专利名称：一种新人参二醇及其衍生物、其制备方法及其医药用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及天然药物领域，具体涉及新人参二醇及其衍生物的制备方法，包括酸降解制备方法和碱降解制备方法及其纯化步骤，以及该新人参二醇在制备治疗老年性痴呆、脑血管性痴呆以及肿瘤治疗的辅助治疗药物中的用途。
背景技术：
人参为我国药典收载品种，其药材来源为五加科植物人参Panax ginsengC.A.Mey.的干燥根及根茎。多于秋季采挖，洗净经晒干或烘干。具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津安神的功效。用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷，心力衰竭，心源性休克。
自从人参皂苷被确认为人参的主要有效成分后，化学家们致力于某些单体皂苷的合成或提取及有效单体的转化。目前主要有以下几种方法研究和应用较多，例如酸水解法，碱水解法，酶解法，缩合法等。从原理看，前三种是用于总苷及单体皂苷，通过水解掉分子中某一部分或几部分来得到某一单体皂苷或皂苷元，后一种则是通过糖与苷元发生成苷反应来得到某一单体化合物。
1982年，Hart BH首次报道了用温和酸水解，使人参皂苷降解并测定了降解产物的结构。例如，将人参皂苷Rg1用0.1MHCI，在37℃条件下以不同间隔时间处理，得到降解产物人参皂苷Rh1，李平亚等研究了从人参皂苷组经酸水解制备单体人参皂苷Rg3(专利号ZL98103433.0)，陈英杰等发现，在适宜的条件下，碱水解法对人参皂苷降解具有反应温和，容易控制等优点，用此法成功地从人参皂苷Rg2合成了人参皂苷Rh1。1992年宋长春等用同样方法从西洋参茎叶皂苷制备了人参皂苷Rh1和Rh2。杨凌等利用碱水解天然人参皂苷制备出单体低极性人参皂苷及其苷元(专利号CN1600790A)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新人参二醇及其衍生物，其制备方法及其医药用途。
本发明新人参二醇衍生物的通式如下 当R为H时，化合物为新人参二醇；当R为1～2个葡萄糖基-glc时，化合物为其衍生物。
新人参二醇的结构如下 化学名称为达玛-20(22)-烯-3β，12β，25-三醇(dammar-20(22)-ene-3β，12β，25-triol)。分子式为C30H52O3，分子量为460；白色棱柱状结晶，易溶于甲醇，丙酮等。该化合物是新化合物，是人参根总皂苷经过降解得到的。
本发明的碳13核磁图谱数据为13C-NMR δppm(pyridine-d5)39.66(C-1)，28.95(C-2)，78.12(C-3)，39.73(C-4)，56.55(C-5)，18.94(C-6)，35.56(C-7)，40.44(C-8)，51.05(C-9)，37.63(C-10)，32.83(C-11)，72.75(C-12)，51.05(C-13)，51.11(C-14)，32.43(C-15)，28.41(C-16)，50.69(C-17)，16.72(C-18)，16.49(C-19)，139.72(C-20)，13.25(C-21)，125.71(C-22)，23.85(C-23)，44.41(C-24)，69.68(C-25)，29.02(C-26)，30.16(C-27)，28.85(C-28)，16.04(C-29)，17.23(C-30)。
