专利名称：用于增进癌症化学治疗药剂功效的医药组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于增进癌症化学治疗药剂功效的组合物，特定地说，本发明涉及利用抗坏血酸和维生素K3的组合以增进癌症化学治疗药剂功效的用途。
背景技术：
肿瘤/癌症通常对人类健康造成威胁。多年来，医学领域已努力研究并开发对于肿瘤/癌症治疗有效的医药品。在多种情况下，外科手术可有效治疗肿瘤/癌症。此外，恶性肿瘤的通常治疗为投用适当化学治疗药剂，即化学疗法。化学疗法基于对癌细胞具有选择性毒性(细胞毒素)的药物的使用。已开发多种化学治疗药物，其包括干扰核酸合成、蛋白质合成和其它关键代谢过程的药物。
在20世纪早期，已将砷化合物用于治疗慢性骨髓性白血病和恶性淋巴瘤。近来，已将三氧化二砷(As2O3)用于治疗原发性和难治愈的急性早幼粒细胞白血病(APL)患者，同时达到高响应率和血液学/分子缓解(Soignet SL等人，N Engl J Med 1998；3391341-1348)。对于携带与成人T细胞白血病/淋巴瘤相关的人类嗜T细胞淋巴病毒I型的患者而言，也已获得临床反应(Bazarbachi A.& Hermine O.，Virus Res.，2001；7879-92)。此外，As2O3在特定癌症类型中会抑制细胞生长且诱导细胞凋零，所述癌症类型包括APL(Shao W.等人，J Natl Cancer I 1998；90124-133)、肝癌(Siu KP等人，Life Sci.2002；71275-285)、胰腺癌(Li X等人，Anticancer Res 2002；222205-2213)与胃癌(Jiang XH等人，Init J Cancer 2001；91173-179)。
据报导当以10mg/d的剂量经静脉注射方式将三氧化二砷投与患复发性急性早幼粒细胞白血病的患者时，可达到90％的完全缓解(CR)率(Shen Z.X.等人，Blood(1997)，893354)。也据报导，除了三氧化二砷之外，诸如含有硫化砷(As2S2)的“复合青黛锭剂”和纯四硫化四砷的含砷物质可分别达到98％和84.9％的完全缓解率(Wang Z.Y.，Cancer Chemother Pharmacol(2001)，48(suppl 1)S72-S76)。
2001年，美国国家卫生院(NIH)继续进行三氧化二砷在血液和实体肿瘤中的临床试验，并在其报告中指出三氧化二砷可抑制多种癌症细胞株的生长且促进所述癌症细胞株的细胞凋零。关于血液恶性肿瘤所实施的三氧化二砷临床试验，除了包括急性早幼粒细胞白血病之外，也包括急性骨髓白血病(ALM)、急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病(CML)、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、骨髓发育不良症候群和多发性骨髓瘤。关于实体肿瘤所实施的三氧化二砷临床试验则包括前列腺癌、子宫颈癌和膀胱癌(Murgo A.J.，The Oncologist(2001)，6(suppl 2)22-28)。
2000年9月，美国食品和药物管理局(FDA)批准将三氧化二砷用作治疗急性早幼粒细胞白血病的孤儿药物。中国台湾卫生署(DOH)在2002年1月批准由台湾东洋药品工业股份有限公司出售含有三氧化二砷的医药制剂(“ASADIN注射剂”；执照号码第000005号)。
数十年来，5-FU已成为用于治疗多种癌症的另一最著名化学治疗药物；其与癌细胞内的酶结合并借此在所述细胞上发挥其抗癌效果。
