专利名称：：用于治疗关节损伤的方法用于治疗关节损伤的方法发明领域本发明关注用于治疗患有关节损伤的受试者中的关节损伤的方法。
背景技术：
：关节的破坏和损伤炎性关节炎是包括类风湿性关节炎(RA)、银屑病关节炎(PsA)、系统性红斑狼疮(SLE)、斯耶格伦氏综合征和多肌炎在内的多种自身免疫性病症中的一项突出临床表现。这些患者中大多数在躯体检查中显现出关节畸形，但是典型的是仅仅RA和PsA患者在成像研究中显示出骨侵蚀。RA是一种慢性炎性疾病，影响北欧和北美大约0.5至1%的成年人口，而且在世界其它J4区影响略4氐的比例(AlamonosaandDrosos，爿wtoz'wmw".Tev.,4:130-136(2005))。它是一种系统性炎性疾病，以患病关节滑膜中的慢性炎症为特征，由于慢性疼痛和疲劳最终导致日常功能的丧失。大多数患者还发生患病关节中软骨和骨的渐进性退化，可能最终导致永久残疾。RA的长期预后是糟糕的，大约50°/。的患者在得到诊断后的10年内发生重大功能残疾(Keystone,i^ewwato/ogy,44(Suppl.2):ii8-iil2(2005))。预期寿命缩短平均3-10年(AlamanosandRosos，swpra)。具有高滴度类风湿因子(RF)的患者(大约80%的患者)患有更具侵害性的疾病(Bukharida/.,^w/zWfeW/zeww.46:906-912(2002)),与那些RF阴性的患者相比具有更差的长期结果和升高的死亡率(Heliovaarada/.,W/zeww.54:811-814(1995))。慢性炎性骨疾病(诸如RA)的发病机理尚未完全阐明。由于升高的破骨性吸收，此类疾病伴有患病关节周围的骨丢失。此过程主要由促炎性细胞因子的局部产量升高来介导(Teitelbaum5We"ce，289:1504-1508(2000);GoldringandGravallese爿W/^/船ies.2(l):33-37(2000))。这些细胞因子可以直接作用于破骨细胞谱系中的细胞，或者间接的通过影响成骨细胞/基质细胞生成关键的破骨细胞分化因子、MKB配体的受体活化物(RANKL)I和/或其可溶性锈铒受体即骨保护素(OPG)(Hossbauer"/M/"^i"15(1):2-12(2000))。TNF-a是炎症的一种主要介导物，它在多种形式的骨丢失的发病机理中的重要性得到了数条实验和临床证据的支持(FeldmannCe〃85(3):307-310(1996))。然而，TNF-a不是破骨细胞发生(osteoclastogenesis)(Dounid//"/7amw.47:27-38(1996))、侵蚀性关节炎(CampbellWa/./C7/"./"组107(12):1519画1527(2001》、或骨质溶解(Childsj5o".16:338-347(2001))所必需的，因为这'些可以在缺乏TNF-a时发生。具体而言，在RA中，免疫应答净皮认为是由滑液隔室中呈递的一种或多种抗原启动/维持的，引起急性炎症细胞和淋巴细胞流入关节。连续的炎症波导致称作血管翳(pannus)的侵入性和侵蚀性组织的形成。这包含正在增殖的成纤维细胞样滑膜细胞和巨噬细胞，其产生促炎性细胞因子，诸如肿瘤坏死因子-oc(TNF-a)和白细胞介素-l(IL-1)。局部释放的蛋白水解酶、各种炎症介导物、和破骨细胞活化促进多数组织损伤。存在关节软骨的丢失和骨侵蚀的形成。周围的腱和嚢可能受到炎症过程的影响。最终，关节结构的完整性受到损害，引起残疾。B细胞对RA的免疫发病机理的确切贡献尚未完全表征。然而，有数种可能的机理，通过其B细胞可能参与疾病过程(SilvermanandCarson,爿W/n'toi仏77zw.，5Suppl.4:SI-6(2003))。历史上，B细胞被认为促进RA中的疾病过程，主要通过充当生成自身抗体的细胞的前体。已经鉴定了多种自身抗体特异性，包括针对II型胶原、和蛋白聚糖、以及类风湿因子的抗体。大量抗体的产生导致免疫复合物的形成和补体级联的激活。这继而放大了免疫应答，并且可能以局部细胞溶解告终。增加的RF合成和补体消耗已经与疾病活力相关联。RF自身的存在与一种更严重形式的RA和关节外特征的存在有关联。最近的证据(JanewayandKatz,■//附wwwo/.，138:1051(1998);Riveraa/"/"A/wmw"o/.,13:1583-1593(2001))显示B细胞是高效的抗原呈递细胞(APC)。RF阳性B细胞可能是特别有效的APC，因为它们的表面免疫球蛋白将会容易的俘获任何免疫复合物，不管其中存在的抗原是什么。许多抗原可以如此被加工以呈递给T细胞。另外，最近已经提出这可能还容许RF阳性B细胞自我延续(Edwardsetal./nlogy,97:188-196(1999))。为了激活T细胞，需要将两种信号传递给细胞；一个通过T细胞受体(TCR)，其在主要组织相容性复合体(MHC)抗原存在时识别经过加工的肽，而另一半通过共刺激分子。在激活后，B细胞在它们的表面上表达共刺激分子，并且可以如此提供第二信号，用于T细胞的激活和效应细胞的产生。B细胞可以通过产生细胞因子来提升它们自己的功能以及其它细胞的功能(Harris&a/.，Ato./mmw"o/.,1:475-482(2000))。B细胞在RA滑膜中可能产生的数种细胞因子中有TNF-a和IL-l、淋巴毒素-a、IL-6、及IL-IO。虽然T细胞激活被认为是RA发病机理的关键因素，最近在重度联合免疫缺陷病(SCID)小鼠中使用人滑膜外植体的工作证明了关节内的T细胞激活和保留是极其依赖B细胞的存在的(Takemura"a/,，《///wmwo/.,167:4710-4718(2001))。B细胞在此过程中的确切作用是不清楚的，因为其它的APC似乎对T细胞不具有相同的作用。对关节的结构损伤是慢性滑液炎症的一个重要后果。在60%到95%之间的患有类风湿性关节炎(RA)的患者在疾病发作3-8年内发生至少一处放射照相术侵蚀(Paulusef"/"/脸謂她/"23:801-805(1996);Hulsmans""/，」w/7ntoT^ewm.43:1927-1940(2000))。在早期RA中，放射照相术损伤得分与功能能力之间的相关性是微弱的，但是在患病8年后，相关系数可以达到高达0.68(Scott"a/"A/zewmato/ogy，39:122-132(2000》。在1，007例年龄小于60岁的、患有RA至少四年的患者中，Wolfe等人(」W/2n'fei^ewm,43Suppl.9:S403(2000))发现了Larsen放射照相术损伤得分(Larsen"a/.，/lcto^&o/.18:481-491(1977))的进展速率、增加的社会保障残疾状况及减少的家庭收入之间的显著相关性。预防或延緩;改射照相术损伤是RA治疗的目标之一(Edmondsa/.,A/zewm.36:336-340(1993))。持续6或12个月的有对照临床试验已经证明了安慰剂组的放射照相术损伤得分的进展比接受曱氨蝶呤(MTX)(Sharpefa/.，爿W/7Wtoi/zew肌43:495-505(2000))、来氟米特(Sharp""/.，swpraf)、杉p氮石黄p比p定(SSZ)(Sharp"a/"swpra)、〉发尼爭^龙(Kirwan"TV./Med.，333:142-146(1995);Wassenburg"<a/.,^W/2函脸画，42:Suppl9:S243(1999))、白介素-l受体拮抗剂(Bresnihanda/.,JW/zn'to41:2196-2204(1998))、或英夫利昔单抗+MTX组合(Lipskyaa/.,TV./Med,3":1594-1604(2000))的组更迅速，而且依那西普治疗后的放射照相术进展不如MTX治疗迅速(Bathonda/.,TV.五"g/./MW.，343:1586-1593(2000))。其它的研究已经评估了用皮质类固醇(JointCommitteeoftheMedicalResearchCouncilandNuffieldFoundation,爿朋朋e謂.19:331-337(1960》VanEverdingenda/"^肌她mMed.,136:1-12(2002》、环孢菌素A(PaseroW/^ewmato/.,24:2113-2118(1997);Forre，爿W/zn'他i/zewm.，37:1506-1512(1994》、MTX较之石危唑噪呤(Jeurissenda/.，爿朋./"fem.Med,114:999-1004(1991))、MTX较之金诺芬(Weinblatt"a/"JW/n'fei/zeww"36:613-619(1993》、MTX(元分析)(AlarconJ.Rheumatol"19:1868-1873(1992》、羟氯喹(HCQ)较之SSZ(VanderHeijded"/，Lancet,1:1036-1038)、SSZ(Hannonen"^W/zn'^W/zeww.36:1501-1509(1993))、泼尼^龙+MTX+SSZ的COBRA(CombinatietherapeiBijReumatoideArtritis)组合(Boersa/.，丄騰e/，350:309-318(1997);Landewe"a/"^W/zn'to脸圃,，46:347-356(2002))、MTX+SSZ+HCQ的组合(0'De11Wa/"N.Engl.J.Med"334:1287-1291(1996);MottoneneM/"丄a"cd,353:1568-1573(1999))、环磷酰胺十硫唑噤呤+HCQ的组合(Csukad"/.,月M4，255:2115-2119(1986))、和阿达木单抗+MTX的组合(Keystone&a/"^W/^to*謹.，46Suppl.9:S205(2002))治疗的患者中的放射照相术进展。FDA现在已经批准了标示主张(labelingclaims),即某些药物例如来氟米特、依那西普、和英夫利昔单抗能减緩放射照相术关节损伤的进展。这些主张基于在随机分配的治疗组与对照组之间观察到的进展速率的统计学显著差异。然而，治疗组与对照组内个体的进展速率有可观程度的交叠；因此，尽管在治疗组之间存在显著差异，这些数据不能用于评估开始治疗的患者将会获得力文射照相术损伤进展方面的有利结果的概率。已经提出多种方法来将来自患者个体的成对放射照片分类归为没有进展，例如，在这两个时间点损伤得分都为零、损伤得分没有增加、没有新的侵蚀关节、和得分变化没有超过最小可检测差异(即，同一放射照片重复读数之间差异的95%置信区间)(LassereWa/"Ji/7ewwato/.,26:731-739(1999))。在6或12个月的临床试验的开始和结束时获得的成对放射照片的间隔期间确定患者个体是否已经有增加的结构损伤是困难的，这有几个原因。放射照相损伤率在RA患者群中不是一致的；少数患者也许具有迅速进展的损伤，但是许多患者也许具有很小的进展或没有进展，尤其是如果间隔相对较短的话。用于给放射照相术损伤评分的方法，例如Sharp(Sharp"a/.,^W/znto脸誦.，14:706-720(1971);Sharp&a/"^/2〃to脸画.，28:1326-1335(1985))、Larsen(Larsenef4ctoi^rafe/.■D&gA,18:481-491(1977))及这些方法的改良(VanderHeijde，/i/^wmato/.，27:261-263(2000))，取决于阅读人的判断和解释，即软骨下外板的表观中断是否是真的，或者关节对侧皮层之间距离的缩短是否是真的或者是由于关节相对于胶片和放射照相束的位置的轻;微改变、放射照相的曝光的改变、或一些其它技术因素。因此，所记录的得分是真实损伤的近似值，而且对于许多受试者来说，同一放射照片的重复得分之间的最小可检测差异大于基线与最终放射照片之间间隔期间所发生的实际变化。如果阅读人不知晓胶片的时间顺序，那么这些不可避免的评分误差可以是任一方向的，在分值降低时得出表观的"治愈，，或在读数误差增加胶片之间的差异时得出表观的迅速进展。当研究牵涉足够大的已经随机分配来接受有效治疗较之安慰剂的患者群时，阳性的和阴性的读数误差彼此抵消，并且在治疗组之间可检测到细微的但真实的差异。用于量化RA疾病活性的临床测量结果的不精确性已经引起了相似的问题；某些来自临床试验的测量结果之间的统计学显著差异不能用于评估开始治疗的个体的改善的概率(Pauluse,a/.,JW/^/to//7eww.,33:477-484(19卯))。随着美国风湿病学学会(ACR)关于改善的20。/。复合标准(ACR20)的产生，个体改善的归属变得可行，该标准指定如果触痛的和肿胀的关节计数有20°/。的改善且5项附加测量(疼痛、躯体功能、患者整体健康评估、医师整体健康评估、和急性期反应物水平)中至少3项有20%的改善，那么该患者是有改善的(Felson&a/.，JW/zn'fei/^wm.，38:727-735(1995))。所有这些测量具有大数值的最小可检测差异，但是通过要求在同一过程(疾病活力)7个方面中的5个有同时的改善，这7项测量误差的随机性得到制约而且更易于将真实的改善归属于个体。在RA中，关节损伤是一个突出特征。关节破坏的放射学参数被看作描述疾病结果的一项关4建结果测量。在最近的OMERACT(风湿病学临床试验结果测量)大会上，放射学被选作纵向观察研究的结果测量的核心集的一部分(Wolfe"a/"^W/2n'泡i/^ww.，41Supp9:S204(1998)abstract)。放射学也是WHO/ILAR(世界卫生组织/国际风湿病学协会联盟)要求的长期临床试验的测量的核心集的一部分(TugwellandBoers,///zewwato/"20:528-530(1993))。在短期和长期的研究中都获得了RA中放射学损伤结果的可用资料。在对最近发病的RA患者的短期研究中，每6个月获得的放射照片显示在初始的迅速进展之后，2-3年之后手脚中放射学损伤的进展速率减小(VanderHeijde&a/"」W/znT^i/zewm.，35:26-34(1992);Fexefa/"/i/zewwato/.,35:1106-1055(1996))。在较低频率拍摄放射照片的长期研究中，发现了恒速的进展，伴有损伤的无情恶化，可长达疾病持续25年(WolfeandSharp，^W/zWfeW/2ewm.，41:1571-1582(1998);Graudal&a/.,爿W/zWtoW/zeww.，41:1470-1480(1998);Plant&a/"/脸調她/"25:417-426(1998);KaarelaandKautiainen,/及/zwmato/.,24:1285-1287(1997))。还不清楚放射照相术进展样式中的这些差异是否是由于评分方法的差异。所用评分系统的差异在于所评分的关节数目、侵蚀(ERO)和关节腔变窄(JSN)的独立得分的存在、每个关节的最大得分、及放射学异常的加权。迄今为止，在评分方法的偏爱上没有达成一致。在对早期关节炎患者的定群研究随访的前3年期间，发现JSN与ERO对手脚中所测到的放射学损伤进展的贡献不同(VanderHeijde"a/.,^W/w^^A/zewm.,35:26-34(1992))。it匕夕卜，发J见对ERO和JSN独立评分的方法，诸如Sharp和Kellgren得分，比使用总体测量的方法，诸如Larsen得分(Plantda/"/i/zewwato/"21:1808-1813(1994);CuchacovichWa/.，^w/zn'toA/zewm.，35:736-739(1992))对早期RA的变化更灵敏。Sharp得分是一种4艮费力的方法(VanderHeijde,j5a/〃/emsC"".i/^wmato/.,10:435-533(1996))。在晚期或破坏性RA中，发现Sharp和Larsen方法提供相似的信息。然而，还没有调查各种评分方法对疾病晚期变化的灵敏度，而且对于独立测量ERO和JSN的评分方法提供有用信息有争论(PincusWa/.,/i/ze騰ato/"24:2106-2122(1997》。还可参见Drossaers-Bakkerda/"」咖她及/^wm.，43:1465-1472(2000),其比较了用于RA长期评估的这三种放射学评分系统。Paulusda/.,爿W/zntoW/zewm.,50:1083-1096(2004)借助于包括大量不精确的且相关的、但不同的结构关节损伤的测量将参与临床试验的RA个体的放射照相术关节损伤分类归入有进展的或无*的，并得出结论观察组群中的RA关节损伤可以分类归入有进展的的或无进展的。似乎在RA患者的曰常有一对放射照片之间至少五个Sharp放射照相术损伤得分单位的间隔变化。在过去的10年里，RA的治疗有重大进展。现有的緩解病情的抗风湿药(DMARD)与新的生物学药剂的联合使用在更大比例的患者中提供了更高水平的疗效，同时疾病的早期诊断和治疗也得到了改善。依那西普是一种完全人的融合蛋白，其抑制肿瘤坏死因子(TNF)和后续炎性细胞因子级联。依那西普已经证明在迅速降低患有RA的成人的疾病活性和维持该改善方面是安全且有效的(Bathona/.，W./MW.,343:1586-1593(2000);Morelandetal.，iV.J337:141-147(1997);Morelandda/"j朋.她mM<130:478-486(1999》Weinblattda/"/Afed.，340:253-259(1999);Morelanda/"■/W/zewwoto/"28:1238-1244(2001))。它在患有多关节幼年型RA的儿童中同样有效(Lovell"a/.，W7!MW.,342:763-769(2000))。依那西普批准用作RA治疗的单一疗法，以及与MTX的组合疗法。功能丧失和放射照相术变化发生在疾病过程的早期。借助于某些DMARD可以延迟或预防这些变化。虽然数种DMARD最初在临床上是有效的且很好耐受的，这些药物中有许多随时间变得不太有效或展现出毒性增加。基于其疗效和可耐受性，MTX已经成为标准疗法，通过它来tf量其它治疗(BathonWa/.,iV./Afed.，343:1586-1593(2000);Albertaa/.，朋謂ato/"27:644-652(2000))。最近的研究检查了服用来氟米特、MTX、或安慰剂的晚期RA患者(StrandJrc/z./"&mMW.，159:2542-2550(1999))，以及在对MTX的部分响应之后服用英夫利昔单抗加MTX或安慰剂加MTX的患者(Lipsky"a/.,iV.J^g/./MW"343:1594-1602(2000);Maini&a/"丄薩W，354:1932-1939(1999))的放射照相术进展。在EnbrelERA(早期RA)试验的第一年，依那西普在改善疾病的体征和症状方面及在抑制放射照相术进展方面证明明显比MTX更有效((Bathon"a/.,TV./M<343:1586-1593(2000》。Ge謂ese"a/.,爿W/2n'toW/^ww.46:1443-1450(2002)报道了该研究第二年的结果，得出结论依那西普作为单一疗法是安全的且在早期侵害性RA患者中在降低疾病活性、阻滞结构损伤、和减轻2年里残疾方面优于MTX。另外，在早期类风湿性关节炎患者接受英夫利昔单抗联合曱氨蝶呤后观察到手脚》文射照相术进展的减轻(VanderHeijde&o/.，^"""/sW/7eMma"crfeeosas64:418-419(2005))。早期类风湿性关节炎患者用英夫利昔单抗治疗后在躯体功能上实现了临床上有意义的且持续的改善(Smolen"v4朋a/s7/zewm加'(764:418(2005》。VanderHeijdeWa/.，y4""a/s朋e謂加'cZXsmyw64:417(2005)报道了英夫利昔单抗和曱氨蝶呤对早期类风湿性关节炎患者的方文射照相术进展的效果。强直性脊柱炎患者的英夫利昔单抗治疗导致与临床疗效有关联的炎症和骨周转的标志物的变化(VisvanathanWa/.,y4"wa/s^/zewmahcZXseases64:319(2005》。VanderHeijdea/"Jwza/sA/zewwa"'c64:319(2005)才艮道了英夫利昔单抗疗法对强直性脊柱炎(AS)患者的骨矿物质密度的影响，其得自一项随机化的、以安慰剂为对照的、名为ASSERT的试验。在ASSERT的结果中发现英夫利昔单抗改善AS患者中的疲劳和疼痛(VanderHeijdeWa/.,Jww^及/7ewwadcD/wos&y64:318-319(2005》。另夕卜，vanderHeijdeWa/.，爿W/^fe5:582-591(2005)描述了英夫利昔单抗在AS患者中的疗效和安全性，作为ASSERT的结果。在24周研究期中，作者得出结论英夫利昔单抗在一个AS患者大组群中是^f艮好耐受且有效的。另外，在279名AS患者的一个随机化的、以安慰剂为对照的试验中通过》兹共振成像评估了英夫利昔单抗疗法对脊柱炎症的效果(VanderHeijde"/"^""a/si/ze應油'cZXseasay64:317(2005))。vanderHeijdea/"^W/zr/feA/zew附.52:1979-1985(2005)提出测量AS患者中脊柱放射照相术进展的治疗效果的方式。Antoniefa/"Jmia/si/2ewmc(HcD/seosas64:107(2005)净艮道了英夫利昔单抗多国银屑病关节炎有对照试验(IMPACT)—年后的放射照相术分析结果。Smolen"a/.，^W/znY/si/zew附.52:1020-1030(2005)报道了英夫利昔单抗加MTX的治疗在没有临床改善的类风湿性关节炎患者中的放射照相术益处的证据，有来自类风湿性关节炎的抗肿瘤坏死因子试验及伴随疗法研究的数据的详细子分析。接受MTX加安慰剂的患者中通过改良的Sharp/vanderHeijde得分的均值变化测量的放射照相术进展要比接受英夫利昔单抗加MTX的患者大得多。作者得出结论，即使在没有临床改善的患者中，英夫利昔单抗加MTX的治疗在破坏性过程方面提供了重大益处，表明在此类患者中疾病的这2项测量是解离的。Breedveldd^wwa/sT^ewwW/c64:52-55(2005)描述了类风湿性关节炎患者的基线放射照相术损伤与用英夫利昔单抗治疗后躯体功能改善之间的关联。使用vanderHeijde改良的Sharp得分来评估结构损伤。作者得出结论，基线时的更大关节损伤与基线时更差的躯体功能和治疗后较少的躯体功能改善有关联，强调了早期干预以减緩关节破坏进展的重要性。CD20抗体及使用CD20抗体的疗法淋巴细胞是在造血过程中在骨髓中生成的许多类型白血球之一。有两种主要的淋巴细胞群B淋巴细胞(B细胞)和T淋巴细胞(T细胞)。本文中特别感兴趣的淋巴细胞是B细胞。B细胞在骨髓内成熟，然后离开骨髓并在其细胞表面上表达抗原结合抗体。当幼稚B细胞初次遭遇其膜结合抗体对之特异性的抗原时，该细胞开始快速分裂且其后代分化成记忆B细胞和称作"浆细胞，，的效应细胞。记忆B细胞具有较长的寿命并继续表达与最初的亲本细胞具有相同特异性的膜结合抗体。浆细胞不生成膜结合抗体，但改为生成可分泌形式的抗体。分泌型抗体是体液免疫的主要效应分子。CD20抗原(也称作人B淋巴细胞限制分化抗原，Bp35，或者B1)是位于前B淋巴细胞和成熟B淋巴细胞上、具有约35kD分子量的四次跨膜、糖基化膜内在蛋白(ValentineWa/"/編.CW264(19):11282-11287(1989);Einfeldda/.,五M50/7(3):711-717(1988))。该抗原还在超过90。/。的B细胞非何杰金氏淋巴瘤(NHL)上表达(Anderson&a/"B/ood63(6):1424-1433(1984)),但在造血干细胞、原B细胞、正常浆细胞或其它正常组织上没有找到(Tedderd"/"//mww"o/.135(2):973-979(1985))。CD20调节细胞周期起始和分化的激活过程中的早期步骤(Tedder"a/.，s甲ra)，并可能发挥钧离子通道的功能(TedderCe〃.B/oc/zew.14D:195(1990))。CD20在活化的B细胞中发生磷酸化(RileyandSliwkowski,(9"co/.27(12):17-24(2000))。CD20出现在前B细胞阶段的B淋巴细胞表面上，而且能在成熟和记忆B细胞上找到，但在浆细胞上找不到(Stashenkoef//附附w"o/.125:1678-1685(1980);ClarkandLedbetter，爿ACa"cw52:81-149(1989))。CD20具有钩通道活性，而且可能在B细胞发育中发挥作用。不清楚体外外周。020+B细胞的溶解与体内rituximab活性之间的联系。rituximab在体外展现出抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)(Reff"a/.,B/ood83:435-445(1994))。还在淋巴瘤细胞和细胞系上(Reff"a/.,w;ra，1994)及在某些小鼠异种移植物模型中(DiGaetanoda/"//wmwwo/.171:1581-1587(2003))观察到rituximab的有力补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。数种抗CD20抗体，包括rituximab,显示出在通过第二抗体或通过其它手段交联时能在体外诱导凋亡(Ghetieetal.,proc.natl.Acad.Sci.94:7509-7514(1997))。倘若CD20在B细胞淋巴瘤中表达，那么该抗原可充当此类淋巴瘤"耙向"的候选者。本质上，这样的靶向可概括如下对患者施用对B细胞的CD20表面抗原特异性的抗体。这些抗CD20抗体特异性结合正常B细胞和恶性B细胞二者的CD20抗原(在表面上)；抗体与CD20表面抗原结合可导致赘生性B细胞的破坏和消减。另外，可以将具有破坏肿瘤潜力的化学药剂或放射性标记物与抗CD20抗体偶联，使得该药剂特异性"投递"至赘生性B细胞。不考虑方法，首要目标是破坏肿瘤；具体方法可根据所利用的具体抗CD20抗体来决定，如此，靶向CD20抗原的可用方法可以有相当大的变化。嵌合鼠/人单克隆抗体。rituximab就是1998年4月7日公告的美国专利No.5,736,137(Andersonetal.)中称作"C2B8"的抗体。rituximab指明用于治疗患有复发性或顽固性低级或滤泡性CD20阳性B细胞非何杰金氏淋巴瘤的患者。作用机制的体外研究表明rituximab结合人补体并通过CDC溶解淋巴样B细胞系(ReffeM/.,B/ood83(2):435-445(1994))。此外，它在ADCC测定法中具有显著活性。最近，rituximab显示出在氖化胸苷掺入测定法中具有抗增殖效应且直接诱导凋亡，而其它抗CD19和抗CD20抗体不行(MaloneyWa/.，88(10):637a(1996))。在实验中还观察到rituximab与化疗和毒素之间的协同作用。具体而言，rituximab使耐药性人B细胞淋巴瘤细胞系对多柔比星、CDDP、VP-16、白喉毒素、和蓖麻毒蛋白的细胞毒性效应敏感(Demidemetal.,CancerChemotherapy&Radiopharmaceuticals12(3)(1997))。体内临床前研究显示了rituximab从猕猴的外周血、淋巴结、和骨髓消减B细胞，可能是通过补体和细胞介导的过程(Reffetal.，Blood83:435-445(1994))。美国在1997年11月批准将rituximab用于治疗患有复发性或顽固性低级或滤泡性CD20+B细胞NHL的患者，每周一次，一剂375mg/m2，共四剂。2001年4月，食品和药品管理局(FDA)批准了用于治疗低级NHL的其它要求复治(每周一次，共四剂)和额外的剂量给药方案(每周一次，共八剂)。有超过300,000名患者暴露于rituximab，或是作为单一疗法或是联合免疫抑制剂或化疗药物。还已经作为维持疗法用rituximab治疗患者，可长达2年(Hainsworthda/"/d(9腳/.21:1746-1751(2003》Hainsworthetal.J.Clin.Oncol.20:4261-4267(2002))。还有，rituximab已经用于治疗恶性和非恶性浆细胞病症(TreonandAnderson,5Wm/".(9"co/.27:79-85(2000))。还在B细胞和自身抗体似乎在疾病病理生理学中发挥作用的多种非恶性自身免疫性病症中研究了rituximab(Edwardsda/.,Soc.7><ms.30:824-828(2002))。有报导说rituximab潜在减轻例如类风湿性关节炎(RA)(Leandroda/.，爿朋.i/zew肌61:883-888(2002》Edwardsda/"爿W/w/fe朋e画.46(Suppl.9):S46(2002);Stahl"a/"^肌脸画.62(Suppl.l):OP004(2003);Emery"a/.，爿W/2hfe脸謂.48(9):S439(2003))、狼掩(Eisenberg，Was.77^5:157-159(2003》LeandroWa/.，JW/7W泡W/zewm.46:2673-2677(2002);Gormanda/.，13:312-316(2004))、免疫性血小板减少性紫癥(D，Arena&a/.，Z^mp/zowa44:561-562(2003);StasiWa/.，98:952-957(2001);SalehdO"co/.27(Suppl.l2):99-103(2000);Zaia"a/"//ae腿/o/g/ca87:189-195(2002);Ratanatharathorn"a/.,/"AMW.133:275-279(2000))、纯红细胞再生障碍(Auner"a/.,/116:725-728(2002))、自身A^寸生tia^Zaja&a/.，T/aemato/og/cfl87:189-195(2002)(勘误见77aemato/og/ca87:336(2002))、冷凝集素病(Layios"a/.,Zewfem/a15:187-8(2001);BerentsenW"/.，103:2925-2928(2004);Berentsena/.,J5k///aewafo/.115:79-83(2001);Bauduer,6ki/aewo^o/.112:1083-1090(2001);Damianida/.，///aewato/.114:229-234(2001))、重度胰岛素耐受B型综合征(Colld"/.,TV./Med350:310-311(2004))、混合性冷球蛋白血症(DeVitaaa/.，JW/zWfeiJ/zewm.46(Suppl.9):S206/S469(2002》、重症肌无力(ZajadA^/ra/og);55:1062-63(2000);WylamWa/.,/尸eWa化143:674-677(2003))、韦格纳氏肉芽肿病(Specksda/.,y^An'to&7/zewwatom44:2836-2840(2001))、顽固性寻常型天疱疱(Dupuy"a/,，/^c/z.Demwto/.140:91-96(2004))、皮肌炎(Levine,爿W/zn.feA/7ewm.46(Suppl.9):S1299(2002》、斯耶格伦氏综合征(Somera"/.，爿W/^'toc&W/zeww"few49:394-398(2003))、活动性II型混合性冷球蛋白血症(Zaja"a/.，祝ood101:3827-3834(2003))、寻常型天疱掩(Dupayda/.,Demmto/.140:91-95(2004))、自身免疫性神经病(Pestronkaa/.，/TVewra/.A^wmswrg.i^yc/z/a^y74:485-489(2003))、瘤外视性眼阵挛-肌阵挛综合征(Pranzatellida/.,A^wra/ogy60(Suppl.l)PO5.128:A395(2003))、及复发-緩和型多发性硬化(RRMS)(Crossa"/.,(摘要)"PreliminaryResultsfromaPhaseIITrialofRituximabinMS",EighthAnnualMeetingoftheAmericasCommitteesforResearchandTreatmentinMultipleSclerosis(美国多发性硬化研究与治疗委员会第八次年会)，20-21P003))的征候和症状。已经在类风湿性关节炎(RA)患者中进行了II期研究(WA16291)，提供了有关rituximab的安全性和疗效的48周跟踪数据(Emerya/.，^W/zWtoi^eww.48(9):S439(2003);Szczepanskia爿W/^.toW/^wm.48(9):S121(2003》。将总共161名患者随才几平分为四个治疗组曱氨i莱呤、^f又用rituximab、rituximab加曱氨蝶呤、及rituximab加环磷酰胺(CTX)。rituximab的治疗方案为第l天和第15天静脉内施用l克。大多数RA患者对rituximab输注有很好的耐受，有36%的患者在其首次输注期间发生至少一例不良事件(与30%接受安慰剂的患者相比)。总之，认为大多数不良事件在严重程度上是轻度到中度的，而且所有治疗组之间很均衡。在48周中四个组共有19例重度不良事件，其中rituximab/CTX组稍多一些。所有组之间的感染发生率很均衡。该RA患者群中重度感染的平均比率为每100名患者-年有4.66例，低于基于社会的流行病学研究中所报告的RA患者中需要入院治疗的感染比率(每100名患者-年为9.57例)(Doran&"/"^w/zn'他W/zeww.46:2287-2293(2002))。所报导的rituximab在少数神经学病症患者中的安全谱，包括自身免疫性神经病(Pestronkefa/.,swpra)、视性眼阵挛-肌阵挛综合征(Pranzatelliea/.,sw/ra)、和RRMS(CrossWa/.，^pra),与在肺瘤学或RA中所报导的类似。在正在RRMS患者中进行的rituximab联合干扰素-|3(IFN-P)或醋酸格拉默的调查人员发起试验(IST)(Cross^wpra)中，10名接受治疗的患者中有l人在首次rituximab输注后发生中度发烧和打寒战，之后入院彻夜观察，而其余9名患者完成了四次输注的方案，没有报告任何不良事件。关注CD20抗体和CD20结合分子的专利和专利出版物包括美国专利No.5,776,456,5,736,137，5,843,439，6,399,061，和6,682,734,以及US2002/0197255,US2003/0021781,US2003/0082172,US2003/0095963，US2003/0147885(Anderson&a/.);美国专利No.6，455，043和WO2000/09160(Grillo-Lopez，A.);WO2000/27428(Grillo-LopezandWhite);WO2000/27433(Grillo-LopezandLeonard);WO2000/44788(Braslawskyda/.);WO2001/10462(Rastetter，W.);WO2001/10461(RastetterandWhite);WO2001/10460(WhiteandGrilloLopez);US2001/0018041,US2003/0180292,WO2001/34194(HannaandHariharan);US2002/0006404和WO2002/04021(HannaandHariharan);US2002/0012665,WO2001〃4388和6，896,885B5(Hanna，N.);US2002/0058029(Hanna,N.);US2003/0103971(HariharanandHanna);US2005/0123540(Hannada/.);US2002/0009444和WO2001/80884(Grillo-Lopez，A.);WO2001/97858;US2005/0112060,和美国专利No.6，846，476(White,C.);US2002/0128488和WO2002/34790(Reff，M.);WO2002/060955(Braslawsky"a/.);WO2002/096948(Braslawskya/.);WO2002/079255(ReffandDavies);美国专利No.6,171,586和WO1998/56418(Lamda/.);WO1998/58964(Raju,S.);WO1999/22764(Raju,S,);WO1999/51642，美国专利No.6，194，551，美国专利No.6，242，195，美国专利No.6,528,624和美国专利No.6，538，124(IdusogieWa/.);WO2000/42072(Presta，L.);WO2000/67796(Curd&a/.);WO2001/03734(GrilloLopez"a/.);US2002/0004587和WO2001/77342(MillerandPresta);US2002/0197256(Grewal,I.);US2003/0157108(Presta,L.);美国专利No.6,565,827,6,090,365,6,287,537，6,015,542，5,843,398，和5，595,721(Kaminskie,a/.);美国专利No.5,500,362,5,677,180,5,721,108，6,120,767，6,652,852,6,893,625(Robinsone/a/.);美国专利No.6,410,391(Raubitschek"a/.);美国专利No.6,224,866和WO00/20864(BarberaGm,E.);WO2001/13945(Barbera-Guillem，E.);WO2000/67795(Goldenberg);US2003/0133930;WO2000A74718和US2005/0191300A1(GoldenbergandHansen);US2003/0219433和WO2003/68821(Hansen"a/.);WO2004/058298(GoldenbergandHansen);WO2000/76542(Golay"a/.);WO2001/72333(WolinandRosenblatt);美国专利No.6，368，596(Ghetie"a/.);美国专利No.6，306,393和US2002/0041847(Goldenberg，D.);US2003/0026801(WeinerandHartmann);WO2002/102312(Engleman，E.);US2003/0068664(AlbitarWa/.);WO2003/002607(Leung,S.);WO2003/049694,US2002/0009427,和US2003/0185796(Wolin"a/.);WO2003/061694(SingandSiegall);US2003/0219818(Bohenaa/.);US2003/0219433和WO2003/068821(Hansenda/.);US2003/0219818(Bohenda/.);US2002/0136719(Shenoyda/.);WO2004/032828和US2005/0180972(WahlWa/,);和WO2002/56910(Hayden-Ledbetter)。