本发明提供了新人参二醇的制备方法，包括酸降解和纯化步骤，人参根总皂苷的酸降解在含有保护剂的有机溶剂酸性水溶液中进行；碱降解和纯化步骤，人参根总皂苷的碱降解在有机溶剂碱性溶液中进行。
其制备方法是①.酸降解制备方法a.取人参根总皂苷10g，溶于10～80％V/V乙醇100ml中，加入保护剂0.5g，加入浓度为2～36％酸10ml，于45～100℃恒温水浴加热回流2小时～5天，加入碱性溶液调pH为7.0，回收乙醇，得人参皂苷酸降解物；有机溶剂一般为10倍量；碱为碱金属、碱金属氧化物、碱金属氢氧化物、低级醇钠之一种，浓度范围为10～30％。降解时间为2小时～5天。
b.新人参二醇的纯化取人参皂苷酸降解物进行硅胶柱层析，氯仿∶乙醚(1∶1)为洗脱剂；含水甲醇重结晶，得新人参二醇。
当使用盐酸或硫酸时，浓度最佳为5～15％，降解温度最佳为60～90℃，降解时间最佳为3～12小时。
②碱降解制备方法a.取人参根总皂苷10g，溶于丙三醇100ml中，加入氢氧化钠10g，搅拌情况下加热8小时，反应液趁热倾入水中，搅拌，静置，过滤，得人参皂苷碱降解物；b.新人参二醇的纯化取人参皂苷碱降解物进行硅胶柱层析，氯仿∶乙醚(1∶1)为洗脱剂；含水甲醇重结晶，得新人参二醇。
其中酸降解中，有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、二氧六环、二甲亚砜、吡啶、乙腈之一种或其混合物；酸为盐酸、硫酸、磷酸、冰醋酸、草酸、苹果酸、柠檬酸之一种；保护剂为抗坏血酸、亚硫酸氢钠、没食子酸，用量为1～10g/L；碱降解中，有机溶剂为高沸点脂肪醇，如乙二醇、丙二醇、丙三醇、正丁醇、丁二醇之一种；碱为碱金属、碱金属氧化物、碱金属氢氧化物、低级醇钠之一种。浓度范围为10～30％。
本发明中人参根总皂苷可以用人参茎叶总皂苷、或人参二醇组皂苷；或西洋参总皂苷、或西洋参根总皂苷、或西洋参茎叶总皂苷、或西洋参二醇组皂苷；或三七总皂苷、或三七根总皂苷、或三七茎叶总皂苷、或三七二醇组皂苷代替。
本发明中人参根总皂苷酸降解制备新人参二醇的方法中，酸可供选择的范围很宽，但硝酸对皂苷的破坏程度很大，不宜选用。综合降解时间、降解温度、收率、工艺处理的难易程度、成本和质量，工业化的可行性等因素，以盐酸和硫酸为最好；收率与酸的种类，酸的浓度，降解温度、降解时间等因素有关，当使用盐酸或硫酸时，浓度最佳为5～15％，降解温度最佳为60～90℃，降解时间最佳为3～12小时。
本发明中人参根总皂苷酸降解制备新人参二醇的方法中，降解后的反应液用碱中和，中和剂为碱金属的氧化物或其氢氧化物。
本发明中人参根总皂苷碱降解制备新人参二醇的方法中，碱可供选择的范围很宽，可以使用碱金属、碱金属氧化物、碱金属氢氧化物，综合考虑，以氢氧化钠和氢氧化钾为最好。当使用氢氧化钠或氢氧化钾时，浓度最佳为10～30％。降解时间最佳为6～12小时。
本发明中人参根总皂苷制备新人参二醇的方法中，有机溶剂的作用是保证中间产物处于溶解状态，利于降解反应进行彻底；有机溶剂的加入量是有要求的，以保证新人参二醇能析出为佳。綜合考虑在酸降解制备方法中以甲醇和乙醇为最佳，当使用甲醇或乙醇时，用30～80％的水溶液；在碱降解制备方法中以丙三醇为佳。
酸降解当使用盐酸或硫酸时，浓度最佳为5～15％，降解温度最佳为60～90℃，降解时间最佳为3～12小时。
当有机溶剂使用甲醇或乙醇时，用30～80％的水溶液。
纯化步骤是降解后的反应液用碱中和后，蒸除有机溶剂，得人参根总皂苷酸降解物，反复柱层析，重结晶。
纯化步骤或是降解后的反应液趁热倾入水中，搅拌，静置，过滤，得碱降解物，反复柱层析，重结晶。
本发明的新人参二醇及其衍生物，可单独或与其它中药及中药提取物组配成药物。
