专利名称：：连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺的制作方法
技术领域：
：本发明属于天然产物化学研究领域，具体涉及天然产物提取、分离、纯化和检测方法，尤其涉及一种连续柱层析法提取苦马豆素的工艺。二、
背景技术：
疯草(Locoweed)在我国西北部是一种很常见的杂草，家畜误食后，容易引起中毒，常被视作有害杂草。近年来的研究表明，疯草的主要毒性成分一苦马豆素，在用量适当的情况下，不但能抑制癌细胞的生长，还能激活机体免疫力，减轻癌症患者因化疗而引起的副作用，因而是一种很有开发前途的天然药物。苦马豆素(swainsonine，SW)的来源主要有三种途径①从植物中提取分离。目前已知的含苦马豆素的植物主要是豆科黄芪属(A^7^^a^/s)和棘豆属(fl^&;^s)植物(统称为疯草)，这类植物广泛分布于世界各地，尤其是北美和我国，资源十分丰富；其次是苦马豆属，该属植物仅局限于澳大利亚。澳大利亚学者Colegate首次利用甘露糖苷酶从苦马豆属植物灰苦马豆中成功分离出苦马豆素。②从豆类丝核菌(朋izoc&m'a2e^/yz7J'/7j'co7a)中提取分离。Schneider等(1983)最早从豆类丝核菌中分离出苦马豆素，我国杨鸣琦等也从自行分离的豆类丝核菌中分离出苦马豆素。(D人工合成苦马豆素。美国化学家Yasuda(1984)、Bennett(1989)和我国院士周维善先后人工合成了苦马豆素。随后加拿大Toronto化学研究所也有了合成产品。由于苦马豆素有四个手性碳原子，即使很好的控制反应，合成产物中还有16个化学结构相同，而立体构象不同的异构体，分离十分困难，整个合成过程有21步，产率仅为6.6%。目前，国内外提纯苦马豆素的方法主要是通过有机溶剂浸提、萃取，再经过阳离子交换柱层析或硅胶柱层析，最后重结晶或减压升华获得苦马豆素纯品。例如在专利申请号为"02114590.3"、发明名称为"一种疯草中苦马豆素的提纯工艺"中所公开的工艺流程是(1)使用工业甲醇作为提取剂，用冷浸提法从疯草草粉中得到疯草浸膏；(2)从疯草浸膏中经多个步骤制备苦马豆素粗品;(3)苦马豆素的层析分离；(4)制备纯品。其中的第(2)步中包括酸溶解、碱调节、离子交换柱层析等步骤。该工艺存在的问题是工艺复杂，成本高，得率低。三、
发明内容本发明的目的在于，提供一种采用连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺，以克服现有技术中存在的工艺复杂，成本高，得率低的不足。为克服现有技术存在的不足，本发明的连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺，依次包括下述步骤(1)疯草的预处理将疯草处理为干燥粉末状，备用；(2)疯草浸膏的获取将干燥的疯草粉末用极性溶剂反复冷浸提，得疯草浸膏，待用；(3)粗品制备将所得浸膏经过简单预处理后，用极性大孔吸附树脂进行粗分，TLC检测，合并含有苦马豆素的洗脱液作为粗品备用；(4)纯化苦马豆素将上述粗品过硅胶柱层析纯化，TLC检测，GC检测，分别收集苦马豆素相对含量>10%的部分；其余含少量苦马豆素的部分合并，积累到一定量之后，再重复进行硅胶柱层析纯化步骤；(5)HPLC检测获得苦马豆素纯品利用苦马豆素标样判断出其在进行HPLC检测时的出峰位置，再将(4)中的收集部分在相同色谱条件下进行HPLC检测，收集该保留时间的流出液，挥千溶剂后，重结晶即得苦马豆素纯品；其余部分合并，积累到一定量之后，再重复进行硅胶柱层析纯化步骤。上述步骤(3)中所用的极性大孔吸附树脂是市售的D101、YWD-03和YWD-06。上述步骤(3)中所用的极性大孔吸附树脂是巿售的YWD-06。