一种微生物源的护肝天然营养保健品及制备方法

专利名称：：一种微生物源的护肝天然营养保健品及制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种微生物源的护肝天然营养保健品及制备方法，尤其涉及一种利用多种益生菌发酵技术发酵，制备成促进肝脏解毒及修复功能的保健营养品，属于保健品
技术领域：
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背景技术：
：根据近几年统计，大量饮酒及食品卫生问题而造成的化学肝损伤人数在不断增加，同时由于全国患乙肝病人日趋增多，仅上海无症状乙肝潜在人数达70万，全国慢性肝炎病人达3000多万，这些原因致使社会对肝脏健康的关注在日趋高涨。生活富裕在激发大家对于健康长寿渴望的同时，生活习惯病即高血压、高血脂、脑梗塞、糖尿病的发病率也在增加，这些也引发了当今大家要求"防治未病"，寻求安全可靠的天然营养保健物品，增加对具有保肝作用的综合功效健康食品的霈求。近年来有大量的保肝、护肝饮品在市场上出现，但大多是采用传统中药材提取，但口感差，人体吸收慢，近年来市场也开发出一些添加核酸的护肝保健品，但其作用机理尚不完善，而且采用化学方法提取，对人体有一定的副作用。类似的一个发明专利，题为"一种具有护肝养胃功能的昆虫保健品及其制备方法"专利号为01142086.3，主要内容为本发明涉及一种具有护肝养胃功能的昆虫保健品及其制备方法，该,保健品主要由人工养殖的家蝇幼虫(蝇蛆)经过双重物理诱导，并按比例添加部分蝇蛆壳提取物而制备。该昆虫保健品或药品的组分，以重量百分比计，包括515%的壳聚糖；85~95%的昆虫蛋白粉。由于该昆虫保健品富含蛋白质、氨基酸、脂类等营养成分及抗菌肽、凝集素、溶菌酶、壳聚糖等药用成分，因而具有提高免疫力、保护肝脏及养护胃肠之功效。该专利昆虫源蛋白源为单一昆虫蛋白源，其壳聚糖也为单一昆虫中提取，无其他药效成分添加，其生产工艺简单，保健功能有限。
发明内容本发明的目的是提供一种能显著提高肝脏的解毒及免疫能力，清除体内的自由基的微生物源的护肝天然营养保健品及制备方法。为实现以上目的，本发明的技术方案是提供一种微生物源的护肝天然营养保健品，其特征在于，由以下重量百分比的菌种组成酿酒酵母30—36%、产朊丝假丝酵母20—27%、嗜酸乳杆菌10—15%、嗜热链球菌22—40%。一种微生物源的护肝天然营养保健品的制备方法，其特征在于，采用复合发酵技术，添加天然辅料，将代谢物和有益菌种进行过滤提取，通过杀菌而成，其生产步骤为第一步、生产制种将经过产菌试验筛选的酿酒酵母、产朊丝假丝酵母、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在30—35'C温度下培养45—50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入2—6'C的冰箱中保存；第二步、菌种液体高速培养(1)、将步驟l培养的菌种按以下重量百分比称取酿酒酵母30—36%、产朊丝假丝酵母20—27%、嗜酸乳杆菌10—15%、嗜热链球菌22—40%;(2)、原料粉碎将筛选个体均匀的龙眼肉、枸杞子、覆盆子、罗汉果通过粉碎机粉碎；(3)菌种复合培养:将以上称取的菌种按1:6—10比例放入以下配比的培养基中龙眼肉2—4%、枸杞子3—5%、覆盆子1—3%、罗汉果5—7%、大豆粉8—10%、无菌水71—81%;ph值调至6.9-7.4;放入发酵罐中培养，搠拌转速为200r/min—240r/min，培养温度为28—30。