专利名称：改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊及生产方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种保健用品。
背景技术：
现有的保健用品种类众多，但能起到改善睡眠、提高免疫力的产品实属不多，且往往效果不佳。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有良好的改善睡眠、提高免疫力效果的改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊及生产方法。
本发明的技术解决方案是 一种改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊，其特征是由下列重量成分的原料制成 灵芝10～30％ 灵芝破壁孢子粉 30～50％ 酸枣仁 20～40％ 银杏叶 5～15％，上述原料重量之和为100％。
所述的改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊，由下列重量成分的原料制成 灵芝20％ 灵芝破壁孢子粉 40％ 酸枣仁 30％ 银杏叶 10％。
一种改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊的生产方法，其特征是包括下列步骤 (1)将灵芝10～30wt％、酸枣仁20～40wt％、银杏叶5～15wt％清洗，烘干后备用； (2)将上述灵芝、酸枣仁、银杏叶加水煎煮、浓缩至比重为1.40的浸膏； (3)将步骤(2)得到的浸膏减压干燥成干浸膏，粉碎过80～100目筛，得干浸膏粉； (4)将干浸膏粉与灵芝破壁孢子粉30～50wt％搅拌、混匀，得混合粉；再加入85％乙醇，加入量控制在混合粉重量的10～30％，制得软材；再经制粒、灭菌、干燥、填充胶囊，得产品。
所述的改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊在制备改善睡眠制品中的应用。
所述的改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊在制备提高免疫力制品中的应用。
本发明产品具有良好的改善睡眠、提高免疫力效果，且原料易得。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施例方式 (1)将灵芝10～30wt％(例10％、20％、30％)、酸枣仁20～40wt％(例20％、30％、40％)、银杏叶5～15wt％(例5％、10％、15％)清洗，烘干后备用； (2)将上述灵芝、酸枣仁、银杏叶加水煎煮2次，微沸(常压，100℃)第一次加10倍水煎煮，第2次加8倍量水煎煮，每次2小时，沉淀，过滤，合并滤液，浓缩至比重为1.40的浸膏； (3)将步骤(2)得到的浸膏在0.08Mpa、80℃条件下减压干燥成干浸膏，粉碎过80～100目筛(例80、90、100目)，得干浸膏粉； (4)将干浸膏粉与灵芝破壁孢子粉30～50wt％(例30％、40％、50％)用槽形混合机充分搅拌、混匀，得混合粉；再加入食品级85％乙醇，加入量控制在混合粉重量的10～30％(例10％、20％、30％)，制得软材；再过16目不锈钢筛，制粒、灭菌(105℃，30分钟)、干燥(70℃，240分钟)，填充胶囊，得产品。上述原料灵芝、酸枣仁、银杏叶、灵芝破壁孢子粉用量之和为100％。产品应用在制备改善睡眠制品中和应用在制备提高免疫力制品中。
本发明产品(又名美宝眠灵芝胶囊)改善睡眠功能实验报告 1材料 1.1样品美宝眠灵芝胶囊，内容物为棕色粉末，由江苏安惠生物科技有限公司提供。样品为0.5g/粒，保存条件为密封、置阴凉干燥处，保存期为24个月，人体推荐摄入量为4500mg/人/d，本试验中按75mg/kg/d计。
1.2动物选用健康雌性ICR种小鼠120只，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，体重18～22g，合格证号SCXK(沪)2004-0005号，按体重随机分为12组，每组10只。环境证号SYXK(苏)2002-0004；动物饲料来源及证号江浦振兴实验动物饲料厂，苏动(饲)字95001号。
1.3仪器电子秤，电子天平，秒表。
1.4试剂戊巴比妥钠，巴比妥钠均为分析纯。
2.方法 2.1剂量及分组各项实验所用动物均按体重随机分成4组，每组10只，设375、750、2250mg/kg b.wt../d(分别相当于成人每日每千克体重推荐摄入量的5倍、10倍和30倍)三个样品剂量和阴性对照组(双蒸水)。