还可参见美国专利No,5,849，898和EP330,191(Seed&"/);EP332,865A2(MeyerandWeiss);美国专利No.4,861,579(Meyer&a/.);US2001/0056066(BugelskiWa/.);WO1995/03770(Bhatda/.);US2003/0219433Al(Hansen&a/.);WO2004/035607(Teeling&a/.);WO2005/103081(Teeling"a/.);WO2004/056312(LowmanWa/.);US2004/0093621(Shitara"a/.);WO2004/103404(Watkins"a/.);WO2005/000901(Tedderda/.);US2005/0025764(Watkins&a/.);WO2005/016969(Carr"a/.);US2005/0069545(Carr&a/.);WO2005/014618(Changa/.);US2005/0079174(Barbera-GuillemandNelson);US2005/0106108(LeungandHansen);WO2005/044859和US2005/0123546(Umana"a/.);WO2005/070963(Allanaa/.);US2005/0186216(LedbetterandHayden-Ledbetter);US2005/0202534(Hayden-LedbetterandLedbetter);US2005/0202028(Hayden-LedbetterandLedbetter);US2005/0202023(Hayden-LedbetterandLedbetter);美国专利No.6,183,744(Goldenberg);和美国专利No.6,897,044(Braslawski"关注4吏用rituximab的治疗的出片反物包括PerottaandAbuel，"ResponseofchronicrelapsingITPof10yearsdurationtorituximab",Abstract#336010(1)(part1-2):p.88B(1998);Perottada/.,"Rituxaninthetreatmentofchronicidiopathicthrombocytopenicpurpura(ITP)，，,94:49(abstract)(1999);Matthews,R.,"MedicalHeretics",A^w5We油'W(7April,2001);Leandroda/.,"Clinicaloutcomein22patientswithrheumatoidarthritistreatedwithBlymphocytedepletion"爿w"朋e訓ZXy,swpra;Leandro&"/.，"Lymphocytedepletioninrheumatoidarthritis:earlyevidenceforsafety,efficacyanddoseresponse",v4w/w她朋e画atow44(9):S370(2001);Leandroda/.，"AnopenstudyofBlymphocytedepletioninsystemiclupuserythematosus",爿W/znto7/^wmatom46:2673-2677(2002),其中在2周期间，每名患者接受两次500mgrituximab输注、两次750mg环磷酰胺输注、和高剂量口月l皮质类固醇，其中两名接受治疗的患者分别在7个月和8个月时复发且已经用不同方案复治；Weide&a/""Successfullong-termtreatmentofsystemiclupuserythematosuswithrituximabmaintenancetherapy",丄w/ws12:779-782(2003),其中一名患者用rituximab治疗(375mg/m2x4,以一周为间隔重复)并每5-6个月投递更多的rituximab应用，然后每三个月接受rituximab375mg/m2的维持疗法，第二名患有顽固性SLE的患者得到了rituximab的成功治疗且每三个月接受维持疗法，两名患者对rituximab疗法都有较好的响应；EdwardsandCambridge,"SustainedimprovementinrheumatoidarthritisfollowingaprotocoldesignedtodepleteBlymphocytes",i/2ewmafo/ogy40:205-211(2001);Cambridge"/.，"Blymphocytedepletioninpatientswithrheumatoidarthritis:serialstudiesofimmunologicalparameters",Jw/znY/i1朋e騰.46(Suppl.9):S1350(2002》CambridgeWa/.，"SerologicchangesfollowingBlymphocytedepletiontherapyforrheumatoidarthritis"爿W/zW"s48:2146-2154(2003);Edwardsda/.，"B-lymphocytedepletiontherapyinrheumatoidarthritisandotherautoimmunedisorders"所oc/ze附Soc.7hmy,，ra/ra;EdwardsW"/.,"Efficacyandsafetyofrituximab,aB-celltargetedchimericmonoclonalantibody:Arandomized,placebocontrolledtrialinpatientswithrheumatoidarthritis",爿W/2W他aw/i/ze訓加'，46(9):S197(2002);Edwards"/.,"EfficacyofB-cell-targetedtherapywithrituximabinpatientswithrheumatoidarthritis"iV/Med350:2572-2582(2004);PavelkaCa/"颠.脸訓.ZXs.63(S1):289-90(2004);Emery"a/.，^W/z"toi/zeww.50(S9):S659(2004);LevineandPestronk,"IgMantibody-relatedpolyneuropathies:B-celldepletionchemotherapyusingrituximab",脸wra/ogy52:1701-1704(1999);Uchidaa/.,"TheinnatemononuclearphagocytenetworkdepletesBlymphocytesthroughFcreceptor-dependentmechanismsduringanti-CD20antibodyimmunotherapy"7!Ex/.Afed199:1659-1669(2004》Gongda/.，"ImportanceofcellularmicroenvironmentandcirculatorydynamicsinBcellimmunotherapy"//w聽wo/.174:817-826(2005》HamaguchiWa/.,"TheperitonealcavityprovidesaprotectivenicheforBlandconventionalBlympho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evereANCA-AssociatedVasculitis:ReportofaProspectiveOpen-LabelPilotTrialin10Patients",AmericanCollegeofRheumatology,SessionNumber:28-100,SessionTitle:Vasculitis,SessionType:ACRConcurrentSession,PrimaryCategory:28Vasculitis,Session10/18/2004(<www.abstractsonline.com/viewer/SearchResults.asp>)。还可参见Keoghda/.,《/^7W5/00d尸mw.26:293(2003)，其中报告了ll名患有顽固性ANCA相关血管炎的患者用四个周剂量375mg/m2rituximab和高剂量糖皮质激素进行治疗，实现了消退。对患有顽固性ANCA相关血管炎的患者施用rituximab及免疫抑制性药物诸如静脉内环磷酰胺、霉酚酸吗乙酯、硫唑嘌呤或来氟米特有明显疗效。Eriksson,"Short-termoutcomeandsafetyin5patientswithANCA-positivevasculitistreatedwithrituximab",A"油e少B/ood尸ms^"reA&searc/z,26:294(2003)(5名患有ANCA相关血管炎的患者每周一次用rituximab375mg/m、'台疗4周，4也们只于治疗有响应)；JayneWa/""B画celldepletionwithrituximabforrefractoryvasculitis"/Vesswreiasearc/z，26:294-295(2003)(6名患有顽固性血管炎的患者接受4次每周一次输注rituximab375mg/n^力。环磷酰胺及背景免疫抑制和泼尼松龙发生了血管炎活性的重大下降)。对患有顽固性系统性血管炎的患者施用rituximab及静脉内环磷酰胺，每剂375mg/m2,4剂的另一份才艮告提供于Jayne,poster88(11thInternationalVasculitisandANCAworkshop),2003AmericanSocietyofNephrology。还可参见StoneandSpecks,"RituximabTherapyfortheInductionofRemissionandToleranceinANCA-associatedVasculitis",于ClinicalTrialResearchSummaryofthe2002-2003ImmuneToleranceNetwork,http:〃www.immunetolerance.org/research/autoimmune/trials/stone.html,其中对ANCA相关血管炎建议了总长度18个月的rituximab试验。还可参见Eriksson,//"fer"a/MW.，257:540-548(2005),关于9名患有ANCA阳性血管炎的患者，他们用2个或4个周剂量500mgrituximab得到了成功治疗，以及Keoghda/.，」W/^/toW/^wma&w，52:262-268(2005)，他报告了ll名患有顽固性ANCA相关血管炎的患者用4个周剂量375mg/m2rituximab进行治疗或复治，通过B淋巴细胞消减诱导了消退，该研究是在2000年1月和2002年9月之间进行的。关于人源化抗CD20抗体的活性，参见例如Vugmeysterda/.,"DepletionofBcellsbyahumanizedanti-CD20antibodyPRO70769inMacacafascicularis"//mmimo^w.28:212-219(2005)。关于人单克隆抗体的讨论，参见Bakera/.,"GenerationandcharacterizationofLymphoStat-B,ahumanmonoclonalantibodythatantagonizesthebioactivitiesofBlymphocytestimulator"JW/2n'fe脸匿48:3253-3265(2003)。研究WA17043，在对DMARD(包括抗TNF剂)响应不当的类风湿性关节炎患者中进行的IIb期、随机化、双盲、剂量确定研究(Emery"a/.，五wra/e朋aga/"W//2ewwaf&w(Et/L4i」(June2005)OP0008;VanVollenhovenefa/.,五t/^4i(June2005)SAT0072)的发现指出，rituximab与MTX的组合与疾病症状的临床和统计显著改善有关。此研究确定了rituximab联合MTX的剂量需要在III期临床研究的设置中进行进一步的调查和确认。还可参见WorldPharmaceuticalNews,www.scrippharma.com，Scrip论文,日期2005年6月13日,题目"Rituximabafuturechallengeforanti-TNFs"，描述了EULAR研究并思索来自III期REFLEX研究的x射线数据是否会显示rituximab是否能减緩关节损伤。另外，2004年10月28日公布的WO2004/091657披露了用CD20抗体治疗对TNFa抑制剂疗法展现出响应不当的类风湿性关节炎患者，其中根据中央阅读部位的测定(手、腕或足的任何关节，除了手的DIP关节)，患者可具有至少一个关节有可归于类风湿性关节炎的明确侵蚀的放射照相术证据。潜在的次要终点包括改良Sharp放射照相术总分、侵蚀得分、和关节腔变窄得分终点和分析可牵涉放射照相术分析，包括没有侵蚀性进展的患者的比例，这可以在第24周及以后评估。还可参见2005年8月25日公布的US2005/00001862，相当于2005年7月7日7>布的WO2005/060999，关于用rituximab治疗类风湿性关节炎患者，其中潜在的次要终点和探索性的终点和分析包括WO2004/091657中的那些。尽管关节病的治疗取得了一些进展，很大数目的患者对当前治疗不适用、不耐受、或响应不足。因此，需要新的治疗选择，特别是那些可靶向疾病病理的不同方面并提供相似或更好的临床效果水平的。发明概述本发明牵涉施用CD20拮抗剂，其为具有关节损伤的受试者提供了安全且有效的治疗方案，包括选择有效的剂量给药方案及有安排的或未安排的复治(re-treatment)。此拮抗剂在初始治疗中和在顽固性疾病的管理中都是有效的。相应的，本发明如所要求的。在第一个方面，本发明关注用于治疗受试者中的关节损伤的方法，包括给受试者施用CD20抗体，并且在该次给药后至少大约一个月，对受试者进行放射照相术检查以测量与该次给药之前的基线相比关节损伤的减轻，其中施用的CD20抗体的量在实现关节损伤减轻中是有效的。在另一个方面，本发明涉及监测受试者中的关节损伤治疗的方法，包括给受试者施用有效量的CD20抗体，并且在距该次给药至少大约一个月之后通过放射照相术测量该关节损伤是否相对于该次给药之前的基线减轻，其中果。在一个优选的实施方案中，施用CD20抗体之后再次测量较之基线的减轻程度。在又一个方面，本发明提供确定是否给具有关节损伤的受试者继续施用CD20抗体的方法，包括通过放射照相术测量受试者第一次施用CD20抗体之后关节损伤的减轻，通过放射照相术测量受试者第二次施用CD20抗体之后关节损伤的减轻，比较第一次和第二次时受试者的放射照相术得分，且若第二次的得分比第一次小，则继续施用该CD20抗体。在又一个方面，本发明致力于一种制品，包含(a)装有CD20抗体的容器；和(b)印有用于治疗受试者中的关节损伤的说明书的包装插页，其中该说明书指示给受试者施用CD20抗体，然后在该次给药后至少大约一个月，进行放射照相术检查以测量与该次给药之前的基线相比该关节损伤的减轻，其中施用的CD20抗体的量在实现关节损伤减轻中是有效的。在一个优选的方面，该制品进一步包含装有第二药物的容器，其中该CD20抗体是第一药物，进一步包含印在包装插页上的、用有效量的第二药物治疗受试者的说明书。在本发明的另一个实施方案中，提供用于治疗受试者中的关节损伤的方法，包括给受试者施用CD20抗体，并且在该次给药后至少大约52周，给予受试者放射照相术检查以测量与该次给药之前的基线相比关节损伤的减轻，其中施用的CD20抗体的量在实现关节损伤减轻中是有效的。在又一个实施方案中，本发明提供监测受试者中的关节损伤治疗的方法，包括给受试者施用有效量的CD20抗体，并且在距该次给药至少大约52周之后通过放射照相术测量该关节损伤相对于该次给药之前的基线是否减轻，其中治疗之后受试者中较之基线的减轻表明CD20抗体正在对关节损伤产生效果。更进一步的，本发明提供一种制品，包含(a)装有CDM抗体的容器；和(b)印有用于治疗受试者中的关节损伤的说明书的包装插页，其中该说明书指示给受试者施用CD20抗体，然后在该次给药后至少大约52周，进行放射照相术^^查以测量与该次给药之前的基线相比该关节损伤的减轻，其中施用的CD20抗体的量在实现关节损伤减轻中是有效的。在又一个方面，本发明提供用于治疗受试者中的关节损伤的方法，其中(a)该受试者展现出对一种或多种抗肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂的响应不足；(b)该受试者接受至少一个在先的使用CD20抗体的疗程；且(c)该治疗包括施用至少一个使用CD20抗体的更多疗程。这些及其它方面将体现在本公开书的其余部分，包括实施例及所附权利要求。附图筒述图l显示用对照(安慰剂加MTX)或者利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX(本文中实施例1)治疗RA患者的研究设计。图2显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗RA患者六个月时的ACR响应。图3显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗RA患者六个月里的ACR20响应。图4显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗RA患者六个月时的328DS的变化。图5显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗RA患者六个月时的EULAR响应。图6显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗RA患者六个月时的EULAR消退或低病情。图7显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗RA患者六个月里的中值C-反应蛋白(CRP)。图8显示在六个月时具有临床上相关的功能改善的RA患者的比例，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图9显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的RA患者六个月时ACR得分变化百分比。图10显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的RA患者六个月时FACIT-F的变化。图ll显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)力口MTX治疗的RA患者六个月时SF-36级别(精神健康和躯体健康)的变化。图12显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的RA患者六个月时的总类风湿因子。图13显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的RA患者六个月时Sharp-Genant总分的均值变化。图14显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)力。MTX治疗的RA患者六个月时Sharp-Genant侵蚀得分的均值变化。图15显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的RA患者六个月时Sharp-Genant关节腔变窄(JSN)得分的均值变化。图16显示在六个月时侵蚀得分没有变化的RA患者的比例，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图17显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的RA患者24周(探索性的终点)时放射照相术终点的变化。图18显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的RA患者24周时ACR核心集参数的均值百分比变化。图19显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的RA患者六个月时中值CD19。图20显示六个月里RA患者的研究中最常报告的不良事件，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图21显示六个月里RA患者的研究中导致退出的不良事件，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图22显示六个月里RA患者的研究中输液24小时期间/之内发生的事件，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图23显示六个月里RA患者的研究中的急性输液反应，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图24显示六个月里RA患者的研究中输液24小时期间/之内发生的严重不良事件，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图25显示六个月里RA患者的研究中系统器官类-感染和侵扰，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图26显示六个月里RA患者的研究中的严重感染，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图27显示六个月里RA患者的研究中的感染率，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图28显示六个月里RA患者的研究中的HACA，其中患者是用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的。图29显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的RA患者六个月里的IgG水平。图30显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)加MTX治疗的RA患者六个月里的IgA水平。图31显示用对照或者用利妥昔单抗(1000mgx2)力口MTX治疗的RA患者六个月里的IgM水平。图32A是序列对比，其比较了鼠2H7(SEQIDNO:l)、人源化2H7.vl6变体(SEQIDNO:2)和人K轻链亚组I(SEQIDNO:3)的轻链可变域(VL)的氨基酸序列。2H7和hu2H7.vl6的Vi的CDR如下CDR1(SEQIDNO:4)、CDR2(SEQIDNO:5)、及CDR3(SEQIDNO:6)。图32B是序列对比，其比较了鼠2H7(SEQIDNO:7)、人源化2H7.vl6变体(SEQIDNO:8)和人重链亚组III共有序列(SEQIDNO:9)的重链可变域(VH)的氨基酸序列。2H7和hu2H7.vl6的VH的CDR如下CDRl(SEQIDNO:10)、CDR2(SEQIDNO:11)、及CDR3(SEQIDNO:12)。在图32A和图32B中，每条链中的CDR1、CDR2及CDR3包括在括号之内，侧翼是框架区FR1-FR4，正如标明的。2H7指鼠2H7抗体。两行序列之间的星号表示两条序列之间不同的位置。残基编号方式是依照Kabat^a/.5^wewceyo//mmwwo/ogz'ca//"temst,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.(1991)，其中插入显示为a、b、c、d、和e。图33显示成熟2H7.vl6轻链的氨基酸序列(SEQIDNO:13)。图34显示成熟2H7.vl6重链的氨基酸序列(SEQIDNO:14)。图35显示成熟2H7.v31重链的氨基酸序列(SEQIDNO:15)。2H7.v31的轻链与2H7.vl6相同。图36是序列对比，其比较了人源化2H7.vl6变体(SEQIDNO:2)和人源化2H7.vl38变体(SEQIDNO:28)的轻链氨基酸序列。图37是序列对比，其比较了人源化2H7.vl6变体(SEQIDNO:8)和人源化2H7.vl38变体(SEQIDNO:29)的重链氨基酸序列。图38显示了成熟2H7.vl6和2H7.v511轻链(分别是SEQIDNO:13和30)的比对，使用了Kabat可变域残基编号方式和Eu恒定域残基编号方式。图39显示了成熟2H7.vl6和2H7.v511重链(分别是SEQIDNO:14和31)的比对，使用了Kabat可变域残基编号方式和Eu恒定域残基编号方式。图40A显示人源化2H7.vll4轻链可变域的序列(SEQIDNO:32);图40B显示人源化2H7.vll4重链可变域的序列(SEQIDNO:33);以及图40C显示人源化2H7.vll4全长重链的序列(SEQIDNO:34)，使用了Kabat可变域残基编号方式和Eu恒定i或残基编号方式。图41图示在56周时REFLEX临床试验的患者配置，包括对选自III期REFLEX临床试验的治疗组和安慰剂组的患者亚组的正在进行的治疗。图42是56周时的放射照相术终点的变化。图43是随时间的Sharp-Genant总分的均值变化。图44是Sharp-Genant总分变化的累积分布。图45是灵敏度分析Sharp-Genant总分的变化。图46是56周时没有放射照相术变化的患者。优选实施方案的详述I.定义"B细胞"是在骨髓内成熟的淋巴细胞，包括幼稚B细胞、记忆B细胞、或效应B细胞(浆细胞)。本文中的B细胞是正常的或非恶性的B细胞。"B细胞表面标志"或"B细胞表面抗原"在本文中指在B细胞表面上表达的、可以用与它结合的拮抗剂靶向它的抗原。例示性的B细胞表面标志包括CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85和CD86白细胞表面标志(描述参见77ze丄et/A:ocj^ey4w"gewFacto5ooA:，第2片反,1997,Barclayefa/.纟扁，AcademicPress,HarcourtBrace&Co.,NewYork)。其它B细月包表面才示志包4舌RP105、FcRH2、B细胞CR2、CCR6、P2X5、HLA-DOB、CXCR5、FCER2、BR3、Btig、NAG14、SLGC16270、FcRHl、IRTA2、ATWD578、FcRH3、IRTA1、FcRH6、BCMA和239287。特别感兴趣的B细胞表面标志较之哺乳动物的其它非B细胞组织在B细胞上优先表达，且可以在前体B细胞和成熟B细胞二者上表达。在本文中优选的B细胞表面标志是CD20和CD22。"CD20，，抗原或"CD20，，是在超过90。/。来自外周血或淋巴样器官的B细胞表面上找到的约35kDa非糖基化磷蛋白。CD20存在于正常B细胞以及恶性B细胞二者上，但在干细胞上不表达。CD20在文献中的其它名称包括"B淋巴细胞限制抗原，，和"Bp35"。CD20抗原记载于例如ClarkWo/.，iVoc.A^/.5W.(m4」82:1766(1985)。"CD22"抗原或"CD22"，也称为BL-CAM或Lyb8,是分子量约130(缩短的)至140kD(未缩短的)的l型整合膜糖蛋白。它在B淋巴细胞的细胞质和细胞膜二者中表达。CD22抗原在B细胞淋巴细胞分化的早期出现，大约在与CD19抗原相同的阶段。与其它B细胞标志不同，CD22膜表达局限于成熟B细胞(CD22+)与浆细胞(CD22-)之间包含的分化晚期。CD22抗原记载于例如Wilsonda/.，/鄉.173:137(199l)和Wilson&a/"//匿,/.150:5013(1993)。"拮抗剂"指在结合B细胞上的CD20后破坏或消减哺乳动物中的B细胞和/或干扰一项或多项B细胞功能的分子，例如通过降低或阻止B细胞引发的体液应答。拮抗剂优选能够消减用它处理的哺乳动物中的B细胞(即降低循环中的B细胞水平)。这样的消减可通过多种机制来实现，诸如ADCC和/或CDC、抑制B细胞增殖、和/或诱导B细胞死亡(例如通过凋亡)。本发明范围内所包括的拮抗剂包括结合CD20的抗体、合成的或天然序列的肽、免疫粘附素、和小分子拮抗剂，任选偶联或融合至另一分子。优选的拮抗剂包括抗体。"抗体拮抗剂"在本文中指在结合B细胞上的B细胞表面标志后破坏或消减哺乳动物中的B细胞和/或干扰一项或多项B细胞功能的抗体，例如通过降低或阻止B细胞引发的体液应答。优选的是，抗体拮抗剂能够在用其处理的哺乳动物中消减B细胞(即降低循环中的B细胞水平)。这样的消减可通过多种机制来实现，诸如ADCC和/或CDC、抑制B细胞增殖、和/或诱导B细胞死亡(如通过凋亡)。术语"抗体"在本文中以最广义使用，明确覆盖单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)、及抗体片段，只要它们展现出期望的生物学活性。"抗体片段"包含完整抗体的一部分，优选包含其抗原结合区。抗体片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab'》和Fv片段；双抗体(diabody);线性抗体；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。为了本文目的，"完整抗体"指包含重链和轻链可变域以及Fc区的抗体。"结合B细胞表面标志的抗体"指在结合B细胞表面标志后破坏或消减哺乳动物中的B细胞和/或干扰一种或多种B细胞功能的分子，例如通过降低或阻止B细胞引发的体液反应。优选的是，抗体能够在用其处理的哺乳动物中消减B细胞(即降低循环中的B细胞水平)。这样的消减可通过多种机制来实现，诸如ADCC和/或CDC、抑制B细胞增殖、和/或诱导B细胞死亡(如通过凋亡)。在一个优选的实施方案中，B细胞表面标志是CD20或CD22,因此结合B细胞表面标志的抗体是分别结合CD20或CD22的抗体，或者分别是"CD20抗体，，或"CD22抗体"。CD22抗体的例子包括EP1,476,120(TedderandTuscano)、EP1,485,130(Tedder)、和EP1,504,035(Popplewelle/a/.)中披露的那些，以及US2004/0258682(Leungda/.)中披露的那些。在一个还要更优选的实施方案中，抗体是CD20抗体。一个特别优选的实施方案是CD20或CD22抗体，优选CD20抗体。CD20抗体的例子包括"C2B8"，现在称作"rituximab，，("RITUXAN⑧/MABTHERA⑧")(美国专利No.5,736,137);钇[90]标记的2B8鼠源抗体，称作"Y2B8，，或"IbritumomabTiuxetan"(ZEVALIN),可从BiogenIdec公司购买(例如美国专利No.5,736,137;2B8于1993年6月22日保藏于ATCC,编号HB11388);鼠源IgG2a"Bl"，也称作"Tositumomab",任选用1311标记以产生"'"I-B1"或"碘131tositumomab，，抗体(BEXXARTM)，可从Corixa购买(还可参见例如美国专利No.5,595,721);鼠源单克隆抗体"lF5"(例如Pressetal"别ood,69(2):584-591(1987))及其变体，包括"才匡架》务补"或人源化1F5(例如WO2003/002607,Leung，S.;ATCC保藏物HB-96450);鼠源2H7和嵌合2H7抗体(例如美国专利No.5,677,180);人源化2H7(例如WO2004/056312(Lowmanda/.)及下文所列)；HUMAX-CD2()tm完全人的、高亲和力抗体，靶向B细胞细胞膜中的CD20分子(Genmab，丹麦；参见例如GlennieandvandeWinkel,Z)&c0v^72Wa_y,8:503-510(2003);Craggetal.，说ood，101:1045-1052(2003));WO2004/035607和WO2005/103081(Teeling"a/"GenMab/Medarex)中所列的人单克隆抗体；US2004/0093621(Shitarada/.)中记载的有复杂的N-糖苷连接的糖链结合至Fc区的抗体；结合CD20的单克隆抗体和抗原结合片I殳(例如WO2005/000901,TedderW0/.)诸如HB20-3、HB20-4、HB20-25、和MB20-11;结合CD20的单链蛋白质(例如US2005/0186216(LedbetterandHayden画Ledbetter);US2005/0202534(Hayden-LedbetterandLedbetter);US2005/0202028(Hayden-LedbetterandLedbetter);US2005/0202023(Hayden-LedbetterandLedbetter)-TrubionPharmlnc.);CD20结合分子，诸如AME系列的抗体，例如AME-33TM抗体，例如WO2004/103404和US2005/0025764(WatkinsWa/"AppliedMolecularEvolution,Inc.)中所列，及具有Fc突变的CD20抗体，例如WO2005/070963(Allan""/"AppliedMolecularEvolution,Inc.)中所列；CD20结合分子，诸如WO2005/016969和US2005/0069545(Carre^/.)中所记载的；双特异性抗体，例如WO2005/014618(Chang"a/.)中所列举的；人源化LL2单克隆抗体，例如US2005/0106108(LeungandHansen;Immunomedics)中所列举的；针对CD20的嵌合或人源化B-Lyl抗体，例如WO2005/044859和US2005/0123546(UmanaWa/.;GlycArtBiotechnologyAG)中所记载的；A20抗体或其变体，诸如嵌合或人源化A20抗体(分别是cA20、hA20)和IMMUN-106(例如US2003/0219433，Immunomedics);及单克隆抗体L27、G28画2、93-lB3、B-C1或NU-B2，可从国际白细胞分类研究组(InternationalLeukocyteTyping^Vorkshop)获;f寻(if列^口Valentine&a/.，丄ez^oqyfe^V/^'"gIH，McMichael》扁，p.440:OxfordUniversityPress,1987)。本文中优选的CD20抗体是嵌合的、人源化的、或人的CD20抗体，更优选rituximab、人源化2H7、嵌合或人源化A20抗体(Immunomedics)、HUMAX-CD2(FM人CD20抗体(Genmab)、和结合CD20的免疫球蛋白/蛋白质(TrubionPharmInc.)。术语"rituximab"(利妥昔单抗)或"RITUXAN⑧"在本文中指针对CD20抗原的遗传工程嵌合鼠/人单克隆抗体，在美国专利No.5,736,137中称作"C2B8",包括其保持结合CD20能力的片段。纯粹为了本文目的且除非另有说明，"人源化2H7"指人源化CD20抗体或其抗原结合片l殳，其包含一种、两种、三种、四种、五种或六种以下CDRyf列CDRL1序列，RASSSVSYXH,其中X是M或L(SEQIDNO:35),例如SEQIDNO:4(图32A);CDRL2序列，SEQIDNO:5(图32A);CDRL3序列，QQWXFNPPT，其中X是S或A(SEQIDNO:36)，例如SEQIDNO:6(图32A);CDRH1序列，SEQIDNO:10(图32B);CDRH2序列，AIYPGNGXTSYNQKFKG，其中X是D或A(SEQIDNO:37),例如SEQIDNO:ll(图32B);和CDRH3序列，VVYYSXXYWYFDV，其中第6位X是N、A、Y、W或D且第7位X是S或R(SEQIDNO:38),例如SEQIDNO:12(图32B)。本文中的人源化2H7抗体包括那些重链氨基酸序列包含C-末端赖氨酸的和那些不含的。上述CDR序列一般存在于人轻链和重链可变区框架序列内，诸如基本上为人轻链K亚组I(VLKl)的人共有FR残基和基本上为人重链亚组III(VhIII)的人共有FR残基。还可参见WO2004/056312(Lo職ana/.)。可以将重链可变区连接人IgG链恒定区，其中所述区可以是例如lgGl或IgG3，包括天然序列的和非天然序列的恒定区。