C，通气量1:0.6—0.8,发酵时间为18-20小时，当ph值达到4.5-6时发酵结束；第三步、添加天然辅料在发酵结束的液体中按以下比例添加辅料天然干草提取物7—10%、蜂蜜8—12%,潘匀并均质第四步、过滤提取及浓縮将添加辅料的发酵液静置22—26小时，通过碟式离心机进行过滤，收集过滤液，通过离子膜过滤，过滤液进行比色试验，要求澄清度在99%以上，将滤液减压浓縮至相对密度1.0-1.15，温度为45'C—50'C;第五步、杀菌将浓縮液在密闭容器内通入蒸汽，进行120—130'C、30—45min高温灭菌；第六步、罐装或压片包装(1)浓縮液产品在无菌车间进行包装，马上压盖封口；(2)或将浓縮液按产品质量的20%添加载体，将添加载体后的产品在摇摆制粒机上制粒，然后在沸腾干燥机内干燥，当水分小于等于5%时干燥结束，将千燥后的产品利用药品机械压片机压片，制成厚度为2mm、重量为0.5g的片剂，即得固体的成品。所述的载体由以下重量百分比原料组成淀粉80%—98%和糊精2%—20%。本发明从研究广泛的益生菌发酵技术入手，采用国家允许添加的益生菌菌种，选用具有特殊药效的中药材和营养品进行兼性发酵，同时添加能明显改善口感的天然辅料，经真空干燥而成，具有浓郁的天然清香味，同时益生菌和发酵产物中含有大量的抗氧化物质，能显著提高肝脏的解毒及免疫能力，清除体内的自由基，是一种安全、高效的肝功能营养品，该产品已申请上海市科委的科研课题，该项目己进入成果转化阶段。1988年，Kim等人首次从酵母中提取出一种新型抗氧化蛋白质，具有抗氧化作用，故命名为保护蛋白，其英文縮写为PRP，试验表明，酿酒酵母和产朊假丝酵母在离糖物质发酵中能产生一定量的保护蛋白，其代谢产物中为多肽链存在，人体吸收很快。实验证明，当酵母菌的培养条件从有氧转为高氧状态时，4小时PRP可增加70M,相反，若从有氧状态转变到无氧状态，PRP可减少35%。同时乳酸菌如双歧杆菌、嗜酸乳杆菌在发酵过程中产生的生物素、卜素、维生素B1、B2及B12、还原型维生素C、维生素P的槲皮酮-3-O吡喃等物质，能对癌细胞选择性地产生自由基，从而杀伤癌细胞，通常情况下，如果可溶性金属离子较多，会产生大量自由基，从而造成对DNA的损伤。但在微生物抗氧化剂的作用下，这些金属有机衍生物会与DNA的特定部位结合，或与蛋白质结合，从而发挥选择性的保护作用。微生物源抗氧化剂中维生素类及FAD等生理活性物质的量较多，这些化合物皆具有抗氧化作用。在多种成分协同作用下，发挥强大的抗氧化效力。同时氨基酸含量高，尤其是脯氨酸，这可能是酵母菌代谢过程中来自DNA的成分。另外，组氨酸可能是来自海带的物质，18种重要氨基酸几乎全部含有，这些成分在抗氧化作用方面也有重要意义。现代医学证明，生物体许多疾病的发生大多是由机体内不饱和脂肪酸共价键上一系列自由基的反应诱导所致。最新研究证明，氧自由基可使生物蛋白质聚合，核酸主键断裂、碱基修饰和氢键破坏，从而使机体内大分子物质产生过氧化变性、交联或断裂，引起细胞结构和功能的破坏，导致机体组织损害和器官退行性变化。在机体内的超量自由基攻击机体细胞膜富含的脂质和蛋白质，产生脂质过氧化反应，导致脂质过氧化物积累；超量自由基还攻击生物膜及DNA键，破坏其结构，使其功能丧失；超量自由基又攻击酶邻近特定氨基酸残基，使酶失活，并使机体抗氧化功能减弱，最终引起机体免疫力下降。微生物抗氧化剂所含丰富的生物抗氧化物质能够直接清除自由基，并具有通过S0D传遵电子而增强其清除自由基的特殊功效，消除自由基对机体组织器正常功能的负面影响，增强组织细胞尤其是代谢强度极高的乳腺细胞的机能，从而提高机体的代谢水平，促进免疫器官的发育，提高增强机体细胞免疫和体液免疫水平，提高血浆中cAMP水平及cAMP/cCMP的比值，同时显著提高血桨GH和T3、T4浓度。