2.2受试物的给予称取样品3750、7500、22500mg，分别加双蒸水至200ml配制成各组受试液(每两天配制一次)，经口灌胃给予小鼠，阴性对照组给予双蒸水，灌胃容积均为20ml/kg b.wt..。全部动物均给予鼠全价颗粒饲料自由食用，连续30天。其中一组于灌胃29天观察直接睡眠作用。
2.3受试物对动物体重的影响各组动物于试验前后称量体重。
2.4直接睡眠实验和延长戊巴比妥钠睡眠时间实验 2.4.1直接睡眠实验各剂量组动物给予相应受试物、对照组动物给予同体积双蒸水后，以翻正反射消失为指标观察动物是否出现睡眠现象，以翻正反射消失与恢复为指标记录入睡动物睡眠时间。
2.4.2延长戊巴比妥钠睡眠时间实验各组动物均于末次灌胃15min后腹腔注射戊巴比妥钠55mg/kg，注射量为0.2ml/20g，以小鼠翻正反射消失为指标，观察受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。
2.5巴比妥钠阈下剂量催眠实验各组动物均于末次灌胃15min后腹腔注巴比妥钠135mg/kg，注射量为0.2ml/20g，以小鼠翻正反射消失1分钟以上为入睡指标，记录在30分钟内各组入睡的小鼠个数。
2.6巴比妥钠睡眠潜伏期实验各组动物均于末次灌胃15min后腹腔注射巴比妥钠215mg/kg，注射量为0.2ml/20g，以小鼠翻正反射消失为指标，记录各组动物睡眠潜伏期。
2.7统计方法使用SPSS统计软件。所有计量资料先进行正态检验和方差齐性检验，均满足正态分布和方差齐的要求，用单因素方差分析方法和多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。入睡个数等计数资料用卡方检验进行分析。
3.结果 3.1美宝眠灵芝胶囊对小鼠体重的影响见表1。
表1美宝眠灵芝胶囊对小鼠体重的影响(
) 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验组 巴比妥钠阈下剂量催眠实验组 巴比妥钠睡眠潜伏期实验组 *单因素方差分析，四组间有无差异的p值 由表1可见，各实验项目小鼠的初始体重组间和终末体重组间均无显著性差异(P＞0.05)，该样品对小鼠体重增长无明显影响。
3.2美宝眠灵芝胶囊对小鼠的直接睡眠作用见表2。
表2美宝眠灵芝胶囊对小鼠的直接睡眠作用 由表2可见，各组小鼠灌胃后均末出现睡眠现象，美宝眠灵芝胶囊对小鼠无直接睡眠作用，本实验结果阴性。
3.3美宝眠灵芝胶囊延长小鼠戊巴比妥钠睡眠时间的作用见表3。
表3美宝眠灵芝胶囊延长小鼠戊巴比妥钠睡眠时间的作用 由表3可见，中、高剂量组小鼠睡眠时间延长，与溶剂对照组相比有统计学显著性差异(p＜0.05，p＜0.01)，表明中、高剂量组样品可延长小鼠戊巴比妥钠睡眠时间，实验结果阳性。
3.4美宝眠灵芝胶囊对巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响见表4。
表4美宝眠灵芝胶囊对巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响 由表4可见，经卡方检验，各剂量组入睡小鼠个数与溶剂对照组相比均有统计学显著性差异(p＜0.05，p＜0.01)，表明各剂量组样品均具有促进小鼠巴比妥钠阈下剂量催眠作用，实验结果阳性。
3.5美宝眠灵芝胶囊对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响见表5。
表5美宝眠灵芝胶囊对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响 *单因素方差分析，四组间有无差异的p值 由表5可见，各剂量组小鼠睡眠潜伏期缩短，但与溶剂对照组相比无统计学显著性差异(p＞0.05)，实验结果阴性。
小结该样品直接睡眠实验结果阴性，延长戊巴比妥钠睡眠时间实验和巴比妥钠阈下催眠实验结果阳性，巴比妥钠睡眠潜伏期结果阴性，根据保健食品功能学评价标准，该样品具有改善睡眠功能。
美宝眠灵芝胶囊增强免疫力功能动物实验报告 1材料和方法 1.1样品美宝眠灵芝胶囊，内容物为棕色粉末，由江苏安惠生物科技有限公司提供。样品为0.5g/粒，保存条件为密封，置阴凉干燥处，保存期24个月，人体推荐摄入量为4.5g/人·日，本试验中按75mg/kg b.wt./d计。