在一个优选的实施方案中，此类抗体包含SEQIDNO:8的重链可变域序列(vl6，如图32B所示)，任选还包含SEQIDNO:2的轻链可变域序列(vl6,如图32A所示)，其任选包含重链可变域中第56、100和/或100a位的一处或多处氨基酸替代，例如D56A、N100A或N100Y、和/或S100aR及轻链可变域中第32和/或92位的一处或多处氨基酸替代，例如M32L和/或S92A。优选的是，抗体是完整抗体，其包含SEQIDNO:13或30的轻链氨基酸序列及SEQIDNO:14、15、29、31、34或39的重链氨基酸序列，下面给出了SEQIDNO:39的序列。一种^尤选的人源4匕2H7抗体是ocrelizumab(Genentech,Inc.)。本文中的抗体还可以在Fc区中包含至少一处改进ADCC活性的氨基酸替代，诸如位于第298、333和334位的氨基酸替代,优选S298A、E333A和K334A，使用EU重链残基编号方式。还可参见美国专利No.6,737,056,L.Presta。任何这些抗体可以在Fc区中包含至少一处改进FcRn结合或血清半衰期的替代，例如位于重链第434位的替代，诸如N434W。还可参见美国专利No.6,737,056,L.Presta。任何这些抗体还可以在Fc区中包含至少一处提高CDC活性的氨基酸替代，例如至少包含位于第326位的替代，优选K326A或K326W。还可参见美国专利No.6,528,624(Idusogieda/.)。有些优选的人源化2H7变体是那些包含SEQIDNO:2的轻链可变域及SEQIDNO:8的重链可变域的抗体，包括那些在Fc区(如果有的话)中具有或没有替代的抗体，和那些包含在SEQIDNO:8中具有改变N100A;或者D56A和N100A;或者D56A、N100Y和S100aR的重链可变域及在SEQIDNO:2中具有改变M32L;或者S92A;或者M32L和S92A的轻链可变域的抗体。2H7.vl6重链可变域中的M34已经鉴定为抗体稳定性的潜在来源，且是替代的另一个潜在候选位置。在本发明的一些各种优选实施方案的总结中，基于2H7.vl6的变体的可变区包含vl6的氨基酸序列，除了下表所示氨基酸替代的位置。除非另有说明，2H7变体将具有与vl6相同的轻链。例示性的人源化2H7抗体变体<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>一种优选的人源化2H7包含2H7.v16轻链可变域序列KVEIKR(SEQIDNO:2);及2H7.vl6重链可变域序列:RVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:8)。若人源化2H7.vl6抗体是完整抗体，则它可包含轻链M酸序列:KVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:13);及重链氨基酸序列SEQIDNO:14或:FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV丽AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP正KTISKAKSLSLSPG(SEQIDNO:15)。另一种优选的人源化2H7抗体包含2H7.v511轻链可变域序列VEIKR(SEQIDNO:39);及2H7.v511重链可变域序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVWYYSYRYWYFDVWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:40)。若人源化2H7.v511抗体是完整抗体，则它可包含轻链氨基酸序列LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:30);及重链氨基酸序列SEQIDNO:31或VVYYSYRYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRLSLSPG(SEQIDNO:41)。见图38和39，它们分别比对了人源化2H7.v511与人源化2H7.vl6的成熟轻链和重链，重链使用C-末端赖氨酸序列。若人源化2H7.v31抗体是完整抗体，则它可包含轻链氨基酸序列PVTKSFNRGEC(SEQIDNO:13);及重链氨基酸序列SEQIDNO:15或:RVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPSLSLSPG(SEQIDNO:42)或:PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNAALPAPIAATISKAKGLSLSPG(SEQIDNO:43)。在本文中的一个优选实施方案中，抗体是包含SEQIDNO:2和8可变域序列的人源化2H7(型式16)。在本文中的另一个优选实施方案中，抗体是包含SEQIDNO:39和40可变域序列的人源化2H7(型式511)。进一步优选的抗体是包含SEQIDNO:32和33可变域序列的人源化2H7(见图40型式114),诸如包含轻链可变域SEQIDNO:32和重链可变域SEQIDNO:34的抗体。进一步优选的抗体是包含在SEQIDNO:8中有改变N100A;或者D56A和N100A;或者D56A,N100Y,和S100aR的重链可变域及在SEQIDNO:2中有改变M32L;或者S92A;或者M32L和S92A的轻4连可变域的人源化2H7。"抗体依赖性细胞介导的细胞毒性"和"ADCC"指由细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)识别耙细胞上结合的抗体，随后引起耙细胞溶解。介导ADCC的主要细胞，NK细胞，只表达FcyRIII，而单核细胞表达FcyRI、FcyRII和FcryRin。RavetchandKinet,"ev./wmimo/.9:457-492(1991)第464页表3总结了造血细胞上的FcR表达。为了评估目的分子的ADCC活性，可进行体外ADCC测定法，诸如美国专利No.5，500,362或5,821,337中所记载的。可用于此类测定法的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可在体内评估目的分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如Clynes"a/.,iWAS(X/iS^」95:652-656(1998)中所披露的。"人效应细胞，，指表达一种或多种FcR并行使效应器功能的白细胞。优选的是，细胞至少表达FcyRIII并执行ADCC效应器功能。介导ADCC的人白细胞的例子包括外周血单个核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞，优选PBMC和NK细胞。术语"Fc受体"或"FcR"用于描述与抗体Fc区结合的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是与IgG抗体结合的FcR(y受体)，包括FcyRI、FcYRII和FcyRin亚类的受体，包括这些受体的等位变体和可变剪接形式。FcyRII受体包括FcyRIIA("活化受体")和FcyRIIB("抑制受体")，它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在于其胞质结构域。活化受体FcyRIIA在其胞质结枸域中包含免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcyRIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见Dagron,iev./mww"o/.15:203-234(1997))。FcR的综述参见RavetchandKinet,v4www.iev.Twmwwo/.9:457-492(1991》Capelefa/.,/mmwwome^O(is4:25-34(1994);deHaasa/.，J!C//w.Md.126:330-341(1995)。术语"FcR，，在本文中涵盖其它FcR，包括那些未来将会鉴定的。该术语还包括新生儿受体，FcRn,它负责将母体IgG转移给胎儿(Guyer"a/.，//www"o/.117:587(1976);Kim"a/"//画,/.24:249(1994》。"补体依赖性细胞毒性"或"CDC"指存在补体时分子溶解靶物的能力。补体激活途径是由补体系统第一组分(Clq)结合与关联抗原复合的分子(例如抗体)起始的。为了评估补体激活，可进行CDC测定法，例如如Gazzano-Santoroaa/.，《/7w腿wo/.Me决oA202:163(1996)中所记载的。"生长抑制性"抗体指那些阻止或降低表达抗体所结合之抗原的细胞增殖的抗体。例如，抗体可以在体外和/或在体内阻止或降低B细胞增殖。"诱导凋亡"的抗体指那些根据标准凋亡测定法的测定，诱导(例如B细胞的)程序性细胞死亡的抗体，所述测定法诸如膜联蛋白V结合、DNA断裂、细胞收缩、内质网膨胀、细胞破裂、和/或膜嚢(称作凋亡小体)形成。"天然抗体"指通常由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链构成的约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白。每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接，而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同种型的重链间有变化。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫键。每条重链在一端具有一个可变域(Va),接着是多个恒定域。每条轻链在一端具有一个可变域(ViJ，而另一端是一个恒定域。轻链的恒定域与重链的第一恒定域排列在一起，而轻链的可变域与重链的可变域排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链与重链可变域之间形成界面。术语"可变的"指可变域中的某些部分在抗体序列间差异广泛且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性的实情。然而，变异性并非均匀分布于抗体的整个可变域。它集中于轻链和重链可变域中称作高变区的三个区段。可变域中更加高度保守的部分称作框架区(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR,它们大多采取|3-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成P-折叠片结构一部分的三个高变区连接。每条链中的高变区通过FR非常接近的保持在一起，并与另一条链的高变区一起促成抗体的抗原结合4立点的形成(参见Kabatefa/.，Segwewcasc/"/Vofe/"so/7mmwwo/og/ca//"femsf，第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，j旦展现出多种效应器功能，诸如ADCC中抗体的参与。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为"Fab"片段，各自具有一个抗原结合位点，及一个剩余的"Fc"片段，其名称反映了它易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生一个F(ab')2片段，它具有两个抗原结合位点且仍能够交联抗原。"Fv"是包含完整抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。此区由紧密、非共价结合的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组成。正是在这种构造中，各可变域的三个高变区相互作用而在vh-vl二聚体表面上确定了一个抗原结合位点。六个高变区共同赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或只包含对抗原特异的三个高变区的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，只是亲和力低于完整结合位点。Fab片段还包含轻链的恒定域和重链的第一恒定域(CHl)。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于重链CH1结构域的羧基末端增加了少数残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中对其中恒定域半胱氨酸残基携带至少一个游离硫醇基的Fab'的称谓。F(ab')2抗体片段最初是作为在Fab'片段之间有铰链半胱氨酸的成对Fab'片段生成的。还知道抗体片段的其它化学偶联。根据其恒定域的氨基酸序列，来自任何脊推动物物种的抗体(免疫球蛋白)的"轻链"可归入两种截然不同的型中的一种，称作卡巾白(k)和拉姆达(人)。根据其重链恒定域的氨基S吏序列，抗体可归入不同的类。完整抗体有五大类IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有些可进一步分为亚类(同种型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。将与不同类的抗体对应的重链恒定域分别称作a、S、s、y和(i。不同类的免疫球蛋白的亚基结构和三维构造是众所周知的。"单链Fv"或"scFv"抗体片段包含抗体的VH和V^结构域，其中这些结构域存在于一条多肽链上。优选的是，Fv多肽在VH与V^结构域之间还包含多肽接头，使得scFv能够形成结合抗原的期望结构。关于scFv的综述参见Pliickthun,于772e户/zm7waco/ogyo/Mowoc/owa/^4w"'Zod/as，vol.113，RosenburgandMoore编，Springer-Verlag，NewYork,pp,269-315(1994)。术语"双抗体"指具有两个抗原结合位点的小型抗体片段，该片段在同一条多肽链(VH-ViJ中包含相连的重链可变域(VH)和轻链可变域(ViJ。通过使用过短的接头使得同一条链上的两个结构域之间不能配对，迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对，从而产生两个抗原结合位点。双抗体更完整的记载于例如<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>术语"单克隆抗体"在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同和/或结合相同表位，除了生产单克隆抗体的过程中可能产生的可能变体外，这些变体通常以极小量存在。与典型的包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性以外，单克隆抗体的优势在于它们未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语"单克隆"指示抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，将依照本发明使用的单克隆抗体可通过最初由KohlerWa/.,A^fww256:495(1975)记载的杂交瘤方法来制备，或者可通过重组DNA方法来制备(参见例如美国专利No.4,816,567)。"单克隆抗体，，还可使用例如Clacksonaa/.:Atowe352:624-628(1991)和Marksda/.，《/Mo/.所o/.222:581-597(1991)中记载的技术从噬菌体抗体库分离。单克隆抗体在本文中明确包括"嵌合"抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(美国专利No.4，816，567;Morrison""/.，尸rac.A^/.爿cad5W.C/5L481:6851-6855(1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括包含书亍生自非人灵长类动物(例如旧大陆猴类(OldWorldMonkey)，诸如狒狒、恒河猴或猕猴)的可变域抗原结合序列和人恒定区序列的"灵长类化"抗体(美国专利No.5，693，780)。非人(例如鼠)抗体的"人源化"形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的高变区残基用具有期望特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的高变区残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架区(FR)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体中或在供体抗体中没有找到的残基。进行这些修饰是为了进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含至少一个、通常两个基本上整个如下的可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有FRA人免疫球蛋白序列的FR，除了上文所述FR替代。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见Jonesetal.，Atowre321:522-525(1986);Riechmannaa/"A^ww332:323-329(1988);Presta,C匿編.2:593-596(1992)。术语"高变区"在用于本文时指抗体中负责抗原结合的氨基酸残基。高变区包含来自"互补决定区，，或"CDR"的氨基酸残基(例如轻链可变域中的残基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97(L3)及重链可变域中的残基31-35(Hl)、50-65(H2)和95画102(H3);Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD,(1991))和/或那些来自"高变环"的残基(例如轻链可变域中的残基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)及重链可变域中的残基26-32(Hl)、53-55(H2)和96画101(H3);ChothiaandLesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。"框架区"或"FR"残基指可变域中那些除此处定义的高变区残基以外的残基。"棵抗体"或"棵露的抗体"指未偶联异源分子，诸如细胞毒性模块、聚合物、或^:射性标记物的抗体(如本文中所定义的)。"分离的"抗体指已经鉴定且自其天然环境的一种成分分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染性成分指将会干扰该抗体的诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将抗体纯化至(l)根据Lowry法的测定，抗体重量超过95%,最优选重量超过99%，(2)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)根据还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE及使用考马斯蓝或优选的银染色，达到同质。既然抗体天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。"关节损伤"以最广义使用，指一个或多个关节的任何部分的损伤或者部分或完全的破坏，包括结締组织和软骨，其中损伤包括任何原因的结构和/或功能的损伤，而且可能引起或不引起关节疼痛/关节痛。它包括，但不限可以是由任何疾患引起的，诸如自身免疫病，诸如狼^(例如系统性红斑狼疮)、关节炎(例如急性和慢性关节炎、类风湿性关节炎包括幼发型类风湿性关节炎、幼年型特发性关节炎(JIA)、或幼年型RA(JRA)、和阶段诸如类风湿性滑膜炎、痛风或痛风性关节炎、急性免疫学关节炎、慢性炎性关节炎、变性关节炎、II型胶原诱发的关节炎、感染性关节炎、脓毒性关节炎、莱姆关节炎、增生性关节炎、4艮屑病关节炎、斯提耳氏病、脊推关节炎、骨关节炎、十曼斗生洋斤进'l"生关节炎(arthritischronicaprogrediente)、变形'I"生关节炎(arthritisdeformans)、慢性原发性多关节炎(polyarthritischronicaprimaria)、反应性关节炎、绝经期关节炎、雌激素衰竭性关节炎、和强直性脊柱炎/类风湿性脊推炎)、RA以外的风湿性自身免疫病、RA继发的重大系统性牵涉(包括但不限于血管炎、肺纤维化或费耳提氏综合征)、斯耶格伦氏综合症、特定的继发性综合症、具有RA的继发性限制性皮肤脉管炎、血清阴性的脊推关节病、莱姆病、炎性肠病、硬皮病、炎性肌病、混合性结締组织病、任何重叠综合征、滑嚢炎、腱炎、骨髓炎、包括流感、麻渗(风渗)、风湿热、埃巴二氏病毒综合症、肝炎、腮腺炎、风渗(德国麻渗)、和水痘(禽痘)在内的感染性疾病、髌骨软骨软化、胶原性结肠炎、与胶原病有关的自身免疫性病症、关节炎症、异常劳累或使用过度诸如扭伤或劳损、包括骨折在内的损伤、痛风尤其是在大趾中发现的、以及由神经学病症、血友病病症(例如血友病性关节病)、肌肉病症、渐进性病症、骨病症、软骨病症、和血管病症引起的。为本文目的，关节指(脊推动物，诸如动物)骨骼各组件与包围和支持它的各部分之间的接触点，包括但不限于例如髋、脊柱的推骨之间的关节、脊柱与骨盆之间的关节(骶髂关节)、腱和韧带附着于骨处的关节、肋骨与脊柱之间的关节、肩、膝、足、肘、手、指、踝和趾，尤其是手和足中的关节。"受试者"在本文中指人类受试者，包括适于接受治疗的患者，他正经受或者已经经受关节损伤的一种或多种体征、症状、或其它指标，已经确诊具有关节损伤，无论例如是新近确诊的或者以前确诊的且现在正经受再次发作或复发，或者有风险发生关节损伤，不管其原因。受试者也许先前已经用CD20抗体治疗过或者没有这样治疗过。适于接受关节损伤治疗的受试者可任选的鉴定为已经经过如下筛选的受试者，像在他的血液中，有升高水平的浸润CD20细胞，或者使用检测自身抗体的测定法来进行筛选，其中定性的及优选定量的评估自身抗体的生成。受试者可以是在开始治疗时未用过所用第二药物的，即该受试者在"基线"(即在本文中治疗方法中施用第一剂CD20抗体之前的一个设定点，诸如开始治疗之前筛选受试者的日子)时以前没有用例如免疫抑制剂诸如曱氨蝶呤治疗过。这样的受试者一般认为是用所述第二药物进行治疗的候选人。对受试者的"治疗"在本文中指治疗性处理和预防性或防范性措施二者。那些需要治疗的受试者包括那些已经患有关节损伤的受试者以及需要预防关节损伤或关节损伤进展的受试者。因此，受试者可以是已经诊断为具有关节损伤或者可以是倾向于或易感于关节损伤，或者可以是具有有限的关节损伤，其有可能在不进行治疗的情况中进展。若关节损伤得到緩解或治愈，或者关节或结构损伤的进展停止或者与给药之前相比减緩，则该治疗是成功减緩或减轻关节损伤或关节损伤进展等同于阻滞、降低、或逆转关节损伤。"临床改善"指防止关节损伤的进一步进展或者关节损伤因治疗所致的任何改善，其根据放射照相术检查以外的方法确定。如此，临床改善可以是例如通过评估触痛的或肺胀的关节数目、银屑病评估严重性指数、受试者整体临床评估、评估红细胞沉降率、或评估C-反应蛋白水平的量而确定的。为本文目的，如果他/她没有活动性关节损伤的症状，诸如那些可通过本文所披露的方法来检测的，而且根据基线时的或治疗期间某一时间点的评估关节损伤没有进展，则该受试者处于"消退"中。那些没有处在消退中的受试者包括例如那些经受关节损伤恶化或进展的受试者。经受症状的重现，包括活动性关节损伤的受试者指那些具有"复发，，或"再次发作"的受试者。关节损伤的"症状"指受试者经受的结构、功能、或感觉中的任何病态现象或偏离正常上的偏离正常，其指示关节损伤，诸如那些上面所列的，包括触痛的的或肿胀的关节。表述"有效量"指抗体或拮抗剂有效治疗关节损伤的量，包括根据放射照相术检查的测定有效实现与施用该量之前的基线相比关节损伤减轻的量。其它药物诸如第二药物的有效量指所述药物有效治疗关节损伤或其它不良效应(包括副作用或症状或伴随关节损伤的其它疾患，包括潜在的疾病或病症)的量。"改良Sharp总分"指使用Genant，爿m.MW.,30:35-47(1983)改良的依照Sharp的方法评估放射照片得到的分值。主要评估为来自筛选的Sharp-Genant总分的变化。Sharp-Genant得分综合了手和足的侵蚀得分和关节腔变窄得分。关节损伤是在这些测试中测量的，其通过均值变化小于基线(患者在第一次施用CD20拮抗剂之前进行筛选或检验的时间)时的得分来评分。在用于本文时，"类风湿性关节炎"指一种已承认的疾病状态，其可以依照关于类风湿性关节炎分类的2000修正的美国类风湿协会标准或任何相似标准来诊断。RA的生理学指标包括对称性关节肿胀，这在类风湿性关节炎中是特征性的尽管不是不变的。手的近端指间(PIP)关节以及掌指(MCP)、腕、肘、膝、踝和跖趾(MTP)关节的纺锤形肺胀常常患病，而且肿胀是容易检测的。纟皮动运动时的疼痛是关节炎症的最灵每文测试，而且炎症和结构变形常常限制患病关节的活动范围。典型的可见变化包括MCP关节处指的尺骨偏斜、MCP和PIP关节的伸展过度或屈曲过度、肘的屈曲挛缩、及腕骨和趾的半脱位。类风湿性关节炎受试者可能耐受DMARD,即DMARD在治疗症状方面无效或不是完全有效。另外，依照本发明的疗法的候选者包括那些由于毒性或疗效不足已经发生对于先前的或当前的使用TNF抑制剂诸如依那西普、英夫利昔单抗和/或阿达木单抗的治疗响应不足的受试者(例如，依那西普3个月、25毫克、每周两次或者英夫利昔单抗以3mg/kg输液至少4次)。患有"活动性类风湿性关节炎"的患者指患有活跃的且非潜伏的类风湿性关节炎症状的患者。患有"早期的活动性类风湿性关节炎"的受试者指那些活动性类风湿性关节炎依照关于RA分类的修正的1987ACR标准确诊至少8周但不长于4年的受试者。银屑病关节炎(PsA)指一种炎性关节病，以广泛的骨吸收为特征。本文中还公开了，来自PsA患者，特别是那些在普通放射照片上具有骨侵蚀的PsA患者的血液样品与健康对照相比展现出破骨细胞前体(OCP)的显著增加。"抗体暴露"指接触或暴露于在约1天至约5周的一段时间里施用的一剂或多剂本文中的抗体。剂量可以一次性给予，或者在该暴露期内以固定的或无规律的间隔给予，诸如例如每周一剂达四周或相隔约13-17天的一段时间的两剂。正如本文详述的，初次和后续的抗体暴露彼此在时间上隔开。直到"距初次暴露"或者距任何在先暴露一段时间才施用或提供暴露意味着自施用在先暴露的任何剂量的时间测量第二次或后续暴露的时间，如果在该暴露中施用了超过一剂的话。例如，如果在初次暴露中施用两剂的话，那么直到自该在先暴露内施用的第一或第二剂的时间测量至少大约16-54周才给予第二次暴露。类似的，若施用三剂，则可以自在先暴露内的第一、第二、或第三剂的时间测量第二次暴露。优选的是，自第一剂的时间测量"距初次暴露"或距任何在先暴露。术语"免疫抑制剂"在本文中用于辅助疗法时指起抑制或掩盖本文中所治疗哺乳动物的免疫系统作用的物质。这将包括抑制细胞因子生成、下调或抑制自身抗原表达、或掩盖MHC抗原的物质。此类药剂的例子包括2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶类(见美国专利No.4,665,077);非类固醇抗炎药类(NSAID);更昔洛韦(ganciclovir)、他克莫司(tacrolimus).糖皮质激素类诸如皮质醇(cortisol)或醛甾酮(aldosterone)、抗炎剂类诸如环加氧酶抑制剂、5-脂加氧酶抑制剂或白三烯受体拮抗剂；嗓呤拮抗剂类，诸如硫唑。票呤(azathioprine)或霉酚酸吗乙酉旨(mycophenolatemofetil，MMF);烷化剂类，诸如环石粦酰胺(cyclophosphamide)、溴隐亭(bromocryptine)、达那峻(danazol)、氨苯砜(dapsone)、戊二醛(它掩盖MHC抗原，如美国专利No.4，120,649中所记载的)；MHC抗原和MHC片段的抗独特型抗体；环孢霉素A;类固醇类，诸如皮质类固醇或糖皮质类固醇或糖皮质激素类似物，例如泼尼松琥珀酸钠、和地塞米+^(dexamethasone);二氢叶酸还原酶抑制剂类，诸如曱氨蝶呤(methotrexate)(口服或皮下)；抗症剂类，诸如氯会(chloroquine)和羟氯全(hydroxycloroquine);柳氮石黄p比"定(sulfasalazine);来氟米特(leflunomide);细胞因子拮抗剂诸如细胞因子抗体或细胞因子受体抗体，包括抗干扰素-a、-卩或-Y抗体，抗肺瘤坏死因子(TNF)-a抗体(英夫利昔单抗(infliximab)(REMICADE⑧)或阿达木单抗(adalimumab))，抗TNF-a免疫粘附素(依那西普(etanercept))，抗TNF-P抗体，抗白介素-2(IL-2)抗体和抗IL-2受体抗体，和抗白介素-6(IL-6)受体抗体和拮抗剂；抗LFA-1抗体，包括抗CDlla和抗CD18抗体；抗L3T4抗体；异源抗淋巴细胞球蛋白；泛(pan)T抗体，优选抗CD3或抗CD4/CD4a抗体；包含LFA-3结合域的可溶性肽(WO90/08187,发布于90年7月26日)；链激酶；转化生长因子-f3(TGF-(3);链道酶；来自宿主的RNA或DNA;FK506;RS-61443;苯丁酸氮芥(chlorambucil);脱氧精胍菌素(deoxyspergualin);雷巾白霉素(rapamycin);T纟田月包受体(Cohen&a/"美国专利No.5,114,721);T细胞受体片段(Offiierda/.,Science251:430-432(1991);WO90/11294;Ianeway，341:482(1989);WO91/01133);BAFF拮抗剂，诸如BAFF抗体和BR3抗体和zTNF4拮抗剂(综述参见MackayandMackay，7>ewA/mmw"o/.23:113-5(2002));干扰T辅助细胞信号的生物制剂，诸如抗CD40受体或抗CD40配体(CD154)，包括CD40-CD40配体的阻断性抗体(例如Durieefa/"/SWe"ce，261:1328-30(1993》MohanWa/"/7mw7imo/"154:1470-80(1995))和CTLA4-Ig(Finckda/"5We"ce,265:1225-7(1994));及T细胞受体抗体(EP340,109)，诸如T10B9。本文中的有些免疫抑制剂还是DMARD，诸如曱氨蝶呤。本文中优选的免疫抑制剂的例子包括环磷酰胺、笨丁酸氮芥、硫唑嘌呤、来氟米特、MMF、或曱氨蝶呤。术语"细胞因子"是由一种细胞群释放，作为细胞间介质作用于另一细胞的蛋白质的通称。此类细胞因子的例子有淋巴因子、单核因子；白介素(IL)，诸如IL-1、IL-la、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL隱8、IL誦9、IL-ll、IL-12、IL-15,包括PROLEUKIN⑧rlL-2;肿瘤坏死因子，诸如TNF-a或TNF-(3;及其它多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。在用于本文时，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质及天然序列细胞因子的生物学活性等效物，包括通过人工合成产生的小分子实体，及其药剂学可接受的衍生物和盐。"细胞因子拮抗剂"指通过任何机制抑制或拮抗此类细胞因子的分子，包括例如细胞因子的抗体、细胞因子受体的抗体、和免疫粘附素。术语"激素"指多肽激素，其一般由具有导管的腺器官分泌。激素包括例如生长激素，诸如人生长激素、N-曱硫氨酰人生长激素、和牛生长激素；曱状旁腺素；曱状腺素；胰岛素；胰岛素原；松驰素；雌二醇；激素代替疗法；名,;敫素类，^者如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他力#S同(dromostanolonepropionate)、环石克雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)或睾内酉旨(testolactone);松驰素原；糖蛋白激素类，诸如促卵泡激素(FSH)、促曱状腺激素(TSH)和促黄体激素(LH);促乳素、胎盘催乳激素、小鼠促性腺激素相关肽、促性腺激素释放激素；抑制素；激活素；穆勒氏(Mullerian)抑制性物质；及血小板生成素。在用于本文时，术语激素包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列激素的生物学活性等效物，包括通过人工合成产生的小分子实体，及其药剂学可接受的衍生物和盐。术语"生长因子"指促进生长的蛋白质，包括例如肝生长因子；成纤维细胞生长因子；血管内皮生长因子；神经生长因子，诸如NGF-(3;血小板衍生生长因子；转化生长因子(TGF)，诸如TGF-a和TGF-(3;胰岛素样生长因子-I和-II;促红细胞生成素(EPO);骨诱导因子(osteoinductivefactor);干扰素，诸如干扰素-a、-P和-y;及集落刺激因子(csf),诸如巨噬细胞csf(m-csf)、粒细胞-巨噬细胞CSF(GM-CSF)和粒细胞CSF(G-CSF)。在用于本文时，术语生长因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列生长因子的生物学活性等效物，包括通过人工合成产生的小分子实体，及其药剂学可接受的衍生物和盐。术语"整联蛋白"指容许细胞结合和应答胞外基质且牵涉多种细胞功能诸如伤口愈合、细胞分化、肿瘤细胞归巢和凋亡的受体蛋白质。它们是牵涉细胞-胞外基质和细胞-细胞相互作用的细胞粘附受体大家族的一部分。功能性整联蛋白由非共价结合的两个跨膜糖蛋白亚基组成，称为a和(3。a亚基彼此都享有一定同源性，(3亚基也是如此。受体总是包含一条a链和一条p链。例子包括a6pi、a3(31、a7pi、LFA-1等。在用于本文时，术语"整联蛋白"包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列整联蛋白的生物学活性等效物，包括通过人工合成产生的小分子实体，及其药剂学可接受的衍生物和盐。为了本发明的目的，"肿瘤坏死因子-a(TNF-a)"指包含Pennica"a/.，A^ww312:721(1984)或Aggarwal"a/"/5C260:2345(1985)中所述氨基酸序列的人TNF-a分子。"TNF-a抑制剂"在本文中指在一定程度上抑制TNF-a的生物学功能的药剂，一般通过结合TNF-a并中和其活性。本文中具体设想的TNF抑制剂的例子有依那西普(etanercept)(ENBREL)、英夫利昔单抗(infliximab)(REMICADE)、和阿达木单抗(adalimumab)(HUMIRATM)。"緩解病情的抗风湿药"或"DMARD"的例子包括羟氯喹(hydroxycloroquine)、柳氮石黄p比"定(sulfasalazine)、曱氨虫莱p令(methotrexate)、来氟米特(leflunomide)、依那西普(etanercept)、英夫利昔单抗(infliximab)(加口服和皮下曱氨蝶呤)、硫唑噪呤(azathioprine)、D-青霉胺、金盐(口服)、金盐(肌肉内)、米诺环素(minocycline)、环孢霉素(cyclosporine)包括环孢霉素A和表面环孑包霉素、葡萄球菌蛋白A(GoodyearandSilverman,/Med.197(9):1125-39(2003))，包括其盐和衍生物，等。本文中优选的DMARD是曱氨蝶呤。"非类固醇抗炎药"或"NSAID，，的例子包括阿司匹林(aspirin)、乙酰水杨酸(acetylsalicylicacid)、布洛芬(ibuprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、萘普生(naproxen)、。引。呆美辛(indomethacin)、舒4木酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)、苯丁唑酮(phenylbutazone)、双氯芬酸(diclofenac)、酮洛芬(ketoprofen)、贝诺酯(benorylate)、曱芬那酸(mefenamicacid)、曱氨蝶呤(methotrexate)、芬布芬(fenbufen)、阿扎丙宗(azapropazone)、COX-2抑制剂诸如塞来考昔(celecoxib)(CELEBREX;4-(5-(4-曱苯基)-3-(三氟甲基)-lH-吡唑-l-基)苯磺酰胺、伐地考昔(valdecoxib)(BEXTRA⑧)、美洛昔康(meloxicam)(MOBIC)、GR253035(GlaxoWellcome)、及MK966(MerckSharp&Dohme)，包括其盐和衍生物，等。优选的是，它们是阿司匹林、萘普生、布洛芬、吲咮美辛或托美丁。