本发明采用的培养基主要有罗汉果、龙眼肉、枸杞子、覆盆子等；罗汉果有"神果"之称、、味甘、性凉，益肝健脾，有清热解暑、化痰止咳、凉血舒骨、清肺润肠和生津止渴等功效，常用于防治呼吸道感染及胃肠保健，经现代科学研究证明，其所含成分具有净化作用，能去除造成各种疾病原因的活性氧；枸杞子和龙眼肉均为中国几千年来传统的药食同源滋补食物。枸杞富含去除自由基的黄酮类物质，龙眼肉富含多糖成份，选用富含亚油酸和亚麻酸的野茶油为基料，更具有良好的营养协同作用。覆盆子属野生药材，有补肝肾、利小便、助阳、固精、明目之药效。其添加辅料主要为甘草提取液，甘草的主要成分是甘草皂苷，甘苹皂苷又称甘草酸，抗病毒作用是甘草酸类成分的主要药理作用之一。近年来，有关甘草酸对肝炎病毒、艾滋病毒及其它病毒的作用研究和应用，取得了较大的进展。由于甘草甜素具有高甜度、低热量、起泡性及溶血性较低、安全无毒等优良特性，现已有甘草甜素片制剂正式在临床上用于治疗乙肝。本发明的优点是1、采用国家药监局允许使用的益生素和真菌菌种，釆用能产生大量活性保护蛋白的微生物源的常用中药及保健食品为原料，进行复合发酵，在产物中含有大量能提高肝脏解毒及抗氧化力的活性营养成分；2、利用酵母菌发酵产生一定量的保护蛋白，其代谢产物中以多肽链存在，便于人体快速吸收，采用高氧浓度的酵母发酵，能大大提高发酵液中保护蛋白的含量；3、利用双歧杆菌、嗜酸乳杆菌在发酵过程中产生的生物素、卜素、维生素Bl、B2及B12、还原型维生素C、维生素P的槲皮酮-3-0吡喃等物质，能抑制过多的自由基和脂质过氧化物对肝细胞的破坏作用，能显著提高人体肝脏损伤后的修复功能，增强机体清除自由基的能力，减轻自由基对机体的损伤；4、采用传统的中药和营养食品为原料，其中罗汉果、龙眼肉、枸杞子、覆盆子都有提高肌体抗氧化能力，清除体内自由基的功效，添加的辅料如甘草提取液已广泛应用于肝脏的保健；5、采用复合菌种的液体高速培养技术，保证有益菌种、氨基酸、活性酶、微量元素、及微生物源抗氧化物、维生素、活性钙在培养物中完全保留；6、产品中不添加如何防腐剂、干燥剂,是一种绿色无副作用的天然营养品。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步详细说明实施例l(口服液型)第一步、生产制种将经过产菌试验筛选的酿酒酵母、产朊丝假丝酵母、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在30'C温度下培养45小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入4'C的冰箱中保存；第二步、菌种液体高速培养(1)、将歩驟l培养的菌种按以下重量百分比称取各菌种酿酒酵母30%、产朊丝镢丝酵母20%、嗜酸乳杆菌10%、嗜热链球菌40%;8(2)、原料粉碎将筛选个体均匀的龙眼肉、枸杞子、覆盆子、罗汉果通过粉碎机粉碎；(3)菌种复合培养:将以上称取的菌种按l;6.9的比例放入以下重量配比的培养基中龙眼肉2%、枸杞子3%、覆盆子1%、罗汉果5%、大豆粉8%、无菌水81X;ph值调至6.9-7.4;放入发酵罐中培养，搅拌转速为200r/min，培养温度为30'C,通气量1:0.6，发酵时间为20小时，当ph值达到5时发酵结束；第三步、添加天然辅料(复配)在发酵结束的液体中按以下比例添加铺料天然干草提取物7%、蜂蜜8%;混匀并均质；第四步、过濂提取及浓縮将添加辅料的发酵液静置24小时，通过碟式离心机过滤，收集过滤液，通过离子膜过滤，去固体残渣，过滤液进行比色试验，要求澄清度在99%以上，将滤液减压浓縮至相对密度1.0-1.15，温度为50'C;第五步、杀菌将浓縮液在密闭容器内通入蒸汽，进行130'C、40min高温灭菌，第六步、罐装或压片包装产品在无菌车间进行包装，包装瓶为300ml，马上压盖封口。