阿霉素(Adriamycin)(也称作亚德里亚霉素，doxorubicin)为霍奇金氏疾病和非霍奇金氏淋巴瘤治疗的通用化学治疗药剂。其经常在多药物疗程中与其它化学治疗药剂并用，其为从波赛链霉菌青灰变异体(Streptomyces peucetius var.caesius)培养物中分离出的细胞毒素蒽环霉素抗生素，且其也为干扰癌细胞生长的抗肿瘤阿霉素，所述药物数十年来已作为用于若干癌症类型的古老化学治疗药物之一。
顺铂(sis-PLA-tin)属于称作烷基化剂的医药品的群组，其用于治疗膀胱、卵巢和睾丸的癌症，其也可用于治疗其它癌症类型。顺铂会干扰癌细胞的生长，所述癌细胞最终会被破坏。
抗坏血酸(也称作维生素C，属于水溶性维生素)在生成骨骼、软骨、肌肉和血管结构的胶原蛋白的形成中很重要。已知抗坏血酸可用作替代化学疗法或用作缓解与其相关副作用的佐剂。例如，据称抗坏血酸会增强亚德里亚霉素(DOX)、顺铂(DDP)和紫杉醇(TX)在活体外人类乳癌细胞株中的抗肿瘤活性。在两种人类乳癌细胞株(MCF-7和MDA-MB-231)中，测试其单独对抗DOX、DDP和TX的活性和对抗与抗坏血酸组合的DOX、DDP和TX的活性时发现抗坏血酸在高浓度(即102-103μM)下显示细胞毒素活性。抗坏血酸在非细胞毒素(1μM)和中等细胞毒素(102μM)浓度下都显著增强DOX、DDP和TX的细胞毒性(Kurbacher CM，Wagner U，Kolster B，Andreotti PE，Krebs D，Bruckner HW.，Ascorbic acid(vitamin C)cisplatin and paclitaxel in human breast carcinomacells in vitro.，Cancer Lett.1996 Jun 5；103(2)183-189)。
维生素K3的早期研究关于利用一种氧化性模型来解释在活体外和活体内研究中所见的抗癌效果；然而，所述模型不足以描述维生素K1和K2的作用。最近的研究已证实，维生素K的抗癌作用是作用在酪氨酸激酶和磷酸酶的量上，调节如Myc和Fos的各种转录因子。与细胞周期蛋白相关的酪氨酸激酶也已显示出受维生素K影响，维生素K可导致细胞周期停滞和细胞死亡。也有相关报导指出，维生素K3会影响L1210鼠类白血病细胞的生长(Chlebowski RT，Dietrich M，Akman S，Block JB.Cancer Treat Rep.1985 May；69(5)527-532)。
在本发明中，出人意料之外地发现抗坏血酸和维生素K3的组合具有改进化学治疗药剂对数种癌细胞株的抑制效果。本发明涉及用于增进癌症化学治疗药剂功效的抗坏血酸和维生素K3的组合，并涉及其用于治疗肿瘤/癌症的用途。
发明内容
本发明的目的为提供一种用于治疗需要治疗的哺乳动物的肿瘤/癌症的医药组合物，其包含有效剂量的抗坏血酸和维生素K3的组合与一种或一种以上化学治疗药剂。抗坏血酸的优选剂量为以大于10g/天的剂量来投用。更理想的剂量为30-60g/天。此外，维生素K3优选剂量为以大于100mg/天的剂量来投用。
本发明的另一目的为提供一种增进癌症化学治疗药剂功效的医药组合物，其包含有效剂量的抗坏血酸和维生素K3的组合，其中所述医药组合物为投与到正接收一种或一种以上化学治疗药剂的哺乳动物。抗坏血酸优选剂量为以大于10g/天的剂量来投用，其更理想剂量为30-60g/天。此外，维生素K3优选剂量为以大于100mg/天的剂量来投用。
本发明的进一步目的为提供一种用于治疗哺乳动物的肿瘤/癌症的治疗组合产品，其在一隔室内包含一剂量的抗坏血酸、在一隔室内包含一剂量的维生素K3且在另一隔室内包含一剂量的化学治疗药剂。
本发明也涉及抗坏血酸和维生素C的组合在制备增进癌症化学治疗药剂功效的药物中的用途。