本文中"整联蛋白拮抗剂或抗体，，的例子包括LFA-1抗体，诸如可以从Genentech购买的efalizumab(RAPTIVA),或a4整联蛋白抗体，诸如可以从Biogen购买的natalizumab(ANTEGREN),或二氮杂环苯丙氨酸衍生物(WO2003/89410)、苯丙氨酸书t生物(WO2003/70709、WO2002/28830、WO2002/16329和WO2003/53926)、苯基丙酸衍生物(WO2003/10135)、烯胺衍生物(WO2001/79173)、丙酸衍生物(WO2000/37444)、链烷酸衍生物(WO2000/32575)、取代苯基衍生物(美国专利No.6，677,339和6,348，463)、芳香胺衍生物(美国专利No.6,369，229)、ADAM解联蛋白结构域多肽(US2002/0042368)、av(33整联蛋白的抗体(EP633945)、氮桥二环氨基酸衍生物(WO2002/02556)等。"皮质类固醇"指具有类固醇的一般化学结构，模拟或提升天然存在皮质类固醇的效果的数种合成的或天然存在的物质中的任一种。合成的皮质类固醇的例子包括泼尼松(prednisone)、泼尼松龙(prednisolone)(包括曱泼尼龙(methylprednisolone),诸如SOLU-MEDROL⑧曱泼尼龙琥珀酸钠)、地塞米松(dexamethasone)或地塞米松曲安西龙(dexamethasonetriamcinolone)、氬化可的+〉(hydrocortisone)和倍他米^^(betamethasone)。本文中优选的皮质类固醇是泼尼松、曱泼尼龙、氢化可的松或地塞米松。术语"BAFF，、"BAFF多肽"、"TALL-l"或"TALL-1多肽"、及"BLyS"在用于本文时涵盖"天然序列BAFF多肽"和"BAFF变体"。"BAFF，用来指称具有下文所示任一氨基酸序列的那些多肽，及其具有天然BAFF生物学活性的同系物和片段和变体人BAFF序列(SEQIDNO:16):1MDDSTEREQSRLTSCLKKREEMKLKECVSILPRKESPSVRSSKDGKLLAATLLLALLSCC121GEGNSSQNSRNKRAVQGPEETVTQDCLQLIADSETPTIQKGSYTFVPWLLSFKRGSALEE181KENKILVKETGYFFIYGQVLYTDKTYAMGHLIQRKKVHVFGDELSLVTLFRCIQNMPETL241PNNSCYSAGIAKLEEGDELQLAIPRENAQISLDGDVTFFGALKLL小鼠BAFF序列(SEQIDNO:17):1MDESAKTLPPPCLCFCSEKGEDMKVGYDPITPQKEEGAWFGICRDGRLLAATLLLALLSS61SFTAMSLYQLAALQADL丽L匿LQSYRGSATPAAAGAPELTAGVKLLTPAAPRPHNSSR121GHRNRRAFQGPEETEQDVDLSAPPAPCLPGCRHSQHDDNGMNLRNIIQDCLQLIADSDTP181TIRKGTYTFVPWLLSFKRGNALEEKENKIVVRQTGYFFIYSQVLYTDPIFAMGHVIQRKK241VHVFGDELSLVTLFRCIQNMPKTLPNNSCYSAGIARLEEGDEIQLAIPRENAQISRNGDD301TFFGALKLLBAFF的生物学活性可选自促进B细胞存活、促进B细胞成熟及与BR3结合。BAFF变体优选与BAFF多肽的天然序列具有至少80°/。或上至100%的任意连续整数，包括更优选至少90%，甚至更优选至少95。/。氨基酸序列同一性。"天然序列"BAFF多肽包括与衍生自自然界的相应BAFF多肽具有相同氨基酸序列的多肽。例如，BAFF在用弗林型蛋白酶从细胞表面切下后以可溶形式存在。此类天然序列BAFF多肽可以从自然界分离，或者可以通过重组和/或合成手段生成。术语"天然序列BAFF多肽"或"天然BAFF，明确涵盖该多肽的天然存在的截短或分泌形式(例如胞外结构域序列)、天然存在的变体形式(例如可变剪接形式)、及天然存在的等位变体。术语"BAFF"包括下列文献中记载的那些多肽Shuda/.，《/丄ewA:oc;^所o/.,65:680(1999);GenBank编号AF136293;WO1998/18921，公布于1998年5月7日；EP869,180，公布于1998年10月7日；WO1998/27114，公布于1998年6月25日；WO1999/12964，公布于1999年3月18日；WO1999/33980,公布于1999年7月8日；Moore"Sc/e"ce,285:260-263(1999);Schneiderda/.,/五;cp.MW.，189:1747-1756(1999);Mukhopadhyayda/"所o/.C77ew.,274:15978-15981(1999)。术语"BAFF拮抗剂，，在用于本文时以最广义使用，包括任何如下所述的分子(1)结合天然序列BAFF多肽或结合天然序列BR3从而部分或完全阻断BR3与BAFF多肽的相互作用，及(2)部分或完全阻断、抑制或中和天然序列BAFF的活性。在一个优选的实施方案中，要阻断的BAFF受体是BR3受体。天然BAFF活性促进B细胞存活和/或B细胞成熟等。在一个实施方案中，BAFF活性的抑制、阻断或中和导致B细胞数目减少。依照本发明的BAFF拮抗剂将在体外和/或在体内部分或完全阻断、抑制或中和BAFF多肽的一种或多种生物学活性。在一个实施方案中，生物学活性BAFF在体外和/或在体内加强下列任一事件或事件组合B细胞存活增加、IgG和/或IgM水平增加、浆细胞数目增加、及脾B细胞中NF-Kb2/100加工成p52NF-Kb(例如Batten"a/.，/192:1453-1465(2000);Moore"a/"Sc&"ce285:260-263(1999);Kayagakida/"7mmww'(y17:515-524(2002》。用来部分或完全阻断、抑制或中和BAFF信号传导。例如，BAFF拮抗剂可直接结合BAFF。例如，设想了这样的BAFF抗体它们结合人BAFF中包含残基162-275和/或选自人BAFF的162、163、206、211、231、233、264和265的残基的邻近残基的区域，使得抗体在空间上阻碍BAFF与BR3结合，其中所述残基编号依照SEQIDNO:16。在另一个例子中，直接结合物是这样的多肽，它包含BAFF受体中任何结合BAFF的部分，诸如BAFF受体的胞外结构域，或其结合天然BAFF的片段和变体。在另一个例子中，BAFF拮抗剂包括这样的多肽，它们具有包含下面式I所示序列的多肽的序列X1画C誦X3一D画X5"L一X7画X8-X9画X10画X11画X12画G誦X14一X15-Xi6國Xn(式I)(SEQIDNO:18)其中XpX3、X5、X7、X8、X9、X0、Xn、X12、X14、X!5和Xn是除了半胱氨酸之外的任何氨基酸；及其中Xw是选自L、F、I和V的氨基酸；且其中所述多肽在式I最靠N端的半胱氨酸C的N端一侧7个氨基酸残基之内及最靠C端的半胱氨酸C的C端一侧7个氨基酸残基之内不含半胱氨酸。在一个实施方案中，包含式I序列的多肽具有通过二石克键相连的两个C;X5LX7Xs形成I型p转角结构的构象，其中转角的中心位于L和X7之间；且乂8的二面角cp(phi)具有正值。在一个实施方案中，Xn)选自W、F、V、L、I、Y、M和非极性氨基酸。在另一实施方案中，X^是W。在另一实施方案中，X3是选自M、V、L、I、Y、F、W和非极性氨基酸的氨基酸。在另一实施方案中，Xs选自V、L、P、S、I、A和R。在另一实施方案中，X选自V、T、I和L。在另一实施方案中，Xs选自R、K、G、N、H和D-氨基酸。在另一实施方案中，X9选自H、K、A、R和Q。在另一实施方案中，Xn是I或V。在另一实施方案中，Xu选自P、A、D、E和S。在另一实施方案中，X,6是L。在一个特定实施方案中，式I序列是选自ECFDLLVRAWVPCSVLK(SEQIDNO:19)、ECFDLLVRHWVPCGLLR(SEQIDNO:20)、ECFDLLVRRWVPCEMLG(SEQIDNO:21)、ECFDLLVRSWVPC画LR(SEQIDNO:22)、IDNO:24)的序列。在一个优选实施方案中，BAFF拮抗剂包含选自SEQIDNO:19、20、21、22和23的任一氨基酸序列。在另一个例子中，BAFF拮抗剂包括这样的多肽，它们具有包含式II序列的多肽的序列X,誦C-X3画D-X5匿L-V-X8画X9画W-V-P画C-XM-X!5-L陽Xn(式II)(SEQIDNO:25)其中X。X3、X5、X8、X9、X14、Xu和Xn是除了半胱氨酸之外的任何氨基酸；且其中所述多肽在式II最靠N端的半胱氨酸C的N端一侧7个氨基酸残基之内及最靠C端的半胱氨酸C的C端一侧7个氨基酸残基之内不含半胱氨酸。在一个实施方案中，包含式II序列的多肽具有两个C之间的二硫键；具有XsLX7X8形成I型卩转角结构的构象，其中转角的中心位于L和X7之间；且X8的二面角cp具有正值。在式II的另一实施方案中，X3是选自M、A、V、L、I、Y、F、W及非极性氨基酸的氨基酸。在式II的另一实施方案中，Xs选自V、L、P、S、I、A和R。在式II的另一实施方案中，Xs选自R、K、G、N、H及D-氨基酸。在式II的另一实施方案中，X9选自H、K、A、R和Q。在又一个实施方案中，由其衍生胞外结构域或其BAFF结合片段或BAFF结合变体的BAFF受体是TACI、BR3或BCMA。或者，BAFF拮抗剂可以与天然序列BR3的胞外结构域在其BAFF结合区处结合，^v而在体外、原位或在体内部分或完全阻断、抑制或中和BAFF与BR3的结合。例如，这样的间接拮抗剂是如下所述的抗BR3抗体它结合BR3中包含如下文定义的人BR3(SEQIDNO:26)的残基23-38的区域或这些残基的邻近区域，从而在空间上阻碍人BR3与BAFF的结合。在有些实施方案中，依照本发明的BAFF拮抗剂包括包含BAFF受体胞外在又一个实施方案中，由其衍生胞外结构域或其BAFF结合片段或BAFF结合变体的BAFF受体是TACI、BR3或BCMA。在另一实施方案中，所述免疫粘附素包含如上所述的式I或式II的氨基酸序列，包括选自SEQIDNO:19、20、21、22、23和24的任一氨基酸序列。根据一个实施方案，BAFF拮抗剂以100nM或更小的结合亲和力结合BAFF多肽或BR3多肽。才艮据另一实施方案，BAFF拮抗剂以IOnM或更小的结合亲和力结合BAFF多肽或BR3多肽。根据另一实施方案，BAFF拮抗剂以1nM或更小的结合亲和力结合BAFF多肽或BR3多肽。术语"BR3"、"BR3多肽"或"BR3受体"在用于本文时涵盖"天然序列BR3多肽"和"BR3变体"(本文对其有进一步定义)。"BR3"用于指称包含下文所示氨基,列的那些多肽及其同系物，及其结合天然BAFF的变体或片段人BR3序列(SEQIDNO:26):1MRRGPRSLRGRDAPAPTPCVPAECFDLLVRHCVACGLLRTPRPKPAGASSPAPRTALQPQ61ESVGAGAGEAALPLPGLLFGAPALLGLALVLALVLVGLVSWRRRQRRLRGASSAEAPDGD121KDAPEPLDKV11LSPGISDATAPA群PGEDPGTTPPGHSVPVPATELGSTELVTTKTAG181PEQQ本发明的BR3多肽可以从多种来源分离，例如来自人组织类型或来自另一来源，或通过重组和/或合成方法制备。术语BR3包括WO2002/24909和WO2003/14294中记载的BR3多肽。"天然序列"BR3多肽或"天然BR3"包括与衍生自自然界的相应BR3多肽具有相同氨基酸序列的多肽。此类天然序列BR3多肽可以从自然界分离，或者可以通过重组和/或合成手段生成。术语"天然序列BR3多肽"明确涵盖该多肽的天然存在的截短、可溶或分泌形式(例如胞外结构域序列)、天然存在的变体形式(例如可变剪接形式)、及天然存在的等位变体。本发明的BR3多肽包括这样的BR3多肽其包含人BR3(SEQIDNO:26)的氨基酸残基l到184的连续序列或者由其組成。BR3"胞外结构域"或"ECD"指BR3多肽基本上不含跨膜结构域和胞质结构域的形式。ECD形式的BR3包括这样的多肽，其包含选自人BR3的氨基酸1-77、2-62、2-71、1-61、7-71、23-38和2-63的任一氨基酸序列。本发明设想了这样的BAFF拮抗剂它们是包含任一上述ECD形式的人BR3及其结合天然BAFF的变体和片段的多肽。微型(Mini)BR3指BR3的BAFF结合域中26个残基的核心区域，即氨基酸序列TPCVPAECFDLLVRHCVACGLLRTPR(SEQIDNO:27)。"BR3变体"意指这样的BR3多肽，其与天然序列全长BR3或BR3ECD具有至少约80。/。的氨基酸序列同一性并结合天然序列BAFF多肽。任选的是，BR3变体包含单个富含半胱氨酸结构域。此类BR3变体多肽包括例如这样的BR3多肽，其中在全长氨基酸序列的N端和/或C端处及一个或多个内部结构域中添加或删除了一个或多个氨基酸残基。还设想了BR3ECD的结合天然序列BAFF多肽的片段。根据一个实施方案，BR3变体多肽与人BR3多肽或其特定片段(例如ECD)具有至少约80。/。的氨基酸序列同一性，至少约81%的氨基酸序列同一性，至少约82%的氨基酸序列同一性，至少约83%的氨基酸序列同一性，至少约84°/。的氨基酸序列同一性，至少约85。/。的氨基S吏序列同一性，至少约86%的氨基酸序列同一性，至少约87%的氨基酸序列同一性，至少约88%的氨基酸序列同一性，至少约89%的氨基酸序列同一性，至少约90%的氨基酸序列同一性，至少约91%的氨基酸序列同一性，至少约92%的氨基酸序列同一性，至少约93%的氨基酸序列同一性，至少约94%的氨基酸序列同一性，至少约95%的氨基酸序列同一性，至少约96%的氨基酸序列同一性，至少约97%的氨基酸序列同一性，至少约98%的氨基酸序列同一性或至少约99%的氨基酸序列同一性。BR3变体多肽不涵盖天然BR3多肽序列。根据另一实施方案，BR3变体多肽的长度为至少约10个氨基酸，长度为至少约20个氨基酸，长度为至少约30个氨基酸，长度为至少约40个氨基酸，长度为至少约50个氨基酸，长度为至少约60个氨基酸或长度为至少约70个氨基酸。在一个优选实施方案中，本文中的BAFF拮抗剂是包含BR3、TACI或BCMA或其结合BAFF的变体中结合BAFF的一部分的免疫粘附素。在其它实施方案中，BAFF拮抗剂是BAFF抗体。"BAFF抗体"是结合BAFF的抗体，优选在人BAFF中包含本文在"BAFF，定义下公开的人BAFF序列(SEQIDNO:16)的残基162-275的区域内结合BAFF。在另一实施方案中，BAFF拮抗剂是BR3抗体。"BR3抗体"是结合BR3的抗体，优选在人BR3中包含本文在"BR3"定义下公开的人BR3序列(SEQIDNO:26)的残基23-38的区域内结合BR3的抗体。一般而言，本文所述人BAFF和人BR3的氨基酸位置是依照本文在"BAFF，和"BR3"定义下所公开的人BAFF和人BR3(即分别为SEQIDNO:16和26)的序列编号方式。BAFF结合多肽或BAFF抗体的其它例子可见于例如WO2002/092620;WO2003/014294;Gordonetal/Biochemistry42(20):5977-5983(2003);Kelleyetal.,J.Biol.Chem.279(16):16727-16735(2004);WO1998/18921;WO2001/12812;WO2000/68378;WO2000/40716。"包装插页，，用于指通常包括在治疗用产品的商业包装中的说明书，它们包含有关涉及此类治疗用产品应用的适应征、用法、剂量、施用、禁忌症、与该包装产品联合的其它治疗用产品和/或警告等的信息。"药物"或"药剂"指治疗关节损伤或其症状或副作用的活性药。II.治疗一方面，本发明提供治疗受试者诸如患者中的关节损伤的方法，包括给受试者施用结合B细胞表面标志的拮抗剂，优选抗体，更优选CD20抗体，并通过放射照相术x-射线来评估受试者是否在治疗后显示出关节损伤减轻。如此，本发明设想了用于治疗受试者中的关节损伤的方法，包括给受试者施用结合B细胞表面标志的拮抗剂，并在给药之后至少大约一个月，给予受试者放射照相术检查以测量关节损伤与该次给药之前的基线相比的减轻，其中施用的拮抗剂的量在实现关节损伤减轻中是有效的，指示该受试者成功的治疗了关节损伤。本发明还设想了用于治疗受试者中的关节损伤的方法，包括给受试者施用结合B细胞表面标志的抗体，并且在给药之后至少大约一月，给予受试者放射照相术检查以测量关节损伤与该次给药之前的基线相比的减轻，其中施用的抗体的量在实现关节损伤减轻中是有效的，指示该受试者成功的治疗了关节损伤。本发明进一步设想了用于治疗受试者中的关节损伤的方法，包括给受试者施用CD20抗体，并且在给药之后至少大约一月，给予该受试者放射照相术检查以测量关节损伤与该次给药之前的基线相比的减轻，其中施用的CD20抗体的量在实现关节损伤减轻中是有效的，指示该受试者成功的治疗了关节损伤。在一个优选的实施方案中，施用拮抗剂或抗体诸如CD20抗体之后的放射照相术检查发生在施用该拮抗剂或抗体之后至少大约二个月，更优选至少大约10周，仍更优选至少大约三个月，进一步优选至少大约四个月，仍更优选至少大约五个月，进一步更优选至少大约24个周，或至少大约六个月，且最优选至少大约52个周。在另一个优选的实施方案中，该检验测量修正的Sharp总分。在另一个优选的实施方案中，受试者接受复治，即该方法进一步包括以与在先施用拮抗剂或抗体诸如CD20抗体的效果相比有效实现持续的或维持的关节损伤减轻的量给受试者施用拮抗剂或抗体诸如CD20抗体。如此，可以给受试者施用第二剂拮抗剂或抗体，并在所述第二剂之后至少大约一个月(优选超过大约两个月，更优选大约24周或大约6个月)通过放射照相术检查进行评估，以确定第二剂是否有效(即施用了有效量的拮抗剂或抗体)维持第一剂的效果或者与第一剂的效果相比增进关节损伤的减轻。此复治方案可以重复，只要是实现或维持关节损伤减轻所需要的或必需的，其指示关节损伤的成功治疗。在另一个实施方案中，将拮抗剂或抗体诸如CD20抗体额外的(继续的)施用给受试者，即使在先给药诸如第一次施用拮抗剂或抗体之后的放射照相术检查时受试者没有临床改善。在后一种实施方案中，优选的是，临床改善是通过评估触痛的或肿胀的关节数目、4艮屑病评估严重性指数、受试者的整体临床评估、评估红细胞沉降率、或评估C-反应蛋白水平的量而确定的。为本发明目的，用于复治的第二次拮抗剂或抗体暴露指在初始抗体暴露之后下一次用拮抗剂或例如CD20抗体处理该受试者，在该初始暴露与第二次暴露之间没有居间的拮抗剂或例如CD20抗体处理或暴露。这样的复治可以是有安排的或未安排的，但是优选是安排好的再次给药，特别是用于保护器官诸如肾以免损伤。如果采用抗体，尤其是CD20抗体，那么优选的是第二次抗体暴露是大约0.5到4克，更优选大约1.5到3.5克，仍更优选大约1.5到2.5克，直到距初始暴露大约20到35周(优选大约23到30周，更优选大约23到28周)才会提供第二次暴露。该方法设想了给受试者施用有效量的拮抗剂或例如CD20抗体以提供第三次拮抗剂或抗体暴露(如果是抗体的话，更优选CD20抗体)，优选大约0.5到4克，更优选大约1.5到3.5克，仍更优选大约1.5到2.5克，直到距初始暴露大约46到60周(优选大约46到55周，更优选大约46到52周)才会提供第三次暴露。优选的是，直到距初始暴露至少大约70-75周才会提供更多的拮抗剂或抗体暴露，仍更优选的是，直到距初始暴露大约74到80周才会提供更多的拮抗剂或抗体暴露。在采用抗体的情况中，本文中的任何一次或多次抗体暴露可以以单剂抗体或多剂抗体例如l-4剂抗体(例如由第一和第二剂，或者第一、第二、和第三剂，或者第一、第二、第三、和第四剂构成，等等)的形式提供给受试者。每次抗体暴露所采用的具体剂数(无论是一、二或三或更多)取决于例如所治疗关节损伤的类型、所采用抗体的类型、是否采用下述第二药物、采用什么类型的下述第二药物、及使用多少下述第二药物、及施用的方法和频率。在施用多剂的情况中，优选在距施用在先的剂的时间大约1到20天，更优选大约6到16天，最优选大约14到16天施用在后的剂(例如第二剂或第三剂)。多剂优选在大约1天和4周之间，更优选在大约1和20天之间的总时期内(例如在6-18天的时期内)施用。在一个这样的方面，多剂大约是一周一次施用的，第二剂在距第一剂大约一周时施用，任何第三剂或后续剂在距第二剂大约一周时施用。多剂的每剂抗体优选是大约0.5到1.5克，更优选大约0.75到1.3克。在一个最优选的实施方案中，提供了治疗受试者中的关节损伤的方法，包括给受试者施用有效量的结合B细胞表面标志的抗体(例如CD20抗体)以提供初始抗体暴露，接着是第二抗体暴露，其中直到距初始暴露大约16到54周才会提供第二暴露，而且每次抗体暴露以单剂或者以两或三剂抗体提供给受试者。优选的是，在这样一种方法中，抗体暴露是每次大约0.5到4克，最优选上文给出的量。在一个实施方案中，给受试者提供至少大约三次抗体暴露，例如大约3到60次暴露，更特别的是大约3到40次暴露，最特别的是大约3到20次暴露。优选的是，这样的暴露是以24周每次间隔施用的。在一个实施方案中，每次抗体暴露是以单剂抗体提供的。在一个备选实施方案中，每次抗体暴露是以多剂抗体提供的。然而，不是每次抗体暴露需要都以单剂或多剂提供。在一个优选的实施方案中，施用大约2-3克CD20抗体作为初始暴露。如果施用大约3克，那么在大约三周里一周一次施用大约1克CD20抗体作为初始暴露。如果施用大约2克CD20抗体作为初始暴露，那么施用大约1克CD20抗体，接着在大约两周后施用另一个大约l克抗体作为初始暴露。在一个优选的方面，第二次暴露距初始暴露大约24周或六个月，并且施用大约2克的量。在另一个优选的方面，第二次暴露距初始暴露大约24周或六个月，并且施用大约1克的CD20抗体，接着在大约两周后施用另一个大约l克的抗体。在本文中的多次暴露方法的一个优选实施方案中，受试者在初始或任何稍后拮抗剂或抗体暴露之后处于消退中。更优选的是，本文中的多次暴露方法牵涉安排好的再次给药或复治，使得在提供第二次，和优选的所有拮抗剂或抗体暴露时受试者处于消退中。这样的再次给药是安排用以预防任何复发、再次发作或器官损伤，而不是在治疗上处理它。最优选的是，自复治方法中所使用的最后一次拮抗剂或抗体暴露起至少大约24周或六个月，仍最优选至少大约九个月，且甚至仍最优选至少大约52周或一年，受试者处于消退中。在又一个实施方案中，至少两次拮抗剂或抗体暴露，优选每次拮抗剂或抗体暴露用相同的拮抗剂或抗体，诸如CD20抗体治疗受试者。如此，初始和第二次拮抗剂或抗体暴露优选使用相同的拮抗剂或抗体，更优选所有拮抗剂或抗体暴露使用相同的拮抗剂或抗体，即前两次暴露，优选所有暴露的治疗使用一种类型的结合B细胞表面标志的拮抗剂或抗体，诸如CD20抗体，例如都使用利妥昔单抗或者都使用相同的人源化2h7。在本文所列所有方法中，拮抗剂(例如CD20或B细胞表面标志抗体)可能是未偶联的，诸如棵抗体，或者可以偶联有另一分子，用于增进有效性，诸如例如为了延长半衰期。本文中优选的CD20抗体是嵌合的、人源化的、或人的CD20抗体，更优选利妥昔单抗、人源化2H7(例如包含SEQIDNO:2和8中的可变域序列，或者包含SEQIDNO:39和40中可变域序列，或者包含SEQIDNO:32和33中的可变域序列，或者包含在SEQIDNO:8中具有改变N100A、或D56A+N100A、或D56A+N100Y+S100aR的重链可变域及在SEQIDNO:2中具有改变M32L、或S92A、或M32L+S92A的轻链可变域)、嵌合的或人源化的A20抗体(Immunomedics)、HUMAX-CD20TM人CD20抗体(Genmab)、或与CD20结合的单链蛋白质(TrubionPharmInc.)。更优选的是利妥昔单抗或人源化2H7。在本文所有方法的另一个实施方案中，受试者以前从未用一种或多种药物，诸如用抗TNF-a抑制剂，例如抗TNF-a或抗TNF-a受体抗体来治疗例如关节炎，或者用免疫抑制剂来治疗关节损伤或潜在原因诸如自身免疫性病症，和/或以前从未用针对B细胞表面标志的拮抗剂(例如抗体)治疗过(例如以前从未用CD20抗体治疗过)。在这样一种实施方案中，受试者以前从未用以下药剂治疗过抗a4整联蛋白抗体或共刺激调控物、生物学药剂、MTX以外的DMARD，除了辟。唑嘌呤和/或来氟米特、细胞消减疗法，包括调查中的药剂(例如CAMPATH、抗CD4、抗CD5、抗CD3、抗CD19、抗CDlla、抗CD22、或BLys/BAFF)、活的/减毒的疫苗(在基线前28天内)、或关节内的或胃肠外的糖皮质激素(在基线前4周内)。在又一个方面，在接受上述任何方法的治疗之前，包括在初始或稍后的拮抗剂或抗体暴露之后，受试者可能已经具有关节损伤复发或者遭受器官损伤诸如肾损伤。然而，优选的是，受试者没有关节损伤复发，更优选的是，至少在初始治疗之前还没有这样的复发。在另一个实施方案中，拮抗剂(例如CD20抗体)是施用给受试者以治疗关节损伤的唯一药物。在另一个实施方案中，拮抗剂(例如CD20抗体)是用于治疗关节损伤的药物之一。在又一个实施方案中，受试者没有恶性肿瘤，包括实体瘤、血液学恶性肿瘤、或原位癌(除了已经切除并痊愈的皮肤的基细胞和鳞状细胞癌)。在又一个实施方案中，受试者没有类风湿性关节炎(RA)。在另一个方面，受试者没有RA以外的风湿性自身免疫病，或者RA继发的重大系统性牵涉(包括但不限于血管炎、肺纤维化或费耳提氏综合征)。在另一个实施方案中，受试者患有继发性斯耶格伦氏综合征或继发性限制性皮肤血管炎。在另一个实施方案中，受试者没有RA功能性状态ACR分类所定义的功能性IV级。在又一个实施方案中，受试者没有RA以外的炎性关节病(包括但不限于痛风、反应性关节炎、银屑病关节炎、血清阴性的脊推关节病、莱姆病)、或其它系统性自身免疫性病症(包括但不限于系统性红斑狼疮、炎性肠病、硬皮病、炎性肌病、混合性结締组织病、或任何重叠综合征)。在另一个实施方案中，受试者在16岁以前没有幼年型特发性关节炎(JIA)或幼年型RA(JRA)和/或RA。在另一个实施方案中，受试者没有重大的和/或不受控制的心或肺病(包括梗阻性肺病)、或重大的伴发病，包括但不限于神经系统、肾、肝、内分泌或胃肠病症，也没有原发性或继发性免疫缺陷(历史或当前活动性的)，包4舌HIV感染的已知历史。在另一个方面，受试者没有可影响任何疗效评估的任何神经学的(先天性的或获得性的)、血管的或系统性的病症，特别是关节痛和肿胀(例如帕金森氏病、大脑性瘫痪、糖尿病性神经病变)。在又一个实施方案中，受试者没有多发性硬化。在又一个实施方案中，受试者没有狼疮或斯耶格伦氏综合征。在又一个实施方案中，受试者没有自身免疫病。在本发明的又一个方面，关节损伤与自身免疫病或关节炎以外的自身免疫病，或者与发生自身免疫病或关节炎以外的自身免疫病的风险无关。为了这最后一些声明的目的，本文中的"自身免疫病"指源于且针对个体自身组织或器官的疾病或紊乱或其共分离(co-segregate)或表现或由其导致的状况。不限于任何一种理论，B细胞通过众多机制途径在人自身免疫病中展现了致病性效果，包括自身抗体的生成、免疫复合物的形成、树突细胞和T细胞的激活、细胞因子的合成、直接的趋化因子释放、及提供巢(nidus)供异位新淋巴生成。这些途径中的每一个不同程度的参与自身免疫病的病理。在一个优选的实施方案中，关节损伤是由以下原因引起的关节炎、整形植入物的无菌关节松动、骨折的不愈合、脊推关节病、银屑病、或克罗恩氏病。更优选的是，关节损伤是由关节炎引起的，更优选的是类风湿性关节炎、骨关节炎、强直性脊柱炎、或4艮屑病关节炎。在进一步的实施方案中，如果拮抗剂是抗体，那么该抗体是静脉内或皮下施用的。在进一步的优选方面，如果拮抗剂是抗体，那么该抗体是以大约0.4到4克，更优选大约1.5到3.5克，仍更优选大约1.5到2.5克的一剂施用的。在另一个方面，该抗体优选是以一剂大约0.4到1.3克、以在大约一个月的时期内一到四剂的频率施用的，更优选大约500毫克到1.2克，仍更优选大约500毫克或大约750毫克到大约1.1克，更优选的是，该抗体是以两到三剂施用的。仍更优选的是，该抗体是在大约2到3周的时期内施用的。在另一个优选的方面，受试者是类风湿因子阴性的。在另一个方面，受试者是类风湿因子阳性的。在上文所述方法的另一个优选的方面，在基线或开始治疗之前给受试者施用曱氨蝶呤。更优选的是，曱氨蝶呤是以一剂大约10-25毫克/周施用的。并且，优选的是，在基线之前施用曱氨蝶呤至少大约12周，仍更优选的是，在基线之前的最后4周施用稳定剂量的曱氨蝶呤。在其它实施方案中，曱氨蝶呤是口服或胃肠外施用的。在上文所述方法的特别优选的实施方案中，关节损伤是由类风湿性关节炎引起的，而且受试者展现出对一种或多抗肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂的响应不足，和/或曱氨蝶呤与该拮抗剂例如CD20抗体一起施用给受试者，和/或该拮抗剂是在治疗开始的第l天和第15天以大约1000毫克x2的一剂静脉内施用的CD20抗体。在又一个实施方案中，本发明提供了监测受试者中的关节损伤治疗的方法，包括给受试者施用有效量的B细胞表面标志拮抗剂(诸如抗体，包括CD20抗体)，并且距该次施用至少大约一个月之后通过放射照相术测量关节损伤相对于该次给药之前的基线是否减轻，其中治疗后受试者中对比于基线的减轻指示该拮抗剂或抗体诸如CD20抗体正在对关节损伤产生效果。优选的是，在施用拮抗剂或抗体诸如CD20抗体之后再次测量对比于基线的减轻程度。并且，优选的是，距该次施用至少大约24周之后进行测量。本发明还包括监测受试者中的关节损伤治疗的方法，包括给受试者施用有效量的B细胞表面标志拮抗剂(诸如抗体，包括CD20抗体)，并且距该次施用至少大约52周之后通过放射照相术测量关节损伤相对于该次给药之前的基线是否减轻，其中治疗后受试者中对比于基线的减轻指示该拮抗剂或抗体诸如CD20抗体正在对关节损伤产生效果。优选的是，在施用拮抗剂或抗体诸如CD20抗体之后再次测量对比于基线的减轻程度。在又一个方面，本发明提供了确定是否要继续给具有关节损伤的受试者施用B细胞表面标志拮抗剂(诸如抗体，包括CD20抗体)的方法，包括通过放射照相术测量第一次施用拮抗剂诸如CD20抗体之后受试者关节损伤的减轻，通过放射照相术测量第二次施用拮抗剂诸如CD20抗体之后受试者关节损伤的减轻，比较第一次和第二次时受试者的放射照相术得分，如果第二次的得分比第一次少，那么继续施用拮抗剂或抗体诸如CD20抗体。在又一个实施方案中，治疗方法包括检验给药步骤之后受试者对治疗的响应的步骤，用于确定该响应水平对于治疗关节损伤是否有效。例如，包括检验给药之后的放射照相术得分并与给药以前获得的基线放射照相术得分比较的步骤，用于通过测量是否发生变化和变化了多少来确定治疗是否有效。此检验可以在给药之后以多种有安排的或未安排的时间间隔重复，用于确定任何部分或完全消退的维持。或者，本文中的方法包括在给药前检验受试者的步骤，用于了解是否存在关节损伤的一种或多种生物标志物或症状，如上文所列。在另一种方法中，可以包括在给受试者施用抗体或拮抗剂之前检查受试者病历的步骤，如上文所详述的，例如用于排除感染或恶性肿瘤作为受试者疾患的原因，例如主要原因的情况。优选的是，关节损伤是原发性的(例如首要疾病)，而且不是继发性的，例如感染或恶性肿瘤继发的，不管是实体瘤或液体瘤。在本文所有方法的一个实施方案，在拮抗剂诸如CD20抗体以外没有给受试者施用其它药物来治疗关节损伤。在本文中的任何方法中，优选的是，可以与结合B细胞表面标志的拮抗剂或抗体一起给受试者施用有效量的第二药物(其中结合B细胞表面标志的拮抗剂或抗体(例如CD20抗体)是第一药物)。第二药物可以是一种或多种药物，包括例如免疫抑制剂、细胞因子拮抗剂诸如细胞因子抗体、生长因子、激素、整联蛋白、整联蛋白拮抗剂或抗体、或其任何组合。此类第二药物的类型取决于多种因素，包括关节损伤的类型、关节损伤的严重性、受试者的状况和年龄、所采用的第一药物的类型和剂量、等等。此类额外药物的例子包括干扰素类药物诸如干扰素-a(例如来自AmarilloBiosciences,Inc.)、IFN-卩-la(REBIF和AVONEX)或IFN匿卩-1b(BETASERON),寡肽诸如醋酸格拉默(COPAXONE⑧)，阻断CD40-CD40配体的药剂，免疫抑制剂(例如米托蒽醌(NOVANTRONE⑧)、曱氨蝶呤、环磷酰胺、苯丁酸氮齐、来氟米特、和硫唑嘌呤)，静脉内免疫球蛋白(y球蛋白)，淋巴细胞消减疗法(例如米托蒽醌、环磷酰胺、CAMPATHtm抗体、抗CD4、克拉屈滨、有至少两个结构域包含受到自身反应性B细胞的Ig受体特异性识别的脱免疫(de-immunized)、自身反应性抗原或其片段的多肽构建体(WO2003/68822)、全身照射、骨髓移植)，整联蛋白拮抗剂或抗体(例如LFA-l抗体诸如可以从Genentech购买的efalizumab/RAPTIVA⑧、或a4整联蛋白抗体诸如可以从Biogen购买的natalizumab/ANTEGREN⑧、或上文所述其它抗体)，治疗关节损伤继发的或相关的症状的药剂诸如本文中所记载的那些，类固醇诸如皮质类固醇(例如泼尼松龙、曱泼尼龙诸如SOLU-medroltm注射用曱泼尼龙琥珀酸钠、泼尼松诸如低剂量泼尼松、地塞米松、或糖皮质激素，例如经由关节注射，包括系统性皮质类固醇疗法)，非淋巴细胞消减免疫抑制疗法(例如MMF或环孢霉素)，"抑制素/他汀"(statin)类降低胆固醇的药物(包括西立伐他汀(cerivastatin)(BAYCOLTM)、氟伐他汀(fluvastatin)(LESCOL)、阿托伐他汀(atorvastatin)(LIPITORTM)、洛伐他汀(lovastatin)(mevacortm)、普伐他汀(pravastatin)(PRAVACHOLTM)和辛伐他汀(simvastatin)(ZOCORTM)，雌二醇，睾酮(任选提高的剂量)(Stuveetal.Neurology8:290-301(2002)),雄激素，激素代替疗法，TNF抑制剂诸如TNF-a的抗体，DMARD,NSAID，血浆去除术或血浆交换，曱氧千啶-磺胺曱口恶唑(BACTRIM,SEPTRA),霉酚酸吗乙酯，H2-阻断剂或质子泵抑制剂(在利用潜在溃疡原性的免疫抑制疗法期间)，左旋曱状腺素，环孢菌素A(例如SANDIMMUNE)，促生长素抑制素(somatastatin)类似物，DMARD或NSAID，细胞因子拮抗剂诸如抗体，抗代谢物，免疫抑制剂，康复性手术，放射碘，曱状腺切除术，BAFF拮抗剂诸如BAFF或BR3抗体或免疫粘附素，抗CD40受体或抗CD40配体(CD154),抗IL-6受体拮抗剂/抗体，另一种B细胞表面拮抗剂或抗体诸如人源化2H7或其它人源化的或人的CD20抗体与利妥昔单抗；IL-1阻断剂，诸如rHUIL-lRa(Amgen-Synergen)和p塞洛芬酸I-lB抑制剂(Hoechst);和共刺激改性剂，诸如ORENCIA⑧(abatacept)(Bristol-MyersSquibb);恩莫单抗(enlimomab)(抗ICAM-1单克隆抗体)；CDO-855(人源化抗体，其特异性结合n型MHC复合物的一个区域，Celltech);CH-3298(Chiroscience);阿西美辛(acemetacin)(Merck);GW353430(抗CD23单克隆抗体，GlaxoWellcome);GR252025(COX02抑制剂，GlaxoWellcome);4162W94(抗CD4人源化抗体；GlaxoWellcome);硫唑噤呤(DMARD,GlaxoWelcome);青霉胺和非诺洛芬(fenoprofen)(EliLilly);等等。优选的此类药物是抗生素、抗整联蛋白、Y球蛋白、疼痛控制剂、整联蛋白拮抗剂、抗CD4、克拉屈滨、曱氧千啶-磺胺曱D恶唑、H2阻断剂、质子泵抑制剂、环孢霉素、抑制素/他汀类降低胆固醇的药物、雌二醇、睾酮、雄激素、激素代替药物、TNF抑制剂诸如TNF-a抑制剂、DMARD、NSAID(用于治疗例如肌肉骨胳的症状)、左旋曱状腺素、环孢菌素A、促生长素抑制素(somatastatin)类似物、细胞因子拮抗剂(包括细胞因子受体拮抗剂)、抗代谢物、BAFF拮抗剂诸如BAFF抗体或BR3抗体(尤其是BAFF抗体)、免疫抑制剂诸如曱氨蝶呤或皮质类固醇、二碳磷酸盐化合物(bisphosphonate)、激素、和另一种B细胞表面标志抗体、诸如利妥昔单抗与人源化2H7或其它人源化CD20抗体的组合。更优选的此类药物是抗生素、免疫抑制剂诸如曱氨蝶呤或皮质类固醇、DMARD、疼痛控制剂、整联蛋白拮抗剂、NSAID、细胞因子拮抗剂、二碳磷酸盐化合物、或激素、或其组合。在一个特别优选的实施方案中，第二药物是DMARD，其优选选自金诺芬、氯喹、D-青霉胺、可注射的金、口服的金、羟氯会、柳氮磺吡啶、硫代myocrisin和曱氨蝶呤。在另一个此类实施方案中，第二药物是NSAID，其优选选自颇得斯安、美沙拉秦、安萨科、磷酸可待因、贝诺酯、芬布芬、萘普生、双氯芬酸、依托度酸和口引咮美辛、阿司匹林和布洛芬。在另一个此类实施方案中，第二药物是疼痛控制剂，其优选选自对乙酰氨基酚以及右丙氧芬。在又一个此类实施方案中，第二药物是免疫抑制剂，其优选选自依那西普、英夫利昔单抗、阿达木单抗、来氟米特、阿那白滞素、硫唑嘌呤、曱氨蝶呤、和环磷酰胺。在其它优选实施方案中，第二药物选自OPG,依那西普、英夫利昔单抗、依那西普、阿达木单抗、kinaret、raptiva、骨保护素(OPG)、RANKFc、抗RANKL、pamidronate、阿伦膦酸盐、actonel、唑来膦酸盐、氯膦酸盐、曱氨蝶呤、azulfidine、羟氯喹、多西环素、来氟米特、柳氮磺吡啶(SSZ)、泼尼松龙、白介素-l受体拮抗剂、泼尼松和甲泼尼龙。在进一步优选的实施方案中，第二药物选自英夫利昔单抗、英夫利昔单抗+曱氨蝶呤(MTX)组合、依那西普、皮质类固醇、环孢菌素A、硫唑噪呤、金诺芬、羟氯喹(HCQ)、泼尼松龙+MTX+SSZ的组合、MTX+SSZ+HCQ的组合、环磷酰胺+硫唑噪呤+HCQ的组合、阿达木单抗+MTX的组合。如果第二药物是皮质类固醇，优选的是，它是泼尼松、泼尼松龙、曱泼尼龙、氬化可的松、或地塞米松。并且，优选的是，皮质类固醇的施用量低于不给用皮质类固醇治疗的受试者施用CD20抗体时的用量。最优选的是，第二药物是曱氨蝶呤。所有这些第二药物可以彼此组合或者单独与第一药物一起使用，因此表述"第二药物"在用于本文时不意味着它是第一药物以外的唯一药物。