实施例2(片剂型)第一步、同实施例1第二步、菌种液体高速培养(1)、将步骤l培养的菌种按以下重量百分比称取各菌种酿酒酵母36%、产朊丝假丝酵母27%、嗜酸乳杆菌15%、嗜热链球菌22%;(2)、原料耱碎将筛选个体均匀的龙眼肉、枸杞子、覆盆子、罗汉果通过粉碎机进行粉碎；(3)菌种复合培养:将以上称取的菌种按1:10的比例放入以下重量配比的培养基中龙眼肉4%、枸杞子5%、覆盆子3%、罗汉果7%、大豆粉10%、无菌水71%;ph值调至7.2;放入发酵罐中培养，搅拌转速为240r/min,培养温度为30'C,通气量1:0.8，发酵时间为20小时，当ph值达到6时发酵结束；第三步、添加天然辅料(复配)在发酵结束的液体中按以下比例添加铺料天然干草提取物10%、蜂蜜12%;混匀并均质；第四步、过濂提取及浓縮-江添加辅料的发酵液静置24小时，通过碟式离心机过滤，收集过滤固性物质，通过离子膜过滤，去固体残渣。过滤液进行比色试验，要求澄清度在99%以上；第五步、杀菌将过滤后固体残渣在密闭容器内通入蒸汽，进行120'C、45min高温灭菌；第六步、罐装或压片包装将固体过滤渣按产品质量的20%添加载体，载体组成为淀粉98%和2%的糊精。将添加载体后的产品在摇摆制粒机上制粒，然后在沸腾干燥机内干燥，当水分小于等于5%时干燥结束。将干燥后的产品利用药品机械压片机压片，制成厚度为2mra、重量为0.5g的片剂，即得固体的成品。在使用时，口服液产品为每次30—40ml，每天3次，固体片剂为每次l片，每天三片，饭后温水吞服，本产品需在干燥通风处密封保存，开瓶后应立即狩紧瓶盖o本发明产品已在上海交通大学农学院药物研究所进行生物抗氧化复合剂对大鼠肝脏损伤的保护作用的相关药效试验，试验内容如下1材料与方法1.1试验动物及分组试验用95只雄性SD大鼠随机分成4组即对照、模型、低剂量和高剂量组，每组设5个重复，每重复5只。笼养，自由采食和饮水，饲养季节为7-8月份，环境温度30-34'C。1.2试验方法鼠购回后，先正常饲养3天以适应环境，然后试验分两阶段进行，第一阶段主要测定正常情况下生物抗氧化剂的抗氧化性能。在对照、低剂量和高剂量组分别饲唱基础日粮、基础日粮+低剂量的抗氧化剂(0.5ml/只*天)和基础日粮+高剂蹇的抗氧化剂(lml/只'天)，抗氧化剂为液状添加于水中伺喂。于第28天在对照，低剂量和高剂量组分别取5只，心脏采血后分离血清，取肝脏后制成匀浆。第二阶段主要p定LPS至机体损伤后的修复作用，于第29天在模型、低剂最和高剂量组分别注射LPS(3mg/Kg)制作应激损伤模型。在注射LPS后的20、68、140和212小时各组分别心脏采血后分离血清，取肝脏后制成匀浆。1.3指标测定1.3.1抗氧化指标的测定分别测定各组的血清和肝组织匀浆中的S0D、GSH-Px酶的活性和N0的含量，用试剂盒检翻，购于南京建成生物工程研究所。1.3.2机体损伤指标的测定分别测定各组的血清和肝组织匀浆中的ALT、AST酶的活性和MDA的含量。用试剂盒检澜，购于南京建成生物工程研究所。1.4数理处趣与统计分析用SAS软件包AN0VA过程进行单因子试验的方差分析，差异显著时用LSD进行各组间的多重比较。