1.2实验动物选用中牧实业股份有限公司南京药械厂提供的18～22g健康雌性二级ICR小鼠(动物证号SCXK(苏)2002-0030号)，分别按体重随机各分为4组，每组10只，共分5批分别进行小鼠脾淋巴细胞转化试验和NK细胞活性测定；二硝基氟苯诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)试验；抗体生成细胞检测和血清溶血素测定；小鼠碳廓清试验；小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。环境证号SYXK(苏)2002-0004；动物饲料来源及证号江浦振兴实验动物饲料厂，苏动(饲)字95001号。
1.3剂量设计成人(按60kg体重计)每日推荐摄入量为4500mg，相当于75mg/kg b.wt./d，实验设人体推荐量的10倍，即每日750mg/kg b.wt.作为中剂量组，上、下各1个剂量组2250mg/kg b.wt./d和375mg/kg b.wt./d作为高剂量组和低剂量组(分别相当于人体推荐量的30倍和5倍)。称取样品22500、7500、3750mg，分别加双蒸水至200ml配制成各组受试液(存放于4℃冰箱，每两天配制一次)，经口灌胃给予小鼠，灌胃容积为20ml/kg b.wt.，阴性对照组灌双蒸水，连续灌胃30d后测各项免疫指标。
1.4主要仪器与试剂电子秤、电子天平、显微镜、酶标仪、二氧化碳培养箱、打孔器、723分光光度计、超净工作台、振荡器、恒温水浴箱、计时器、染色槽、可调移液器、试管、微量采血管、200目筛网、24孔培养板、96孔培养板、手术器械等。
RPMI1640细胞培养液、YAC-1细胞、小牛血清、2-巯基乙醇(2-ME)、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A(ConA)、盐酸、异丙醇、MTT、Hank′s液、PBS缓冲液(pH7.2-7.4)、2，4-二硝基氟苯(DNCB)、丙酮、麻油、绵羊红细胞(SRBC)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、都氏试剂、印度墨汁、Na2CO3、乳酸锂、硝基氯化四氮唑(INT)、吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)、NAD、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH8.2)、2.5％Triton等。
1.5实验方法 1.5.1二硝基氟苯诱导小鼠迟发性变态反应(DTH) 连续灌胃25d后，小鼠腹部去毛，1％二硝基氟苯(DNFB)丙酮麻油溶液50ul涂抹致敏。致敏后5d，小鼠右耳均匀涂抹1％DNFB丙酮麻油溶液10ul进行攻击，左耳涂抹丙酮麻油溶液作对照，攻击后24h处死小鼠，剪下左右耳壳，于同一部位取直径8mm的耳片称重，左右耳片重量之差作为肿胀度。同时取小鼠的胸腺及脾脏，以每10g小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)作为脾脏/体重比值和胸腺/体重比值。
1.5.2ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法) 连续灌胃30d后，无菌取脾，制成单个细胞悬液(细胞浓度为3×106个/ml)。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75ulConA液，另一孔作为对照，置5％CO2，37℃CO2孵箱中培养72h。培养结束前4h加入MTT(5mg/mL)50ul/孔，继续培养。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔分装3孔(200ul/孔)作为平行样，用酶联免疫检测仪，以570nm波长测定光密度值。用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力。
1.5.3抗体生成细胞检测(PFC) 连续灌胃25d后，每鼠腹腔注射2％(v/v)压积SRBC 0.2ml致敏。免疫5d后，将小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，制成单细胞悬液，进行溶血空斑试验。计数溶血空斑数，用空斑数/106脾细胞来表示抗体生成细胞数。
1.5.4血清溶血素测定半数溶血值(HC50)测定法 连续灌胃25d后，每鼠腹腔注射2％(v/v)压积SRBC 0.2ml致敏。免疫5d后，小鼠摘眼球采血，取血清测溶血反应，另设不加血清(以SA缓冲液代替)的对照管为比色空白，于540nm分别测定各管光密度值。按下式计算各鼠的样品HC50
1.5.5小鼠碳廓清试验 连续灌胃30d后小鼠每10g体重尾静脉注射1∶3(v/v)稀释的印度墨汁0.1ml，注入后立即计时，并分别于2、10min从内眦静脉丛取血20μl，加到2ml 0.1％碳酸钠中，测OD600nm。并取肝、脾称重，按公式
