专利名称：：用于心室肥厚或心肌纤维化治疗的含有硝酸酯类药物的组合物的制作方法
技术领域：
：本发明属于西药新技术，其特点是增加新的临床症状的治疗。背*技术心肌肥厚，或称为心室肥厚、左室肥厚是心血管系统疾病的一项独立危险因素，80年代以來，人们已逐歩认识到心肌肥厚是心,胞和心肌间质细胞对多种刺激《压力负荷、牵张、神经体液因子、血管活性肽、细胞因子、生长因子等)的适应性反应，是细胞内一系列基因异常表达和细胞表型改变的结果，心肌肥厚和心肌纤维化可以说是一个病症的两个方面，高血压等因素所致的心肌肥厚，都伴有心肌纤维化。心肌肥厚是离血压患者常见的一种病理改变，我国的统计数字表明，高血压患者发生心肌肥厚几率均为正常人的6倍。该病以心肌细胞肥大和间质成分改变为主的心脏重塑是主要表现形式。心肌肥厚后，心肌细胞的血液供应并不相应增加，相反，心肌肥厚，心室壁的张力權加，耗氧量增加，再合并心脏扩张则形成高血压性心脏病。人体内血压升高，心脏霜要更加有力的收缩才能将血液压出。久而久之，心肌就会变得肥厚。在血管紧张素n的作用下，心肌发生了异常重构，肥厚的心肌主要为紊乱排列的心肌细胞，并出现纤维化，因此其收縮力下降。而且纤维化的心肌壁变硬，弹性下降，也影响了心脏收縮射血的能力。长期高血压可造成心脏受损，使心脏呈向心性心肌肥厚，心腔变小，每次收缩射出的血量减少。虽然心脏长期负荷过重初期心肌肥厚是一种有益的代偿反应，但持续性心肌肥厚最终可导致扩张性心肌病、心力衰竭或猝死，造成高血压患者心肌肥厚的原因有以下几种高血压病患者血浆儿茶酚胺浓度升高，去甲肾上腺素诱导心肌蛋白合成，致心肌肥厚，室间隔对去甲肾上腺素的敏感性较右心室和左室后壁为高，可能为室间隔增厚早于左室后壁的原因之一。血压长期升高增加了左心室的负担，左心室收缩负荷过度，也是心肌肥厚的原因。不同的抗高血压药物对心肌肥厚的影响不甚相同。资料表明，血管紧张素转换酶抑制剂(卡托普利，依那普利)能有效的防止和逆转左室肥厚，e受体阻滞剂，芳香氨酸脱羧酶抑制剂(a-甲基多巴)和铐拮抗剂也有类似疗效，而利尿剂逆转心肌肥厚的功能较弱。硝醮类可通过扩张外周血管，特别是增加静脉血容量，减少回流量，降低心脏前后负荷，而减少心肌耗氧量。主要用f冠心病的长期治疗心绞痛的预防；心肌梗死后持续心绞痛的治疗；与洋地黄或利尿剂联含应用，治疗慢性充血性心力衰竭。有机硝酸酯的主要药理作用是松弛血管平滑肌，释放-氧化氮(恥)，一氧化氮与内皮释放的舒张l賴子相同，激活鸟苷酸环化酵，使环鸟苷酸(c(;,)增加，肌球蛋白轻链去磷酸化，从而松弛血管平滑肌，扩张冠状动脉,.增加冠脉血流量；扩张外周动脉，降低外周腺管阻力，降低A压,-对静脉的扩张作用更强。本类药物经静脉给药，迅速分布至全身，在心脏、脑组织和胰腺中含量较高，脂肪组织、皮肤、结肠、肾上腺和肝脏含量较低，血浆蛋白结合率低。硝酸酯H在肝脏几乎完全被代谢，肝病患者不出现蓄积现象。在试验研究过程中，发现硝酸酯类药物对心肌肥厚有明显的抑制作用。