其使用效果最好。上述步骤的优选方案是(2)疯草浸膏的获取将粉碎干燥后的疯草粉末510倍重量的极性溶剂反复冷浸提取46次，每次58天，过滤取上清液，合并，减压回收极性溶剂，得疯草浸膏，干燥保存待用；(3)粗品制备取制得的浸膏，用24倍量的极性溶剂-水(46:1，v/v浓度)充分溶解，离心，过滤，弃去残渣，上清液浓縮后，用极性大孔吸附树脂YWD-06进行粗分，TLC检测，合并含有苦马豆素的洗脱液作为粗品备用；(4)纯化苦马豆素将上述粗品在506(TC水浴挥干溶剂，用适量的氯仿一丙酮一甲醇一氨水(6575:57:1822:4，v/v/v/v)充分溶解，离心，过滤，除去残渣，上清液浓缩后，过硅胶柱层析纯化。上述步骤(2)或(3)中，极性溶剂是乙醇或甲醇。这两种极性溶剂适宜进行工业化大规模生产。上述步骤(2)中，极性溶剂是食用乙醇，步骤(3)中，极性溶剂是甲醇。上述步骤(l)中，是将采摘的疯草自然风干一周后，置于6(TC烘箱中烘干，彻底去除水分，用粉粹机粉碎成粉末，干燥保存。本发明采用疯草为提取原料，直接从植物中提取分离制备苦马豆素，其优点是1、操作过程简便本发明直接将浸膏采用连续柱层析，使得操作过程更为简便，也更易于对生产过程进行监控，便于连续化生产的实现，有效节约了人力资源。尤其是通过HPLC获得纯品，将纯化和检测的过程合二为一，从而减少了以前先生产、再检测时，由于人员的操作而引起的误差，也利于生产效率的提高和生产成本的降低，最终为苦马豆素在抗肿瘤药物及免疫增强剂等方面的产业化生产提供可靠的原料。2、成本低本发明将苦马豆素的检测和纯品的制取两步操作合二为一，提纯工艺流程简便，简化了批量生产的操作步骤，也为最后所得产品的纯度提供了可靠的检测结果，设备投资少，成本低，为其工业化生产奠定了基础。3、纯度高本发明为保证产品的纯度，进行了全面的考虑，该优点可以从本发明的多个步骤得到体现由于步骤(2)得到的疯草浸膏中杂质种类比较多，成分也比较复杂，直接用硅胶进行分离效果不是很好，对硅胶的损伤也比较大，因此步骤(3)中先用极性大孔吸附树脂粗分、除去大部分非极性及弱极性杂质，再用硅胶进行下一步纯化，这样所达到的分离效果较好，分离得到的产品纯度也较高，有利于最后精制得到纯品。步骤(4)中采用GC检测是为了选取下一步要进行纯化的样品段，只有在检测结果中显示含有苦马豆素的部分我们才有必要拿来进行下一步的纯化，而在现有的公知技术中没有做这一步。那么怎样断定拿去升华的粗品中一定含有苦马豆素，其含量又能达到多少，也不排除凭经验取舍时将含有苦马豆素的部分弃去而造成损失的可能性。而采用仪器检测，首先排除了这种误弃目标物的可能性，其次，检测含量后再进行下一步纯化，也增加了最后纯化结果和得率的可预见性。收集苦马豆素相对含量》10%的部分，是根据多次检测结果而人为规定的一个经验值，这样规定是因为在硅胶柱层析过程中，苦马豆素的流出是一个连续的过程，不存在一个"有"与"没有"之间的突跃值，对于含量很少的部分，由于GC检测的灵敏度非常高，微量的苦马豆素也是能够被检测到的，但如果拿这种含有微量苦马豆素的样品去进行下一步的HPLC纯化精制，那么必定会增加生产的成本；而其余苦马豆素含量〈10%的部分，也并不是弃去不要，而是把这些部分集中合并，达到一定量之后，再进行柱层析纯化，重复这样的步骤，既避免了浪费(最大限度的保证得率)，又降低了生产成本，这种做法，也是针对大规模生产而量身定制的。步骤(5)中采用了三重保险来确保产品的纯度①可以看到
背景技术：