如此，第二药物不必是一种药物，而是可以包含超过一种此类药剂。本文所列的这些第二药物通常以与上文所用相同的剂量和施用途径或者迄今所用剂量的大约1-99%使用。如果确实使用此类第二药物，那么优选它们以低于不存在第一药物时的量使用，尤其是在第一药物的初始服药之后的后续给药中，以便消除或降低由此引起的副作用。对于本文所述复治方法，其中第二药物以有效量与拮抗剂或抗体暴露一起施用，它可以与任何暴露一起施用，例如，只与一次暴露或者与超过一次暴露一起施用。在一个实施方案中，第二药物与初始暴露一起施用。.在另一个实施方案中，第二药物与初始和第二暴露一起施用。在又一个实施方案中，第二药物与所有暴露一起施用。优选的是，在初始暴露(诸如类固醇的)之后，降^f氐或清除此类第二药物的量以减少受试者对具有副作用的药剂诸如泼尼松、泼尼松龙、曱泼尼龙、和环磷酰胺的暴露。第二药物的联合施用包括使用分开的配制剂或单一的药用配制剂的共施用(同时施用)，以及任一次序的序贯施用，其中优选有一段时间这两种(或这多种)活性剂(药物)同时发挥其生物学活性。本文中的抗体或拮抗剂以任何合适手段施用，包括胃肠外、表面、皮下、腹膜内、肺内、鼻内和/或损伤内施用。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内(i.v.)、动脉内、腹膜内或皮下施用。还设想了膜/鞘内施用(参见例如US2002/0009444，Grillo-Lopez,AconcerningintrathecaldeliveryofaCD20antibody)。另外，还可合适的通过脉沖输注来施用抗体或拮抗剂，例如用剂量逐渐减少的抗体或拮抗剂。优选静脉内或皮下给药，更优选静脉内输注。如果提供多次抗体暴露，那么每次暴露可以使用相同的或不同的施用手段来提供。在一个实施方案中，每次暴露通过静脉内施用。在另一个实施方案中，每次暴露通过皮下施用给予。在又一个实施方案中，所述暴露通过静脉内和皮下施用二者给予。在一个实施方案中，以緩慢的静脉内输注而非静脉内推注或快速注射来施用CD20抗体。例如，在CD20抗体的任何输注之前约30分钟施用类固醇诸如泼尼松龙或曱泼尼龙(例如静脉内约80-120毫克，更优选静脉内约100毫克)。所述CD20抗体是通过例如专用线路输注的。对于多剂CD20抗体暴露的初始剂，或者对于所述暴露只包括一剂的单剂，此类输注优选以约50毫克/小时的速率开始。这可逐步^^是高，例如，每约30分钟速率提高约50毫克/小时直至约400毫克/小时的最大值。然而，如果受试者正发生输注相关反应，那么输注速率优选降低至例如当前速率的一半，例如从100毫克/小时降低至50毫克/小时。优选的是，CD20抗体此类剂(例如约1000毫克总剂量)的输注用约255分钟(4小时15分钟)完成。优选的是，受试者在开始输注前大约30至60分钟通过口接受醋氨酚/对乙酰氨基酚(例如约l克)和盐酸苯海拉明(diphenhydramineHCl)(例如约50毫克或相似药剂的等效剂量)的预防性处理。如果给予超过一次的CD20抗体输注(剂)以完成整个暴露，那么优选在此输注实施方案中以高于初始输注的速率开始第二或随后的CD20抗体输注，例如约100毫克/小时。此速率可以逐步提高，例如每约30分钟速率提高约100毫克/小时直至约400毫克/小时的最大值。发生输注相关反应的受试者优选将输注速率降低至该速率的一半，例如从100毫克/小时降低至50毫克/小时。优选的是，此类第二剂或随后剂的CD20抗体(例如约1000毫克总剂量)的输注用约195分钟(3小时15分钟)完成。在另一个实施方案中，提供了治疗受试者中的关节损伤的方法，包括给受试者施用B细胞表面标志拮抗剂诸如抗体，例如CD20抗体，并且，在该次给药之后至少大约52周，给予该受试者放射照相术检查以测量关节损伤相比给药之前基线的减轻，其中施用的拮抗剂或抗体诸如CD20抗体的量在实现关节损伤减轻中是有效的，指示受试者得到成功的治疗。在这种方法中，优选的是，所述检验测量改良Sharp总分。在另一个优选的实施方案中，所述拮抗剂是CD20抗体。更优选的是，所述CD20抗体是利妥昔单抗，或者是包含SEQIDNO:2和8中的可变域序列的人源化2H7，或者是包含SEQIDNO:39和40中的可变域序列的人源化2H7，或者是包含SEQIDNO:32和33中的可变域序列的人源化2H7，或者是包含在SEQIDNO:8中具有改变N100A、或D56A+N100A、或D56A+N100Y+S100aR的重链可变域及在SEQIDNO:2中具有改变M32L、或S92A、或M32L+S92A的轻链可变域的人源化2H7。在另一个优选的实施方案中，所述关节损伤是由关节炎，优选RA，更优选早期活动性RA引起的。在另一个优选的实施方案中，所述受试者在该治疗方法中施用第一剂拮抗剂或抗体诸如CD20抗体之前以前从未用免疫抑制剂治疗过。在一个优选的实施方案中，所述拮抗剂或抗体是以大约0.4到4克的一剂施用的，更优选的是，所述拮抗剂或抗体是以大约0.4到1.3克的一剂施用的，频率为在大约一个月的时期内一到四剂。仍更优选的是，所述剂是大约500毫克到1.2克，在其它实施方案中，是大约750毫克到1.1克。在这样的方面，所述拮抗剂或抗体优选以两到三剂施用，和/或在大约2到3周的时期内施用。在另一个方面，这样的方法进一步包括复治受试者，即通过给受试者提供额外的施用如下量的拮抗剂诸如CD20抗体，所述量有效实现关节损伤与在先施用拮抗剂或抗体诸如CD20抗体的效果相比有持续的或维持的减轻。在这个实施方案的一方面，将所述拮抗剂或抗体诸如CD20抗体额外施用给受试者，即使受试者在在先给药之后的放射照相术检查时没有临床改善。所述复治可以开始于第一次施用拮抗剂诸如CD20抗体之后至少大约24周，并且任选开始一次或多次进一步的复治。在另一个实施方案中，所述进一步的复治开始于第二次施用拮抗剂诸如CD20抗体后至少大约24周。在又一个优选的方面，复治后的关节损伤与第一次放射照相术评估之后的关节损伤程度相比有减轻。优选的是，在关于大约52周评估的此方法中，施用有效量的第二药物，其中拮抗剂或抗体诸如CD20抗体是第一药物。在一个方面，第二药物是超过一种药物。在另一个方面，第二药物是抗生素、免疫抑制剂、緩解病情的抗风湿药(DMARD)、痛疼控制剂、整联蛋白拮抗剂、非类固醇抗炎药(NSAID)、细胞因子拮抗剂、二碳磷酸盐化合物、或激素、或其组合，最优选曱氨蝶呤。受试者可以是类风湿因子阴性的或阳性的。并且，优选的是，拮抗剂诸如CD20抗体是静脉内或皮下施用的，最优选静脉内施用。下面讨论了生成、修饰、和配制这样的抗体的方法。III.抗体的生成本发明的方法和制品使用或包含与B细胞表面标志结合的抗体，尤其是与CD20结合的抗体。因此，本文将描述用于生成此类抗体的方法。将用于生成或筛选抗体的CD20抗原可以是例如可溶形式的CD20或其包含期望表位的部分。或者/另外，在其细胞表面表达CD20的细胞可用于生成或筛选抗体。可用于生成抗体的其它形式的CD20对本领域技术人员将是显而易见的。下面的描述例示了用于生产依照本发明使用的抗体的方法。(T)多克隆抗体多克隆抗体优选在动物中生成，通过多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂。使用双功能或衍生化试剂，例如马来酰亚氨基苯曱酰基磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基偶联)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2或R^NONR(其中R和W是不同的烃基)，将相关抗原与在待免疫物种中有免疫原性的蛋白质偶联可能是有用的，例如匙孔UiA蓝蛋白、血清清蛋白、牛曱状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂。通过将例如100吗或5吗蛋白质或偶联物(分别用于兔或小鼠)与3倍体积的弗氏完全佐剂混和并将该溶液皮内注射于多个部位，将动物针对抗原、免疫原性偶联物或衍生物进行免疫。l个月后，通过多个部位的皮下注射，用弗氏完全佐剂中初始量l/5-l/10的肽或偶联物对动物进行加强免疫。7-14天后，采集动物的血液并测定血清的抗体滴度。对动物进行加强免疫直到滴度达到平台(plateau)。优选的是，将动物用相同抗原但与不同蛋白质和/或通过不同交联剂偶联得到的偶联物进行加强免疫。偶联物还可在重组细胞培养中作为蛋白质融合物来制备。同样，适当使用凝聚剂诸如明矾来增强免疫应答。单克隆抗体单克隆抗体是由一群基本上同质的抗体获得的，即构成群体的各个抗体相同和/或结合相同表位，除了在生产单克隆抗体的过程中产生的可能变体外，此类变体一般以极小量存在。由此，修饰语"单克隆，，指明抗体的特征，即不是分立的或多克隆的抗体的混合物。例如，单克隆抗体可使用最初由Kohleraa/.,Atoww256:495(1975)记载的杂交瘤方法来制备，或者可以通过重组DNA方法(美国专利No.4,816,567)来制备。在杂交瘤方法中，如上所述免疫小鼠或其它适宜的宿主动物，诸如仓鼠，以引发生成或能够生成如下抗体的淋巴细胞，所述抗体将特异性结合用于免疫的蛋白质。或者，可以在体外免疫淋巴细胞。然后，使用合适的融合剂诸如聚乙二醇将淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以形成杂交瘤细胞(Goding，JW"owoc/o"a/^4wrifeodZes:/V/"")/^aweiVac//ce,pp.59-103，AcademicPress,1986)。将如此制备的杂交瘤细胞在合适的培养基中接种和培养，所述培养基优选含有抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞生长或存活的一种或多种物质。例如，若亲本骨髓瘤细胞缺乏酶次黄噤呤鸟噪呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，则用于杂交瘤的培养基典型的将含有次黄噪呤、氨基喋呤和胸苦(HAT培养基)，这些物质阻止HGPRT缺陷细胞生长。优选的骨髓瘤细胞是那些高效融合、支持所选抗体生成细胞稳定的高水平生成抗体、并对诸如HAT培养基的培养基敏感的。在这些细胞中，优选的骨髓瘤细胞系是鼠骨髓瘤系，诸如那些可从索尔克研究所细胞分配中心(SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,California,USA)获4寻的MOPC-21和MPC-ll小鼠肺瘤及可从美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Rockville，Maryland,USA)获得的SP-2或X63-Ag8-653细胞所衍生的。人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也已记载用于生成人单克隆抗体(Kozbor，/Twwwwo/.133:3001(1984);Brodeura/"Afowoc/owa/Jwf/60(i7尸radwWowrec/w—aw//^p/Zca/Zfrns,pp.51-63,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987)。可对杂交瘤细胞正在其中生长的培养液测定针对抗原的单克隆抗体的生成。优选的是，通过免疫沉淀或通过体外结合测定法，诸如放射免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA)，测定由杂交瘤细胞生成的单克隆抗体的结合特异性。单克隆抗体的结合亲和力可通过例如Munson"/.，Aoc/ze肌107:220(1980)的Scatchard分析来测定。在鉴定得到生成具有期望特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，该克隆可通过有限稀释规程进行亚克隆并通过标准方法进行培养(Goding,Mowoc/o"fl/^4w"6W饥'/Wwcz)/^尸rac/7'ce,pp.59-103，AcademicPress,1986)。适于这一目的的培养基包括例如D-MEM或RPMI-1640培养基。另外，杂交瘤细胞可在动物中作为腹水瘤进行体内培养。可通过常规免疫球蛋白纯化规程，诸如例如蛋白A-SEPHAROSETM、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析，将亚克隆分泌的单克隆抗体与培养液、腹水或血清适当分开。编码单克隆抗体的DNA易于使用常规规程分离和测序(例如通过使用能够特异性结合编码鼠抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。以杂交瘤细胞作为此类DNA的优选来源。一旦分离，可将DNA置'于表达载体中，然后将该表达栽体转染到原本不生成免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞中，诸如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞，以在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。关于编码抗体的DNA在细菌中的重组表达的纟宗述'〖生论文包4舌Skerrada/"Cwr(9/^'m'owiwmwwo/.5:256-262(1993)和Pliickthun，/wm柳o/.130:151-188(1992)。在又一个实施方案中，可以从使用McCaffertyaa/.,348:552-554(1990)所记载的技术构建的噬菌体抗体库分离抗体或抗体片段。Clacksonda/.,Atow"352:624-628(1991)和MarksWa/"/Mo/.所o/.222:581-597(1991)分别记载了使用噬菌体文库分离鼠和人抗体。后续出版物记载了通过链改组(Marks&,"/o/Tec/z"o/ogv10:779-783(1992)),以及组合感染和体内重组作为构建非常大的噬菌体文库的策略(WaterhouseWa/.，M/c.i仏21:2265-2266(1993))，生成高亲和力(nM范围)的人抗体。如此，这些技术是用于分离单克隆抗体的传统单克隆抗体杂交瘤技术的可行替代方法。还可以修饰DNA,例如通过替代即用人重链和轻链恒定域的编码序列代替同源鼠序歹'J(美国专利No.4,816,567;MorrisonWiVa".5W.USA81:6851(1984)),或通过将非免疫球蛋白多肽的整个或部分编码序列与免疫球蛋白编码序列共价连接。典型的是，用此类非免疫球蛋白多肽替代抗体的恒定域，或者用它们替代抗体的一个抗原结合位点的可变域，以产生嵌合二价抗体，其包含对一种抗原具有特异性的一个抗原结合位点和对不同抗原具有特异性的另一个抗原结合位点。另外，包含对FqR有高亲和力的变异Fc区的抗体可用于治疗其中希望效应细胞功能的功效增强的疾病，诸如自身免疫病，例如US2005/0037000和WO2004/63351(Macrogenics，Inc.STAVENHAGENetal)中所列举的。(iii)人源化抗体本领域已经记载了用于将非人抗体人源化的方法。优选的是，人源化抗体具有一个或多个从非人来源引入的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常常称作"输入"残基，它们典型的取自"输入"可变域。人源化可基本上遵循Winter及其同事的方法进行(Jonesda/.，A^wm321:522-525(1986);Riechmanna/"332:323-327(1988);Verhoeyenda/"5We"ce239:1534-1536(1988)),通过用高变区序列替代人抗体的相应序列。因此，此类"人源化"抗体是嵌合抗体(美国专利No.4,816,567),其中基本上少于整个人可变域用来自非人物种的相应序列替代。在实践中，人源化抗体典型的是其中一些高变区残基和可能的一些FR残基用来自啮齿类抗体中类似位点的残基替代的人抗体。用于构建人源化抗体的人可变域的选择，包括轻链和重链二者，对于降低抗原性非常重要。依照所谓的"最适"(best-fit)方法，用啮齿类抗体的可变域序列对已知的人可变域序列的整个文库进行筛选。然后选择与啮齿类序列最接近的人序列作为人源化抗体的人框架区(FR)(Sims"a/.,J!/mww"o/.151:2296(1993);ChothiaM/.196:901(1987))。另一种方法使用由特定轻链或重链可变区亚组的所有人抗体的共有序列衍生的特定框架区。同一框架可用于数种不同的人源化抗体(CarterWa/.,Prac.M"Jcad5W.89:4285(1992);Prestada/.，/wmw"o/,151:2623(1993》。更为重要的是，抗体在人源化后保持对抗原的高亲和力和其它有利的生物学特性。为了实现这一目标，依照一种优选的方法，通过使用亲本和人源源化抗体。三维免疫球蛋白模型是公众可获得的且为本领域技术人员所熟悉。可获得图解和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序。检查这些显示图像容许分析残基在候选免疫球蛋白序列行使功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可以从受体和输入序列选出FR残基并进行组合，从而获得期望的抗体特征，诸如对靶抗原的亲和力提高。一般而言，高变区残基直接且最实质的涉及对抗原结合的影响。(iv)人抗体作为人源化的替代方法，可生成人抗体。例如，现在有可能生成在缺乏内源免疫球蛋白生成的情况下能够在免疫后生成人抗体完整全集的转基因动物(例如小鼠)。例如，已经记载了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(Jh)基因的纯合删除导致内源抗体生成的完全抑制。在此类种系突变小鼠中转移大量人种系免疫球蛋白基因将导致在抗原攻击后生成人抗体。参见例如Jakobovits&"/，淑/.5W.L/iX490:2551(1993);Jakobovits"胸,362:255-258(1993》Brugg飄anna/.，7離/画画.7:33(1993);美国专利No.5,591,669、5，589,369和5,545,807。或者，噬菌体展示技术(McCafferty"a/.,Atoww348:552-553(1990))可用于在体外从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变(V)域基因全集生成人抗体和抗体片段。依照这种技术，将抗体V结构域基因以符合读码框的方式克隆入丝状噬菌体诸如M13或fd的主要或次要外壳蛋白基因，并在噬菌体颗粒表面上展示为功能性抗体片段。因为丝状噬菌体颗粒包含噬菌体基因组的单链DNA拷贝，以抗体的功能特性为^出进行的选择也导致编码展示那些特性的抗体的基因的选择。如此，噬菌体模拟B细胞的一些特性。噬菌体展示可以多种格式进行；有关综述参见例如JohnsonefCwreW(9p/"/ow〖"5^w"wra/3:564-571(1993)。V基因区段的数种来源可用于噬菌体展示。Clackson""/.，A^w352:624-628(1991)从衍生自经免疫小鼠脾的小型V基因随机组合文库分离得到大量不同的抗D恶唑酮抗体。可本质上遵循Marksa/"/Mo/.Ao/.222:581-597(1991)或Griffith12:725-734(1993)所记载的技术，自未免疫人供体构建V基因全集和分离针对大量不同抗原(包括自身抗原)的抗体。还可参见美国专利No.5，565，332和5,573,905。还可以由体外激活的B细胞来生成人抗体(参见美国专利No.5，567，610和5,229,275)。(V)抗体片段已经开发了用于生成抗体片段的多种技术。传统上，通过蛋白水解消化完整抗体来衍生这些片段(参见例如Morimoto"Jow"a/o/所oc/zem/ca/朋d5—/z戸'ca/MeAo^is24:107-117(1992》Brennan&a/"5We"ce229:81(1985))。然而，现在可直接由重组宿主细胞生成这些片^殳。例如，可以从上文讨论的噬菌体抗体库分离抗体片段。或者，可直接从大肠杆菌回收Fab'-SH片段并化学偶联以形成F(ab')2片段(Carterda/.，5/o/rec/z"o/ogy10:163-167(1992))。依照另一种方法，可直接从重组宿主细胞培养物分离F(ab')2片段。用于生成抗体片段的其它技术对熟练从业人员将是显而易见的。在其它实施方案中，所选抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO93/16185;美国专利No.5,571,894;美国专利No.5,587,458。抗体片段还可以是"线性抗体",例如如美国专利No.5，641，870中所记载的。此类线性抗体片段可以是单特异性的或双特异性的。(Vi)双特异性抗体双特异性抗体指具有对至少两种不同表位的结合特异性的抗体。例示性的双特异性抗体可结合CD20抗原的两种不同表位。其它此类抗体可结合CD20并进一步结合第二种B细胞表面标志。或者，可将抗CD20结合臂与结合白细胞上触发分子诸如T细胞受体分子(例如CD2或CD3)或IgG的Fc受体(FcyR)(诸如FcYRI(CD64)、FcyRII(CD32)和FcyRI11(CD16))的臂组合在一起，使得细胞防御机制聚焦于B细胞。双特异性抗体还可用于将某些药剂定位至B细胞。这些抗体具有CD20结合臂和结合该药剂(例如曱氨蝶呤)的臂。可将双特异性抗体制备成全长抗体或抗体片段(例如F(ab')2双特异性抗体)。用于构建双特异性抗体的方法是本领域已知的。全长双特异性抗体的传统生成基于两对免疫球蛋白重链-轻链的共表达，其中两条链具有不同的特异性(Millstein&A^w^305:537-539(1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤(四源杂交瘤(quadroma))生成10种不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和层析步骤进行的正确分子的纯化相当麻烦且产物产量低。WO93/08829及Trauneckerda/.,五M50J10:3655-3659(1991)中披露了类似的规程。依照一种不同的方法，将具有期望结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变域与免疫球蛋白恒定域序列融合。融合优选使用包含至少部分铰链、CH2和CH3区的免疫球蛋白重链恒定域。优选的是，至少一种融合物中存在包含轻链结合所必需的位点的重链第一恒定区(CH1)。将编码免疫球蛋白重链融合物和(如果需要)免疫球蛋白轻链的DNA插入分开的表达载体，并共转染入合适的宿主生物体。在用于构建的三种多肽链比例不等时提供最佳产量的实施方案中，这为调整三种多肽片段的相互比率提供了极大的灵活性。然而，在至少两种多肽链以相同比率表达导致高产量时或在该比率没有特别意义时，有可能将两种或所有三种多肽链的编码序列插入同一个表达载体。在该方法的一个优选实施方案中，双特异性抗体由一个臂上具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链和另一个臂上的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。由于免疫球蛋白轻链仅在半个双特异性分子中的存在提供了分离的便利途径，因此发现这种不对称结构便于将期望的双特异性复合物与不想要的免疫球蛋白链组合分开。该方法披露于WO94/04690。关于生成双特异性抗体的进一步详情参见例如Sureshd"/.,Mef/zotfe￡>72>wo/ogv121:210(1986)。依照美国专利No.5,731，168中记载的另一种方法，可改造一对抗体分子之间的界面，以将从重组细胞培养物回收的异二聚体的百分比最大化。优选的界面包含至少部分抗体恒定域的CH3结构域。在该方法中，将第一抗体分子的界面的一个或多个小氨基酸侧链用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换。通过将大氨基酸侧链用较小氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换，在第二抗体分子的界面上产生大小与大侧链相同或相似的补偿性"空腔"。这提供了较之其它不想要的终产物诸如同二聚体提高异二聚体产量的机制。双特异性抗体包括交联的或"异源偶联的"抗体。例如，异源偶联物中的一种抗体可以与亲合素偶联，另一种与生物素偶联。例如，此类抗体建议用于将免疫系统细胞靶向不想要的细胞(美国专利No.4,676,980),及用于治疗HIV感染(WO91/00360;WO92/200373;EP03089)。可使用任何便利的交联方法来制备异源偶联抗体。合适的交联剂是本领域众所周知的，并且连同许多交联技术一起披露于美国专利No.4,676,980。文献中还记载了自抗体片段生成双特异性抗体的技术。例如，可使用化学连接来制备双特异性抗体。Brennan"a/.,5Wewce229:81(1985)记载了通过蛋白水解切割完整抗体以生成F(ab')2片段的规程。将这些片段在存在二硫醇络合剂亚砷酸钠时还原，以稳定邻近的二硫醇并防止分子间二硫键形成。然后将产生的Fab，片段转变为硫代硝基苯曱酸酯(TNB)衍生物。然后将Fab'-TNB衍生物之一通过巯基乙胺的还原重新恢复成Fab'-硫醇，并与等摩尔量的另一种Fab'-TNB衍生物混合，以形成双特异性抗体。产生的双特异性抗体可用作酶的选择性固定化试剂。还已记载了直接从重组细胞培养物制备和分离双特异性抗体片段的多种技术。例如，已使用亮氨酸拉链来生成双特异性抗体(KostelnyW//mww"o/.148(5):1547-1553(1992))。将来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合与两种不同抗体的Fab'部分连接。抗体同二聚体在铰链区还原而形成单体，然后重新氧化而形成抗体异二聚体。这种方法也可用于生成抗体同二聚体。由Hollingerd7VW/.^cad90:6444-6448(1993)记载的"双抗体"技术提供了构建双特异性抗体片段的替代机制。该片段包含通过接头相连的重链可变域(VH)和轻链可变域(vo，所述接头太短使得同一条链上的两个结构域之间不能配对。因此，迫使一个片段上的Vh和Vl結构域与另一个片段上的互补Vt和VH结构域配对，由此形成两个抗原结合位点。还已报道了通过使用单链Fv(sFv)二聚体构建双特异性抗体片段的另一种策略。参见Gruber/wmw"o/.152:5368(1994)。设想了具有超过两个效价的抗体。例如，可制备三特异性抗体。Tutt"a/.，//w聽"o/.147:60(1991)。IV.抗体的偶联物和其它修饰本文设想了抗体的修饰。如此，在一个实施方案中，可以将抗体与另一分子偶联，例如用以延长半衰期或提高稳定性或在其它方面改进抗体的药动学。例如，可以将抗体与多种非蛋白质性质聚合物中的一种连接，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧化烯、或聚乙二醇与聚丙二醇的共聚物。连有一个或多个PEG分子的抗体片段(诸如Fab')是本发明的一个尤其优选的实施方案。本文公开的抗体还可配制成脂质体。可通过本领域知道的方法来制备包含抗体的脂质体，诸如Epsteinda/.,尸rac.7V""爿c^/.5W.82:3688(1985);Hwang"a/.，尸rac.A^/.^cad5W.77:4030(1980);美国专利No.4，485，045和4,544，545;WO97/38731，公布于1997年10月23日中所记载的。美国专利No.5，013,556中披露了循环时间延长的脂质体。特别有用的脂质体可以用含有磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物通过反相蒸发法生成。将脂质体挤过具有限定孔径的滤器，以产生具有期望直径的脂质体。可以将本发明抗体的Fab，片段经二硫化物交换反应与脂质体偶联，如Martinaa/.,/CTzew.257:286-288(1982)中所记载的。设想了本文所述蛋白质或肽抗体的氨基酸序列修饰。例如，可能希望改进抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。通过将适宜的核苷酸变化引入抗体核酸或者通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如抗体氨基酸序列内的残基删除和/或插入和/或替代。只要最终的构建物具有期望的特性，可进行删除、插入和替代的任意组合以获得最终的构建物。氨基酸变化还可改变抗体的翻译后加工，诸如改变糖基化位点的数目或位置。可用于鉴定抗体中作为优选诱变位置的某些残基或区域的一种方法称作"丙氨酸扫描诱变"，如CunninghamandWells,^SWe"ce244:1081-1085(1989)所记载的。这里，鉴定了一个残基或一组靶残基(例如带电荷的残基，诸如arg、asp、his、lys、和glu)，并用中性或带负电荷的氨基酸(最优选丙氨酸或聚丙氨酸)替换，以影响氨基酸与抗原的相互作用。然后通过在或对替代位点引入更多或其它变体，推敲那些对替代展现出功能敏感性的氨基酸位置。如此，虽然引入氨基^列变异的位点是预先决定的，但是突变本身的性质不需要预先决定。例如，为了分析给定位点处的突变的后果，在靶密码子或区域进行丙氨酸扫描诱变或随机诱变，并对所表达的抗体变体筛选期望活性。氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端的融合，长度范围从一个残基至包含上百个或更多残基的多肽，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N-末端曱硫氨酰残基的抗体或者与多肽或聚合物融合的抗体。抗体分子的其它插入变体包括在抗体的N-或C-末端融合酶或延长抗体血清半衰期的多肽。另一类变体是氨基酸替代变体。这些变体在抗体分子中有至少一个氨基酸残基用不同残基替换。抗体中最感兴趣进行替代诱变的位点包括高变区，但也设想了FR改变。保守替代显示在下表中标题"优选替代，，下。如果此类替代导致生物学活性的变化，那么可以引入下表中称为"例示替代，，的更多实质性变化，或如下文中关于氨基酸种类的进一步描述，并筛选产物。<table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table>对抗体生物学特性的实质性修饰通过选择在保持以下方面的效果上显著不同的替代来完成(a)替代区域的多肽主链的结构，例如作为折叠片或螺旋构象，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。根据其侧链特性的相似性，可以将氨基酸如下分组(A.L.Lehninger，说oc/^w/s^v,第2版，pp.73-75,WorthPublishers,NewYork,(1975)):(1)非极性的Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、lie(1)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)(2)不带电荷的、极性的Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)(3)酸性的Asp(D)、Glu(E)(4)石成性的Lys(K)、Arg(R)、His(H)或者，基于共同的侧链特性，可以将天然存在残基如下分组(1)疏水性的正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、lie;(2)中性的、亲水性的Cys、Ser、Thr、Asn、Gin;(3)酸性的Asp、Glu;(4)石咸性的His、Lys、Arg;(5)影响链取向的残基Gly、Pro;(6)芳香力臭的Trp、Tyr、Phe。非保守替代将需要用这些类别之一的一个成员替换另一个类别的。任何不牵涉保持抗体正确构象的半胱氨酸残基也可替代，一般用丝氨酸，以改进分子的氧化稳定性和防止异常交联。相反，可以向抗体中添加半胱氨酸键以改进其稳定性(特别是当抗体是抗体片段诸如Fv片段时)。特别优选的一类替代变体牵涉替代亲本抗体的一个或多个高变区残基。一般而言，选择用于进一步开发的所得变体相对于产生它们的亲本抗体将具有改良的生物学特性。用于产生此类替代变体的一种便利方法是使用噬菌体展示的亲和力成熟。简而言之，将数个高变区位点(例如6-7个位点)突变，在每个位点产生所有可能的氨基酸替代。如此产生的抗体变体以单价形式展示在丝状噬菌体颗粒上，作为与每个颗粒内包装的Mi3基因in产物的融合物。然后如本文所公开的对噬菌体展示的变体筛选其生物学活性(例如结合亲和力)。为了鉴定用于修饰的候选高变区位点，可进行丙氨酸扫描诱变以鉴定对抗原结合具有重要贡献的高变区残基。或者/另外，分析抗原-抗体复合物的晶体结构，以鉴定抗体与抗原之间的接触点可能是有益的。此类接触残基及邻近残基是依照本文详述的技术进行替代的候选位点。一旦产生此类变体，就如本文所述对该组变体进行筛选，可选择在一种或多种相关测定法中具有优良特性的抗体用于进一步的开发。抗体的另一类氨基酸变体改变了抗体的原始糖基化样式。此类改变包括删除在抗体中发现的一个或多个碳水化合物模块，和/或添加抗体中不存在的一个或多个糖基化位点。多肽的糖基化典型的或是N-连接的或是O-连接的。N-连接指碳水化合物模块附着于天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸)是将碳水化合物模块酶促附着于天冬酰胺侧链的识别序列。如此，多肽中这两种三肽序列任一的存在产生了潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化指将糖类N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附着于羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，但也可使用5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸。向抗体添加糖基化位点可通过改变氨基酸序列使其包含一个或多个上述三肽序列而便利的完成(用于N-连接的糖基化位点)。该改变还可通过向原始抗体的序列中添加或替代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基来进行(用于O-连接的糖基化位点)。若抗体包含Fc区，则可改变附着其上的碳水化合物。例如，美国专利申请US2003/0157108(Presta,L.)中记载了有缺少岩藻糖的成熟碳水化合物结构附着于抗体Fc区的抗体。还可参见US2004/0093621(KyowaHakkoKogyoCo"Ltd.)。WO03/011878(Jean-Mairet"a/.)和美国专利No.6,602,684(Umana"a/.)中提到了在附着于抗体Fc区的碳水化合物中有等分N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)的抗体。WO97/30087(Patel"a/.)中报告了在附着于抗体Fc区的寡糖中有至少一个半乳糖残基的抗体。关于有更改碳水化合物附着于其Fc区的抗体还可参见WO1998/58964(Raju，S.)和WO1999/22764(Raju,S.)。还可参见US2005/0123546(Umanaetal)，其关于具有改良糖基化的抗原结合分子。本文中优选的糖基化变体包含Fc区，其中附着于Fc区的碳水化合物结构缺少岩藻糖。此类变体具有改良的ADCC功能。任选的是，Fc区进一步包含进一步改进ADCC的一个或多个氨基酸替代，例如Fc区第298、333和/或334位(Eu残基编号方式)的替代。涉及"脱岩藻糖型，，或"岩藻糖缺陷型"抗体的出版物的例子包括US2003/0157108;WO2000/61739;WO2001/29246;US2003/0115614;US2002/0164328;US2004/0093621;US2004/0132140;US2004/0110704;US2004/0110282;US2004/0109865;WO2003/085119;WO2003/084570;WO2005/035586;WO2005/035778;WO2005/053742;OkazakiWa/.，■/Mo/.B/o/.336:1239-1249(2004);Yamane-Ohnuki"a/"肠&c/7.87:614(2004)。生成脱岩藻糖化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖化缺陷的Lec13CHO细胞(Ripka"a/.，v4rc/z.所oc/zem.B/op/^.249:533-545(1986);美国专利申请US2003/0157108Al,Presta，L;WO2004/056312Al,AdamsW尤其是实施例ll)和敲除细胞系，诸如a-l,6-岩藻糖转移酶基因FLTS敲除的CHO细胞(Yamane-Ohnuki"a/.,5/o^c/z.所oe"g.87:614(2004))。编码抗体氨基酸序列变体的核酸分子可通过本领域知道的多种方法来制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然存在氨基酸序列变体的情况中)，或者通过对早期制备的变体或非变体型式的抗体进行寡核苦酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒式诱变来制备。