发明内容我们在对硝駿酯类药物的药理作用进一步研究过程中，意想不到的发现硝酸酯类药物对心肌肥厚或心肌纤维化很好的疗效。因此，我们结合硝醴酯类药物的临床应用案例特点,建设性地提出将碡酸酯类药物用于各种原因所致的心肌肥厚或心肌纤维化的治疗。除已知的扩来冠状动脉、缓解心绞痛为硝酸酯、扩血管药物降低心脏前后负荷、改養心功能的主要作用外，还通过更深入的药理研究发现，硝酸酯类药物还可作为预防及治疗心肌肥厚或心肌纤维化的药物应用于临床。我们在实验中发现，.硝酸酯类药物对多种原因所致的心室肥厚或心肌纤维化有着明显的抑制作用，如对盐性离血压大鼠的左室指数、L-甲状腺素心肌肥大模型大鼠的左室指数和心肌胶原含量、慢性应激性高血压大鼠的左室指数和心肌胶原含量等等均有着显著的治疗效应。我们的动物实验结果预示着，硝酸酯类药物将来在临床上可以用于一种新的适应症的治疗，而目前这种适应症在临床上尚没有理想的治疗药物，很多的抗高血压药物虽然可以有效降低患者的血压，但对高血压患者的心室肥厚却没有明显的疗效，仅有的几种抗高血压药物，例如血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂等虽然可以逆转患者的心室肥厚，但是效果也并不十分理想。.我们在实验中还发现，硝酸酯类药物与现在经过临床验证的，有逆转心室肥厚作用的抗高血压药物联合使用，在对心lfWE厚以及'&肌纤维化的各项指标上，例如左室指数和心室肌胶原含量，取得了理想的协同性作用。心肌肥厚或称为左室肥厚、心室肥厚是高血压患者最为显著的并发症之--，它是高血压患者预后的.最有力的预测指标之一，也是高血压治疗过程中最需要关注的治疗目标，这对于预防高血压患者以后发生各种心血管疾病有着十分i要的意义。右室肥厚是肺动脉高压最为严重的并发症，也是肺动脉高压患者后朗最重要的死亡県因。心肌肥厚广泛见于商血压心脏病、肺源性心脏病以及心衰等多种疾病。临床流行病学资料表明高血压合并心肌肥厚时，心血管意外的发生率明显增加，如猝死、心肌梗死、心率失常、心肌缺血、心衰等，因此，预防及逆转心肌肥厚是当前治疗,血管疾病中瞩目的问题。本发明所采用给药方式为口服给药，该种给药途径简单、易行，可操作性强，易于为病人接受。具体实餘式根据心肌肥厚的受累范围，可分为左心肥厚、右心肥厚及全心肥厚。其中高血压所致心肌肥厚主要见于肺动脉高压症。严重心肌肥厚可合并肺动脉高压症，因而可能累及整个心脏。实旌例l单硝黢异山梨酯对D0CA-盐型大鼠高血压心肌肥厚的抑制作用MCA-盐型大鼠髙血压心肌肥厚模型属于内分泌型离血压肥厚模型，为低肾素型，给脱氧皮质酮加盐水,形成容量过负荷高血压心肌肥厚模型。1.实验材料.1.1药品单硝酸异山梨酯(鲁南制药股份公司)氯化钠(天津市申泰化学实际有限公司批号20040318规格50%分析纯)生理盐水(滨州市制药厂批号04111304规格5(Htel)硝傘地平(泗水希尔康制药有限公司批号200410224规格10呢*100片)1.2仪器Sartorius分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)电子称(上海大华电子称厂)1.3动物SD大鼠清洁级体重150200g雌雄兼用，山东新时代药业有限公司动物中A魂供，动物合格证号SYXK(鲁)00572.实验方法2.1模型的建立与分组SD大鼠60只，体重100150g,雌雄各半。实验室饲养两周后按体重隨机分为模型组、假手术组、阳性药(硝苯地平)对照组、单糖酸异山梨酯低、中、高剂量组，并计6组。除假手术组外其余各组动物腹腔注射3X戊巴比妥钠50mg/kg麻醉，动物倒卧位放置，术野剪毛，皮肤消毒，于腹正中线切开剪除左肾(不摘除肾上腺)，不触及右肾，缝合。每鼠右后肢肌肉注射青霉素2万单位预防感染。假F术组只作切幵处理不作肾摘除手术，其余操作同其他组动物。