本发明的详细说明陈述于下列说明中。本发明的其它特征、目的和优势在本发明说明和权利要求书中将是显而易见的。
图1描述抗坏血酸(1mM)和维生素K3(1μM)的组合与As2O3(0.25-2μg/ml)对Hep3B细胞增殖能力的影响。
图2描述各种浓度的抗坏血酸(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)和维生素K3(1-3μM)的组合与As2O3(0.5-2μg/ml)对MCF-7细胞增殖能力的影响。
图3描述各种浓度的抗坏血酸(100-200μg/ml)和维生素K3(0.1μM)的组合与5-FU对T109A细胞增殖能力的影响。
图4描述各种浓度的阿霉素(0.03-1μg/ml)在与维生素C(100或200μg/ml)和维生素K3(1μg/ml)的组合相结合或没有与其结合时，其对Hep3B肝癌细胞增殖能力的影响。
图5描述各种浓度的顺铂(0.03-1μg/ml)在与维生素C(100或200μg/ml)和维生素K3(1μg/ml)的组合相结合或没有与其结合时，其对Hep3B癌细胞增殖的影响。
具体实施例方式
在本文所用的术语“抗肿瘤剂量”是指足以在哺乳动物血浆(其中所述哺乳动物需要治疗)中达到对癌细胞具有细胞毒性(如使用模拟活体内实体肿瘤的活体外培养物模型经试验所证实)的浓度含量的剂量。
在本文所用的术语“有效剂量”是指所述剂量会增进用于治疗需要治疗的哺乳动物的肿瘤/癌症的化学治疗药剂的功效。
在本文所用的术语“载剂”或“医药学上可接受的载剂”是指所属领域的技术人员所熟知的可用于制备医药组合物的稀释剂、赋形剂、接受剂和其类似物。
如本文所用的术语“抗坏血酸”、“抗坏血酸盐”或“维生素C”是指与抗坏血酸涵义相同，其包括阴离子组份抗坏血酸根(无论为酸或其医药学上可接受的盐之一)，优选包括抗坏血酸钠和抗坏血酸钙。
本文所用的术语“维生素K3”是指天然或合成维生素K3和其医药学上可接受的盐。
本发明发现通过以抗坏血酸和维生素K3的组合来调配癌症化学治疗药剂时，所述组合将显著增进所述化学治疗药剂的效果。此外，通过增加抗坏血酸浓度(尤其大于200μg/ml)可有效增加所述增进效果。如实例1(下文中讨论)结果所证实，发现抗坏血酸(100μg/ml-200μg/ml)和维生素K3(0.1μg/ml-1μg/ml)的组合可显著地增进化学治疗药剂(诸如As2O3、阿霉素、顺铂或5-Fu)的功效以抑制多种癌细胞的增殖。
本发明特征在于使用抗坏血酸和维生素K3的组合来增进防治癌细胞的癌症化学治疗药剂的功效。
已开发出多种用于治疗癌症的化学治疗药剂，如烷基化剂、嘌呤拮抗剂、嘧啶拮抗剂、植物碱、嵌入抗生素、芳香酶抑制剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物响应调节剂、抗激素和抗雄激素。适用于本发明方法中的所述化学治疗药剂的实例包括(但不限于)5-FU、阿霉素、顺铂或含砷化合物，所述含砷化合物优选为As2O3。
根据本发明医药组合物/治疗组合产品可用于治疗肿瘤或癌症，所述肿瘤或癌症优选选自由血液恶性肿瘤和实体肿瘤组成的群组。所述实体肿瘤优选选自由乳癌、结肠癌、直肠癌、肝肿瘤、卵巢癌和前列腺癌组成的群组。所述实体肿瘤更优选选自由肝细胞癌、胆管细胞癌、肝细胞癌的纤维板层变异体、肝内胆管癌、肝细胞胆管细胞混合癌、未分化肝细胞癌、肝肿瘤并胆总管侵入、肝母细胞瘤、儿童肝肿瘤和原发性肝细胞癌组成的群组。
本发明提供一种用于治疗哺乳动物的肿瘤/癌症(尤其为晚期实体肿瘤)的医药组合物，其包含抗肿瘤剂量之一种或一种以上化学治疗药剂和有效增进所述一种或一种以上化学治疗药剂功效的剂量的抗坏血酸与维生素K3的组合以及至少一种医药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。抗坏血酸优选剂量是以大于10g/天的剂量来投用，更理想剂量是以30-60g/天的剂量来投用。此外，维生素K3优选剂量是以大于100mg/天的剂量来投用。