中通过减压升华和本发明通过HPLC纯化得到苦马豆素纯品是两个截然不同的纯化途径，减压升华是根据苦马豆素易升华的性质，使其升华冷凝而与其它物质分离的，而HPLC分离是根据苦马豆素粗品中各物质的极性不同而在特定条件下具有特征保留时间而进行分离的。这种差别对分离效果所产生的影响易升华是一个通用的性质，也就是说如果在粗品中还存在其他易升华的物质，也会和苦马豆素一起升华冷凝分离出来，并且这种杂质的引入将是无法避免，也是无法采用再升华方法除去的；而通过HPLC根据化合物的保留时间进行分离是根据化合物的特征性质进行分离的，色谱的优越性就在于特定的物质在特定的条件下具有特定的保留时间，因此才能够以保留时间作为物质的一个定性指标，因此根据保留时间分离的结果具有唯一性，即使同是强极性的化合物，在进行HPLC分离时，也会表现出不同的保留时间，从而保证了在这一时间所收集到的流出液都是只含有苦马豆素的，进一步保证了收获物的纯度。②用减压升华得到产品之后，并不知道所得产物的纯度到底是多少，就要再次进行检测，这时在取样、样品预处理、分析检测中都会不可避免的引入误差，这样检测得到的结果与收获产品的实际纯度也有一定的偏差，并且极有可能在取样过程中污染到剩余样品；而采用HPLC分离可以在线检测流出液中目标产物的纯度，并有目的的地收集苦马豆素流出部分，能够更有效保证其纯度。③在减压升华中，由于减压的真空度不好控制，随着减压升华的时间延续，会使SW絮状物压实、紧密，在真空压力控制不当的情况下，会使苦马豆素粗品爆沸(苦马豆素及易吸湿，所以很难保证粗品完全干燥)，这样会使其他杂质成分附着在冷凝的苦马豆素上，造成污染，而采用HPLC分离完全可以避免这一问题，进一步保证了产品的纯度。4、提取率高本发明采用了连续柱层析法提纯苦马豆素，便于连续化生产和监控，与传统的萃取分离相比，大大节省了试剂使用量，改善了分离效果，同时也避免了在减压升华中，由于温度和压力的控制不当，造成的提取率下降的问题。提取率明显高于目前已在使用的技术，有望用于苦马豆素的规模化生产。四图1连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺过程；图2苦马豆素的紫外(UV)光谱图；图3苦马豆素的红外(IR)光谱图；图4苦马豆素的质谱(MS)图；图5苦马豆素标样的气相色谱检测结果；图6硅胶柱层析纯化后洗脱液样品的气相色谱检测结果；图7苦马豆素标样的高效液相色谱检测结果；图8硅胶柱层析纯化后洗脱液样品的高效液相色谱检测结果。五具体实施方式为了更清楚的理解本发明，以下结合附图和实施例对本发明作进一步的详细描述，但本发明并不限于这些实施例，实施例的流程参见图l:实施例l:甘肃棘豆中苦马豆素的提取(1)疯草的预处理采摘的甘肃棘豆草自然风干一周后，置于60'C烘箱中烘干，彻底去除水分，用粉粹机粉碎成粉末，干燥保存。(2)疯草浸膏的获取将甘肃棘豆干草500g，用3L食用乙醇冷浸提取4次，每次7天，过滤，合并乙醇液，减压回收乙醇，得总浸膏64.8g，提取率12.96%。(3)极性大孔吸附树脂(YWD-06，河北沧州远威化工有限公司生产)初步分离疯草浸膏中的苦马豆素①疯草浸膏的预处理称取所得的疯草浸膏10.058g用30ml的甲醇-水(5:1，v/v)充分溶解，离心，过滤，弃去残渣，合并上清液，浓縮后待用；②极性大孔吸附树脂的预处理使用前，用无水乙醇浸泡4h，再用清水洗至流出液与3倍清水混合不浑浊，用35倍柱体积的流动相冲洗柱子，即可用于一般提取；③极性大孔吸附树脂柱层析加样后，以甲醇-水(5:1，v/v)为流动相匀速淋洗，从柱下端用容量瓶每50ml接一份，共收集30份；④柱层析流出液的TLC检测将各洗脱液在60'C水浴上挥干溶剂，分别用2ml甲醇充分溶解，进行TLC检测，合并苦马豆素部分。