所有大鼠术后-周皮下注射给予脱氧皮质酮(DOCA,溶于生理盐水)剂量50mg/kg,每周5次，共5周》常规饲养，并给化氯化钠自由饮用。术后5周，各给药组大鼠灌胃给予相应药物；模型组灌胃给予纯水假手术组自由给予淡水。2.2实验指标測定术后9周，处死大鼠，称重。取出心脏，除去心脏大血管残根，洗尽残血，滤纸艰干水分后称左心室湿重(LV+VS)，计算LV+VS/体重值(g/g〉。2.3统计分析所有数据以S土s表示，组间各指标对比采用t检验和方差分析，两两比较计算P值。3.实验结果表1.单硝酸异山梨酯对DOCA-盐型大鼠高血压心肌肥厚的抑制作用组别剂量(呢/kg)UWS/体重(g/g)模型组4.53±0.52假手术组2.17±0.33"阳性对照组74.26±0.38A单硝低剂置1.54.21±0.31A糊中剂量4.53.77±0.52AA*单确高剂暈13.54.63±0.79注-与模型组比较〈0.05AAp<0.01,与阳性对照组比较《0.05.4讨论本研究所用药物剂量，为根据人与实验动物用药剂量换箅而得，因而结果对临床用药有一定的参考意义。本文采用给予DOCA和高盐饮水的方法建立容量过负荷所致大鼠左室肥萍模型，其LV/体重均明显比假手术组增大。当预防性和治疗性地给予单辩后，上述指标显著下降，表明单硝可预防和逆裙容量过负荷所致大鼠的左室肥厚。而且本实验发现单硝低剂量并不明显地降低大覼左室腿厚，而中剂量抑制大鼠心肌肥厚作用明显，提示单硝预防和逆转容量过负荷所致大鼠的左室肥厚有一定剂量依赖性。实旌例2硝酸甘油对Jl-甲状腺素所致心肌肥厚的抑制作大剂量L-甲状腺素可促进肌体心肌细胞ffl剛A和蛋白质合成从而使心肌肥厚。ATP耗竭，氧耗量增加，心肌毛细血管密度降低，从而使氧从毛细血管弥散至心肌细胞中心的距离增加，因此心Mie厚有缺血倾向，存在散在性缺血性损害。1.实验材料1.1硝酸甘油(北京益民药业有限公司批号20050607规格5mg/片)羧甲基纤维素钠(国药集团化学试剂有限公司批号F20050302规格500g化学纯)L-甲状腺素钠片(德国默克公司批号3600601规格50Hg/片)M0A试剂盒、SOD试剂盒均购自南京建成生物工程研究所卡托普利(佛山市生化制药厂05030606)柠椽酸(无锡市苏强化工有限公司批号20041020规格500g分析纯)柠樣酸钠(国药集团化学试剂有限公司批号2W50324规格500g分析纯)过氯酸(金鹿化工有限公司批号20050620规格500ml分析纯)对二甲胺基苯甲醛(国药集团化学试荆有限公司批号20060117规格25g分析纯)氯胺T(国药集团化学试剂有限公司批号20051121规格500g分析纯)盐酸(无锡市苏强化工有限公司批号20040125规格50(W分析纯)1.2仪器Sartorius分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司〉电子称(上海大华电子称厂)721UV分光光度计1.3动物SD大鼠清洁级体重150200g雌雄兼用，山东新时代药业有限公司动物中心提供，动物合格证号SYXK(鲁)0肪72.实验方法2.1模型的建立与分组SD大鼠60只，雌雄不拘，体重250-300g。按体重随机分为空白对照组、模型组、阳性对照(卡托普利)组、硝酸甘油低、中、高剂量组，共计6组，每组10只，除正常对照组外，其余各组动物灌胃给予L-甲状簾素(0.5%羧甲基纤维素钠配制成混悬液)1mg/(kg")，连续给药10天，各给药组于给L-甲状腺素第八天灌胃给予相应药物，连续14天。