本发明的新人参二醇及其衍生物可与药学上可接受的赋形剂混合，用于制备治疗用药物组合物。可制备成药剂上通用的剂型，如片剂、胶囊、丸剂、口服液、酊剂、颗粒剂、注射剂等。
本发明制备治疗老年性痴呆、脑血管性痴呆的药物是由有效成分单体或有效成分与固体或液体赋形剂一起构成的。这里使用的固体或液体赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个具体实例内服的片剂的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、硫酸钙、磷酸氢钙、硬脂酸钙、硬脂酸镁、氧化镁、碳酸镁、十二烷基硫酸镁、氢氧化铝凝胶粉、明胶浆、聚维酮等；溶液剂的赋形剂有水、乙醇、淀粉浆、单糖浆、1，2-丙二醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；软膏赋形剂有无水或含水羊毛脂、凡士林、氮酮、蜂蜡、甘油、固体或液体石蜡、硅油类等组合成的疏水剂或亲水剂。
本发明的有益效果在于新化合物新人参二醇可用于制备治疗老年性痴呆、血管性痴呆以及肿瘤治疗的辅助治疗药物，具有疗效显著的特点。
有效物质的剂量可根据服用方式、病人年龄及体重、病情严重程度和其它类似因素的变化而改变，口服量为1～3mg/kg，每日服用二次；注射0.1～0.2mg/kg，每日一次。
通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
图1新人参二醇质谱图；图2新人参二醇1H-NMR图；图3新人参二醇13C-NMR图；图4新人参二醇DEPT图；图5新人参二醇HMQC图。
具体实施例方式
一、新人参二醇的制备实施例1a.酸降解制备方法取人参根总皂苷10g，溶于60％乙醇100ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入浓硫酸5ml，于90℃恒温水浴加热回流8小时，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收乙醇，得人参皂苷酸降解物。
b.新人参二醇的纯化取人参皂苷酸降解物进行硅胶柱层析，氯仿∶乙醚(1∶1)为洗脱剂。含水甲醇重结晶，得新人参二醇。
实施例2a.酸降解制备方法取人参根总皂苷10g，溶于60％乙醇100ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入浓硫酸7ml，于90℃恒温水浴加热回流8小时，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收乙醇，得人参皂苷酸降解物。
b.新人参二醇的纯化取人参皂苷酸降解物进行硅胶柱层析，氯仿∶乙醚(1∶1)为洗脱剂。含水甲醇重结晶，得新人参二醇。
实施例3a.酸降解制备方法取人参根总皂苷10g，溶于60％乙醇100ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入浓盐酸7ml，于90℃恒温水浴加热回流8小时，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收乙醇，得人参皂苷酸降解物。
b.新人参二醇的纯化取人参皂苷酸降解物进行硅胶柱层析，氯仿∶乙醚(1∶1)为洗脱剂。含水甲醇重结晶，得新人参二醇。
实施例4a.酸降解制备方法取人参根总皂苷10g，溶于60％乙醇100ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入浓盐酸10ml，于90℃恒温水浴加热回流8小时，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收乙醇，得人参皂苷酸降解物。