(4)硅胶柱层析纯化苦马豆素①样品预处理将含苦马豆素部分的洗脱液合并后在6(TC水浴中挥干溶剂，用10ml的氯仿一丙酮一甲醇一氨水(70:6:20:4，v/v/v/v)充分溶解，离心，过滤，除去残渣，上清液合并后，浓縮待用；②硅胶柱层析以氯仿一丙酮一甲醇一氨水(70:6:20:4，v/v/v/v)为流动相，湿法装柱，加样后，用流动相匀速洗脱，每50ml收集一份洗脱液，共收集20份；③硅胶柱层析流出液的TLC检测将各洗脱液在6(TC水浴中挥干溶剂，分别用2ml甲醇充分溶解，点样进行TLC检测，保留经检测证明含有苦马豆素的洗脱液，进行气相色谱(GC)的检测；④硅胶柱层析流出液的GC检测分别对苦马豆素标样和待检样品进行硅烷化反应后，进样检测。检测结果表明，苦马豆素的保留时间为6.161min，保留苦马豆素相对含量^10%的样品；其余部分合并，积累到一定量之后，再重复进行硅胶柱层析纯化步骤。(5)HPLC检测获得苦马豆素纯品对苦马豆素标样进行HPLC检测，判断苦马豆素的出峰时间。将经过GC检测后，苦马豆素相对含量》10%的洗脱液样品在相同色谱条件下进行HPLC检测，收集苦马豆素出峰时的流出液，合并后挥干溶剂，重结晶得到苦马豆素纯品11.021mg,提取率0.0142%。其余部分合并，积累到一定量之后，再重复进行硅胶柱层析纯化步骤。实施例2:黄花棘豆中苦马豆素的提取(1)疯草的预处理采摘的黄花棘豆草自然风干后，置于烘箱中烘干，彻底去除水分，用粉粹机粉碎成粉末，干燥保存。(2)疯草浸膏的获取将黄花棘豆干草500g，用5L7(m的甲醇冷浸提取5次，每次5天，过滤，合并乙醇液，减压回收乙醇，得总浸膏59.3g，提取率11.86%。(3)极性大孔吸附树脂(市售的D101)初步分离疯草浸膏中的苦马豆素①疯草浸膏的预处理称取所得的疯草浸膏10.032g用40ml的甲醇-水(4:1，v/v)充分溶解，离心，过滤，弃去残渣，合并上清液，浓縮后待用；②极性大孔吸附树脂预处理使用前，用无水乙醇浸泡4h，再用清水洗至流出液于3倍清水混合不浑浊，用35倍柱体积的流动相冲洗柱子，即可用于一般提取；③极性大孔吸附树脂柱层析加样后，以甲醇-水(4:1，v/v)为流动相匀速淋洗，从柱下端用容量瓶每50ml接一份，共收集30份；④柱层析流出液的TLC检测将各洗脱液在60'C水浴中挥干溶剂，分别用2ml甲醇充分溶解，进行TLC检测，合并苦马豆素部分。(4)硅胶柱层析纯化苦马豆素①样品预处理将含苦马豆素部分的洗脱液合并后在5(TC水浴上挥干溶剂，用10ml的氯仿一丙酮一甲醇一氨水(75:5:18:4，v/v/v/v)充分溶解，离心，过滤，除去残渣，上清液合并后，浓縮待用；②硅胶柱层析以氯仿一丙酮一甲醇一氨水(75:5:18:4，v/v/v/v)为流动相，湿法装柱，加样后，用流动相匀速洗脱，每50ml收集一份洗脱液，共收集20份；③柱层析流出液的TLC检测将各洗脱液在5(TC水浴上挥干溶剂，分别用2ml甲醇充分溶解，点样进行TLC检测，保留经检测证明含有苦马豆素的洗脱液，进行气相色谱(GC)的检测；④柱层析流出液的GC检测分别对苦马豆素标样和待检样品进行硅烷化反应后，进样检测。检测结果表明，苦马豆素的保留时间为6.157min，保留苦马豆素相对含量》10%的样品；其余部分合并，积累到一定量之后，再重复进行硅胶柱层析纯化步骤。(5)HPLC检测获得苦马豆素纯品对苦马豆素标样进行HPLC检测，判断苦马豆素的出峰时间。将经过GC检测后，苦马豆素相对含量高于10%的洗脱液样品在相同色谱条件下进行HPLC检测，收集苦马豆素出峰时的流出液，合并后挥干溶剂，重结晶得到苦马豆素纯品8.251mg，提取率0.0098%。其余部分合并，积累到一定量之后，再重复进行硅胶柱层析纯化步骤。实施例3:变异黄芪中苦马豆素的提取(1)疯草的预处理采摘的变异黄芪自然风干一周后，置于6(TC烘箱中烘干，彻底去除水分，用粉粹机粉碎成粉末，干燥保存。(2)疯草浸膏的获取将变异黄芪500g用3L食用乙醇冷浸提取6次，每次8天，过滤，合并乙醇液，减压回收乙醇，得总浸膏65.3g，提取率13.06%。