2.2实验指标测定最后一次给药2他后处死动物，取出心脏，根据心脏重量、.心室.重量及体重计算心脏指数及心室措数，然后将心肌组织匀浆,測定其MDA(硫代巴比妥酸法)和胶原蛋白(羟脯氣酸含量測定法)含量。2.3统计分析所有数据以S±s表示，组间各指标对比采用t检验和方差分析，两两比较计算P值。3.实验结果表2.硝酸甘油对L-甲状腺素所致心肌肥厚的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与对照组比较，模型组心脏指数、心室指数均明显升高(P〈0.(H),硝酸甘油中、高剂量(P〈0.Ol)組能有效地抑制L-甲状腺素引起的大鼠心脏指数的升高，对抗大鼠心肌肥厚的形成(表l)。与对照组相比，硝酸甘油能显著提高大鼠心肌中SOD活性(表2),并减少MM的生成(表3),尤其以中、高剂暈为佳(P〈0.05,P〈0.01),且呈现刑量依赖关系。与对照组比较，硝醵甘油能明显减轻心肌肥厚大鼠心肌纤维化程度(表4)。由此说明，硝酸甘油对L-甲状腺素引起的心肌肥厚模型有明显治疗作用。我们通过试验发现单销酸异山梨酯对L-甲状腺素所致心肌肥厚同样具有抑制作用，而且取得了与硝酸甘油同样的效果。实鰂3硝酸异山梨酵塌对应激性大鼠高血压模型的抑制作用采用冷水刺激结合噪声应激刺激的方法制备应激性高血压大鼠模型。应瀲性高血压的发生是体内多种因素相互作用的结果。如在应激过程中，肾素-血管紧张素系统(RAS)功能亢进，交感神绎紧张性增加，肾上腺糖质释放肾上腺素和去甲肾上腺素等等，同时一些与上述功能有拮抗作用的物质的合成或释放出现异常，1.实验材料l.l药品硝酸异山梨醇酯缓释胶囊(自制)无水乙醉(青岛海滨化学试剂厂批号200511W9规格500ml分析纯〉1.2仪器Sartorius分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)电子称(上海大华电子称厂)721UV分光光度计扬声器电铃1.3动物SIJ大鼠清翁级体重150200g雌雄兼用，山东新时代药业有限公司动物中心提供，动吻合格证号SYXK(鲁)00572.实验方法2.1模型的建立与分组采用SD大白鼠50只，雌雄各半。按体重随机分为正常组、模型组、硝酸异山梨醇豳低、中、寓剂量组，共计5组，每组10只。除正常对照组外，其余各组动物放入隔音塞内笼养，噪音刺激可由电铃或扬声器发出，噪音干扰曰夜不.止同时白天将每只动物置于6TC冷水中，持续5min:晚上拥挤过夜连续3月。期间各给药组动物每天,胃给予相应药物，同样连续3个月。2.2实验指标滩定最后一次拥挤过夜后处死动物，取出心脏左心室和室间痛(LV+VS),，根据(LV+V3)重量及体重计算心室指数，然后将W肌组织匀浆，测定其MDA和胶康蛋白含量，方法同实施例2。2.3统计分析所有数据以；±s表示，组间各指标对比采用t检验和方差分析，两两比较计算p值。3.实验结果表5.硝酸异山梨酵酯对大鼠心肌肥厚的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表6.硝酸异山梨醇酯对大鼠肥厚心肌■的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>乾7.