可能希望在效应器功能方面》务饰本发明的抗体，例如增强抗体的ADCC和/或CDC。这可通过在抗体Fc区中引入一处或多处氨基酸替代来实现。或者/另外，可以在Fc区中引入半胱氨酸残基，从而容许在该区中形成链间二硫键。如此产生的同二聚体抗体可具有改良的内在化能力和/或提高的补体介导的细胞杀伤和ADCC。参见Caronaa/.，/MW.176:1191-1195(1992)和Shopes，/^wm/"o/.148:2918-2922(1992)。同二聚体抗体还可使用如Wolff&a/.,Owcw及&^aw/z53:2560-2565(1993)中记载的异双功能交联剂来制备。或者，抗体可改造成具有双重Fc区，由此可具有增强的补体溶胞和ADCC能力。参见Stevensond^""-C騰erZ)，D^y^73:219-230(1989)。WO00/42072(Presta，L.)记载了在存在人效应细胞时具有改良的ADCC功能的抗体，其中所述抗体在其Fc区中包含氨基酸替代。优选的是，具有改良的ADCC的抗体在Fc区的第298、333和/或334位包含替代。优选的是，改变的Fc区是在这些位置中的一个、两个或三个处包含替代或由其组成的人IgGlFc区。W099/51642、美国专利No.6,194,551Bl、美国专利No.6,242,195Bl、美国专利No.6，528，624Bl和美国专利No.6,538,124(Idusogie&a/.)中记载了具有改变的Clq结合和/和CDC的抗体。所述抗体在其Fc区的第270、322、326、327、329、313、333和/或334位氨基酸中的一个或多个处包含氨基酸替代。为了延长抗体的血清半衰期，可以将补救受体结合表位掺入抗体(尤其是抗体片段)，如例如美国专利No.5,739,277中所记载的。在用于本文时，术语"补救受体结合表位"指IgG分子(例如IgGpIgG2、IgG3或IgGj的Fc区中负责延长IgG分子体内血清半衰期的表位。WO00/42072(Presta，L.)中记载了其Fc区中有替代且血清半衰期延长的抗体。还设想了具有三个或更多(优选四个)功能性抗原结合位点的工程化抗体(美国专利申请US2002/0004587Al，Miller""/.)。V.药用配制剂依照本发明使用的抗体的治疗用配制剂通过将具有期望纯度的抗体与任选的药剂学可接受的载体、赋形剂或稳定剂C^脂力gtowk户/wrwacew^a/5We"ces，第16版，Osol，A.编(1980))混合，以冻干配制剂或水溶液的形式制备供贮存。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，包括緩沖剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和曱硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二曱基千基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵、苯索氯铵；酚、丁醇或苯曱醇；对羟基苯曱酸烷基酯，诸如对羟基苯曱酸曱酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间曱酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA;糖类，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICStm或聚乙二醇(PEG)。例示性的抗CD20抗体配制剂记载于WO98/56418。该出版物记载了一种液体多剂配制剂，其包含40mg/mLrituximab,25mM乙酸盐，150mM海藻糖,0.9%苯曱醇，0.02%聚山梨醇酯20pH5.0,最小保存期是于2-8。C保存两年。另一种感兴趣的抗CD20配制剂在9.0mg/mL氯化钠，7.35mg/mL二水合柠檬酸钠，0.7mg/mL聚山梨醇酯80,和注射用无菌水pH6.5中包含10mg/mLrituximab。适于皮下施用的冻干配制剂记载于美国专利No.6,267,958(Andya"/.)。此类冻干配制剂可以用合适的稀释剂重建至高蛋白质浓度，重建的配制剂可皮下施用于本文中待治疗的哺乳动物。还设想了结晶形式的抗体。参见例如US2002/0136719Al(Shenoy"本文中的配制剂还可在必要时含有超过一种活性化合物(上文所述的第二药物)，优选那些活性互补且彼此没有不利影响的。此类药物的类型和有效量取决于例如配制剂中存在的抗体的量及受试者的临床参数。优选的此类药物是上文所述的。活性成分还可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶嚢中(例如分别是羟曱基纤维素或明胶微胶嚢和聚(曱基丙烯酸曱酯)微胶嚢)，在胶状药物投递系统中(例如脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶嚢)，或在粗滴乳状液中。此类技术4皮露于^^抓'"^0"'>尸//"^^(^""(^/5We"ces,第16版，Osol,A.编(1980)。可制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有抗体的固体疏水性聚合物半透性基质，该基质是定型产品的形式，例如薄膜或微胶嚢。持续释放基质的例子包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-曱基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利No.3,773,919)、L-谷氨酸与L-谷氨酸y乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物诸如LUPRONDEPOTtm(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)、及聚—D-(-)-3-羟基丁酸。用于体内施用的配制剂必须是无菌的。这可容易的通过使用无菌滤膜过滤来实现。VI.制品在本发明的另一个实施方案中，提供了含有可用于治疗上文所述的关节损伤的材料的制品。具体而言，本发明提供了一种制品，其包括(a)容器，其中装有结合B细胞表面标志的拮抗剂诸如抗体(例如CD20抗体)(优选的是，该容器在该容器内装有抗体及药剂学可接受的载体或稀释剂)；和(b)包装插页，其印有治疗受试者中的关节损伤的说明书，其中所述说明书表明对受试者施用拮抗剂或抗体(例如CD20抗体)，然后在施药后至少大约l个月进行射线照相测试，测量关节损伤与施药前基线相比的降低，其中拮抗剂或抗体诸如CD20抗体的施用量有效实现关节损伤的降低，表明受试者得到了成功治疗。在此发明方面的一个优选实施方案中，本发明的制品还包括装有第二药物的容器，其中拮抗剂或抗体是第一药物，而且制品还在包装插页上包含用有效量的第二药物治疗受试者的说明书。第二药物可以是任何上文列出的那些药物，例示性的第二药物就是那些上文所列的，包括抗生素、免疫抑制剂、緩解病情的抗风湿药(DMARD)、疼痛控制剂、整联蛋白拮抗剂、非类固醇抗炎药(NSAID)、细胞因子拮抗剂、二膦酸盐、或激素，或其组合，更优选DMARD、NSAID、疼痛控制剂、或免疫抑制剂。最优选的是，第二药物是曱氨蝶呤。在此方面，包装插页在容器上或伴随容器。合适的容器包括例如瓶(bottles)、小瓶(vials)、注射器(syringes)等。容器可以用多种材料诸如玻璃或塑料制成。容器装有或含有有效治疗关节损伤的组合物，并可以具有无菌存取口(例如该容器可以是具有可被皮下注射针头刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是拮抗剂或抗体。标签或包装插页表明该组合物用于治疗适于治疗的受试者中的关节损伤，以及关于所提供的拮抗剂或抗体及任何其它药物的给药量和间隔的具体指示。制品可以进一步包括别的容器，该容器装有药剂学可接受的稀释緩沖剂，诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐緩沖盐水、林格氏(Ringer)溶液和/或右旋糖溶液。制品还可包括其它从商业和使用者观点看有需要的材料，包括其它緩冲剂、稀释剂、滤器、针头和注射器。在更具体的实施方案中，制品包括(a)容器，其中装有结合B细胞表面标志的拮抗剂诸如抗体(例如CD20抗体)(优选的是，该容器在该容器内装有抗体及药剂学可接受的载体或稀释剂)；和(b)包装插页，其印有治疗受试者中的关节损伤的说明书，其中所述说明书表明对受试者施用拮抗剂或抗体(例如CD20抗体)，然后在施药后至少大约52周进行射线照相测试，测量关节损伤与施药前基线相比的降低，其中CD20抗体的施用量有效实现关节损伤的降低，表明受试者得到了成功治疗。在一个优选的实施方案中，制品包括装有第二药物的容器，其中拮抗剂或抗体(诸如CD20抗体)是第一药物，还在包装插页上包含用有效量的第二药物治疗受试者的说明书。优选的是，此第二药物是曱氨蝶呤。下面的非限制性实施例说明了本发明进一步的细节。在此明确的将本说明书中所有引用的公开内容引入本文作为参考。实施例实施例1:利妥昔单抗在对先前的抗TNF疗法响应不足或缺乏耐受的患者中的功效和安全性这是m期随机化的、双盲的、平行组的、多中心的临床试验，称为RA中利妥昔单抗的长期功效的随机化评估(REFLEX)。本研究设计如图l所示。本研究的目标是妥昔单抗的功效和安全性，所述患者对一种或多种抗TNF疗法响应不足。研究利妥昔单抗在该患者群中的药动学和药效学(例如B细胞消减的持续时间的长度以及对免疫球蛋白和类风湿因子的影响)。本研究的结果是主要终点(PrimaryEndpoint)第24周时具有ACR20应答的患者的比例。次要全冬点(SecondaryEndpoints)第24周时具有ACR50和ACR70应答的患者的比例。自基线到第24周DAS28的变化。第24周时的EULAR应答。ACR核心集自基线的变化。SF-36自基线的变化。第56周时Genant改良的Sharp放射照相总分的变化。第24周时Genant改良Sharp放射照相得分的变化(探索性的)。侵蚀得分和关节腔变窄得分的变化。本研究的关键选择标准(inclusioncriteria)是由于毒性或功效不足而经受了对先前的或当前的依那西普、英夫利昔单抗或阿达木单抗治疗响应不足依那西普为25mg，每周两次，大于或等于3个月英夫利昔单抗为大于或等于3mg/kg,至少4次输注阿达木单抗为40mg，隔周一次，大于或等于3个月。必须已经接受了至少12周的剂量为10-25mg/周的MTX(经口的(peroral，p.o.)或肠胃外的)，以及筛选之前最后4周的剂量稳定。随机化之前至少4周停用所有其它DMARD/生物学应答修饰剂(对于英夫利昔单抗、来氟米特和阿达木单抗为8周)。泼尼松等价物大于或等于10mg/天。肿胀关节数(SJC)大于或等于8(66个关节数)，触痛关节数(TJC)大于或等于8(68个关节数)。CRP大于或等于1.5mg/dL(15mg/L)或者ESR大于或等于28mm/h。至少一个关节有可归因于类风湿性关节炎的确切侵蚀的放射照相证据。本研究的研究处理是A组第1天和第15天时两次1000mg的利妥昔单抗i.v.输注。B组第1天和第15天时的安慰剂i.v.输注。两组均有每次利妥昔单抗/安慰剂输注之前的100mgi.v.曱泼尼龙。第2-7天60mg/d以及第8-14天30mg/d的泼尼松。6月结果患者群患者数安慰剂利妥昔单抗登记的209308ITT201298药瓶破裂(VialBreaks)4审核的场所(AuditedSite)14随机化前治疗的(TreatedPriorRandomisation)3分区域的ITT(ITTbyRegion)201298US非us分RF的ITT(ITTByRF)RF+veRF-vc遵照方案(perprotocol)排除安全性*ITT随机化的接受部分输注的作为随机化的分析*遵照方案如上，^f旦遵守方案*安全性随机化的接受部分输注的作为接受的分析患者的人口统计116(58%)85(42%)201160(80%)41(20o/o)16148(24%)209172(58%)126(42%)298234(79%)64(21%)25949(16%)308安慰剂利妥昔单抗2x1000mg(n=201)(n=298)性别女82%81%男18%19%年龄(均值，岁)5352曱氨喋呤剂量(mg/wk)1515早先的DMARD(均值)2.52.6先前的抗TNF治疗数1.51.5接受并行皮质类固醇的患者*78%74%接受NSAID或COX2的患者》75%67%患者的基线疾病特征安慰剂利妥昔单抗2x(n=201)(n=298)疾病持续时间(年)11.712.2SJC(均值)2323TJC(均值)3334RF阳性80%79%RF(均值，IU/L)320328CRP(均值，mg/dL)3.83.8ESR(均值，mm/h)4848DAS286,86.9患者的配置随机化的退出不良事件死亡响应不足拒绝治疗其他完成24周安慰剂20997(46%)1(<10/0)利妥昔单抗2x30854(18%)8(3%)83C40%)36(12%)5(2%)5(2%)8(4%)5(2%)112(54%)254(82%)该研究的功效结果示于图1-12。该研究的放射照相结果示于图13-17。ACR核心集参数的均值变化示于图18。该研究的安全性分析示于图19-31。REFLEX研究的结论是利妥昔单抗与ACR20响应率相对于安慰剂的显著提高有关(主要终点)所有次要和探索性终点(DAS、EULAR、ACR核心集)支持主要分析放射照相结果表明与安慰剂组相比治疗组在24周时间里显示出较低的Sharp-Genant总分(图13),与安慰剂组相比在24周时间里显示出较低的Sharp-Genant侵蚀得分(图14)，与安慰剂组相比在24周时间里显示出较低的Sharp-GenantJSN得分(图15),与安慰剂组相比在治疗第24周时大得多比例的患者在侵蚀得分上没有变化(图16)，图17给出了第24周时安慰剂和治疗组放射照相终点的概括。利妥昔单抗通常被;^艮好地耐受。输注相关事件所有感染的比率与安慰剂可比严重感染的比率/发生率有轻微升高对免疫球蛋白无显著影响低HACA56周结果患者数(％)*安慰剂利妥昔单抗(n=186)(n=277)完成56周退出141(76)46(25)202(73)75(27)退出并接受TNF抑制剂治疗12(6.5)29(10.5)*第56周时可获得放射照相资料的患者。图41进一步图解第56周时REFLEX临床试验的患者配置，包括选自III期REFLEX临床试验治疗组和安慰剂组的患者亚组的正在进行中的治疗。如图42所示，第56周时Genant改良的Sharp总分(Genant,爿附./Md.,30:35-47(1983))、关节腔变窄(JSN)和侵蚀得分的均值变化相对于安慰剂都显示出统计学上显著的升高。通过Sharp-Genant总分随时间的均值变化进一步图示利妥昔单抗治疗的功效。如图43所示，所述升高自第24周持续到第56周。图44显示Sharp-Genant总分变化的累积分布。图45显示灵敏度分析的结果，以Sharp-Genant总分的变化来表示。利妥昔单抗+MTX治疗组始终优于安慰剂十MTX治疗组。图46显示在第56周观察点关节状况未显示放射照相变化的患者的百分比，分别通过侵蚀得分和Genant改良的Sharp得分测量。结论是，本临床试验的结果显示，利妥昔单抗显著抑制对一种或多种TNF抑制剂具有响应不足或不耐受的类风湿性关节炎(RA)患者的放射照相进展。此外，本研究首次表明B细胞靶向疗法能够抑制放射照相进展。实施例2:利妥昔单抗在RA:III期程序中RA中评估的重要结果包括结构性关节损伤进展的抑制和躯体机能的改善。该结果对于最近被诊断为患RA的患者来说特别重要，因为对这些及早施力o影响可能有更高的长期益处。Genoveseetal,ArthritisRheum.46:1443-1450(2002)。因此，早期RA患者群是研究这些重要结果的适当人群。就这些患者的合适对照治疗而言，当前早期RA的黄金标准疗法是MTX。因此，选择未接触过MTX的患者群并将利妥昔单抗加MTX与单独MTX相比，提供了该新型治疗方法与当前针对这些患者的黄金标准的比较。该研究是随机化的III期、有对照的、双盲的(soluble-blind)、平行组的、多中心的研究，以评估未接触过MTX的活动性RA患者中利妥昔单抗联合MTX与单独MTX相比较的安全性和功效。主要目的1.测定利妥昔单抗在预防结构性关节损伤进展中的功效，评估利妥昔单抗在用MTX启动治疗的活动性RA患者中的安全性。2.评估利妥昔单抗在改善患者的躯体机能和RA体征和症状中的功效。3.通过群体分析手段研究目标RA患者群中利妥昔单抗的药动学(PK)和协变量(covariates)对PK参数的影响。4.研究更多利妥昔单抗疗程的长期功效和安全性。第一个疗程-研究设计A组利妥昔单抗500mgi.v.x2加MTX(7.5mg逐步提高至20mgp.o.)B组利妥昔单抗1000mgi.v.x2加MTX(7.5mg逐步提高至20mgp.o.)C组安慰剂利妥昔单抗i.v.x2加MTX(7.5mg逐步提高至20mgp.0.)对于C组患者，自第104周起，对于符合条件的患者，可以以利妥昔单抗500mgi.v.x2加MTX的疗程进行复治。下述复治规则，与上文方案一致，应用第二个疗程达到下述条件时只要可行则尽可能快地施用利妥昔单抗加MTX或安慰剂加MTX的第二个疗程1.自研究药疗的最后疗程的首次输注起已经过去了最少24周。2.DAS28-ESR〉2.6。3.最后的血样分析满足了绝对嗜中性粒细胞计数(不低于1.5x103(^)、IgG(不低于5.Omg/mL)和IgM(不低于0.40mg/mL)的合格中选(Eligibility)标准。此外，患者必须满足下述合格中选排除标准8、10和11:1.重大的心脏或肺部疾病(包括阻塞性肺病)。2.原发性或继发性免疫缺陷(历史性的，或者当前活动性的)，包括已知的HIV感染史。3.已知的任何类别的活动性感染(排除曱床的真菌感染)，或者任何重大感染发作，其需要在感染的4周内入院治疗或用i.v.抗感染药治疗或者在输注前2周内完成口服抗感染药。第24周时不满足第二个利妥昔单抗/安慰剂疗程标准的患者每4到8周随访一次，随后在他们基于上述标准变得合格时接受第二个疗程。更多疗程自第48周起患者可能变得符合接受第三个利妥昔单抗/安慰剂疗程的条件。第三个疗程以及之后的疗程可能只施用于已满足上述第二个疗程标准的患者和调查人员认为在第一个或第二个利妥昔单抗疗程之后已有相关临床应答的患者。从未出现临床应答的患者应当退出而进入安全性跟踪(safetyfollow-up,SFU)。被认为已经出现临床应答但目前尚不满足更多利妥昔单抗疗程标准的患者自第48周至第56周每4周随访一次，然后每8周随访一次，随后在他们基于上述标准变得合格时接受更多疗程。所有患者在每次输注之前都接受100mgi.v.曱泼尼龙的预药疗。所有患者还接受以单剂或每周一次的分剂给予的稳定剂量的叶酸(folate)(至少5mg/周)。所有患者应持续接受稳定剂量的任何背景皮质类固醇(至少10mg/天的泼尼松或等效物)或口服非类固醇抗炎药(NSAID)。随机化依据区域(US或ROW)和类风湿因子(阳性或阴性)分组以确保治疗组间跨区域和RF状况的患者的平衡配置。患者在最先的24周每4周参加一次门诊，此后每8周一次(除了第48-56周时每4周一次)，以评估功效、安全性、免疫学和生活质量。在筛选时、第24周和第52周进行放射照相评估。还在首剂研究药疗后2年和3年时进行放射照相评估。在第52周时评估主要终点(改良Sharp总分的变化)。次要和探索性终点包括更多的放射照相终点和体征和症状、躯体坤几能和消退终点。在第52周的放射照相评估之后的任何时候，肿胀和触痛关节数都没有改善(improvement)20%的患者可以接受升高剂量的MTX或一种非生物学DMARD的援救疗法。自该研究退出或处于任何时间点的或完成全部治疗期的所有患者均应在退出或完成之后的第4、12、24、36和48周返回，进行SFU评估。这在患者自该研究退出/完成该研究之后一年有效地随访患者。如果患者的外周B细胞计数(CD19)在一年以后没有恢复到其基线水平或者恢复到正常范围之内，按两者中较低者计算，则应当以12周的间隔继续进行安全性随访，直到出现B细l包充满为止。对于报导的所有严重感染性不良事件都应当在所述感染性不良事件变严重的一周之内测定CBC、微分(differentials)、血小板、定量Ig和CD19计数。强烈鼓励退出而进入SFU的患者返回来进行所有排定的放射照相评估(第24、52、104和152周)，无论其于任何时间点退出所述研究。相对于随机化的最初日期(originalday),按照原始评估日程为这些患者拍摄放射照片。大约852名患者被招募到此项研究中，并平等地被随机化到三个处理组中。患者依据区域(US或世界其他地方(ROW))和RF状况(阳性RF至少20IU/mL或者阴性RF少于20IU/mL)分组。RF阴性患者的整体比例限制在总样本大小的20%。招募是竟争性的，在任何区域有不超过70%且不少于30%加入。患者的治疗由于任何原因中止都不再用其他患者来替换。目标人群该研究的目标人群是患早期活动性RA的患者，其尚未接触过MTX。选择标准(inclusioncriteria):患者必须满足以下标准以符合参加研究的条件1.能够并愿意提供知情同意书，可遵守研究方案的要求。2.根据RA分类法的1987修订ACR标准，RA患者被确诊至少8周但不超过4年。3.患者未接触过MTX并认为是MTX治疗的候选者。4.筛选和基线时肿胀关节数(SJC)至少为8(66个关节数)，触痛关节数(TJC)至少为8(68个关节数)。5.筛选时CRP至少为1.2mg/dL(12mg/L)。6.年龄18-80岁。7.如果基线之前至少四周是稳定的，则允许使用至少10mg/天泼尼松龙(prednisolone)或等效物的糖皮质激素。8.如果基线之前至少两周是稳定的，则允许使用NSAID。9.对于有生育能力的患者(男性和女性)，在参与研究的始终使用可靠的避孕手段(例如，激素避孕药、贴片(patch)、子宫内避孕器、物理屏障)。10.必须愿意接受口服叶酸。11.仅仅对于RF阴性患者，至少一个关节患可归因于RA的确切侵蚀的射线照片证据。12.患者基于门诊要接受或者当前正在接受治疗。排除标准与RA有关的排除1.非RA的风湿性自身免疫病，或者RA继发的明显系统性波及(包括但不限于血管炎、肺纤维化或者费尔提氏综合征(Felty，ssyndrome))。患伴随有RA的继发性斯耶格伦氏综合征(Sj6gren，ssyndrome)或者继发性局限性皮肤血管炎是允许的。2.如RA的功能状态的ACR分类法所定义的功能性类别IV。3.历史性的或者当前的非RA的炎性关节病(包括但不限于痛风、反应性关节炎、银屑病关节炎、血清阴性脊柱关节病、莱姆病(Lymedisease)),或者其它系统性自身免疫性病症(包括但不限于系统性红斑狼疮、炎性肠病、硬皮病、炎性肌病、混合型结締组织病、或任何重叠综合征)。4.诊断有幼年型特发性关节炎(JIA)或幼年型RA(JRA)和/或16岁之前的RA。与一般健康有关的排除5.任何手术规程，包括基线之前12周之内的或者研究期间计划的骨/关节手术/滑膜切除术(包括关节融合或置换)。6.外周静脉入口的缺失。7.怀孕或哺乳。8.重大的和/或不受控制的心脏或肺部疾病(包4舌阻塞性肺部疾病)。9.重大伴发病的迹象，包括但不限于以调查人员的观点来看将排除患者参与的神经系统、肾、肝、内分泌或胃肠病症。10.原发性或继发性免疫缺陷(历史性的，或者当前活动性的)，包括已知的fflV感染史。11.已知的任何类别的活动性感染(排除甲床的真菌感染)，或者任何重大感染发作，其需要在感染的4周内入院治疗或用i.v.抗感染药治疗或者在输注前2周内完成口服抗感染药。12.基线前52周内的深层空间/组织感染史(例如筋膜炎、脓肿、骨髓炎)。13.严重复发性或者慢性感染史(为了筛选胸部感染，如果不在筛选前12周内进行，在筛选时实施胸部放射照相)。14.癌症史，包括实体瘤、血液病学恶性肿瘤和原位癌(除了已经切除和治愈的皮肤基细胞和鳞状细胞癌之外)。15.任何可能影响任何一种功效评估，特别是关节疼痛和胂胀的神经病学(先天性的或获得性的)、血管或系统性病症(例如，帕金森病、大脑性瘫痪、糖尿病性神经病)。16.当前活动性的酒精或药物滥用或基线前24周内的酒精或药物滥用史。与药物治疗有关的排除17.对生物学药剂的严重变应性或过^:性反应史或者对利妥昔单抗的任何组分或对鼠蛋白质的已知的超敏感性。18.先前用针对RA的任何已批准的或研究性生物学药剂进行的治疗。19.先前用抗oc4整联蛋白抗体或共刺激调节剂进行的治疗。20.用任何生物学药剂或非MTX的DMARD进行的并行治疗。除了以下情况，必须在基线前14天中止治疗至少28天的碌J坐嘌呤；至少8周的来氟米特(或者ll天的标准消胆胺(cholestymmine)或活性碳清洗后至少14天)。21.先前用任何细胞消减疗法包括研究性药剂(例如，CAMPATH、抗CD4、抗CD5、抗CD3、抗CD19、抗CDlla、抗CD22、BLys/BAFF和抗CD20)进行的治疗。22.在基线的28天内或者研究性药物的5个半衰期(以较长的为准)内用任何研究性药剂进行的治疗。23.在基线前28天内接受活/减毒疫苗(建议在接受利妥昔单抗/安慰剂前仔细调查患者的接种记录和对免疫的需求)。24.基线前4周内的关节内或者肠胃外糖皮质激素。25.对i.v.糖皮质激素的不耐受或禁忌症(contra-indications)。与实验发现有关的排除26.首次利妥昔单抗输注前测量的阳性血清人绒毛膜促性腺激素(hCG)。27.针对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎核心抗体(HBsAb)或丙型肝炎血清学的阳性测试。28.血红蛋白少于8.0g/dL。29.血清IgG和/或IgM的浓度分别低于5.0和0.40mg/mL。30.绝对嗜中性粒细胞计数(ANC)少于1.5xl03/pL。31.AST或ALT大于正常上限的2.5倍。治疗的结束规定为3年的时间点，之后有额外的至少一年的SFU期。在第1天和第15天通过IV输注施用利妥昔单抗(500mg或1000mg)力口MTX或安慰剂加MTX。患者可能符合复治的条件(相隔14天的两剂)，最高频率为每24周一次的复治。最初随机化为接受利妥昔单抗加MTX的患者在整个研究过程中接受相同剂量的复治。自第104周起，最初随机化为接受安慰剂加MTX的患者可能符合接受利妥昔单抗(500mg)加MTX的条件。在每次输注之前施用100mgi.v.曱泼尼龙的预药疗。所有组都口服施用曱氨蝶呤药片(7.5mg/周逐步提高到20mg/周)。建议所有患者都应当在输注开始前30到60分钟用对乙酰氨基酚/醋氨酚(paracetamoI/acetaminophen)(lgmp.o.)和盐酸苯海拉明(diphenhydramineHC1)(1OOmgi.v.或口服等效抗组胺剂)预药疗，以减少输注反应的可能。患者接受以单剂或每周一次分剂形式给予的叶酸或等效物(至少5mg/周)。患者可以继续接受任何的背景糖皮质激素(至少10mg/天的泼尼松或等效物)。需要时可以用镇痛药止痛。主要终点是第52周时改良Sharp总分相对于筛选时的变化，所述筛选是利用改良的意向治疗(intent-to-treat,ITT)人群进行的。放射照相次要终点是1.第24和104周时改良Sharp总分的变化2.第52周时改良Sharp侵蚀得分的变化3.第52周时改良关节腔变窄得分的变化4.第52周时没有放射照相进展的患者的比例(定义为改良Sharp总分的变化小于或等于0)。此外，分析第24和104周时没有放射照相进展的患者比例。放射照相探索性终点是1.随着时间推移呈现改良Sharp得分的变化。2.于第24、52和104周在下述亚类中进一步呈现没有放射照相进展的患者的比例a.改良Sharp侵蚀得分相对于筛选没有变化的患者的比例b.改良关节腔变窄得分相对于筛选没有变化的患者的比例c.没有新侵蚀关节的患者的比例。如下进行放射照相评估按照评估计划拍摄每只手后前位(posterior-anterior,PA)和每只扭p前后4立(anterior-posterior,AP)各自的射线照片。筛选拜访时，必须在患者离开工作场所(site)前确认放射照片的可读性和质量(这可以在手、腕和脚放射照相检查程序手册中找到)。对RF阴性患者在筛选拜访时的放射照片检查至少一个关节有根据中心读取地(centralreadingsite)可归因于RA的确切侵蚀的放射照相证据。所有放射照片利用Genant,/30:35-47(1983)改良的Sharp方法进行评估。主要评估是第52周时改良Sharp总分相对于筛选时的变化。改良Sharp总分将双手和双脚的侵蚀得分和关节腔变窄得分联合在一起。手和脚中最大总体侵蚀得分为100和42，手和脚中最大关节腔变窄得分为100和48。可获得的最大改良Sharp总分为290。如下计算第52周时得分的变化变化=第52周时的得分减去筛选得分。拍摄手和脚的射线照片以计算改良Sharp总分。在试验开始前，所有放射部门都参加训练课以标准化放射照片。这包括设备、胶片、盒、手/脚位置的确认程序和获得一致放射照片的程序的标准化。改良Sharp总分的变化是偏态的，因此不是正态分布的。因此，利用根据区域和RF状况分组的非参数检验统计学检验治疗组之间在第52周时改良Sharp总分的变化。然而，如果显示出数据大致是正态分布的，那么利用方差分析(ANOVA)模型分析数据，将区域、RF状况和治疗组作为模型中的检测项(exploratoryterm)。闭合原则(closureprinciple)用于调节主要终点中的多重比较。第一个比较在三个治疗组中的每一个之间利用克鲁斯凯-沃利斯检验(Kruskal-Wallistest)统计学进行。如果有足够的统计学证据否定下述无效假设(nullhypothesis):H0:=p2=^即，不存在任一治疗组中总体Sharp得分变化有任何差异的证据，并4妄受下述择一,支"i兌(alternativehypothesis):H,:m不等于i12,即，在至少一个成对治疗比较中改良或者m不等于内，Sharp总分变化存在差异，或者|0_2不等于|13那么所述三个治疗组将被认为是不同的。如果检测结果在p=0.05水平是统计学上显著的，那么推断第52周时治疗组之间在改良Sharp总分相对于基线的变化上存在差异。随后，在p=0.05水平将每个利妥昔单抗组与安慰剂组相比较，如下所述。主要对比考虑是个体利妥昔单抗剂量组与安慰剂组相比，利用VanElteren检验统计学。如果存在足够的统计学证据否定下述无效假设H0:m=|a2即，不存在利妥昔单抗组中改良Sharp总分变化优于安慰剂组的证据，并接受下述择一假说H1:^不等于^即，利妥昔单抗组中改良Sharp总分的变化优于安慰剂组，那么认为每个利妥昔单抗治疗组均优于安慰剂组。如果4企-验结果在p=0.05水平是统计学上显著的，那么推断第52周时利妥昔单抗组所呈现的改良Sharp总分相对于基线的变化优于安慰剂组。只要可能，做所有努力以确保患者返回，进行其放射照相就诊，即使停用了研究药物。采用下述方法输入丟失的第52周的数据如果第52周的放射照相数据丟失，那么第24周的放射照相数据用于线性外推该患者第52周的结果。第52周前提早从所述研究退出的那些患者作为第52周放射照相数据分析的一部分而包括在内。任何没有筛选后放射照相数据的患者从改良ITT人群中排除，因此从主要终点分析中排除。研究潜在的特定工作场所内治疗配置失衡的影响。进行灵敏度分析以评估严重失衡的工作场所对主要分析的影响。对于放射照相次要终点，以与针对主要终点所规定的相同方式分析第24和104周时改良Sharp总分的变化。以与针对主要终点规定的相同方式分析第52周时改良Sharp侵蚀得分的变化。此外，分析第24和104周时改良Sharp侵蚀得分的变化。以与针对主要终点规定的相同方式分析第52周时改良的关节腔变窄得分的变化。此外，分析第24和104周时改良的关节腔变窄得分的变化。如下所述评估第52周时没有放射照相进展(定义为改良Sharp总分的变化小于或等于0)的患者的比例利用根据区域和RF状况分组的Cochran-MantelHaenszel(CMH)检验统计学检验该比例的差异。此外，分析第24和104周时没有放射照相进展的患者的比例。对于放射照相探索性终点，呈现改良Sharp得分随时间的变化。进一步在下述亚类中呈现第24、52和104周时没有》文射照相进展的患者的比例改良Sharp侵蚀得分相对于筛选时没有变化的患者的比例改良关节腔变窄得分相对于筛选时没有变化的患者的比例没有新侵蚀关节的患者的比例。用于放射照相评估的关节和评级标度(gradingscales)(Genant,^w.j:MW.，30:35-47(1983))的详情如下评级标度1.关节腔变窄(JSN)0级-正常。0.5级-轻微的JSN或模糊的发现l.O级-轻度JSN(病灶性的或较小的)1.5级-轻度至中度JSN2.0级-中度JSN2.5级-中度至重度JSN3.0级-重度JSN3.5级-接近于关节强直的重度JSN4.0级-确切的关节强直。2.侵蚀(皮层表面的不连续间断)0级-正常0.5.-轻微的皮层连续性丧失或者骨侵蚀的模糊发现l.O级-轻度的。确切的但小型的一个或两个关节骨的侵蚀，通常位于波及少于25%关节表面的棵露区域。1.5级-轻度至中度。波及一个或两个关节骨的少于25%关节表面的小型-中型侵蚀。2.0级-中度。同时波及两个关节骨26-50%关节表面的中型-大型侵蚀。2.5级-中度至重度。51-75°/。关节表面的侵蚀。3.0级-重度。76-90%关节表面的侵蚀。3.5级-非常严重。100%关节表面的侵蚀(关节表面的完全损坏)。关节评估1.手的关节腔变窄(每只手13个关节)a.第II-V个手指上的所有近端指节间(PIP)关节。b.第I个手指上的指节间关节。c.所有掌指(MCP)关节。d.作为单个单位的第III-V个手指的腕掌(CMC)关节。e.嚢周(舟骨-头状骨和月骨-头状骨耳关合的)区域。f.桡腕关节。2.手的侵蚀得分(每只手14个关节)a.第II-V个手指上的所有近端指节间(PIP)关节。b.第I个手指上的指节间关节。c.所有掌指(MCP)关节。d.第I个手指的腕掌(CMC)关节。e.舟骨。f.远端桡骨。g.远端尺骨。得分分别加和(对于侵蚀为14x3.5即每个关节的最大值x2:98，对于JSN为13x4即每个关节的最大值x2)。每个和标准化为0-100的标度。两个得分相加获得总分(标度0-200)。3.关节腔变窄和侵蚀(每只脚6个关节)a.所有跖趾(MTP)关节。b.第I个足趾上的所有趾节间关节。得分分别加和(对于侵蚀为6x3.5即每个关节的最大值x2=42,对于JSN为6x4即每个关节的最大值x2)。把两个得分相加获得标度为0-90的总分。将原始放射照片发送到中心读取场所，在那里控制它们的质量。如果原始放射照片具有不可接受的质量，中心被建议需要什么样的修正并被告知获取第二幅放射照片。研究中所有随机化而接受至少部分利妥昔单抗剂量的患者(包括已经退出而进入安全性跟踪的那些患者)在第24、52、104和152周拍摄手/腕和脚的放射照片。强烈鼓励患者返回以进行所有的放射照相评估，不管他们自研究退出的时间点是什么。相对于随机化的最初一天按照原始评估日程表拍摄这些患者的放射照片。其他次要的和探索性的终点有体征和症状、躯体机能、消退和患者报告的结果。因此，利用根据区域和RF状况分组的非参数检验统计学来检验治疗组之间在第52周时改良Sharp总分的变化。然而，如果显示出数据大致是正态分布的，那么利用方差分析(ANOVA)模型分析数据，将区域、RF状况和治疗组作为模型中的检测项。显然希望通过限制疾病发作并潜在地限制结构性损伤的进展以使患者保持在低疾病活性状态。在上文提到的DANCER研究中(Emery等，EULAR,同上和VanVollenhoven等，EULAR,同上)，第24周时，大约90%用利妥昔单抗治疗的患者尚未实现EULAR(DAS28)消退。在该研究中，作为此实施例受试者的这些患者符合在第24周时接受他们的首次利妥昔单抗复治的条件。基于DAS28-ESR的强制性复治提供有关基于疾病活性的复治范例的客观信息。根据利妥昔单抗的药动学和药效学，推荐疗程之间的最小间隔期为24周。不受任何一种理论的限制，看起来利妥昔单抗的药动学和药效学显示出在这个时候(第24周)药物水平低于检测水平，有恢复外周CD19+细胞的证据。在该时间点后，疾病活性的明显提高与此平行，因此代表了能够给予更多疗程的合理的时间点。利妥昔单抗(或者代替利妥昔单抗的人源化2H7抗体)与MTX联合在满究的方案还满足一种或多种次要放射照相终点。如此，施用第一剂利妥昔单抗或人源化2H7(500mgx2或者100mgx2)及曱氨蝶呤自基线或自治疗开始起至少约一个月，优选自基线起至少约24周，更优选自基线起至少约52周，以及直至自基线起104周的更多时间点相对于基线(首次施用CD20抗体前)减轻关节损伤，其通过改良Sharp总分测量。还能够自基线起第24周或第52周时有效地复治患者以保持对该关节损伤进展的预防。以如上提出的排定再次剂量给药方案给受试者施用利妥昔单抗或人源化2H7在第52周或之后在预防结构性关节损伤进展方面是有效的。这些结果明显好于对照的结果。在大约第48-54周时一次性给予另一剂lg或2g的CD20抗体(例如，利妥昔单抗或人源化2H7)或者在约14-16天时间里以0.5或1克的量分散给予CD20抗体还在整个第二年有效治疗关节损伤，其中有或无一种或多种第二种药剂诸如免疫抑制剂。如此，首先在大约2周时间里施用CD20抗体，接着自初始治疗(从给予任何一剂起计算)起大约4-8个月时进行另一次治疗，接着自初始治疗起大约一年时进行另一次治疗，接着自初始治疗起大约两年时进行治疗，对于每次治疗以大约半克或者一克x2-4剂，大约每周一次或者约二到四周时间里大约隔周一次一起施用，获得成功。该治疗的结果比使用安慰剂的对照的结果好得多。该复治方案成功使用数年而没有副作用或副作用很小。