求小鼠吞噬指数a值(K＝(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1))。
1.5.6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(滴片法) 连续灌胃26d后，每鼠腹腔注射2％(v/v)压积SRBC 0.2ml，激活小鼠巨噬细胞。4d后，颈椎脱臼法处死小鼠，腹腔注射加小牛血清的Hank’s液4mL/只，吸取腹腔洗液与等量的1％鸡红细胞混匀。吸取0.5mL混合液，加入玻片的琼脂圈内，放置孵箱内37℃孵育20分钟。孵育结束后用生理盐水将未贴壁细胞冲掉，于甲醇液中固定1分钟，Giemsa液染色15分钟。用40×显微镜计数吞噬率和吞噬指数(吞噬率为每100个巨噬细胞中，吞噬鸡红细胞的巨噬细胞所占的百分率；吞噬指数为平均每个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的个数)。并据此判定巨噬细胞的吞噬能力。
1.5.7NK细胞活性测定 连续灌胃30d后，无菌取脾，制成单个细胞悬液(细胞浓度为2×107个/mL)，作为效应细胞。取靶细胞(YAC-1细胞)和效应细胞各100ul(效靶比50∶1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100ul，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5％Triton各100ul；上述各项均设三个重复孔，于37℃、5％CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100ul置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100ul，反应3min，每孔加入1mol/L的HCl 30ul，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)。
按下式计算NK细胞活性
1.6实验数据统计 本实验所得小鼠体重、脏体比、光密度值、肿胀度、溶血空斑数、HC50、吞噬率和吞噬指数、小鼠吞噬指数a、NK细胞活性等数据均为计量资料，原始数据(其中吞噬率经平方根反正弦变换后)采用SPSS统计软件进行正态性检验和方差齐性检验，满足“方差齐”和“正态分布”要求，再用SPSS统计软件单因素方差分析法进行统计，对P＜0.05的数据用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。
2实验结果 2.1样品对实验前后动物体重的影响 由表1，表2，表3可见，实验前后各受试物剂量组小鼠增重与对照组相比无显著性差异(P＞0.05)。
表1各组小鼠的初始体重(
) 表1(续)各组小鼠的初始体重(
) 表2试验末各组小鼠的体重(
) 表2(续)试验末各组小鼠的体重(
) 表3 样品对小鼠体重增加的影响(
) 表3(续)样品对小鼠体重增加的影响(
) 2.2样品对脏器/体重比值的影响 由表4可见，各组小鼠胸腺/体比值、脾/体比值与对照组相比无显著性差异(P＞0.05)。
表4美宝眠灵芝胶囊对小鼠脏器(mg)/体重(10g)比值的影响 2.3细胞免疫功能试验二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发性变态反应(DTH) 由表5可见，各剂量组小鼠的耳廓肿胀度均高于溶剂对照组值，且随剂量增加而增加，经方差分析及两两比较统计学处理，各剂量组均有统计学显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。提示美宝眠灵芝胶囊可增强DNFB引起的小鼠迟发性变态反应。
表5美宝眠灵芝胶囊对小鼠耳廓迟发性变态反应的影响 2.4细胞免疫功能试验ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法) 由表6可见，各剂量组光密度差值均高于溶剂对照组值，但结果经方差分析及两两比较统计学处理，各剂量组均无统计学显著性差异(P＞0.05)。提示美宝眠灵芝胶囊无明显增强小鼠淋巴细胞增殖能力。
表6美宝眠灵芝胶囊对小鼠脾淋巴细胞转化的影响 2.5体液免疫功能试验抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法) 由表7可见，各剂量组空斑数均高于溶剂对照组值，经方差分析及两两比较统计学处理，中、高剂量组空斑数与对照组值相比有统计学差异(P＜0.05，P＜0.01)。提示中、高剂量美宝眠灵芝胶囊具有增强小鼠产生抗体生成细胞的能力。