2结果与分析2.1对体内抗氧化指标的影响2.1.1血淸和肝脏中SOD酶的活性在试验的第28天，血清中SOD酶的活性，高剂量组比对照组提高了14.07%(P<0,05),低剂量组比对照组提高了9.63%(P>0.05)，注射LPS后，血淸中S0D酶的活性迅速下降，在20小时，模型组、低剂量组和高剂量组比对照组显著降低(P<0.05)，随后，SOD酶的活性缓慢上升，在68小时，模型组和低剂量组与对照组无显著差异(P>0.05)，但高剂量组的活性仍显著低于对照组(P<0.05)，140小时，各组之间无显著差异，但随后低剂量组和高剂量组酶的活性迅速升高，在212小时均高于对照组和模型组，但未能达到显著水平。试验第28天，肝脏中SOD酶的活性，高剂量组比对照组提高了13.1%(P<0.05),低剂量组比对照组提高了13.26%(P〈0.05)。注射LPS后，SOD酶的活性下降。在68小时时，模型组和高剂量组降到最低点，随后开始上升。而全期低剂量组仅有小幅波动。在注射LPS后的68、140小时低剂量组的酶活性显著高于模型组，但在212小时时却显著低于模型组，见表l。表1血清和肝脏中SOD的活性TablelActivityofSODinserumandliver<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注表中数据具有不同肩标字母的数据之间差异显著(P〈0.05)，字母相同者差异不显著(P〉0.05)。2.1.2血淸和肝脏中GSH-Px酶的活性在试骏的第28天，血清中GSH-Px酶的活性，高剂量组比对照组提高了19.89%(P<0.05),低剂量组比对照组提高了6.42%(P>0.05)。注射LPS后，血清中GSH-PxSI的活性迅速下降。在20小时，模型组、低剂量组和高剂量组比对照组显著降低(P<0.05)，高剂量组和低剂量组活性比模型组要高。随后，GSH-Px酶的活性缓慢上升，在68小时，各组之间己经无显著差异(P>0.05),模型组有较大的升幅。140小时，模型组与各组无显著差异(P>0.05)，高剂量组和低剂量组酶的活性比对照组显著低(P<0.05)，但随后低剂量组和高剂量组酶的活性迅速升高，在212小时超过模型组，但未能达到显著水平。试验第28天，肝脏中GSH-Px酶的活性，高剂量组比对照组提高了26.54%(P<0.05)，低剂量组比对照组提高了9.98%(P<0.05)。注射LPS后GSH-Px酶的活性下降。在20小时，各组差异不显著(P〉0.05)，但低剂量组和高剂量组好于模型组。在68小时，各组降到最低点，此时，模型组、低剂量组和高剂量组之间无显著差异，但它们比对照组显著降低(P〈0.05)。随后开始上升，140小时，低剂量组和高剂量组要显著高于对照组和模型组(P〈0.05)。但到212小时，模型组又显著髙于其它各组(P〈0.05)，见表2。表2血清和肝脏中GSH-Px的活性Table2ActivityofGSH-Pxinserumandliver对照组模型组低剂量组高剂量组血28天3328.48±3542.03±3990.51±清170.03b199.27ab172.49aG注20小时3590.85±2049.15±2520.76±2501.7±S射184.la120.22b45.07b150.24bHLPS68小时3255.65±3183.65±2891.74±2629.57±后136.09a195.28a421.18a197.86a140小时3628.17±3305.74±'3024.78±2836.17±214.69a72.64ab235.08b135.95b212小时3207.38±2786.58±2947.65±2842.95±71.38a156.01b127.28ab117.61b13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2.1.3血淸和肝脏中N0的含量在试验的第28天，血清中NO的含量，高剂量组比对照组降低了42.36%(P<0.05),低剂量组比对照组提高了36.71%(P<0.05)。