还利用相同方案以相同剂量或更高剂量且没有第二种药剂诸如MTX而使用利妥昔单抗或另一种CD20抗体作为单一疗法满足所述主要终点，而且利用相同方案以相同剂量或者更高剂量作为单一疗法的复治获得成功。实施例3:类风湿性关节炎患者中利妥昔单抗复治的功效研究本实施例描述在接受背景曱氨蝶呤的RA受试者中进行利妥昔单抗复治的in期、随机化的、双盲的、以安慰剂为对照的、多中心的研究。本研究的主要目的是评估正在接受MTX并且对TNF抑制剂响应不足的活动性RA受试者中利妥昔单抗复治的功效。本研究的次要目的如下评估正在接受MTX并且对TNF抑制剂响应不足的活动性RA受试者中利妥昔单抗复治的安全性。评估正在接受MTX并且对TNF抑制剂响应不足的活动性RA受试者中利妥昔单抗的安全性。这是评估正在接受MTX的活动性RA受试者中利妥昔单抗复治的功效的III期、随机化的、双盲的、以安慰剂为对照的、多中心的研究。该研究由四个部分组成筛选、治疗期(第一个疗程标签开放的利妥昔单抗，对于合格的受试者，双盲的、随机化的复治)、安全性跟踪(SFU)和B细胞跟踪。受试者必须是由于毒性或功效不足而对一种或多种TNF抑制剂的治疗响应不足的。在美国大约有555名受试者在大约150个研究场所进入治疗期。招募RF阳性和RF阴性受试者并将其在治疗组之间平等配置，其中RF阴性受试者的总比例限制在总样本大小的20°/0。第1天前，除MTX之外，受试者中止所有DMARD(对于来氟米特、阿达木单抗、和英夫利昔单抗，为28周，对于依那西普，为24周)。所有受试者在研究期间以稳定剂量继续接受MTX10-25mg/wk。根据清除要求，所述筛选拜访可以早在接受第一剂研究治疗之前56天进行。所有满足合格中选标准并加入所述试验的受试者接受第一个疗程的利妥昔单抗。利妥昔单抗疗程定义为相隔14天给予两剂1000mg静脉内(IV)，在每剂利妥昔单抗前用曱泼尼龙100mglV进行预药疗。所有受试者还接受稳定剂量的叶酸(Smg/wk)。所有受试者应当继续接受稳定剂量的任何背景皮质类固醇(SlOmg/天泼尼松或等效物)或口服非类固醇抗炎药(NSAID)。首剂利妥昔单抗应当在基线评估之后24小时内给予。然而，如有必要，允许基线评估与首剂研究药物之间长达72小时。第24-40周期间，根据28个关节的疾病活性得分(DAS28-红细胞沉降率[ESR])22.6而具有活动性疾病的受试者^L为符合复治条件，并以2:1的比例随机化而接受一个额外利妥昔单抗(A组)或安慰剂(B组)疗程的复治。对第24-40周期间不满足第二个利妥昔单抗疗程标准的受试者继续跟踪安全性和功效。第24-40周期间满足复治标准且由于任何原因而拒绝复治的受试者退出治疗期并进入SFU期。进行标准关节炎和安全性评估。药效学测量包括。019+B细胞、免疫球蛋白和自身抗体。研究人员在定期的排定拜访时计算DAS28-ESR得分(Prevoo爭^w/zn.toi/zewm38:44-48(1995);DAS-score.nl2005DAS-score.nl2005:homeoftheDAS.DepartmentofRheumatologyUniversityMedicalCenterNijmegan-荷兰[2005年9月1日引用].可以自http:〃www.das-score.nl/www.das画score,nl/index.htmW寻至l1)。治疗期长72周(第1天至第72周)。任何时间自治疗期退出的或者在第24-40周之间接受利妥昔单抗/安慰剂复治并完成治疗期的所有受试者都应当在退出或完成后第4、12、24、36和48个SFU周返回，进行SFU评估。所有受试者在他们的最后一剂利妥昔单抗之后跟踪至少48周。所有只接受一个疗程利妥昔单抗治疗(即，研究期间不符合复治条件的受试者)并完成治疗期的受试者不返回作SFU。治疗期或SFU期结束时其外周B细胞计数尚未恢复的受试者继续每12周跟踪实验室评估和严重不良事件的发生，直至B细胞恢复。B细胞恢复定义为外周B细胞计数恢复到基线值或正常下限(LLN),以两者中较低的为准。复治后16周之时或之后，与基线相比尚未实现触痛关节数(TJC)和肺胀关节数(SJC)均改善20%的受试者可以用一种非生物学DMARD启动拯救治疗，其选择由他们的治疗医师判断。在RA中的利妥昔单抗复治研究中，受试者获得了持续的ACR(美国风湿病学学会，AmericanCollegeofRheumatology)20、50和70响应(Pavelka等"Efficacyandsafetyfollowingrepeatedcoursesofrituximabinpatientswithactiverheumatoidarthritis."于EULAR2005提供的摘要)。然而，因为本研究为标签开放的研究，所以没有对照数据来评估RA中利妥昔单抗复治的功效和安全性。本研究设计用以在以安慰剂为对照的试验中评估复治的功效，其中活动性RA受试者接受单个额外的利妥昔单抗疗程。以DAS28-ESR22.6为特征的活动性疾病受试者在第24-40周期间用第二个研究药物(利妥昔单抗或安慰剂)疗程进行治疗。用利妥昔单抗进行复治的目的是预防发作，促进疾病的持续控制，并潜在地预防疾病进展。DAS28-ESR22.6的复治标准确保了具有临床显著疾病活性的受试者得到复治。用肿胀和触痛关节数、ESR和患者的整体疾病活性评估(在100mm直观类比标度(visualanalogscale)[VAS])计算DAS28-ESR。本研究的主要终点是第48周时相对于基线(第l天)而非相对于复治时间的具有ACR20的复治受试者的比例。选择基线(第l天)而不选择复治时间是为了评估中度至重度RA受试者用利妥昔单抗复治的整体益处。不受任何一种理论的限制，猜测，与安慰剂治疗的受试者中的恶化相比，用RTX复治导致第48周时相对于第24周时轻微改善效果的维持。尽管复治受试者中可能有明显的治疗益处，但是对于两个组来说，第48周相对于第24周基线的ACR20应答可能是无意义的。如此，本研究不是设计用于评估相对于复治时间的改善。基于III期研究(REFLEX，WA17042/U2646s/IDEC102-20)中第24周的数据，大约91%用利妥昔单抗治疗的受试者满足了该方案第24周时的复治标准(DAS28-ESR22.6)。基于DAS28-ESR的强制性复治利用基于疾病活性的复治范例提供客观的功效信息。24周的最小期间基于利妥昔单抗的药动学和药效学。这与该时间点后疾病活性的明显提高平行，因此代表了复治的合理时间。主要结果测量是第48周时相对于基线(第l天)具有ACR20响应的复治受试者的比例。次要结果测量如下第48周时相对于基线(第l天)具有ACR50和ACR70响应的复治受试者的比例。对于复治受试者，第48周时与基线(第l天)相比DAS28-ESR的变化相对于基线(第l天)，第48周时获得欧洲风湿病防治联合会(EuropeanLeagueAgainstRheumatism,EULAR)响应(优等或中等)的复治受试者的比例对于复治受试者，与基线(第l天)相比，第48周时ACR核心集(SJC、TJC、健康评估问巻[HealthAssessmentQuestionnaire,HAQ]、患者和医师的整体评估、患者疼痛评估、C-反应性蛋白[CRP]、和ESR)的变化复治受试者中第48周时的ACR-N复治受试者基线(第l天)至第48周SF-36副标度(subscale)和概括得分(summaryscore)的变化复治受试者基线(第l天)至第48周慢性疾病疗法的机能评估-疲劳的变化所有受试者中在第48周时ACR20、ACR50、和ACR70响应的比例探索性结果测量为与基线相比，第72周时获得ACR20、ACR50和ACR70响应的所有受试者的比例第48周时具有DAS28-ESR消退(DAS28—ESR<2.6)的受试者的比例第48周时具有DAS28-ESR低病情(lowdisease)(DAS28-ESRS3.2)的受试者的比例第72周时具有DAS28-ESR消退(DAS28—ESR<2.6)的受试者的比例第72周时具有DAS28-ESR低病情(DAS28-ESRS3.2)的受试者的比例对患有活动性RF阳性(220IU/mL)或RF阴性RA、正在接受MTX、并且先前或当前对一种或多种TNF抑制剂响应不足的合格中选的受试者进行参加研究的筛选。RF阴性受试者限制在总加入人群的200/。。受试者必须满足以下标准作为符合进入研究的条件在知情同意表上签字能够且愿意遵照研究方案的要求18-80岁依照RA分类的1987修订版ACR标准(Hochberg等，ArthritisRheum35:498-502(1992)),i貪断为RA至少6个月I类具有从事所有寻常职务而不存在困难的能力的完全机能能力II类尽管存在不便的困难或者一个或多个关节灵活性受限但足以实施正常活动的机能能力III类仅足以实施寻常职业的极少数职务或者自我照料的机能能力IV类基本上或者完全无能力的、卧病在床或者困于轮椅、几乎不能自我照料的受试者基于门诊接受RA治疗筛选时记录的中度至重度活动性RA活性如下TJC28(68个关节计数)，和SJC28(M个关节计数)，和20.6mg/dL的异常CRP，或者228mm/hr的ESR记录的由于毒性或者功效不足而对先前或当前一种或多种以下药物治疗响应不足依那西普、英夫利昔单抗、和/或阿达木单抗。功效不足包括以下治疗依那西普，S个月，每周两次25mg或每周一次50mg;英夫利昔单抗，至少四次S3mg/kg的输注；或者阿达木单抗，隔周40mg，23个月。在第1天前使用MTX10-25mg/wk212周，稳定剂量24周愿意接受口服叶酸如果服用背景皮质类固醇(S10mg/天的泼尼松或等效物)，那么必须在第1天前4周期间以稳定剂量使用皮质类固醇如果在第1天前22周剂量是稳定的，那么允许使用NSAID对于有生育能力的男人和女人，在第1天前230天和研究期间或者受试者外周CD1^B细胞消减期间，以较久者为准，愿意使用可靠的避孕手段(例如激素避孕药、子宫内装置、物理屏障)满足以下任一标准的受试者排除在研究之外a.—般性的(General)非RA的风湿性自身免疫病或者继发于RA的重大系统性波及(例如，血管炎、肺纤维化或费尔提氏综合征)伴随RA的继发性斯耶格伦氏综合征是允许的。历史性的或当前的非RA的炎症性关节病(例如，痛风、反应性关节炎、银屑病关节炎、血清阴性脊柱关节病、或者莱姆病)或者其它系统性风湿性疾病(例如，系统性红斑狼掩、炎性肠病、硬皮病、炎性肌病或者重叠综合征)机能性IV类，如类风湿性关节炎中功能状态的ACR分类所定义的任何手术规程，包括骨/关节手术/滑膜切除术(包括关节融合或置换)，在第1天前12周内或者计划在第l天后48周内对人源化或鼠单克隆抗体的任何组分的已知的超敏感性在第1天前4周内接受活的接种重大心脏或肺部疾病，包"fe阻塞性肺病重大失控伴发病的证据，诸如但不限于神经系统、肾、肝、内分泌或胃肠病症已知的活动性细菌、病毒、真菌、分枝杆菌(mycobacterial)或其它感染(包括肺结核或非典型性分支杆菌病但排除曱床真菌感染)，或者需要在第l天的4周内入院治疗或用IV抗生素治疗或者在第l天的2周内口服抗生素的感染的任何重大发作严重复发性或慢性感染史(为了筛选胸部感染，如果在筛选前12周没有实施，那么在筛选时实施胸部放射照相)历史性的或当前的活动性原发性或继发性免疫缺陷，包括HIV感染癌症史，包括实体瘤和血液病学恶性肿瘤(已经切除和治愈的皮肤基底细胞或鳞状细胞癌除外)重大血细胞减少症或其它骨髓病症史第1天前24周内的酒精、药物或化学品滥用史怀孕或哺乳可能干扰疼痛评估的神经病和神经血管病不良外周静脉通路(access)对口服或IV皮质类固醇的不耐受或禁忌症b.实验室排除标准血纟工蛋白〈8.0g/dL绝对嗜中性粒细胞计数<1.5xlOVpLIgM<0.40mg/mLIgG<5.0mg/mL天冬氨酸转氨酶(AST)或丙氨酸转氨酶(ALT)>2.5倍正常上限阳性乙型肝炎表面抗原或丙型肝炎抗体血清学对于具有生育能力的女人(包括那些已经结扎输卵管的)，筛选时的阳性血清妊娠测试^C排除的先前的或并行的药疗目前使用非MTX的任何DMARD使用任何生物学试剂的并行治疗除了以下情况外，在第1天前至少4周必须中止治疗来氟米特，28周(或者11天的标准消胆胺清除后214天)；英夫利昔单抗，28周；及阿达木单抗，》8周在第1天前4周或5个研究药物半衰期(以时间较长者为准)内使用任何研究试剂的治疗任何先前使用利妥昔单抗或其它细胞消减疗法的治疗，包括CAMPATH、抗CD4、抗CD5、抗CD3、抗CD19、抗CDlla、抗CD22、BLys/BAFF、及其他抗CD20试剂先前使用抗ot4整联蛋白的试剂，包括natalizumab先前在6个月的筛选期内用IVy球蛋白或？1*080^3@柱的治疗一旦完成受试者已满足所有选择标准和排除标准的所有筛选评估和验证，工作场所的人员联系交互式语音应答系统(interactivevoiceresponsesystem,ivrs)以获取受试者数目并确认受试者登记以进行研究药物盘点管理(studydruginventorymanagement).所有登记的受试者接受利妥昔单抗作为他们的初始治疗疗程。第24-40周期间，符合复治条件的受试者以2:1的比例随机化到A组(利妥昔单抗复治)或者B组(安慰剂；见表l)。如果在第24-40周期间受试者满足复治的合格中选标准，那么工作场所的人员联系IVRS以启动受试者的随机化并获取研究药物试剂盒编号。独立的IVRS供应者实施随机化并保留治疗指派代码。随机化根据研究中心、基线RF状况(RF阳性、RF阴性)、及第24周时触痛和肿胀关节数的改善(220%的改善或<20%的改善)分组。非盲操作(unblinding)时，要求IVRS供应者提供治疗指派代码和试剂盒治疗编号。转移和包括于转移中的数据的记录保存在档案上。表l研究治疗组<table>tableseeoriginaldocumentpage111</column></row><table>复治期间，治疗组指派对工作场所的人员和Genentech来说是盲法操作的(blinded)。为了防止由于复治期间观察到的功效或实验室变化而发生的潜在非盲操作(unblinding)，使用双重评估员法来评估功效和安全性。外周CD19B-细胞计数对工作场所的人员和Genentech来说是盲法操作的，直到所有加入试验的受试者第48周主要终点数据库关闭时为止。因此，所有在数据库关闭前已经完成治疗期和SFU的受试者假设为外周消减的，并且保持B细胞跟踪。功效评估员(或被指派者)应当是风湿病学专家或熟练的关节炎评估员。功效评估员必须不是主要研究人员(PrincipalInvestigator)。功效评估员仅仅有权接触功效数据并且仅仅负责完成关节数和医师的整体疾病活性VAS评估。为了确保整个试验期间关节评估的一致性，对于所有研究拜访应当由同一关节评估员评估受试者个体。研究拜访期间，受试者报告的所有结果应当在所有其它评估之前完成。安全性评估员(或被指派者)应当是风湿病学专家并且有权同时接触安全性和功效数据。安全性评估员可以是主要研究人员。安全性评估员有权接触源文件、实验室结果和病例报告表(CaseReportForm,CRF)，并且负责计算DAS28-ESR以及根据受试者的临床应答和实验室参数做出治疗决定。安全性评估员不能代表功效评估员完成任何的功效评估或者记录任何功效评估结果。用于本研究的利妥昔单抗是用于IV施用的无菌的、澄清的、无色的、无防腐剂的液体浓缩物。利妥昔单抗置于500mg(50mL)—次使用药瓶中，以10mg/mL的浓度提供。产品配制在9.0mg/mL氯化钠、7.35mg/mL二水合杵檬酸钠、0.7mg/mL聚山梨醇酯80和无菌注射用水中用于IV施用。pH调至6.5。所有登记的受试者接受利妥昔单抗疗程(于第l和15天IV输注1000mg利妥昔单抗)作为他们的初始治疗。第24-40周期间，符合复治条件的受试者随机化到A组以接受相隔14天的1000mgIV利妥昔单抗的额外疗程(两剂)，或者随机化到B组以接受相隔14天的1OOOmgIV安慰剂的疗程(两剂)。对于所有受试者，推荐使用1000mg口服醋氨酚和50mg口服苯海拉明的预药疗，并且需要在每次利妥昔单抗/安慰剂输注之前30-60分钟内完成100mgIV曱泼尼龙。所有受试者继续接受10-25mg/wk稳定剂量的MTX,并且接受以单剂或每周一次分剂给予的稳定剂量的叶酸05mg/周)。利妥昔单抗/安慰剂输注应当在医院或门诊处在研究人员或被指派者的严密监督下施用于受试者，在医院或门诊处有全套抢救(resuscitation)设备是立即可用的。尽管可以基于门诊来施用利妥昔单抗，但根据研究人员的判断受试者也可以入院观察。利妥昔单抗/安慰剂应当以緩慢IV输注形式施用。不要以IV推注(pushorbolus)形式施用。每次输注结束时，IV线应当原地保留至少1个小时，以便必要时IV施用药物。如果这期间没有发生不良事件，则可以除去IV线。利用适当的无菌技术取出必需量的利妥昔单抗/安慰剂并以4mg/mL的终浓度稀释到输注袋中，输注袋中装有0.9%氯化钠、USP，或者溶于水中的5%右旋糖、USP。轻轻颠倒袋子以混合溶液。利妥昔单抗药瓶在2。C-8。C(36。F-46。F)是生物学和化学稳定的。一定不能使用超过有效期的药瓶。应当避免利妥昔单抗暴露于阳光直射。一旦在IV袋中重建，用于输注的利妥昔单抗溶液可以于2。C-8。C(36。F-46。F)存储24小时。已显示用于输注的利妥昔单抗溶液室温(23。C或73。F)再存储24小时是稳定的。然而，由于利妥昔单抗溶液不含防腐剂，稀释的溶液应当冷藏(2。C-8。C)。尚未观察到利妥昔单抗和聚氯乙烯或聚乙烯袋之间有不相容性。对于复治，利用来自当前拜访的关节数和患者的整体疾病活性(VAS)评估和来自当前拜访的ESR来计算DAS28-ESR，只有来自当前拜访的ESR不能获得时才利用来自先前拜访的ESR。第24-40周期间任何一次拜访时满足以下标准的受试者符合接受研究药物(利妥昔单抗或安慰剂)的复治的条件DAS28-ESR22.6具有生育能力的女人(包括已经结扎输卵管的那些)的阴性尿妊娠测试此外，如果不能获得当前的结果，那么就第24-40周期间DAS28-ESR22.6来说适合于复治的受试者还必须满足以下标准以便基于来自先前拜访的结果进行复治血红蛋白28.0g/dL绝对嗜中性粒细胞计数(1.5x103/pL)IgM20.40mg/mLIgG25.0mg/mL没有重大心脏或肺部疾病(包括阻塞性肺病)没有原发性或继发性免疫缺陷，包括已知的HIV感染史没有重大失控伴发病的证据，诸如但不限于神经系统、肾、肝、内分泌、或胃肠病症没有任何类别的活动性感染，(不包括曱床的真菌感染)，或者需要在输注的4周内入院治疗或用IV抗生素治疗或者在输注前2周内完成口服抗生素的感染的任何重大发作。本研究期间不允许变更利妥昔单抗剂量。如果发生输注相关反应，可以调节输注速率。如果受试者发生需要中断输注的输注相关反应并且研究人员断定不应重新启动输注，那么所述受试者应当自研究治疗期退出并进入SFU。所有受试者由他们的治疗医师开处方，接受并行的10-25mg/wk的MTX。受试者在进入研究前必须已经用MTX治疗了212周，并且在第l天之前和研究期间必须保持24周的稳定剂量的MTX，除非由于毒性必需变更。可能发生通常与MTX治疗有关的某些不良事件。为了最小化MTX毒性，所有用MTX治疗的受试者还接受以每周一次的单剂或每天一次的分剂给予的稳定剂量的叶酸(25mg/周)。剂量给药方案由研究人员作出判断。如果第1天前剂量稳定了24周，则允许每天用《10mg泼尼松或等效物治疗。整个研究期间剂量应当保持稳定，除非由于毒性需要作出变更。如果第1天前剂量稳定了22周，则允许使用一种NSAID。整个研究期间剂量应当保持稳定，除非由于毒性需要作出变更。此外，对于心血管的预防，允许每天用《325mg乙酰水杨酸治疗。需要时可以用额外的止痛药止痛。然而，受试者在拜访前12个小时内不应服用止痛药，其中拜访时实施功效评估。可以调整止痛方案，但所述变化必须记录在适当的CRF中。不鼓励皮质类固醇的关节内注射，特别是第一个48周期间；然而，可以在研究期间在管理受试者的RA活性的有限基础上使用皮质类固醇的关节内注射。每24周时间里应当注射不超过一个关节，任意48周时间里同一关节不应注射超过一次。单次注射不应当超过40mg曲安西龙(或等效物)，任意48周时间里皮质类固醇的总剂量不应超过80mg曲安西龙(或等效物)。研究期间，受试者可以以S10mg/天泼尼;^(或等效物)的剂量继续"t妄受背景皮质类固醇。在需要用口服皮质类固醇治疗的疾病发作或者非RA疾患诸如哮喘的情况中，应当施用最长2周的适当剂量，且应当以医学上尽可能快的速度递减到先前的水平。提高皮质类固醇的剂量被视为受试者疾患相对于基线的恶化，应当作为不良事件记录在CRF上。除了治疗方案中规定的那些，研究中不允许IV或者肌肉内皮质类固醇。提高皮质类固醇的剂量被视为受试者疾患相对于基线的恶化，应当作为不良事件记录在CRF上。第l天前和研究期间，受试者必须维持》4周的稳定剂量的MTX,除非由于毒性必需变更。复治后16周之时或之后，与基线相比尚未实现TJC和SJC均改善20%的受试者可以用一种非生物学DMARD启动拯救治疗，其选择由他们的治疗医师判断。接受拯救的受试者不从研究中退出。样品必须在输注曱泼尼龙IV和利妥昔单抗/安慰剂之前采集。如果受试者在拜访期间书写困难或者不能阅读，那么只可以由代表所述受试者的研究护士/研究者记录受试人员报告的数据(例如，患者的整体疾病活性评估、患者的疼痛评估)。这必须清楚地记录在受试者记录中。为了防止潜在的非盲操作(unblinding)，使用双重评估员(功效评估员和安全性评估员)法来评估功效和安全性。由受试者和功效评估员完成的评估必需在安全性评估员所作的评估之前做出。受试者应当利用100-mm水平(horizontal)VAS表述最后24小时期间他/她的整体疾病活性评估，所述100-mm水平VAS中线条的左手末端代表无疾病活性(无症状且无关节炎症状)，右手末端代表最大疾病活性(最大关节炎疾病活性)。受试者应当利用100-mm水平VAS表述最后24小时期间他/她的疼痛水平评估，所述100-mm水平VAS中线条的左手末端代表无疼痛，右手末端代表无法忍受的疼痛。斯坦福HAQ残疾指数是特别针对RA的受试者报告问巻。它包括涉及八个构件集的20个问题衣着/修饰(dressing/grooming)、起居(arising)、进食(eating)、4亍走(walking)、卫生(hygiene)、4申展(reach)、4爪4屋(grip)和；舌寸生(activities)。根据斯坦福大学医学中心(StanfordUniversityMedicalCenter)的指导对问巻进行评分(Fries等，Jw/2ntoA/zewm23:137-145(1980))。使用FACIT-F来评估疲劳。它是有13个项目的问巻，要求受试者对其中的每个问题以0-4的标度评分。该评估最初开发用于慢性疾病，现在批准用于RA受试者(Cella等，Ji/zewwa/o/ogy32(5):811-819(2005))。SF-36是通用的健康相关的生活质量工具，已经广泛测试了它的心理测验特性(psychometricproperties),并且广泛用于临床和流行病学研究(Ware等，HowtoScoreVersionTwooftheSF-36HealthSurvey.Lincoln,RI:QualitymetricIncorporated,2000)。SF-36(第2版)由MedicalOutcomesTrust(Boston,MA,USA)提供。应当由风湿病学专家或者熟练的关节评估员评估66个关节的肿胀和68个关节的触痛。躯体4企查时才艮据压力和关节推拿(pressureandjointmanipulation)评估关节并分为肿胀或无肺胀以及触痛或无触痛。不应评估作了完全的关节》务复术Af艮体(prosthesis)或关节融合术(arthrodesis)的关节；然而，应当评估所有其它关节。以下提供要评估肿胀和触痛的关节颞下颌关节胸锁关节肩锁关节肩a肘*腕*第l指上的指节间的关节a第2-5指上的远端指节间关节第2-5指上的近端指节间关节3第1-5指上的掌指关节3臀(仅触痛)膝a踝跖第l-5趾上的趾节间关节第l-5趾上的跖趾关节a包括用于计算疾病活性得分(DAS)28的28个关节。应当如下评估已经经受过如下^L程的关节手术已经在研究之前或研究期间的任何时候被置换或融合的任何关节应当记录为研究期间不可评估的(NE)。任何已经经受过滑膜切除术(包括化学和放射学滑膜切除术)的关节应当在滑膜切除术之后24周记录为未进行(ND)。此后可以再次评估该关节。关节内注射任何已经接受了关节内注射皮质类固醇的关节应当在接下来的12周记录为ND。此后可以再次评估该关节。关节穿刺术任何经受过滑液抽吸的关节在接下来的排定拜访时不作评估，并且评级为ND。此后可以再次评估该关节。医师应当用100-mm水平VAS表述最后24小时期间对受试者疾病活性的评估，lOO-mm水平VAS中线条的左手末端代表无疾病活性(无症状和无关节炎症状)，右手末端代表最大疾病活性。这应当由功效评估员完成，所述功效评估员可以是医师也可以不是医师。在中心实验室分析CRP。用韦斯特格伦氏法(westergrenmethod)在当地实验室测定ESR。已经选择DAS28-ESR22.6作为该试验中复治的阈值。第24-40周期间DAS28-ESR22.6的受试者可符合接受第二个疗程的研究药物(利妥昔单抗或安慰剂)的条件。应当在评估日程中指定的时间实施全面躯体检查(包括心血管、呼吸、胃肠和神经系统)。应当记录每次实施^f企查时的任何持续异常。合适的话应当将新的异常的诊断记录为不良事件。在评估日程中指定的时间获取生命体征(心率、收缩和舒张压、以及体温)。应当在受试者已在半仰卧位姿势保持至少5分钟之后进行评估。应当在评估日程中指定的时间实施十二根导线的心电图(ECG)。筛选时应当获得后前位及侧面胸部放射照片并由研究人员或被指派者评审。筛选时，如果在过去的12周内已经拍摄的胸部放射照片没有显示出临床上显著的异常，并且不存在暗示可能要将受试者从试验中排除出去的肺部疾病的体征或症状，那么胸部放射照相不需要重复。由中心实验室实施血液学、血清学、化学、尿检、血清妊娠测试、流式细胞术、免疫学和CRP分析；由Genentech实施药动学和HACA分析；在研究场所本地实施尿妊娠测试和ESR评估。为所有实验室评估提供使用手册和补给(supply)试剂盒，包括药动学和HACA补给。实-验室评估包括以下项目血液学/CBC:血红蛋白、血细胞比容、红细胞(RBC)、白细胞(WBC)(带微分(differential))和血小板计数。血清学乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和丙型肝炎病毒(HCV)抗体。血清化学AST/SGOT、ALT/SGPT、碱性磷酸酶、总蛋白、清蛋白、总胆红素、血液尿素氮(BUN)、尿酸、肌酸酐、随机葡萄糖(randomglucose)、钟、钠、氯化物、4丐和磷。尿检血液、蛋白质和葡萄糖(如果有异常且适当的话，显微镜检查)。妊娠测试所有有生育潜力的女人(包括已经进行输卵管结扎的那些)在筛选时进行血清妊娠测试。此外，在所有其它拜访时实施定期尿妊娠测试。如果尿妊娠测试为阳性，则必须经过血清妊娠测试确认。血清C3和C4补体水平。免疫学评估定量免疫球蛋白(总Ig、IgG、IgA和IgM)、RF(总的和同种型浓度)和抗环状-瓜氨酸化肽(cyclic-citrullinatedpeptide,CCP)抗体(IgG)。扩展荧光5敫活的纟田月包分选4义(Expandedfluorescent-activatedcellsorter,FACS)分析所评估的细胞群体包括单核细胞(CD14和CD16);NK细胞(CD56);T细胞亚组(CD3、CD4、CD8、CD45RO和CD45RA);和B细胞亚组(CD19、CD27、CD38和IgD)。还可以评估活化标志物(CD25、CD69、CD40L和CD80)。B细胞FACS分析仅绝对B细胞(CD19)。对于所有登记的受试者，利用ELISA实施HACA应答分析。药动学测试在SOA中指定的拜访时以及与HACA相同的时间点获取血清样品用于药动学测试。需要用血清利妥昔单抗浓度来精确解释HACA结果。任选的生物标志物样品对于单独许可的受试者，在探索性生物标志物评估研究过程中收集任选的研究样品(全血、血清)。利用PAXgeneTMRNA管收集的全血样品用于绘制基因表达谱。涉及RA或利妥昔单抗的标志物的血清样品评估可以包括但不限于细胞因子/趋化因子测量以及骨和软骨周转(tumover)标志物的定量。为了获得最佳数据可比性，在相同的时间点收集所有样品。预期由该分析获得的信息通过更好的了解利妥昔单抗的作用方式、相关的功效和安全性、良好应答的预测物以及可能的RA(及其他自身免疫)疾病进展的决定因素促进和便于个体化保健(individualizedhealthcare)。这些样品将在数据库截止后存储达15年。实施研究所特定的任何规程或评估(包括变更受试者当前的治疗方案)之前，所有受试者必须提供知情同意书。可以在第l天实施的首次利妥昔单抗输注之前的56天期间进行筛选评估。应当在其它临床评估之前实施受试者报告的评估。如果筛选时受试者未通过实验室排除标准，则研究人员可以在筛选期内重复测试多达两次。如果所述受试者第三次未通过实验室标准，那么把他们视为未通过筛选。如果由于样品处理问题、破损或样品完整性而导致重新取样，则不将血样或实验室测试视为重复测试。未通过筛选的受试者可以再次筛选。如果受试者在最初筛选拜访的56天内未达到所有的合格中选标准，则可以对其再次筛选。进^f亍再次筛选的受试者必须重复整个筛选过程并且在研究所特定的任何程序之前再次许可。受试者只可以再次筛选一次。a.筛选拜访(第-56天)知情同意书检查选择和排除标准联系IVRS以获得分配的受试者筛选编号人口统计资料(例如，性别、年龄、人种/种族(race/ethnicity))完整医疗史(包括疫苗接种史)筛选前12周内服用的并行药疗，包括疫苗、所有之前的DMARD和生物学药剂生命体4i(心率、血压和体温)全面躯体检查，包括身高和体重测量关节评估12导线ECG胸部X射线如果已经在筛选前12周内实施了胸部X射线并且没有显示临床显著异常，那么筛选时不需要实施胸部X射线。中心实验室评估血液学/CBC乙型肝炎表面抗原和丙型肝炎抗体具有生育潜力的女人(包括已经结扎输卵管的那些)的血清妊娠测试血清化学尿检CRPIgG和IgM总RFESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)对于每次拜访，治疗期间的所有评估都应当在指定时间窗口进行。曰程上排定的在施用利妥昔单抗的日期进行的评估和规程应当在利妥昔单抗输注之前完成，除非另有说明。对于该研究，第l天是初始利妥昔单抗输注的那一天。第l天拜访应当在允许后续拜访(例如，第15天拜访)进行而不会被延迟的那一天实施。应当在其它临床评估之前实施受试者报告的评估。对于符合复治条件的受试者，所述受试者满足复治的合格中选标准的那次拜访被认为是确认资格的拜访。a.第l天所有评估都在输注前30分钟进行，除非另有说明。检查选择和排除标准联系IVRS以获得受试者登记编号和研究药物清单患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQFACIT-FSF-36生命体征(心率、血压和体温)输注前、输注期间(1小时内每15分钟一次，然后每30分钟一次，直至输注结束)和输注后(输注后的1个小时每30分钟一次)躯体4企查，包括测量体重关节评估医师的整体疾病活性评估(VAS)具有生育潜力的女人(包括已经结扎输卵管的那些)的尿妊娠测试中心实验室评估血液学/CBC(输注前和输注后30分钟之内)血清化学尿检扩展FACS(输注前和输注后30分钟之内)CD19B细胞(输注前和输注后SO分钟之内)CRP免疫球蛋白RF抗CCP抗体C3、C4药动学样品(输注前和输注后30分钟之内)HACA样品ESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)任选的研究生物标志物样品(全血和血清样品)施用曱泼尼龙施用利妥昔单抗不良事件并行药疗(concomitantmedications)b.第15天(土1天)所有评估都在输注前30分钟进行，除非另有说明。具有生育潜力的女人(包括已经结扎输卵管的那些)的尿妊娠测试生命体征(心率、血压和体温)输注前、输注期间(1小时内每15分钟一次，然后每30分钟一次，直至输注结束)和输注后(输注后的1个小时每30分钟一次)中心实^r室评估血液学/CBC(利妥昔单抗输注前和输注后30分钟之内)血清化学尿检C3、C4药动学样品(输注前和输注后30分钟之内)施用曱泼尼龙施用利妥昔单抗不良事件并行药疗第4、12和20周(分别为第28、84和140天；±3天)患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQFACIT-F(仅第12周)关节评估医师的整体疾病活性评估(VAS)中心实验室评估血液学/CBC血清化学尿检扩展FACS(仅第12周)CD19B细胞(仅第4周和第20周)CRPC3、C4(仅第4周)药动学样品免疫球蛋白ESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)任选的研究生物标志物样品(全血和血清样品)(仅第12周)不良事件并行药疗d.第24周(第168天士3天)患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQFACIT-FSF-36关节评估医师的整体疾病活性评估(VAS)利用得自此次拜访的关节计数和患者的整体疾病活性评估(VAS)和得自先前拜访的ESR，计算DAS28-ESR,如果ESR结果不可用的话。根据所计算的DAS28-ESR和来自先前拜访的实验室结果，评估受试者对于复治的合适性(eligibility)。如果受试者符合复治条件，则进入复治第1天并且按照说明完成评估。具有生育潜力的女人(包括已经结扎输卵管的那些)的尿妊娠测试中心实^r室评估血液学/CBC血清化学尿检扩展FACSCRP免疫球蛋白RF抗CCP抗体药动学样品HACA样品ESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)任选的研究生物标志物样品(全血和血清样品)不良事件并行药疗第28周(第196天士3天)患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQ关节评估医师的整体疾病活性评估(VAS)只有当受试者未被复治时完成。利用得自此次拜访的关节计数和患者的整体疾病活性评估(VAS)和得自先前拜访的ESR，计算DAS28-ESR，如果ESR结果不可用的话。根据所计算的DAS28-ESR和来自先前拜访的实验室结果，评估受试者对于复治的合适性(eligibility)。如果受试者符合复治条件，则进入复治第1天并且按照说明完成评估。中心实验室评估血液学/CBC血清化学尿检CD19B细胞CRP免疫球蛋白药动学样品ESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)不良事件并4于药疗f.第32、训和"周(分别为第224、280和308天；±3天)患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQFACIT-F(仅第32周)关节评估医师的整体疾病活性评估(VAS)只有当受试者未^C复治时完成。利用得自此次拜访的关节计数和患者的整体疾病活性评估(VAS)和得自先前拜访的ESR，计算DAS28-ESR，如果ESR结果不可用的话(仅第32和40周)。根据所计算的DAS28-ESR和来自先前拜访的实验结果，评估受试者对于复治的合适性(eligibility)。如果受试者符合复治条件，则进入复治第l天并且按照说明完成评估。具有生育潜力的女人(包括已经结扎输卵管的那些)的尿妊娠测试中心实验室评估血液学/CBC血清化学尿检扩展FACS(只有当受试者未被复治时才进行；仅第44周)CD19B细胞免疫球蛋白CRP药动学样品ESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)不良事件并4于药疗g.第48周(第336天士3天)患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQFACIT-FSF-36关节评估医师的整体疾病活性评估(VAS)中心实验室评估血液学/CBC血清化学尿检扩展FACSCRP免疫球蛋白RF抗CCP抗体药动学样品HACA样品ESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)任选的研究生物标志物样品(全血和血清样品)不良事件并4于药疗h.第60周(第420天±7天)患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQFACIT-F关节评估医师的整体疾病活性评估(VAS)具有生育潜力的女人(包括已经结扎输卵管的那些)的尿妊娠测试中心实验室评估血液学/CBC血清化学尿检扩展FACSCRP免疫J求蛋白任选的研究生物标志物样品(全血和血清样品)ESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)不良事件并行药疗i.第72周(第504天土7天)在完成此次拜访时外周B细胞(CD19+)计数尚未恢复的受试者进入B细胞跟踪期。B细胞恢复定义为外周CD19+计数已经恢复到基线值或LLN，以两者中较低的为准。患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQFACIT-FSF-36生命体征(心率、血压和体温)躯体检查，包括体重关节评估医师的整体疾病活性评估(VAS)12导线ECG具有生育潜力的女人(包括已经结扎输卵管的那些)的尿妊娠测试中心实验室评估血液学/CBC血清化学尿检扩展FACSCRP免疫球蛋白RF抗CCP抗体ESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)任选的研究生物标志物样品(全血和血清样品)不良事件并4于药疗第24-40周期间符合复治条件的受试者被随机化以接受额外的研究药物疗程。