(3)极性大孔吸附树脂(YWD-03,河北沧州远威化工有限公司生产)初步分离疯草浸膏中的苦马豆素①疯草浸膏的预处理称取所得的疯草浸膏10.086g用20ml的甲醇-水(5:1，v/v)充分溶解，离心，过滤，弃去残渣，合并上清液，浓縮后待用；②极性大孔吸附树脂预处理使用前，用无水乙醇浸泡4h，再用清水洗至流出液于3倍清水混合不浑浊，用35倍柱体积的流动相冲洗柱子，即可用于一般提取；③极性大孔吸附树脂柱层析加样后，以甲醇-水(5:1，v/v)为流动相匀速淋洗，从柱下端用容量瓶每50ml接一份，共收集30份；④柱层析流出液的TLC检测将各洗脱液在6(TC水浴上挥干溶剂，分别用2ml甲醇充分溶解，进行TLC检测，合并苦马豆素部分。(4)硅胶柱层析纯化苦马豆素①样品预处理将含苦马豆素部分的洗脱液合并后在6(TC水浴上挥干溶剂，用10ml的氯仿一丙酮一甲醇一氨水(70:4:22:4，v/v/v/v)充分溶解，离心，过滤，除去残渣，上清液合并后，浓縮待用；②硅胶柱层析以氯仿一丙酮一甲醇一氨水(70:4:22:4，v/v/v/v)为流动相，湿法装柱，加样后，用流动相匀速洗脱，每50ml收集一份洗脱液，共收集20份;③柱层析流出液的TLC检测将各洗脱液在6(TC水浴上挥干溶剂，分别用2ml甲醇充分溶解，点样进行TLC检测，保留经检测证明含有苦马豆素的洗脱液，进行气相色谱(GC)的检测；④柱层析流出液的GC检测分别对苦马豆素标样和待检样品进行硅烷化反应后，进样检测。检测结果表明，苦马豆素的保留时间为6.162min，保留苦马豆素相对含量》10%的样品；其余部分合并，积累到一定量之后，再重复进行硅胶柱层析纯化步骤。(5)HPLC检测获得苦马豆素纯品对苦马豆素标样进行HPLC检测，判断苦马豆素的出峰时间。将经过GC检测后，苦马豆素相对含量高于10%的洗脱液样品进行HPLC检测，收集苦马豆素出峰时的流出液，合并后挥干溶剂，重结晶得到苦马豆素纯品10.428mg，提取率0.0135%。其余部分合并，积累到一定量之后，再重复进行硅胶柱层析纯化步骤。下表列出了本发明实施例1提取的苦马豆素的技术性能指标。苦马豆素白色针状结晶，分子量173，熔点144145'C，纯度》99%。UV、IR、MS、丽R、GC、HPLC图谱数据与苦马豆素标准图谱数据完全吻合。苦马豆素UV光谱数据UV入max:289(log4.67),249(log3.83)(参见图2)。苦马豆素IR光谱数据:IRmax(KBr压片，cm-1):3414.70，3376.41(-0H吸收峰);3060.42，2942.40，2886.32(CH吸收峰)；2797.952724.55(Bohlmanband),1073.78(C-0吸收峰)(参见图3)。苦马豆素MS(m/e)数据173(M+)，155(M-H20),138(M-H20-0H)，116(138一H20—4H);96,84，72，43(均为母核裂解碎片峰)(参见图4)。苦马豆素GC色谱数据苦马豆素分子结构中含羟基，与单糖结构相似，无法气化，因此GC直接进样不出峰，所以首先要使之衍生化，在GC图谱上出现单一峰。苦马豆素用用吡啶溶解，加入硅烷化试剂(BSTFA)6(TC水浴反应15min，形成TMS衍生物。用0V-1701(0.32mmX30m)毛细管柱进行GC分析，柱温195°C，6.161min出峰。苦马豆素HPLC色谱数据通过全波长扫描，选择苦马豆素的最大吸收波长为288nm，在该波长条件下，选择ODS(4.6mmX250mm，C18，5um)色谱柱，对苦马豆素进行检测，甲醇一水梯度洗脱，苦马豆素在5.484min出峰。苦马豆素的技术性能指标<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>权利要求1.