销酸异山梨醉瞎对大鼠肥厚心肌胶原舉白含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注与模型组相比〈0.054.讨论本实验采用翁髙與压模型为大鼠应激性高血压心肌肥厚模型。大鼠长对期处于噪音或钥匙叮噹响声刺濂造成的听源性紧张情况下，可诱发神经原性高血压，它与人的高血压病相类似，适用于降压药物的筛选。与空白组比较，本实验模型造模成功。与模型组比较，硝酸异山梨醇酯各剂量组均表现出对本模型所致心肌肥厚的抑制作用。硝酸异山梨醇酯降低了应激大鼠的心室肥厚指数，能有效抵扰心肌细胞脂质过氧化，减轻应激大鼠心肌纤维化程度。实旌例4单硝酸异山梨酯缓释片1.处方每1000片含下w物质单硝酸异山梨酯2,6g(10M乙醇溶液29.5ml)硬脂酸60.g十六醉66.g聚维酮(IW)31.g徵晶纤维素58.8g乳糖49,8g滑石粉？4.9g硬脂酸镁1.5g2.工艺流程将PVP溶于单确酸异山梨酯乙醇溶液中，加微粉娃胶混匀，加硬脂酸与十六醇，水浴加热到601C,使籌，将微晶纤维素、乳糖、滑石粉的均勾混余物加入上皿化的系统中，拢拌l小时将上^te耨的漏合物摊于盘中，室温放置20分钟，待成团块时，用16目筛制粒。301C千燥，整粒，加入硬脂酸镁，压片，即得。实簾例5硝酸异山梨酵酯律释胶囊1.处方硝酸异山梨,酯300g微晶纤维素40g5丙甲纤缘素溶液适量》丙烯酸树脂&idragitRS100(包农液)适量"l-二烷基硫酸钠0.8g滑石粉lOS.Sg制成1000粒硝酵异山梨醇酯缓释胶囊。2.工艺流程2.1丸芯的制备:将硝酸异山梨醇酯粉碎，过120貝筛，备用。称取处方量40目60目微晶纤维素种核，置于包衣锅内，开启包衣锅，瞼洒載合剂(5條丙甲纤维素溶液)润湿种核表面，加入少量的硝酸异山梨醇酯，如此反复，使种核增长。待硝酸异山梨醇酷加完后，继续转动机器，抛光6rain,出锅，6(TC烘干，筛取18目24目药芯。2.2包衣称取1000gl8目24目药芯置于包衣锅内，另取包衣液水分散体372g，滑石粉108.88，十二烷SI酸钠0.8g,水32(W,启动包农锅，待包衣液喷完后出锅，401C烘干24h:装入l号胶囊，取样、检査、包装、即得硝酸异山梨醇酯缓释胶囊。权利要求1.—种含有硝酸酯类药物的药物组合物,其特征在于它是用于制备一种治疗心肌肥厚或心肌纤維化的药物。2.如权利要求1所述的硝酸酯类药物，它是单硝酸异山梨酯、硝酸异山梨酯、硝酸甘油或戊四硝酯。3.如扭利要求1所述的一种含有硝酸酯类药物的药自合物，其特征在于它用于制备—种治疗由高血压引起的心肌肥厚或由高血压引起的心肌纤維化的药物。全文摘要心肌肥厚是多种心血管病的一种病理改变，以心肌细胞肥大和间质成分改变为主的心脏重塑是主要表现形式。本发明将硝酸酯类药物用于治疗各种原因所导致的心肌肥厚，取得了良好的治疗效果。目前在临床上硝酸酯类药物广泛用于冠心病、心绞痛和心力衰竭的治疗，通过扩张静脉系统降低心脏前负荷和心肌耗氧量，并扩张冠状动脉。现在应用于临床的主要有硝酸甘油、亚硝酸异戊酯、二硝酸山梨醇酯、硝酸异山梨醇酯类、5-单硝山梨醇酯类、三硝酸甘油酯类、戊四硝酸酯类、硝乙醇胺类。文档编号A61P9/00GK101120939SQ20061010433公开日2008年2月13日申请日期2006年8月8日优先权日2006年8月8日发明者赵志全申请人:鲁南制药集团股份有限公司