注射LPS后，血淸中NO的含量迅速升高。在20小时，模型组、低剂量组和高剂量组比对照组极显著增高(P<0.01)，高剂量组和低剂量组活性比模型组要高。随后，各组NO的含量下降，在68小时，各组之间已经无显著差异(P>0.05),低剂量组和高剂量组要低于模型组，但高于对照组。140小时，模型组与各组无显著差异(P>0.05),高剂量组NO含量比对照组显著降低(P<0.05)。试验第28天，肝脏中NO的含量，各组均无显著差异，低剂量组和高剂量组高于对照组。注射LPS后，N0含量上升，在20小时，模型组、低剂量组和髙剂量组比对照组显著增高(P〈0.05)，随后，各组NO的含量下降，68小时，低剂量组的NO含量要显著高于其它各组(P<0.05)。140小时和212小时，高剂量组的含量比对照组和模型组均低，但差异并不显著(P>0.05)，见表3。表3血清和肝脏中NO的含量Table3ContentsofNOinseruraandliver对照组模型组低剂量组高剂量组血28天28.66±4.73a18.14±1.98b16.52±0.74b淸N注射20小时24.29±2.36a594.13±83.93b655.6±74.46b610.93±83.55b0LPS后68小时31.5±3.33a34.01±3.52a33.2±3.42a32.29±2.39a140小时32.55±1.68a28.02±3.lab28.85±1.14ab26.39±1.15b212小时30.53±1.85a43±2.93b33.44±2.91a30.87±3.08a肝28天5.09±0.46a6.19±0.67a5.17±0.81a脏注20小时3.75±0.3a7.68±0.47b7.6±0.92b8.76±1.02bN射68小时4.41±0.23a4.08±0.23a5.34±0.38b4.13±0.25a0LPS后140小时4.88±0.34ab4.43±0.58ab5.52±0.77a3.55±0.09b212小时4.59±0.39a5.01±0.44a4.51±0.21a4.09±0.29a2.1.4血清和肝脏中MDA的含量在试验的第28天，血清中MDA的含量，各组差异并不显著(P〉0.05)。注射LPS后，血滴中MDA的含量迅速升高。在20小时，模型组比低剂量组、高剂量组及对照组显著增高(P<0.05)，随后，各组MDA的含量下降，在68小时，低剂量组、高剂量组和模型组均显著低于对照组(P〈0.05),在140小时，高剂量组MDA含量比其它各组均显著降低(P<0.05)。试验第28天，肝脏中MDA的含量，高剂量组比对照组显著降低了25.37%(P<0.05)。注射LPS后，MDA含量上升。在20小时，高剂量组显著低于模型组和低剂量组(P<0.05),随后，各组MDA的含量下降，在68小时，各组差异不显著(P>0.05),在212小时，高剂量组和低剂量组均显著低于模型组(P<0.05),见表4。