优选的医药组合物包含抗肿瘤剂量的含砷化合物和有效剂量的抗坏血酸与维生素K3的组合；更好的组合为所述含砷化合物为As2O3。另一优选医药组合物包含抗肿瘤剂量的5-FU或阿霉素和有效剂量的抗坏血酸与维生素K3的组合。
本发明另外提供一种增进癌症治疗药剂功效的医药组合物，其包含有效剂量的抗坏血酸和维生素K3，其中所述医药组合物为投与到正接受一种或一种以上化学治疗剂的哺乳动物。抗坏血酸优选剂量是以大于10g/天的剂量来投用，更理想剂量是以30-60g/天的剂量来投用。此外，维生素K3优选剂量是以大于100mg/天的剂量来投用。
本发明的医药组合物可通过所属领域的技术人员所熟知的技术而调配成适于非经肠、经口或局部投药的形式，诸如溶液、胶囊、分散液、悬浮液等等。根据本发明的医药组合物优选效果为用于非经肠投药。更好的方式是，根据本发明的医药组合物调配成适于注射的形式，诸如粉末注射剂、用于注射的冻干产品、乳液注射剂、油性注射剂和脂质体注射剂等。在制备本发明的医药组合物时，可视情况包括各种添加剂，如一种或一种以上载剂、稀释剂、赋形剂、流化剂、粘合剂、稳定剂、稠化剂、pH值调节剂和其类似物。
合适的载剂、稀释剂和赋形剂包括淀粉和其衍生物，如马铃薯淀粉、玉米淀粉、糊精和小麦淀粉和羟丙基淀粉；糖类，如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨糖醇；纤维素类，如甲基纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基纤维素；无机化合物，如氯化钠、硼酸、硫酸钙、磷酸钙和沉淀碳酸钙；和其类似物。
合适的流化剂包括氧化镁、合成硅酸铝、偏硅酸、氧化铝镁、含水硅酸、无水硅酸、滑石粉、硬脂酸镁、高岭土和其类似物。
合适的粘合剂包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷、聚乙烯醇、阿拉伯胶、黄耆胶、海藻酸钠、明胶、麸质和其类似物。
合适的稳定剂包括蛋白质类，如白蛋白、鱼精蛋白、明胶和球蛋白；氨基酸类和其盐类；和其类似物。
合适的稠化剂包括蔗糖、丙三醇、甲基纤维素、羧甲基纤维素和其类似物。
合适的pH值调节剂包括盐酸、氢氧化钠、磷酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐和其类似物。
所属领域的技术人员将能够易于确定最适用于待治疗病症的路径和剂量。根据本发明，优选的投药路径为非经肠投药。剂量将由主治医师或兽医来判断，并将取决于待治疗病症的性质和状态、待治疗受检者的年龄和总体健康状况、投药路径和任何先前已可实施的治疗。所属领域的技术人员应了解，所述剂量可随个体而变化，视个体的年龄、大小和健康状况和相关因素而定。
本发明也提供一种治疗组合产品，其在单一隔室中分别包含(a)适于投用的即用医药制剂，其含有剂量大于10g的抗坏血酸；(b)适于投用的即用医药制剂，其含有剂量大于100mg的维生素K3；和(c)适于投用的即用医药制剂，其含有化学治疗药剂。
本发明进一步涉及抗坏血酸与维生素K3的组合在制备增进化学治疗药剂功效的药物中的用途。
参照下列非限制性实例来详述本发明。执行下列程序以证实抗坏血酸与维生素K3的组合对于癌细胞增殖能力的影响。
实例1肿瘤样本和细胞株在所述研究中使用包括人类肝癌细胞株Hep3B、乳癌细胞株MCF-7和结肠癌细胞株T109A的三种人类细胞株。
