一种含甲羟茋苷的药物组合物及其制备方法

专利名称：一种含甲羟茋苷的药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种含甲羟茋苷的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
甲羟茋苷即4′-甲氧基-5-羟基茋-3-O-β-葡萄糖苷。所述甲羟茋苷的分子式为C21H24O8，化学结构为 中国专利200510010757.X公开了甲羟茋苷在缺血性心脑血管疾病治疗中的用途。本发明人发现，甲羟茋苷水溶性较差。经检测，室温下，甲羟茋苷在纯水中的溶解度低于0.06mg/ml。采用常规条件下的助溶剂和增溶剂以及调节pH值等方法难以获得适合临床给药需要的注射用溶液，因此制备适合非胃肠道途径给药的注射液存在困难。
调节pH值、加热、添加表面活性剂等是提高化合物溶解度的常用方法。研究表明，对于制备稳定的药效浓度的甲羟茋苷药物组合物，这些方法的价值有限。
例如，调节溶液pH值可以增加甲羟茋苷的溶解度，但室温下，获得浓度大于1mg/ml的甲羟茋苷水溶液，溶剂pH值约为12以上。本领域内技术人员均熟知，临床用溶液一般要求pH4.0~9.0范围内。此外，甲羟茋苷在高pH值的溶液中稳定性较差，因此高pH值甲羟茋苷药物组合物制剂的临床应用将进一步受到限制。
加热可以提高甲羟茋苷在水溶液中的溶解性，但提高的溶解度有限，而且加热所得甲羟茋苷水溶液，在温度下降时甲羟茋苷将重新析出，显然，该方法并不适合制备成药制剂。
研究表明，表明活性剂可以一定程度地提高甲羟茋苷的溶解度，但作用有限。例如，采用土温80配制含1mg/ml甲羟茋苷水溶液，在pH4～9范围内，土温80用量需达7.52～0％，然而供临床使用的注射液一般要求土温80用量应当在0.5％以内。
显然，在临床制剂允许的范围内，通过调节pH值、添加吐温类表面活性剂均不能获得理想的临用甲羟茋苷注射液的制剂方案。因此，研究开发含药效浓度甲羟茋苷的稳定的溶液型药物组合物对于实现甲羟茋苷的临床应用具有重要的现实意义。

发明内容
本发明的目的在于提供一种含甲羟茋苷的药物组合物及其制备方法，该药物组合物可包含药效浓度的甲羟茋苷，在低温贮存时能够保持稳定，该组合物按照临床常规用法用量配伍，可保持配伍溶液稳定、澄明。
本发明含甲羟茋苷的药物组合物征在于所述含甲羟茋苷的药物组合物是一种含甲羟茋苷的溶液，该溶液包含甲羟茋苷以及用于溶解甲羟茋苷的溶剂，以体积计，所述溶剂包含50％～90％的乙醇，0％～60％的丙二醇，其余量为水。
所述甲羟茋苷在上述溶剂中的浓度为2.5mg～75mg/ml。
所述甲羟茋苷在上述溶剂中的浓度最好为10mg～50mg/ml。
以体积计，在含甲羟茋苷的药物组合物中，所述溶剂包含30～80％的乙醇，10～40％的丙二醇，其余量为水。
以体积计，在含甲羟茋苷的药物组合物中，所述溶剂包含50％的乙醇，30％的丙二醇，其余量为水。
在含甲羟茋苷的药物组合物中，所述水为纯化水、注射用水、生理盐水、葡萄糖溶液、葡萄糖氯化钠溶液或缓冲溶液。
在含甲羟茋苷的药物组合物中，所述缓冲溶液的pH值为6.0～9.0。
在含甲羟茋苷的药物组合物中，所述药物组合物的剂型为注射液、口服溶液。
含甲羟茋苷的药物组合物在制备治疗或预防缺血性心脑血管病药物中的应用。所述疾病为冠心病、脑梗死。