表7美宝眠灵芝胶囊对小鼠脾抗体生成细胞量的影响 2.6体液免疫功能试验血清溶血素试验 由表8可见，各剂量组小鼠血清半数溶血值(HC50)与均高于对照组值，且随剂量增加而升高，经方差分析及两两比较统计学处理，高剂量组有统计学显著性差异(P＜0.05)。提示高剂量美宝眠灵芝胶囊可增强小鼠产生血清溶血素的能力。
表8美宝眠灵芝胶囊对血清溶血素水平的影响 2.7单核-巨噬细胞功能试验小鼠碳廓清试验 由表9可见，各剂量组小鼠的吞噬指数a均高于溶剂对照组，经方差分析及两两比较统计学处理，各剂量组均有统计学显著性差异(P＜0.05)。提示美宝眠灵芝胶囊具有增强小鼠碳廓清能力的作用。
表9美宝眠灵芝胶囊对小鼠碳廓清的影响(
) 2.8单核-巨噬细胞功能试验小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞 由表10可见各剂量组小鼠的吞噬率和吞噬指数均高于溶剂对照组，且随剂量增加而升高，经方差分析及两两比较统计学处理，与对照组值相比，高剂量组吞噬率及吞噬指数均有统计学差异(P＜0.01)。提示高剂量美宝眠灵芝胶囊具有增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的作用。
表10美宝眠灵芝胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响(
) 2.9NK细胞活性测定 由表11可见各剂量组小鼠的NK细胞活性均高于溶剂对照组，结果经方差分析及两两比较统计学处理，中、高剂量组均有统计学显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)，表明中、高剂量美宝眠灵芝胶囊均具有增强小鼠NK细胞活性的作用。
表11美宝眠灵芝胶囊对小鼠NK细胞活性的影响(
) 3小结经口给予小鼠不同剂量的美宝眠灵芝胶囊30d，对小鼠体重增长无影响；低、中、高剂量美宝眠灵芝胶囊均可增强DNFB引起的小鼠迟发性变态反应和增强小鼠碳廓清能力的作用中、高剂量美宝眠灵芝胶囊具有增强小鼠产生抗体生成细胞的能力和增强小鼠NK细胞活性的作用；高剂量美宝眠灵芝胶囊具有增强小鼠产生血清溶血素的能力和增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的作用。根据保健食品增强免疫力功能评价标准，美宝眠灵芝胶囊具有增强免疫力的功能。
权利要求
1、一种改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊，其特征是由下列重量成分的原料制成
灵芝 10～30％
灵芝破壁孢子粉30～50％
酸枣仁20～40％
银杏叶5～15％，上述原料重量之和为100％。
2、根据权利要求1所述的改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊，其特征是由下列重量成分的原料制成
灵芝 20％
灵芝破壁孢子粉40％
酸枣仁30％
银杏叶10％。
3、一种改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊的生产方法，其特征是包括下列步骤
(1)将灵芝10～30wt％、酸枣仁20～40wt％、银杏叶5～15wt％清洗，烘干后备用；
(2)将上述灵芝、酸枣仁、银杏叶加水煎煮、浓缩至比重为1.40的浸膏；
(3)将步骤(2)得到的浸膏减压干燥成干浸膏，粉碎过80～100目筛，得干浸膏粉；
(4)将干浸膏粉与灵芝破壁孢子粉30～50wt％搅拌、混匀，得混合粉；再加入85％乙醇，加入量控制在混合粉重量的10～30％，制得软材；再经制粒、灭菌、干燥、填充胶囊，得产品。
4、一种权利要求1所述的改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊在制备改善睡眠制品中的应用。
5、一种权利要求1所述的改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊在制备提高免疫力制品中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种改善睡眠、提高免疫力的灵芝胶囊及生产方法和用途，产品由灵芝、灵芝破壁孢子粉、酸枣仁、银杏叶制成。本发明产品具有良好的改善睡眠、提供免疫力效果，且原料易得。
文档编号A61P25/20GK1969986SQ200610098138
公开日2007年5月30日 申请日期2006年11月29日 优先权日2006年11月29日
发明者陈惠 申请人:江苏安惠生物科技有限公司