表4血清和肝脏中MDA的含量Table4ContentsofMDAinserumandliver对照组模型组低剂量组髙剂量组血28天7.69±1.06a8.04±1.9a6.72±1.17a清注20小时13.46±9±L31a7.86±0.44a8.22±1.22aM射0.72bDLPS68小时11.39±0.24a6.4±0.31b7.97±0.73b7.94±1.4%A后140小时4.97±0.47a4.89±0.37a4.79±0.37a3.72±0.2b212小时4.2±0.29a4.15±0.61a4.94±0.54a5±0.75a肝28天3.35±0.23a3.33±0.28a2.5±0.16b脏注20小时4.13±3.5±0.23ab4.34±0.32c2.99±0.22bM射0.17acDLPS68小时2.18±0.la2.13±0.16a2.45±0.18a2,37±0.18aA后140小时2.4±0.llab2.08±0.16a2.7±0.28b2.47±0.23ab212小时4.7±0.32ab5.27±0.41a3.87±0.66bc3.23±0.21c2.2对肝脏损伤的修复作用2.2.1血清中AST和ALT酶的活性在试验的第28天，血清中AST酶的活性，各组差异不显著(P〉0.05),高剂量组的AST酶的活性最低，其次为低剂量组。注射LPS后，血清中AST酶的活性迅速升高。在20小时，模型组、低剂量组比高剂量组和对照组有显著提高(P<0.05)。随后，AST酶的活性下降，在68小时，低剂量组和高剂量组均低于另外两组，但差异不显著(P>0.05)，见表5。2.2.2血淸和肝脏中ALT瞎的活性在试验的第28天，血清中ALT酶的活性，高剂量组和低剂量组比对照组分别降低了36.33%(P<0.05)和29.97(P<0.05)。注射LPS后，血清中ALT酶的活性迅速升高。在20小时，模型组、低剂量组和高剂量组比对照组显著降低(P<0.05)，商剂量组和低剂量组活性比模型组要高。随后，GSH-Px酶的活性缓慢上升，在68小时，各组之间已经无显著差异(P〉0.05),模型组有较大的升幅。在140小时，模型组与各组无显著差异(P〉0.05),高剂量组和低剂量组酶的活性比对照组显著低(P<0.05)，但随后低剂量组和高剂量组酶的活性迅速升高，在212小时超过模型组，但未能达到显著水平(P>0.05)，见表5。表5血清年AST和ALT酶的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>本发明产品已在上海交通大学农学院药物研究所进行生物抗氧化复合剂对大鼠肝脏损伤的保护作用的试验，试验摘要如下试验用95只雄性SD大鼠随机分为对照、模型、低剂量和高剂量四组，在低剂量和高剂量组分别添加生物抗氣化复合剂0.5ml/只+天和lml/只+天，研究生物抗氧化复合剂的抗氧化活性及对肝损伤的修复作用。试验分两阶段进行。第一阶段主要测定正常情况下生物抗氧化剂的抗氧化性能，第二阶段主要测定生物抗氧化剂对LPS致伤的大鼠肝损伤的保护作用。结果表明(1)正常情况下，生物抗氧化复合剂能提高机体的抗氧化能力，SOD和GSH-Px显著提高(P<0.05),NO显著降低(P<0.05)。(2)注射LPS后，生物抗氧化复合剂可以保护机体和肝细胞内的内源抗氧化系统，抑制LPS产生的自由基造成的脂质过氧化，抑制过多的自由基和脂质过氧化物对肝细胞的破坏作用，从而达到保护肝脏的作用。本产品于2006年在上海市中西医结合医院进行了临床病例应用试验，将51例慢性乙型肝炎患者随机分成三组，将本产品按15ml/次，每天三次为乙性肝炎病人服用，随访至10个月，观察肝功能及乙型肝炎病毒标记物、HBVDNA变化情况.