b.新人参二醇的纯化取人参皂苷酸降解物进行硅胶柱层析，氯仿∶乙醚(1∶1)为洗脱剂。含水甲醇重结晶，得新人参二醇。
实施例5a.碱降解制备方法取人参根总皂苷10g，溶于丙三醇100ml中，加入氢氧化钠10g，搅拌情况下加热8小时，反应液趁热倾入水中，搅拌，静置，过滤，得人参皂苷碱降解物。
b.新人参二醇的纯化取人参皂苷碱降解物进行硅胶柱层析，氯仿∶乙醚(1∶1)为洗脱剂。含水甲醇重结晶，得新人参二醇。
实施例6a.碱降解制备方法取人参根总皂苷10g，溶于丙三醇100ml中，加入氢氧化钾10g，搅拌情况下加热8小时，反应液趁热倾入水中，搅拌，静置，过滤，得人参皂苷碱降解物。
b.新人参二醇的纯化取人参皂苷碱降解物进行硅胶柱层析，氯仿∶乙醚(1∶1)为洗脱剂。含水甲醇重结晶，得新人参二醇。
二、制剂实施例1 含本发明新人参二醇单体的片剂取新人参二醇50g，与淀粉110g，糊精40g混合，用适量30％乙醇作润湿剂，制成软材，按常规方法制粒，加入适量硬脂酸镁混匀，经压片机制成0.2g/片，每片含新人参二醇50mg。
实施例2 含本发明新人参二醇单体的胶囊取新人参二醇50g，与淀粉150g，糊精50g，混合，用适量30％乙醇作润湿剂，制成软材，按常规方法制粒，装入硬胶囊中，制成0.25g/粒胶囊，每粒含新人参二醇50mg。
实施例3 含本发明新人参二醇单体的注射剂无菌条件下，取新人参二醇10g，注射用水2000ml，混合后装入1000支安瓶中，每支2ml，含新人参二醇10mg。
三、生物活性实验例一、新人参二醇对老年性痴呆的影响(一)实验材料与方法材料新人参二醇1mg/ml水溶液；吡拉西坦片(东北制药总厂，批号20070112)。
方法选用昆明种小鼠60只，雌雄各半，体重(20±2.0)g，6周龄。每日每鼠口服(ig)三氯化铝液0.5g/kg，连续90天。造模后采用Y型电迷宫法观测小鼠学习记忆行为等指标。
动物分组、造模及给药方法小鼠适应环境三天后，按性别、体重随机分为五组正常对照组、模型组、吡拉西坦组、新人参二醇I组(0.02mg/kg)、新人参二醇II组(0.04mg/kg)，每组12只，雌雄兼用，分笼饲养。各组动物均按20ml/kg ig，正常对照组每日每鼠ig等量生理盐水，其它各组每日每鼠ig三氯化铝0.5g/kg，吡拉西坦组每鼠加灌吡拉西坦0.5g/kg，新原人参二醇低、高剂量组每鼠加灌新人参二醇0.02mg/kg、0.04mg/kg，共给药60天。
指标观察学习记忆行为、脑(脾)湿重指数等指标。
(二)实验结果(1)学习记忆获得能力采用Y型电迷宫法。实验开始先将小鼠放入迷路一支臂端部。在另外两支臂中的任一支臂给灯光信号，示为安全区，灯光照射5秒后通电，直到小鼠逃避到安全区为止，结束一次训练。连续训练10次(每两次电击之间休息30秒，以巩固记忆)，剔除反应异常鼠。以给电击后直接逃入安全区为正确反应，否则为错误反应。24小时后重新测试，记录连续给予小鼠20次电击，小鼠逃回安全区的正确反应次数。
表1给药后30天对小鼠学习记忆的影响(x±SD)
注与模型组比*P＜0.05，**P＜0.01表2给药后60天对小鼠学习记忆的影响(x±SD)
注与模型组比*P＜0.05，**P＜0.01由表1及表2可见，模型组小鼠的反应时间延长、潜伏期缩短、错误次数增多，与正常组比较有显著性差异(P＜0.01)，提示造模成功。与模型组相比，各给药组小鼠的学习、记忆指标均有明显的改善(P＜0.05、P＜0.01)，显示吡拉西坦及新人参二醇都可拮抗三氯化铝所致的学习、记忆获得障碍；且新人参二醇组对记忆功能的改善作用要优于吡拉西坦组(P＜0.05)。