抗癌药剂从Sigma Pharmaceutical Co.购得抗坏血酸钠、维生素K3、5-FU、顺铂和阿霉素。从台湾TOYO Pharmaceutical Co.获赠As2O3(Asadin)。以培养基将上述药剂稀释到各种浓度并使其完全混合，且接着将其添加到用于培养癌细胞的培养皿中。
癌细胞的治疗将各种癌细胞先在37℃培养箱内培养24小时，然后将其以1×103个细胞/培养皿的密度涂于96孔培养皿中。在37℃下细胞附着隔夜之后，通过直接应用添加或没有添加维生素C和维生素K3的抗癌药剂而使培养皿曝露在各种处理浓度下，继续培养72小时。
MTT检定在72小时培育以后，在37℃下将上清液移除并以含MTT(0.5mg/ml)的新鲜培养基替代。历经四小时后，将上清液移除并以DMSO溶解。在550nm的测试波长下，由EIA读取器读取吸光值。根据标准吸光值测定技术来测定癌细胞增殖能力。
增殖能力＝药物治疗的吸光值/没有用药物治疗的吸光值×100％。
统计分析为了分析资料，对各治疗而言，绘制吸收率平均值-化学治疗药剂浓度的曲线以获得增进效果的剂量-响应关系。
结果抗坏血酸和维生素K3的组合对于As2O3对抗Hep3B细胞的抗癌活性的增进效果图1显示单独使用As2O3和As2O3加上抗坏血酸(1mM)和维生素K3(1μM)的组合对Hep3B细胞发育能力的影响。在这一试验中，使抗坏血酸和维生素K3浓度保持恒定，而使As2O3改变。由图1可知，与单独使用As2O3相比，抗坏血酸和维生素K3的组合与As2O3相结合的治疗对Hep3B细胞增殖能力造成更大抑制作用。值得注意的是，对增殖能力抑制作用的增进效果呈剂量依赖性(dose-dependent)。
抗坏血酸和维生素K3的组合对于As2O3对抗MCF-7乳癌细胞的抗癌活性的增进效果另一实验为通过改变抗坏血酸和维生素K3浓度来进行，同时使用100μg/ml-800μg/ml的抗坏血酸、1-3μg/ml的维生素K3和0.5-2μg/ml的As2O3。图2所示的结果指出，抗坏血酸和维生素K3的组合与As2O3相结合的治疗对MCF-7细胞增殖能力造成显著抑制作用。由各图可知，随维生素K3的浓度增加，其抑制活性也增加。
抗坏血酸和维生素K3的组合对于5-FU对抗T109A结肠癌细胞的抗癌活性的增进效果图3显示(i)单独使用5-FU、(ii)5-FU加上抗坏血酸、(iii)5-FU加上维生素K3、和(iv)5-FU加上抗坏血酸和维生素K3的组合对于T109A细胞增殖能力的影响。改变所有的5-FU、抗坏血酸和维生素K3浓度。由图3可知，与(i)单独使用5-FU/(ii)5-FU加上抗坏血酸/(iii)5-FU加上维生素K3相比，(iv)抗坏血酸和维生素K3的组合与5-FU相结合的治疗对T109A细胞增殖能力造成更大抑制作用。值得注意的是，对增殖能力抑制作用的增进效果具有剂量依赖性。
图4显示(i)单独使用阿霉素、(ii)抗坏血酸加上维生素K3和(iii)阿霉素加上抗坏血酸和维生素K3的组合对于Hep3B肝癌细胞增殖能力的影响。使阿霉素的浓度在0.03-1μg/ml之间变化，而使抗坏血酸(100-200μg/ml)和维生素K3(1μg/ml)恒定。显而易见，与(i)单独阿霉素或(ii)抗坏血酸加上维生素K3相比，(iii)抗坏血酸、维生素K3和阿霉素的组合相结合的治疗对Hep3B肝癌细胞增殖能力造成更大抑制作用。当维生素C处于200μg/ml的高浓度下时，维生素C和维生素K3的组合对阿霉素抗癌效果的增进效果更为明显。