结果四组病例肝功能均恢复较好，18个月时HBVDNA阴转率分别为45%、45.5%、50X和HBeAg阴转率分别为40.5%、40.9%和62.5%,HBeAg/抗-HBe血洧转换率分别为30%、31.8%、45.0%，其药效明显高于同类产品效果。权利要求1.一种微生物源的护肝天然营养保健品，其特征在于，由以下重量百分比的菌种组成酿酒酵母30-36％、产朊丝假丝酵母20-27％、嗜酸乳杆菌10-15％、嗜热链球菌22-40％。2.根据权利要求1所述的一种微生物源的护肝天然营养保健品的制备方法，其特征在于，采用复合发酵技术，添加天然辅料，将代谢物和有益菌种进行过滤提取，通过杀菌而成，其生产步骤为-第一步、生产制种将经过产菌试验筛选的酿酒酵母、产朊丝假丝酵母、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在30—35'C温度下培养45—50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入2—6'C的冰箱中保存；第二步、菌种液体高速培养(1)、将步骤l培养的菌种按以下重量百分比称取酿酒酵母30—36%、产朊丝假丝酵母20—27%、嗜酸乳杆菌10—15%、嗜热链球菌22—40%;(2)、原料粉碎将筛选个体均匀的龙眼肉、枸杞子、覆盆子、罗汉果通过粉碎机粉碎；(3)菌种复合培养:将以上称取的菌种按1:6_10的比例放入以下重量配比的培养基中龙眼肉2—4%、枸杞子3—5%、覆盆子1—3%、罗汉果5—7%、大豆粉8—10%、无菌水71——81%;ph值调至6.9-7.4;放入发酵罐中培养，搅拌转速为200r/min—240r/min，培养温度为28—30'C，通气量1:0.6—0.8,发酵时间为18-20小时，当ph值达到4.5-6时发酵结束；第三步、添加天然辅料在发酵结束的液体中按以下比例添加辅料天然干草提取物7—10%、蜂蜜8—12%,溷匀并均质；第四步、过滤提取及浓縮将添加辅料的发酵液静置22—26小时，通过碟式离心机进行过滤，收集过滤液，通过离子膜过滤，过滤液进行比色试验，要求澄清度在99%以上，将滤液减压浓縮至相对密度1.0-1.15，温度为45°C—50'C;第五步、杀菌将浓縮液在密闭容器内通入蒸汽，进行120—130'C、30—45min高温灭菌；第六步、權装或压片包装(4)液体产品在无菌车间进行包装，马上压盖封口；(5)或将浓缩液按产品质量的20%添加载体，将添加载体后的产品在摇摆制粒机上制粒，然后在沸腾干燥机内干燥，当水分小于等于5%时干燥结束，将干燥后的产品利用药品机械压片机压片，制成片剂，即得固体的成品。3.根据权利要求2所述的一种微生物源的护肝天然营养保健品的制备方法，其特征在于，所述的载体由以下重量百分比原料组成淀粉80%—98%和糊精2%—20%。全文摘要本发明涉及一种微生物源的护肝天然营养保健品及制备方法，其特征在于，采用国家药监局允许使用的益生素和真菌菌种，采用能产生大量活性保护蛋白的微生物源的常用中药及保健食品为原料，进行复合发酵，在产物中含有大量能提高肝脏解毒及抗氧化力的活性营养成分。本发明为生物抗氧源营养产品是由微生物发酵产生的，富含胡萝卜素、B族维生素、还原型维生素C、槲皮酮-3-D吡喃葡萄糖(栎素)、槲皮酮(类黄酮)、肌醇和多种微量元素的金属衍生物的绿色保健品，能显著提高人体肝脏损伤后的修复功能，增强机体清除自由基的能力，减轻自由基对机体的损伤，是一种安全、绿色的护肝天然营养保健品。文档编号A61K36/064GK101259148SQ20071003781公开日2008年9月10日申请日期2007年3月5日优先权日2007年3月5日发明者瀚江申请人:上海创博生态工程有限公司