(2)脑(脾)组织湿重指数用脑(脾)湿重/体重×100％作为指数，考察新人参二醇对实验动物脑(脾)组织的影响。
表3给药后60天对小鼠脑(脾)湿重指数影响(x±SD)
注与模型组比**P＜0.01由表3可见，新人参二醇能明显提高小鼠脑(脾)湿重指数，与模型组比较，差异显著(P＜0.01)，且新人参二醇组优于吡拉西坦组。研究表明，记忆是人们对外界事物的客观反映和记录能力，信息主要贮存于大脑皮层中，老年性痴呆者尸检大脑皮层萎缩，重量减轻，三氯化铝能造成脑细胞死亡，皮层萎缩脑(脾)重量减轻，经用新人参二醇后，模型小鼠脑(脾)湿重指数明显增加，说明其能有效防止脑细胞死亡及萎缩的发生，并提示新人参二醇有延缓脾萎缩保护机体正常免疫功能的作用。
实验例二、新人参二醇对脑血管性痴呆的影响(一)实验材料与方法材料新人参二醇1mg/ml水溶液；尼莫地平片(拜耳医药保健有限公司，批号108735)。
方法选用早老龄昆明种小鼠70只，12月龄，体重45～558，雌雄兼用。以乌拉坦1～1.5g/kg腹腔注射麻醉，固定，消毒，无菌手术。颈部正中切口，体检显微镜下分离双侧颈总动脉，套“4”号丝线扣备用，拉紧丝扣，阻断血流20分钟，同时在距尾尖部1cm剪尾放血约0.3ml，热凝止血。松开丝扣灌注10分钟后，再次阻断血流20分钟，第二次再灌后观察30分钟，缝合皮肤，切口局部注射庆大霉素0.2万单位。术后每日肌注青霉素0.2万单位，连续3天。其中假手术组只分离颈总动脉，套丝扣，但不阻断血流，尾部不放血，观察时间与其他组相同。手术过程中小鼠体温保持在36.5℃。
动物分组及给药方法小鼠术后48小时待自主活动恢复后，按性别、体重随机分为五组正常对照组、模型组、尼莫地平组(0.02mg/kg)、新人参二醇I组(0.02mg/kg)、新人参二醇II组(0.04mg/kg)，每组12只，雌雄兼用，分笼饲养，术后第二天开始ig药物或等量生理盐水，连续给药20天。
指标观察采用跳台法测试。实验时先将小鼠置于跳台仪中适应环境3分钟，然后底部铜栅通以36V交流电，记录动物受到电击后跳上橡皮垫的反应时间和5分钟内受到电击的次数(错误次数)，作为学习成绩，24小时后将小鼠放入跳台仪中适应环境3分钟，再将其直接放于橡皮垫上，记录其第一次跳下橡皮垫的记忆时间，作为记忆成绩，剔除反应异常鼠。
(二)实验结果表4术后10天跳台学习记忆成绩
注与模型组比*P＜0.05，**P＜0.01表5术后20天跳台学习记忆成绩
注与模型组比*P＜0.05，**P＜0.01
由表4可见，术后10天模型组反应时间明显延长，错误次数明显增加，学习成绩下降；记忆潜伏时间明显缩短，错误次数明显增加，记忆成绩下降，提示模型组造模成功。新人参二醇I组与模型组比较记忆潜伏时间明显延长，而学习反应时间、错误次数和记忆错误次数未有明显改变，新人参二醇II组与模型组比较学习错误次数及记忆潜伏时间有明显差异，而学习反应时间和记忆错误次数未有明显改变。用药后实验结果提示新人参二醇低、高剂量组具有改善记忆的趋势，新人参二醇高剂量组优于尼莫地平组。
由表5可见，术后20天，用药各组与模型组比较学习成绩与记忆成绩均有明显好转(P＜0.05或P＜0.01)，新人参二醇低、高剂量组之间呈一定的量效关系，且新人参二醇高剂量组优于尼莫地平组。
血管性痴呆是指各种脑血管病引起脑功能障碍而产生的获得性智能损伤综合征，为一慢性进行性疾病。经用新人参二醇后，模型小鼠学习成绩与记忆成绩均有提高，提示新人参二醇具有改善血管性痴呆的功效。
权利要求