受试者应当完成确认资格的拜访(qualifyingvisit)期间没有实施的所有复治第l天评估。从所述确认资格的拜访(qualifyingvisit)实施的评估不需要重复。如果不能在确认资格的拜访的同一天给予输注，所述受试者应当在所述确认资格的拜访的72小时内返回以给予输注。复治疗程(复治第1天和第15天)后，受试者应当从符合复治条件的时间点回到其基于评估日程的下一次排定拜访，其中所述受试者在所述时间点获得复治的资格。例如，如果受试者在第32周拜访时符合复治条件，复治疗程(复治第1和15天)后，受试者的下一次排定拜访应当为第40周的拜访。a.复治第1天(R1)所有评估都在输注前30分钟进行，除非另有说明。通过IVRS随机化和分配研究药物患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQFACIT-FSF-36生命体征(心率、血压和体温)输注前、输注期间(1小时内每15分钟一次，然后每30分钟一次，直至输注结束)和输注后(输注后的1个小时每30分钟一次)躯体检查，包括体重测量关节评估医师的整体疾病活性评估(VAS)具有生育潜力的女人(包括已经结扎输卵管的那些)的尿妊娠测试中心实验室评估血液学/CBC(输注前和输注后30分钟之内)血清化学尿检CRP扩展FACS(输注前和输注后30分钟之内)CD19B细胞(输注前和输注后30分钟之内)免疫球蛋白RF抗CCP抗体C3、C4药动学样品(输注前和输注后30分钟之内)HACA样品ESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)任选的研究生物标志物样品(全血和血清样品)施用曱泼尼龙施用研究药物不良事件并4于药疗b.复治第15天(R15;±1天)所有评估都在输注前30分钟进行，除非另有说明。生命体征(心率、血压和体温)输注前、输注期间(1小时内每15分钟一次，然后每30分钟一次，直至输注结束)和输注后(输注后的1个小时每30分钟一次)具有生育潜力的女人(包括已经结4L输卵管的那些)的尿妊娠测试中心实验室评估血液学/CBC(输注前和输注后:30分钟之内)血清化学尿检C3、C4药动学样品(输注前和输注后30分钟之内)施用曱泼尼龙施用研究药物不良事件并4于药疗要求由于任何原因早期从治疗期退出的受试者返回以进行早期治疗退出手早访(earlytreatmentwithdrawalvisit)(直至退出后14天)，然后于退出手早-沐后的第4周返回，然后从受试者退出的时间起至少48周每12周返回一次。在早期治疗退出拜访的时进行以下评估患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQFACIT-FSF-36生命体征(心率、血压和体温)躯体检查，包括体重关节评估*医师的整体疾病活性评估(VAS)12导线ECG中心实验室评估血液学/CBC血清化学尿检CRPCD19B细胞免疫球蛋白RF抗CCP抗体药动学样品HACA样品任选的研究生物标志物样品(全血和血清样品)ESR(本地实验室；韦斯特格伦氏法)不良事件并4于药疗对于以下受试者在早期退出或完成所确定的治疗期之后的第4、12、24、36和48个SFU周进行安全性跟踪(SFU)评估第24-40周期间复治并完成治疗期(即，第72周拜访)的受试者早期从治疗期退出的受试者在每次SFU拜访时进行以下评估直至第4周的所有不良事件第4周之后的严重不良事件和感染性不良事件用于治疗这些事件的并行药疗中心实^r室评估血液学/CBC免疫球蛋白药动学样品HACA样品CD19B细胞在最后的SFU拜访时，外周B细胞(CD19+)计数尚未恢复的受试者进入B细胞跟踪期。B细胞恢复定义为外周CD19+计数已经恢复到基线值或LLN,以两者中较低的为准。对于报告的所有严重感染性不良事件，应当在发作l周内测定CBC(带微分)、定量Ig和CD19计数。在最后方案确定的拜访时(第72周或者SFU结束时)外周B细胞(CD19+)计数尚未恢复的受试者进入B细胞跟踪期并自最后一次拜访起每12周返回进行研究拜访，直至B细胞恢复。B细胞恢复定义为外周CD19+计数已经恢复到基线值或LLN，以两者中较低的为准。在每次B细胞跟踪拜访时实施以下评估和规程严重不良事件和感染性不良事件用于治疗这些事件的并行药疗中心实验室评估血液学/CBC免疫球蛋白流式细胞术B细胞(CD19+)计数对于报告的所有严重感染性不良事件，应当在发作1周内测定CBC(带微分)、定量Ig和CD19计数。血液、血清和尿液样品在指定时间点获取。在实验室手册中提供处理、存储和运输样品到Genentech和中心临床实验室的说明。对于血液学、血清学、化学、血清p-hCG、流式细胞术、免疫学和尿4企，使用标准测定法。利妥昔单抗药动学ELISA测定人血清样品中的利妥昔单抗水平。它使用亲和纯化的多克隆山羊抗利妥昔单抗作为捕捉试剂，使用偶联有辣根过氧化物酶(HRP)的山羊抗小鼠IgGF(ab)2抗体作为检测试剂。抗利妥昔单抗HACAELISA为桥接测定法，其使用利妥昔单抗作为捕捉试剂，生物素化的利妥昔单抗和链霉亲合素-HRP用于检测。所述测定法使用由亲和纯化的多克隆山羊抗利妥昔单抗抗体制作的校准曲线，并通过利用利妥昔单抗的免疫消减确认。以相对单位(RU)/mL报告相对于该多克隆抗体的该测试的结果。受试者可以随时从治疗期退出或中止，但应当在14天内回到研究中心进行早期治疗退出拜访、SFU和潜在地B细胞跟踪。已经自该治疗期中止的受试者被跟踪以进行安全性评估。应当尽最大努力以获得早期中止的受试者的这些评估。早期中止的主要原因必须记录在合适的CRF页上。受试者被研究人员中止的原因包括但不限于下述经i午可的主动退出如果他或她继续参与研究可能会危及受试者的安全的任何医学疾患，这由研究人员决定研究人员判定继续的话不符合受试者的最大利益研究期间任何时候具有阳性尿或血清妊娠测试的受试者。早期退出的受试者不再替换。Genentech有权在任何时候终止本研究。终止本研究的原因可能包括但不限于下述在本研究或其它研究中不良事件的发生率或严重程度显示了对受试者潜在的健康危害。受试者登记不令人满意。lt据记录不准确或不完整。本研究设计用于评估对于合格的受试者用利妥昔单抗或安慰剂复治一个疗程的功效以及评估活动性RA受试者中利妥昔单抗治疗的安全性，所述活动性RA受试者正在接受MTX并且先前或当前对一种或多种抗TNF疗法响应不足。进行复治的受试者的合适性以DAS28-ESR消退标准(DAS28-ESR兰2.6)为基础。有大约555名受试者加入。本研究对于第一个疗程(用利妥昔单抗)是标签开放的，而对于符合复治疗程(研究药物)条件的受试者是盲法操作的(blinded)。第24-40周期间，把满足复治标准的受试者以2:1的比例随机化至利妥昔单抗或安慰剂。除非另有说明，所有统计学检验都是双侧的(twosided),并且在p=0.05的显著性水平进行。主要终点是第48周时相对于基线(第l天)具有ACR20应答的受试者的比例。一旦来自所有受试者的第48周评估进入数据库并且数据库被清理和冻结，则开始分析非盲lt据。对于用利妥昔单抗进行的标签开放治疗区段(本研究的前24周)，由中心对加入的受试者编号制表。对于自标签开放治疗区段中止的受试者，总结中止的原因。总结关键合格中选标准的违反(violations)、其它主要方案偏差(protocoldeviations),以及完成每次预定剂量的受试者数。对于用研究药物进行的盲法复治区段，由中心和治疗组对随机化的受试者编号制表。由治疗组在受试者随机化、治疗和研究的完成方面总结受试者的配置。由治疗组概括关键合格中选标准的违反、其它主要方案偏差、以及完成每次预定剂量的受试者数。对于早期从安慰剂对照、复治区段中止的受试者，由治疗组总结和列出中止的原因。在人口资料(即，年龄、性别、人种/种族)和基线特征(例如，体重、RA持续时间、基线RF状况、基线SJC/TJC、基线DAS28-ESR和之前的TNF疗法数)方面评估治疗组基线的可比性。把任何变量的基线值定义为首次施用利妥昔单抗(第l天)前的最后可得值。通过不良事件、死亡、实验室测试结果、生命体征和HACA的总结来评估安全性。这些总结作为标签开放治疗区段的全面概括由安慰剂对照的复治区段的治疗组提供。安全性分析以接受任何研究药物量的受试者为基础。根据接受的实际治疗分析受试者。下述安全性总结包括于安全性分析中。治疗紧急不良事件的说明逐字编制(mapped)到MedDRA辞典项(thesaurusterm)。不良事件根据系统器官类别、治疗组和NCICTCAE等级制表。以所有治疗的受试者为基础针对严重不良事件、感染相关的不良事件、利妥昔单抗相关的输注反应和导致研究药物中止的不良事件进行不良事件制表，并且在初始利妥昔单抗疗程和复治疗程的首次输注之后制表。此外，以初始利妥昔单抗疗程和复治疗程的首次输注之后以及整个观察期每100个患者-年的发生率概括严重不良事件。列出和/或总结受试者死亡和死亡的主要原因。提供整个研究期间实验室数值以及相对于基线的变化的叙述性概括。概括经历治疗紧急实验室异常的受试者的比例。治疗组提供整个研究期间生命体征以及相对于基线的变化的叙述性概括概括对利妥昔单抗有可测量的抗体应答的受试者的比例。意向治疗(intent-to-treat,ITT)人群由随机化到安慰剂对照的复治区段中并且接受任何研究药物的所有受试者组成。ITT人群是主要和次要终点的主要分析人群。根据受试者的随机化治疗对其进行分析。主要终点是第48周时与基线(第l天)相比具有ACR20应答的复治受试者的比例。为了获得ACR20，与基线相比在TJC和SJC中均需要》20。/。的改善，同样，如下五种额外测量值中有三种需要有220%的改善医师的整体疾病活性评估患者的整体疾病活性评估(VAS)患者的疼痛评估(VAS)HAQ急性期反应物(CRP或ESR)CRP用于ACR20的计算。如果CRP丟失或未实施，则使用ESR。利用通过基线RF状况分组的Cochran-MantelHaenszel检验统计，提供安慰剂复治和利妥昔单抗复治组之间ACR20应答率差异的主要分析。由治疗组叙述性地概括结果并以比例表示，同时还有应答率和p-值之间差异的相应经调整的95%置信区间(CI)。ACR20应答率还利用逻辑斯谛回归(logisticregression)分析，并且在利用逻辑斯谛回归模型以基线RF状况为对照的同时，检验第48周时ACR20应答与治疗纟且之间的关耳关(ACR20responserateswillalsobeanalyzedusinglogisticregressionandtestingforanassociationbetweenACR20responseatWeek48andtreatmentarmwhilecontrollingforbaselineRFstatususingalogisticregressionmodel.》通过对标准误差、Wald统计和具有相应的95%CI和p值的优势比(oddsratios)制表来检验来自所述模型的参数估计值。也通过调整ACR20应答的可能的说明项(例如，基线SJC)来实施灵敏度分析。如下分析次要终点利用与针对主要终点规定的相同手段分析第48周时具有ACR50和ACR70应答的受试者的比例。利用方差分析(ANOVA)模型评估DAS28-ESR自基线到第48周的变化，在所述模型中安慰剂/利妥昔单抗复治组和基线RF状况作为说明项。利用通过基线RF状况分组的累力口logits模型(logitsmodel)分析第48周时经排序的(ordered)ACR应答类别(ACR70应答者、ACR50-70应答者、ACR20-50应答者和ACR20无应答者)。通过对标准误差、Wald统计和具有相应的95%CI和p值的优势比制表来检验来自所述模型的参数估计值。以与针对主要终点规定的相同手段分析EULARA应率(优等或中等)。在ANOVA模型中分析ACR核心集(SJC、TJC、HAQ、患者的和医师的整体评估、疼痛、CRP以及ESR)自基线到第48周的变化，在所述模型中安慰剂/利妥昔单抗复治组和基线RF状况作为说明项。利用方差分析(ANOVA)模型评估第48周ACRn和第48周ACRn的AUC，在所述模型中安慰剂/利妥昔单抗复治组和基线RF状况作为说明项。对于八个区域(domain)得分和精神及躯体构件得分，利用ANOVA模型中所分析的，报告SF-36子标度(subscale)和概括得分自基线到第48周的变页化，在所述模型中安慰剂/利妥昔单抗复治组和基线RF状况作为说明项。此外，对精神和躯体构件得分进一步分类和分析。利用ANOVA模型中所分析的，分析FACIT-F评估自基线到第48周的变化，在所述模型中安慰剂/利妥昔单抗复治组和基线RF状况作为说明项。以与针对主要终点规定的相同手段分析第48周时获得DAS28-ESR消退(DAS28-ESR<2.6)的受试者的比例。以与针对主要终点规定的相同手段分析第48周时获得DAS28-ESR低病情(DAS28-ESRS3.2)的受试者的比例。利用群体PK模型针对所有受试者估计衍生自利妥昔单抗血清浓度的药动学(PK)参数，包括最大血清浓度(C醒)、最大血清浓度的时间(T隱)、浓度-时间曲线下面积(AUC)、系统清除(CL)、分布容量(V)和半衰期(t！/2)。由于取样稀少，分布相可能不能很好地表征。来自本研究的PK数据与来自其它研究的数据组合，用于群体PK分析。对于群体PK分析，与受试者内和受试者间变异的估计值和随机误差的估计值一起估算整个研究人群的总体均值PK参数。利用事后(posthoc)分析规程计算个体受试者参数估计值。准备远景分析计划(prospectiveanalysisplan),并且在来自临床研究报告的单独报告中提供群体PK分析。群体PK分析包括探索性分析，以鉴定影响该患者人群中利妥昔单抗的药动学的基线协变量。要检验的基线协变量包括人口资料及其他受试者特征，例如疾病严重程度和所选择的实验室测量值。利用描述性统计学包括均值、标准偏差、几何均值、变异系数、中值和范围概括数据。叙述性地概括来自血液样品的潜在的药效学标志物，包括B细胞计数、定量Ig水平、淋巴细胞亚型和HACA浓度。对于这些分析，自第l天服药前样品测定的基线值用于计算每个取样时间点相对于基线的变化。实施探索性分析以评估药效学标志物、PK测量值和临床应答之间的可能相关性，并在统计学分析计划(StatisticalAnalysisPlan)中详细说明。有大约555名受试者加入。标签开放治疗区段的退出率达25%,第24周时获得DAS28-ESR消退且不进行复治的受试者达10。/。，随机化比率为2:1，那么利用Fisher精确检验，该样本大小在检测利妥昔单抗复治组(50%的ACR20应答者)和安慰剂组(34%的ACR20应答者)之间自基线到第48周的ACR20应答率中16°/。的差异时具有80°/。的能力(power)。安全性评估包括监测和记录方案确定的不良事件(AE)和严重不良事件(SAE);方案规定的实验室(血液学、临床化学和尿检)变量测量值；方案规定的生命体征测量值；及其他被认为对研究药物的安全性评估至关重要的方案规定的测试。为了监测输注相关反应，在施用研究药物的日子里，在刚进行输注前，对于输注期间的第一个小时每15分钟一次、然后对于输注的其余时间每30分钟一次，对于输注后的一个小时每30分钟一次获得生命体征。可以在输注相关反应(例如，低血压和/或发烧)的事件中获得其他的读数。AE是暂时与使用研究(医学)产品或其它方案施加的干预有关的任何不喜欢的和不想要的体征、症状或疾病，不管归因(attribution)。这包括下述之前在受试者中没有观察到的、在方案规定的AE报告期出现的AE,包括与RA有关的在AE报告期之前不存在的体征或症状并发症，其作为方案强制性的干预(例如，介入性操作例如活组织切片)的结果而发生如果适用的话，在分配研究治疗之前发生的与药疗排除、没有治疗运行(notreatmentrun-in)或其它方案强制性的干预有关的AE经调查人员判断，在方案规定的AE报告期期间，严重程度或频率上恶化的或者性状改变的先前存在的医学疾患(非正在研究的疾患)如果AE满足下述标准，则应当将其归类为SAE:它导致死亡(即，所述AE事实上引发或者导致死亡)。它威胁生命(即，在调查人员看来，所述AE将受试者立即置于死亡的风险中。它不包括已经以更严重的形式发生的可能已经引发死亡的AE。)。它要求患者入院治疗或者延长了患者入院治疗。它导致持久的或者重大的残疾/无能(即，所述AE导致受试者实施正常生命机能的能力的实质性破坏)。对于暴露于所述调查产品的母亲来说，它在新生儿/婴儿出生中导致先天异常(congenitalanomaly)/出生缺陷(birthdefect)。调查人员根据医学判断将它视为重大的医学事件(例如，可能危及受试者或者可能需要医学/手术干预以预防以上列出的其中一种结果)。所有不满足任一严重标准的AE都应当被认为是非严重AE。术语"重度的(severe)"和"严重的(serious)"不同义。严重程度(或者强度)指特定AE的等级，例如，轻度的(等级l)、中度的(等级2)或者重度的(等级3)心肌梗死。"严重的(Serious)"为调节性概念，其以受试者或事件结果或者行动标准为基础，其通常与对受试者的生命或机能造成威胁的事件相关。严重性(seriousness)(非严重程度(notseverity))用作将来自主办者的调节性报告义务(regulatoryreportingobligations)确定为可适用的调节性才又利(applicableregulatoryauthorities)的指导。在CRF上记录AE和SAE时应当独立评估严重程度和严重性。调查人员评估研究期间所有受试者评估时间点AE和SAE的发生。所有AE和SAE，无论是受试者自愿提供的、研究人员在询问期间发现的、或者通过躯体检查、实验室测试或者其它手段检测的，都记录在受试者的医疗记录中和适当的AE或SAECRF页上。所记录的每个AE或SAE都通过其持续时间(即，开始和结束日期)、严重程度(参见表2)、(如果适用的话)调节性严重性标准、猜测的与调查产品的相关性(参见后面的指导)以及采取的行动来描述。在NCICTCAE,V3.0中发现的AE评级(严重程度)标度用于AE报告。表2不良事件评级(严重程度)标度<table>tableseeoriginaldocumentpage137</column></row><table>者致残的(应用事件特异医学干预/治疗，可能入院的NCICTCAE评级标准)治疗^_与AE相关的死亡_注不管严重程度，一些事件也可能满足调节性严重性标准。参见SAE的定义。a当所观察的或报告的AE不在NCICTCAE列表中时使用这些等级l、2、3和4事件的替代定义。为了确保AE和SAE因果性评估的一致性，调查人员应当应用以下通用指南是在AE发作和施用调查产品之间存在似是而非的暂时的相关性，并且不能容易地通过受试者的临床状态、间发(intercurrent)疾病或并行治疗解释所述AE;和/或所述AE遵循对所述调查产品应答的已知模式；和/或一旦中止所述调查产品或者减少剂量则AE减轻或消除，并且如果适用的话，一旦再次攻击则重新出现。*否存在所述AE具有非调查产品的病因学的证据(例如，先前存在的医学疾患、潜在的疾病、间发疾病或者并行药疗)；和/或所述AE与施用所述调查产品没有似是而非的暂时的相关性(例如，首剂研究药物后2天it断的癌症)。注调查人员对个体AE报告因果性的评估是研究记录处理的一部分。不管针对个体AE报告的"是"或"否"的因果性评估，主办者迅速评估所有针对累积的产品经历报告的SAE，以鉴定和迅速向调查人员和合适的管理当局(regulatoryauthorities)传达可能的新安全性发现。只有当调查人员在研究期间的任何时间断定严重程度和/或频率已经出乎意料地恶化或者属性已经改变时才应当将RA记录为AE或者SAE。当在AE或SAECRF页上记录出乎意料的类风湿性关节炎恶化时，通过包括适当的描述语(例如，"加速的类风湿性关节炎")而表达疾患已经改变的意思是重要的。根据本文的方案(或者用不同的CD20抗体)复治对于预防或减緩RA导致的结构性关节损伤和侵蚀的进展是有效的。不使用MTX,即使用CD20抗体的单一疗法产生有效的结果。实施例4:4艮屑病关节炎患者中利妥昔单抗的功效研究除了治疗患者由4艮屑病关节炎导致的关节损伤之外，沿用实施例2中的方案。就类风湿性关节炎而言，观察到类似的结果(使用利妥昔单抗或者人源化2H7抗体)，即，首剂CD20抗体(取决于例如剂量，有或没有曱氨蝶呤，所述剂量可以适当地调整)后，在自基线或治疗开始起至少大约一个月、优选自基线起至少24周、更优选自基线起至少52周、以及直至自基线起104周的更多时间点实现对结构性关节损伤进展的预防。这些基于利妥昔单抗的方案挑战现行的护理标准，提高净临床益处，主要目的是预防关节损伤的进展。这些结果显著优于对照组的结果。以实施例2所列预定再次剂量给药方案给受试者施用利妥昔单抗或人源化2H7于第52周或之后在预防结构性关节损伤进展方面是有效的。这些结果显著优于对照的结果。在大约第48-54周时一次性给予另一剂lg或2g的CD20抗体(例如，利妥昔单抗或人源化2H7)或者在约14-16天时间里以0.5克或1克的量分散给予CD20抗体还在整个第二年有效治疗关节损伤，其中有或无一种或多种第二种药剂诸如免疫抑制剂。如此，首先在大约2周时间里施用CD20抗体，接着自初始治疗(从给予任何一剂起计算)起大约4-8个月时进行另一次治疗，接着自初始治疗起大约一年时进行另一次治疗，接着自初始治疗起大约两年时进行治疗，对于每次治疗以大约半克或者一克x2-4剂，大约每周一次或者约二到四周时间里大约隔周一次一起施用，获得成功。该治疗的结果比使用安慰剂的对照的结果好得多。该复治方案成功使用数年而没有副作用或副作用很小。实施例5:骨关节炎和克罗恩氏病患者中利妥昔单抗功效的治疗研究在患者具有骨关节炎或克罗恩氏病所致的关节损伤的情况中，实施例2的结果获得成功，无论是使用利妥昔单抗还是另一种CD20抗体诸如人源化2H7，无论是否使用免疫抑制剂，其中剂量的调节是本领域技术人员知道的。还有，如果这些患者首先用CD20抗体进行治疗，然后在首次治疗后大约六个月或者大约一年用这种抗体进行复治，其它方面采用实施例2的相同剂量给药及其他方案，他们在较长的时间里继续经历对关节损伤进展的预防。利妥昔单抗或其它CD20抗体在诱导和维持关节损伤消退方面也至少与常规治疗方案一样有效，凭借其优越的副作用谱，例如，比类固醇更小的毒性和更好的恢复耐受，相对于标准疗法提供实质性优势。治疗组中的患者很好地耐受利妥昔单抗输注，他们的B细胞短促(swiftly)消减。除了曱氨蝶呤之外，如果需要的话，对于在CD20抗体治疗的患者中诱导消退和维持持续的消退来说(6个月或更久)，额外的免疫抑制剂不是必需的。权利要求1.一种用于治疗受试者中的关节损伤的方法，包括将CD20抗体施用于该受试者，并且在该次给药之后至少大约一个月给予该受试者放射照相术检查，以测量与该次给药之前的基线相比该关节损伤的减轻，其中CD20抗体的施用量在实现该关节损伤的减轻中是有效的。2.权利要求l的方法，其中施用该CD20抗体之后的该放射照相术检查发生在施用该抗体之后至少大约两个月。3.权利要求l的方法，其中施用该CD20抗体之后的该放射照相术检查发生在施用该抗体之后至少大约IO周。4.权利要求l的方法，其中施用该CD20抗体之后的该放射照相术检查发生在施用该抗体之后至少大约三个月。5.权利要求l的方法，其中施用该CD20抗体之后的该放射照相术检查发生在施用该抗体之后至少大约四个月。6.权利要求l的方法，其中施用该CD20抗体之后的该放射照相术检查发生在施用该抗体之后至少大约五个月。7.权利要求l的方法，其中施用该CD20抗体之后的该放射照相术检查发生在施用该抗体之后至少大约24周。8.权利要求l的方法，其中施用该CD20抗体之后的该放射照相术检查发生在施用该抗体之后至少大约52周。9.权利要求l-8任一项的方法，进一步包括再次将CD20抗体施用于该受试者，其中CD20抗体的施用量在实现与前次施用CD20抗体的效果相比持续的或维持的关节损伤减轻中是有效的。10.权利要求9的方法，其中再次将CD20抗体施用于该受试者，即使在前次给药之后的放射照相术检查时该受试者没有临床改善。11.权利要求10的方法，其中所述临床改善是通过评估触痛的或肿胀的关节数目、银屑病评估严重性指数、受试者的整体临床评估、评估红细胞沉降率、或者评估C-反应蛋白水平的量而确定的。12.权利要求l的方法，其中所述检查测量改良Sharp总分。13.权利要求l的方法，其中所述抗体是利妥昔单抗。14.权利要求l的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含SEQIDNO:2和8中的可变域序列。15.权利要求l的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含SEQIDNO:39和40中的可变域序列。16.权利要求l的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含SEQIDNO:32和33中的可变域序列。17.权利要求l的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含在SEQIDNO:8中具有改变N100A、或D56A+N100A、或D56A+N100Y+S100aR的重链可变域及在SEQIDNO:2中具有改变M32L、或S92A、或M32L+S92A的轻链可变域。18.权利要求l的方法，其中所述关节损伤是由关节炎、整形植入物的无菌关节松动、骨折的不愈合、脊推关节病、银屑病、或克罗恩氏病引起的。19.权利要求18的方法，其中所述关节损伤是由关节炎引起的。20.权利要求19的方法，其中所述关节损伤是由类风湿性关节炎、骨关节炎、强直性脊柱炎、和银屑病关节炎引起的。21.权利要求l的方法，其中所述抗体是静脉内施用的。22.权利要求l的方法，其中所述抗体是皮下施用的。23.权利要求l的方法，其中所述受试者以前从未用CD20抗体治疗过。24.权利要求l的方法，其中所述受试者是未用过曱氨蝶呤的患者。25.权利要求24的方法，其中所述未用过曱氨蝶呤的患者患有活动性类风湿性关节炎。26.权利要求l的方法，其中所述抗体是棵抗体。27.权利要求l的方法，其中所述抗体偶联有另一分子。28.权利要求l的方法，其中所述抗体是以大约0.4到4克的一剂施用的。29.权利要求26的方法，其中抗体是以大约0.4到1.3克的一剂施用的。30.权利要求29的方法，其中所述剂是大约1.5到3.5克。31.权利要求30的方法，其中所述剂是大约1.5到2.5克。32.权利要求l的方法，其中所述抗体是以大约一个月时期内一到四剂的频率施用的。33.权利要求32的方法，其中所述剂是大约500毫克到1.2克。34.权利要求33的方法，其中所述剂是大约750毫克到1.1克。35.权利要求l的方法，其中所述抗体是以两到三剂施用的。36.权利要求l的方法，其中所述抗体是在大约2到3周的时期内施用的。37.权利要求l的方法，其中没有对该受试者施用CD20抗体以外的药物以治疗该关节损伤。38.权利要求l的方法，其中以有效量施用第二药物，其中该CD20抗体是第一药物。39.权利要求38的方法，其中所述第二药物是种类超过一种的药物。40.权利要求38或39的方法，其中所述第二药物是抗生素、免疫抑制剂、緩解病情的抗风湿药(DMARD)、疼痛控制剂、整联蛋白拮抗剂、非类固醇抗炎药(NSAID)、细胞因子拮抗剂、二碳磷酸盐化合物、或激素、或其组合。41.权利要求40的方法，其中所述第二药物是DMARD。42.权利要求41的方法，其中所述DMARD选自金诺芬、氯喹、D-青霉胺、可注射的金、口服的金、羟氯喹、柳氮磺吡啶、myocrisin和曱氨蝶呤。43.权利要求40的方法，其中所述第二药物是NSAID。44.权利要求43的方法，其中所述NSAID选自颇得斯安、美沙拉秦、安萨科、磷酸可待因、贝诺酯、芬布芬、萘普生、双氯芬酸、依托度酸、吲哚美辛、阿司匹林和布洛芬。45.权利要求40的方法，其中所述第二药物是疼痛控制剂。46.权利要求45的方法，其中所述疼痛控制剂选自对乙酰氨基酚和右丙氧分。47.权利要求40的方法，其中所述免疫抑制剂选自依那西普、英夫利昔单抗、阿达木单抗、来氟米特、阿那白滞素、疏唑嘌呤和环磷酰胺。48.权利要求40的方法，其中所述第二药物选自OPG、依那西普、英夫利昔单抗、依那西普、阿达木单抗、kinaret、raptiva、骨保护素(OPG)、RANKFc、抗RANKL、pamidronate、阿伦膦酸盐、actonel、峻来膦酸盐、氯膦酸盐、曱氨蝶呤、azulfidine、羟氯喹、多西环素、来氟米特、柳氮磺吡啶(SSZ)、泼尼松龙、白介素-l受体拮抗剂、泼尼松和曱泼尼龙。49.权利要求40的方法，其中所述第二药物选自英夫利昔单抗、英夫利昔单抗+曱氨蝶呤(MTX)组合、MTX、依那西普、皮质类固醇、环孢菌素A、碌u唑噪呤、金诺芬、羟氯喹(HCQ)、泼尼松龙+MTX+SSZ的组合、MTX+SSZ+HCQ的组合、环磷酰胺+碌u唑嘌呤+HCQ的组合、和阿达木单抗+MTX的组合。50.权利要求49的方法，其中所述皮质类固醇是泼尼松、泼尼松龙、曱泼尼龙、氢化可的松、或地塞米松。51.权利要求49的方法，其中所述第二药物是MTX。52.权利要求l的方法，其中所述受试者是类风湿因子阴性的。53.权利要求l的方法，其中所述受试者是类风湿因子阳性的。54.权利要求l的方法，其中所述受试者在基线之前施用了曱氨蝶呤。55.权利要求54的方法，其中所述曱氨蝶呤是以大约10-25毫克/周的一剂施用的。56.权利要求54或55的方法，其中所述曱氨蝶呤在基线之前施用了至少大约12周。57.权利要求56的方法，其中所述曱氨蝶呤在基线之前最后四周是以稳定的剂量施用的。58.权利要求54的方法，其中所述曱氨蝶呤是口服或胃肠外施用的。59.权利要求l的方法，其中所述关节损伤是由类风湿性关节炎引起的且所述受试者已经展现出对一种或多种抗肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂的响应不足。60.权利要求59的方法，其中伴随的曱氨蝶呤与CD20抗体一起施用于受试者。61.^L利要求60的方法，其中在治疗开始时在第1天和第15天以大约1000毫克x2的一剂静脉内施用CD20抗体。62.—种监测受试者中的关节损伤治疗的方法，包括将有效量的CD20抗体施用于该受试者并在该次给药之后至少大约一个月通过放射照相术测量该关节损伤是否相对于该次给药之前的基线已经减轻，其中治疗之后该受试者中对比于基线的减轻指明该CD20抗体正在对该关节损伤产生效果。63.权利要求62的方法，其中在施用CD20抗体之后再次测量对比于基线的减轻程度。64.权利要求62或63的方法，其中所述测量在至少大约24周之后。65.—种制品，包括a.装有CD20抗体的容器；和b.印有用于治疗受试者中的关节损伤的说明书的包装插页，其中该说明书指示对受试者施用CD20抗体，然后在该次给药之后至少大约一个月进行放射照相术检查以测量与该次给药之前的基线相比该关节损伤的减轻，其中CD20抗体的施用量在实现关节损伤的减轻中是有效的。66.权利要求65的制品，进一步包括装有第二药物的容器，其中CD20抗体是第一药物，进一步包括印在包装插页上的、用有效量的第二药物治疗受试者的说明书。67.—种用于治疗受试者中的关节损伤的方法，包括将CD20抗体施用于该受试者，并且在该次给药之后至少大约52周给予该受试者放射照相术检查以测量与该次给药之前的基线相比该关节损伤的减轻，其中CD20抗体的施用量在实现该关节损伤的减轻中是有效的。68.权利要求67的方法，其中所述^r查测量改良Sharp总分。69.权利要求67的方法，其中所述抗体是利妥昔单抗。70.权利要求67的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含SEQIDNO:2和8中的可变域序列。71.权利要求67的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含SEQIDNO:39和40中的可变域序列。72.权利要求67的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含SEQIDNO:32和33中的可变域序列。73.权利要求67的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含在SEQIDNO:8中具有改变N100A、或D56A+N100A、或D56A+N100Y+S100aR的重链可变域及在SEQIDNO:2中具有改变M32L、或S92A、或M32L+S92A的轻链可变域。74.权利要求67的方法，其中所述关节损伤是由关节炎引起的。75.权利要求74的方法，其中所述关节炎是类风湿性关节炎。76.权利要求75的方法，其中所述关节炎是早期活动性类风湿性关节炎。77.权利要求67的方法，其中在该治疗方法中施用第一剂CD20抗体之前该受试者以前没有用免疫抑制剂治疗过。78.权利要求67的方法，其中所述抗体是以大约0.4到4克的一剂施用的。79.权利要求67的方法，其中所述抗体是以大约0.4到1.3克的一剂、以大约一个月时期内一到四剂的频率施用的。80.权利要求79的方法，其中所述剂是大约500毫克到1.2克。81.权利要求80的方法，其中所述剂是大约750毫克到1.1克。82.据权利要求67的方法，其中所述抗体是以两到三剂施用的。83.权利要求67的方法，其中所述抗体是在大约2到3周的时期内施用的。84.权利要求67的方法，进一步包括通过给该受试者施用有效量的CD20抗体来复治该受试者。85.权利要求84的方法，其中所述复治开始于第一次施用CD20抗体之后至少大约24周。86.权利要求85的方法，其中开始了又一个复治。87.权利要求86的方法，其中所述又一个复治开始于第二次施用CD20抗体之后至少大约24周。88.权利要求84的方法，其中所述复治之后关节损伤已经减轻。89.权利要求84的方法，其中所述复治之后进行放射照相术检查时在受试者中没有观察到临床改善。90.权利要求89的方法，其中所述临床改善是通过评估触痛的或胂胀的关节数目、银屑病评估严重性指数、受试者的整体临床评估、评估红细胞沉降率、或者评估C-反应蛋白水平的量而确定的。91.权利要求67的方法，其中以有效量施用第二药物，其中该CD20抗体是第一药物。92.权利要求91的方法，其中所述第二药物是种类超过一种的药物。93.权利要求91的方法，其中所述第二药物是抗生素、免疫抑制剂、緩解病情的抗风湿药(DMARD)、疼痛控制剂、整联蛋白拮抗剂、非类固醇抗炎药(NSAID)、细胞因子拮抗剂、二碳磷酸盐化合物、或激素、或其组合。94.权利要求93的方法，其中所述第二药物是曱氨蝶呤。95.权利要求67的方法，其中所述受试者是类风湿因子阴性的。96.权利要求67的方法，其中所述受试者是类风湿因子阳性的。97.权利要求67的方法，其中所述CD20抗体是静脉内施用的。98.权利要求67的方法，其中所述CD20抗体是皮下施用的。99.一种监测受试者中的关节损伤治疗的方法，包括将有效量的CD20抗体施用于该受试者并在该次给药之后至少大约52周通过放射照相术测量该关节损伤是否相对于该次给药之前的基线已经减轻，其中治疗之后该受试者中对比于基线的减轻指明该CD20抗体正在对该关节损伤产生效果。100.权利要求99的方法，其中在施用CD20抗体之后再次测量对比于基线的减轻程度。101.—种制品，包括a.装有CD20抗体的容器；和b.印有用于治疗受试者中的关节损伤的说明书的包装插页，其中该说明书指示对受试者施用CD20抗体，然后在该次给药之后至少大约52周进行放射照相术检查以测量与该次给药之前的基线相比该关节损伤的减轻，其中施用的CD20抗体的量在实现关节损伤的减轻中是有效的。102.权利要求101的制品，进一步包括装有第二药物的容器，其中CD20抗体是第一药物，进一步包括印在包装插页上的、用有效量的第二药物治疗受试者的说明书。103.权利要求102的制品，其中所述第二药物是曱氨蝶呤。104.—种用于治疗受试者中的关节损伤的方法，其中(a)该受试者已经展现出对一种或多种抗胂瘤坏死因子(TNF)抑制剂的响应不足；(b)该受试者接受了至少一个在先的使用CD20抗体的疗程；且(c)该治疗包括施用至少一个^f吏用CD20抗体的更多疗程。105.权利要求104的方法，其中所述受试者对至少一个在先的使用抗CD20抗体的疗程有响应。106.权利要求104的方法，其中所述关节损伤是由关节炎引起的。107.权利要求106的方法，其中所述关节炎是类风湿性关节炎。108.权利要求104的方法，其中所述抗体是利妥昔单抗。109.权利要求104的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含SEQIDNO:2和8中的可变域序列。110.权利要求104的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含SEQIDNO:39和40中的可变域序列。111.权利要求104的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含SEQIDNO:32和33中的可变域序列。112.权利要求104的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含在SEQIDNO:8中具有改变N100A、或D56A+N100A、或D56A+N100Y+S100aR的重链可变域及在SEQIDNO:2中具有改变M32L、或S92A、或M32L+S92A的轻链可变域。全文摘要本发明提供了治疗符合治疗条件的受试者中的关节损伤的方法，包括以根据放射照相术的测量能有效减缓关节损伤进展的量对受试者施用能与B细胞表面标志结合的拮抗剂，诸如CD20抗体。本发明进一步提供了可用于这样的方法的制品。文档编号A61P19/02GK101365487SQ200680050934公开日2009年2月11日申请日期2006年11月14日优先权日2005年11月15日发明者戴维·约克姆,苏尼尔·阿加瓦尔,蒂莫西·M·肖,阿里拉·凯尔曼,马克·托托里蒂斯申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司;生物基因Idec公司;健泰科生物技术公司