一种连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺，依次包括下述步骤(1)疯草的预处理将疯草处理为干燥粉末状，备用；(2)疯草浸膏的获取将干燥的疯草粉末用极性溶剂反复冷浸提，得疯草浸膏，待用；(3)粗品制备将所得浸膏经过简单预处理后，用极性大孔吸附树脂进行粗分，TLC检测，合并含有苦马豆素的洗脱液作为粗品备用；(4)纯化苦马豆素将上述粗品过硅胶柱层析纯化，TLC检测，GC检测，分别收集苦马豆素相对含量≥10％的部分；其余含少量苦马豆素的部分合并，积累到一定量之后，再重复进行硅胶柱层析纯化步骤；(5)HPLC检测获得苦马豆素纯品利用苦马豆素标样判断出其在进行HPLC检测时的出峰位置，再将(4)中的收集部分在相同色谱条件下进行HPLC检测，收集该保留时间的流出液，挥干溶剂后，重结晶即得苦马豆素纯品；其余部分合并，积累到一定量之后，再重复进行硅胶柱层析纯化步骤。2、如权利要求1所述的连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺，其特征在于-所述步骤(3)中所用的极性大孔吸附树脂是市售的D101、YWD-03或YWD-06。3、如权利要求2所述的连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺，其特征在于所述步骤(3)中所用的极性大孔吸附树脂是YWD-06。4、如权利要求1或2或3所述的连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺，其特征在于步骤(2)中，将粉碎干燥后的疯草粉末510倍重量的极性溶剂反复冷浸提取46次，每次58天，过滤取上清液，合并，减压回收极性溶剂，得疯草浸膏，干燥保存待用；步骤(3)中，取制得的浸膏，用24倍量的极性溶剂-水(46:1，v/v浓度)充分溶解，离心，过滤，弃去残渣，上清液浓縮后，用极性大孔吸附树脂进行粗分，TLC检测，合并含有苦马豆素的洗脱液作为粗品备用；步骤(4)中，将上述粗品在506(TC水浴挥干溶剂，用适量的氯仿一丙酮一甲醇一氨水(6575:57:1822:4,v/v/v/v)充分溶解，离心，过滤，除去残渣，上清液浓縮后，过硅胶柱层析纯化。5、如权利要求4所述的连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺，其特征在于:述步骤(2)或(3)中，极性溶剂是食用乙醇或甲醇。6、如权利要求5所述的连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺，其特征在于:所述步骤(2)中，极性溶剂是食用乙醇，步骤(3)中，极性溶剂是甲醇。全文摘要本发明属于天然产物化学研究领域，具体涉及天然产物提取、分离、纯化和检测方法，尤其涉及一种连续柱层析法提取苦马豆素的工艺。本发明要克服现有技术中存在的工艺复杂，成本高，得率低的不足。其解决方案是，依次包括下述步骤(1)疯草的预处理；(2)疯草浸膏的获取；(3)粗品制备浸膏用极性大孔吸附树脂进行粗分，TLC检测，合并含有苦马豆素的洗脱液作为粗品备用；(4)纯化苦马豆素将上述粗品过硅胶柱层析纯化，TLC检测，GC检测，分别收集苦马豆素相对含量≥10％的部分；(5)HPLC检测获得苦马豆素纯品将(4)中的收集部分通过HPLC检测，收集苦马豆素出峰时间段的流出液，挥干溶剂后，重结晶即得苦马豆素纯品。文档编号A61K36/185GK101270118SQ20071001754公开日2008年9月24日申请日期2007年3月22日优先权日2007年3月22日发明者刘彬慧,师宗臣,贺武利,辛发定申请人:贺武利;师宗臣;辛发定;刘彬慧