1.一种如下通式的新人参二醇 其化学名称为达玛-20(22)-烯-3β，12β，25-三醇(dammar-20(22)-ene-3β，12β，25-triol)。
2.根据权利要求1所述的新人参二醇，其衍生物为以下结构 当R为H时，化合物为新人参二醇；当R为1～2个葡萄糖基(-glc)时，化合物为其衍生物。
3.一种新人参二醇的制备方法，包括酸降解和纯化步骤，人参根总皂苷的酸降解在有机溶剂酸性水溶液中进行；或碱降解和纯化步骤，人参根总皂苷的碱降解在有机溶剂碱性溶液中进行；采用酸降解制备方法a.取人参根总皂苷10g，溶于10～80％V/V有机溶剂100ml中，加入保护剂0.5g，加入浓度为2～36％酸10ml，于45～100℃恒温水浴加热回流2小时～5天，加入碱溶液调pH为7.0，回收乙醇，得人参皂苷酸降解物；b.新人参二醇的纯化取人参皂苷酸降解物进行硅胶柱层析，氯仿∶乙醚是1∶1为洗脱剂；含水甲醇重结晶，得新人参二醇。或碱降解制备方法a.取人参根总皂苷10g，溶于丙三醇100ml中，加入氢氧化钠10g，搅拌情况下加热8小时，反应液趁热倾入水中，搅拌，静置，过滤，得人参皂苷碱降解物；b.新人参二醇的纯化取人参皂苷碱降解物进行硅胶柱层析，氯仿∶乙醚是1∶1为洗脱剂；含水甲醇重结晶，得新人参二醇。其中所述的酸降解中，有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、二氧六环、二甲亚砜、吡啶、乙腈之一种或其混合物；所述的酸为盐酸、硫酸、磷酸、冰醋酸、草酸、苹果酸、柠檬酸之一种；所述的保护剂为抗坏血酸、亚硫酸氢钠、没食子酸之一种，用量为1～10g/L；其中所述的碱降解中，有机溶剂为高沸点脂肪醇，如乙二醇、丙二醇、丙三醇、正丁醇、丁二醇之一种；所述的碱为碱金属、碱金属氧化物、碱金属氢氧化物、低级醇钠之一种，浓度范围为10～30％。
4.按照权利要求3中所述新人参二醇的制备方法，其特征在于人参根总皂苷可以用人参总皂苷、人参茎叶总皂苷、人参二醇组皂苷；西洋参总皂苷、西洋参根总皂苷、西洋参茎叶总皂苷、西洋参二醇组皂苷；三七总皂苷、三七根总皂苷、三七茎叶总皂苷、三七二醇组皂苷代替。
5.按照权利要求3中所述的新人参二醇的制备方法，其特征在于当使用盐酸或硫酸时，浓度最佳为5～15％，降解温度最佳为60～90℃，降解时间最佳为3～12小时。
6.按照权利要求3中所述的新人参二醇的制备方法，其特征在于当有机溶剂使用甲醇或乙醇时，用30～80％的水溶液。
7.按照权利要求3中所述的新人参二醇的制备方法，其特征在于纯化步骤是降解后的反应液用碱中和后，蒸除有机溶剂，得人参根总皂苷酸降解物，反复柱层析，重结晶。
8.按照权利要求3中所述的新人参二醇的制备方法，其特征在于纯化步骤是降解后的反应液趁热倾入水中，搅拌，静置，过滤，得碱降解物，反复柱层析，重结晶。
9.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1或2的化合物和药学上可接受的赋形剂。
10.权利要求1或2的化合物在制备治疗老年性痴呆、脑血管性痴呆以及肿瘤治疗的辅助治疗药物中的用途。
全文摘要
一种新人参二醇及其衍生物、其制备方法及其医药用途，涉及天然药物领域，具体涉及化学名称为达玛－20(22)－烯－3β，12β，25－三醇(dammar－20(22)－ene－3β，12β，25－triol)。分子式为C
文档编号A61P35/00GK101054400SQ20071005569
公开日2007年10月17日 申请日期2007年5月28日 优先权日2007年5月28日
发明者尹建元, 孟勤, 陶娌娜 申请人:尹建元, 孟勤