图5显示(i)单独使用顺铂、(ii)抗坏血酸加上维生素K3和(iii)顺铂加上抗坏血酸和维生素K3的组合对于Hep3B肝癌细胞发育能力的影响。使顺铂的浓度在0.1-3μg/ml之间变化，而使抗坏血酸(100或200μg/ml)和维生素K3(1μg/ml)恒定。显而易见，与(i)单独使用顺铂或(ii)抗坏血酸加上维生素K3相比，(iii)抗坏血酸、维生素K3和顺铂的组合相结合的治疗对Hep3B肝癌细胞增殖能力造成更大抑制作用。当维生素C处于200μg/ml的高浓度下时，维生素C和维生素K3的组合对顺铂抗癌效果的增进效果更为明显。
当使用增殖能力抑制检定进行评估时发现，抗坏血酸和维生素K3的组合确实有效增进化学治疗药剂(例如，As2O3、阿霉素、顺铂和5-FU)对抗肝癌、乳癌和结肠癌细胞株的增殖能力的抑制活性。所述增进效果具有剂量依赖性。
权利要求
1.一种用于治疗哺乳动物的肿瘤/癌症的医药组合物，其包含抗肿瘤剂量的一种或一种以上化学治疗药剂和有效剂量的抗坏血酸和维生素K3的组合与至少一种医药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。
2.根据权利要求1所述的医药组合物，其用于非经肠或经口投药。
3.根据权利要求1所述的医药组合物，其中所述抗坏血酸的剂量大于10g/天。
4.根据权利要求1所述的医药组合物，其中所述维生素K3的剂量大于100mg/天。
5.根据权利要求1所述的医药组合物，其中所述化学治疗药剂选自5-FU、阿霉素、顺铂或含砷化合物。
6.根据权利要求5所述的医药组合物，其中所述含砷化合物为As2O3。
7.根据权利要求1所述的医药组合物，其中所治疗的肿瘤/癌症选自肝癌、乳癌或结肠癌。
8.根据权利要求1所述的医药组合物，其可视情况另外包含一种或一种以上添加剂。
9.一种增进癌症化学治疗药剂功效的医药组合物，其包含有效剂量的抗坏血酸和维生素K3的组合，其中所述医药组合物被投与到正接受一种或一种以上化学治疗药剂的哺乳动物。
10.根据权利要求9所述的医药组合物，其用于非经肠或经口投药。
11.根据权利要求9所述的医药组合物，其中所述抗坏血酸的剂量为大于10g/天。
12.根据权利要求9所述的医药组合物，其中所述维生素K3的剂量大于100mg/天。
13.根据权利要求9所述的医药组合物，其中所述化学治疗药剂选自5-FU、阿霉素、顺铂或含砷化合物。
14.根据权利要求13所述的医药组合物，其中所述含砷化合物为As2O3。
15.一种用于治疗哺乳动物的肿瘤/癌症的治疗组合产品，其在单一隔室中分别包含(a)适于投用的即用医药制剂，其含有抗坏血酸；(b)适于投用的即用医药制剂，其含有维生素K3；和(c)适于投用的即用医药制剂，其含有化学治疗药剂。
16.根据权利要求15所述的产品，其中所述化学治疗药剂选自5-FU、阿霉素、顺铂或含砷化合物。
17.根据权利要求16所述的产品，其中所述含砷化合物为As2O3。
18.根据权利要求15所述的产品，其用于治疗肝癌、乳癌或结肠癌。
19.一种抗坏血酸与维生素K3的组合在制备增进化学治疗药剂功效的药物中的用途。
20.根据权利要求19所述的用途，其中所述抗坏血酸的剂量为大于10g/天。
21.根据权利要求19所述的用途，其中所述维生素K3的剂量为大于100mg/天。
22.根据权利要求19所述的用途，其中所述化学治疗药剂为选自5-FU、阿霉素、顺铂或含砷化合物。
23.根据权利要求22所述的用途，其中所述含砷化合物为As2O3。
全文摘要
本发明提供一种治疗癌症和/或增进癌症化学治疗药剂功效的医药组合物，具体而言，本发明涉及利用抗坏血酸和维生素K3的组合来治疗癌症和/或增进癌症化学治疗药剂功效的用途，以及含抗坏血酸和维生素K3的医药组合物与治疗组合产品。
文档编号A61K31/704GK1876183SQ20061000204
公开日2006年12月13日 申请日期2006年1月20日 优先权日2005年6月7日
发明者陈明丰 申请人:台湾东洋药品工业股份有限公司