此分开单独包封乙醇丁胺还改善了乙醇丁胺口服施用时的生物利用度。另一个特性是有关最小抑菌浓度(MIC)。已发现当乙醇丁胺作为其中一种活性物质包封四种活性物质时无法获得MIC。然而，分开单独包封乙醇丁胺提供了所需的MIC。包封有ATD的PLG-NP的制备方法通过下列实施例解释说明。实施例将10mgINH和10mgPZA溶于lmLDW中。将10mgRIF和30mgPLG混悬于10mLDCM中。将水溶液加入DCM溶液中，在4。C下超声处理lmin并倒入1%PVA溶液(8mL)，随后在4'C下超声处理3min。将乳剂搅拌18hr并以10，OOOrpm离心20min。将沉淀用DW洗涤3次并接着重悬于其中以进行冻干。将10mgEMB溶解在lmLM中。将10mgPLG混悬在10mlDCM中。将水溶液加入DCM溶液，在4。C下超声处理lmin并倒入1%PVA溶液(8mL),随后在4。C下超声处理3min。将乳剂搅拌18hr并以10,Q00rpm离心20min。将沉淀用DW洗涤3次并接着重悬于其中以进行冻干。将冻干的微粒混悬在NS中并且口服施用于小鼠，所得结果在表1中给出。表l-药物治疗后小鼠器官中的结核分枝杆菌菌落形成单位(CFU)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>.数值是平均值士SD,每组11=5.logcfu值在组2a/b/c和组4(a)之间相当(P〉0.05),然而，其显著低于(P復001)组1。.*是指在接种未稀释和以1比IO稀释的組织匀浆后第28天没有可测得的cfu。单次口服施予小鼠PLG纳米微粒，只有当EMB被分开单独包封并给药时才在血浆中获得最小抑菌浓度(乙醇丁胺的MIC=1.5ng/ml)。这从TB治疗角度而言是重要的，因为如果药物水平低于MIC，治疗将变得无效。事实上，当将共同包封EMB连同其它3种药物的PLG-NP施用于小鼠时，血液中的EMB水平在整个研究期间均低于MIC。此外，参照于生物利用度视为-1的游离EMB，PLG-NP-包封的EMB(单独)的生物利用度是-IO.6，而PLG-NP-包封的EMB(连同其它3种药物)的生物利用度是5.1。PLG-NP中药物含量的测定PLG-NP的药物包封效率如下RIF56.99±2.72%INH66.31±5.83%PZA68.02±5.58%EMB43.11±4.21%如通过血浆胆红素、丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶所评估的，PLG-NP不包含任何肝毒性。权利要求1.其中包封有抗结核药物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯纳米微粒的制备方法，包括(i)在DW/NS/PBS中制备稳定的水溶性药物的水溶液，(ii)在DW/NS/PBS中制备不稳定药物，(iii)在有机溶剂中制备聚合物和疏水药物溶液，(iv)将步骤(i)和(ii)的溶液分别与步骤(iii)的溶液混合并且在低温条件下超声处理，(v)将上述乳剂加入PVA水溶液并且在低温条件下再次超声处理，(vi)搅拌该乳剂并对其进行离心，(vii)洗涤所述微粒，对其进行重配并冻干。2.如权利要求1所述的方法，其中所述有机溶剂是二氯甲烷。3.如权利要求1和2所述的方法，其中所述聚合物以1:0.3-1w/v的比例溶解在所述溶剂中。4.如权利要求1所述的方法，其中所述药物以1:l-1000w/v的比例溶解于DW/NS/PBS中和以1:0,5-5w/v的比例溶解于DCM中。5.如权利要求1所述的方法，其中所述水溶液和有机溶液以1:5-20v/v的比例混合。6.如权利要求1所述的方法，其中所述药物和聚合物的比例是1:lw/w。7.如权利要求1所述的方法，其中第一次超声处理进行45-120秒并且第二次超声处理进行2-5分钟，各自均在4°C-15。C下进行。8.如权利要求1所述的方法，其中所述聚乙烯醇的浓度为0.8-2.5%并且DCM:PVA的比例是1:0.5-1.5。9.如权利要求1所述的方法，其中离心是在4。-20。C下以8000-12000rpm进行15-30分钟。10.如权利要求1所述的方法，其中所述微粒用DW/NS/PBS(pH7.2-7.4)洗涤3-4次并冻干。'11.实质上如本文描述和实施例例示说明的其中包封有抗结核药物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯纳米微粒的制备方法。全文摘要在其中包封有抗结核药物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯纳米微粒的制备方法，包括(i)在DW/NS/PBS中制备稳定的水溶性药物的水溶液，(ii)在DW/NS/PBS中制备不稳定药物，(iii)在有机溶剂中制备聚合物和疏水药物溶液，(iv)将步骤(i)和(ii)的溶液分别与步骤(iii)的溶液混合并且在低温条件下超声处理，(v)将上述乳剂加入PVA水溶液并且在低温条件下再次超声处理，(vi)搅拌该乳剂并对其进行离心，(vii)洗涤所述微粒，对其进行重配并冻干。文档编号A61K9/51GK101160119SQ200580049436公开日2008年4月9日申请日期2005年4月11日优先权日2005年4月11日发明者G·K·库勒,J·N·沃玛,R·潘迪,S·沙玛申请人:莱富凯尔创新私人有限公司