中国专利200510010757.X公开了以乙醇作为溶剂提取甲羟茋苷，但是甲羟茋苷在乙醇溶剂中的溶解特性以及乙醇在制备含甲羟茋苷药用制剂中的用途并不明确。研究表明，甲羟茋苷在乙醇中具有良好的溶解度而在纯水中的溶解度很低(＜0.06mg/ml)。一般地，一种溶质在良溶剂中溶解后，加入低溶解度溶剂，将使溶质在良溶剂中的溶解度显著下降。中药及天然药物领域中采用“水提醇沉”或“醇提水沉”法分离提取物或利用混合溶剂进行重结晶均是基于此原理。但是，本发明人研究发现，甲羟茋苷在乙醇-水混合溶剂中具有独特的溶解行为，其规律与上述一般规律完全不同。作为甲羟茋苷良溶剂的乙醇，与甲羟茋苷低溶解度溶剂水混合时，在一定比例范围内，不良溶剂增加，混合溶剂对甲羟茋苷的溶解性没有下降，反而出乎意料地有所升高。例如，室温条件下，甲羟茋苷在纯水中的溶解度＜0.06mg/ml；在无水乙醇中的溶解度约7mg/ml；出乎意料的是，在约50％~95％(v/v)的乙醇水溶液中，甲羟茋苷的溶解度均大于20mg/ml。此结果表明，50％~95％(v/v)的乙醇水溶液对甲羟茋苷具有“潜溶”作用，即一定比例范围内，乙醇-水混合溶剂对甲羟茋苷的溶解性优于其中纯水和纯乙醇之任何一种单一溶剂。研究还发现，在15％乙醇-水溶液中，甲羟茋苷的溶解度约为0.2mg/ml；在30％乙醇-水溶液中，其溶解度约为1.5mg/ml；也就是说，超过一定的比例范围，混合溶剂的“潜溶”性质将不复存在。
本发明人还进一步意外地发现，在上述乙醇-水溶液中，若加入一定量的丙二醇组成新的混合溶剂，则甲羟茋苷在该混合溶剂的一定比例范围内，溶解度可进一步提高，即分别高于其在对应单一溶剂(乙醇-水、丙二醇)中的溶解度。例如，以60％乙醇-水与丙二醇按照10∶5(v/v)的比例组成新的混合溶剂，则甲羟茋苷的溶解度约为67mg/ml，远高于其在60％乙醇-水及溶剂丙二醇中的溶解度(分别约为37mg/ml及20mg/ml)。该溶液经低温贮存考察，稳定性良好。研究也发现，超过一定的比例范围，混合溶剂的“潜溶”性质亦将不再存在。
对于静脉内给药，注射液所含乙醇浓度不能过高。鉴于此，本发明采用注射用浓溶液实现可静脉内连续滴注给药的注射剂。所谓注射用浓溶液是指在临用前采用注射用生理盐水稀释至规定倍数，然后再通过静脉推注或静脉滴注途径给药的注射剂。试验表明，以乙醇-水或水-乙醇-丙二醇混合溶剂配制的甲羟茋苷注射液在注射用生理盐水中的配伍稳定性良好，而以丙二醇-水配制的样品溶液，配伍不稳定。此外，研究显示，在一定条件下，混合溶剂的临床配伍稳定性优于乙醇-水，且混合溶剂配制比例不同，样品溶液的配伍稳定性也有所区别。
由此可见，本发明首次阐明合适比例的乙醇-水和/或丙二醇混合溶剂可以对甲羟茋苷产生特定的“潜溶”作用；只有合适比例的乙醇-水和/或丙二醇混合溶剂才可以制备具有配伍稳定性的注射用浓溶液，且该溶液可长期低温贮存，这些性质对于制备可实际应用于临床的药用制剂具有非常重要的意义。
由于水、乙醇、丙二醇均为药学上可接受的溶剂，因此，基于本发明的目的及上述发现，本发明提供了一种可以包含高浓度甲羟茋苷的溶液型药物组合物。在本文中，有时将含甲羟茋苷的药物组合物简称为甲羟茋苷药物组合物。
本发明提供的甲羟茋苷药物组合物，包含甲羟茋苷，以及用于溶解甲羟茋苷的溶剂，以体积计，所述溶剂包含50％～90％的乙醇，0％～60％的丙二醇，以及余量的水。
在本文中，如无特别说明，所述百分含量均为体积百分含量。根据中国药典，溶剂乙醇如无特殊说明即指95％乙醇。
在本发明提供的甲羟茋苷药物组合物中，甲羟茋苷在所述溶剂中的浓度通常应为不低于2.5mg/ml。
进一步的，甲羟茋苷在所述溶剂中的浓度为5mg～100mg/ml。
优选的，甲羟茋苷在所述溶剂中的浓度为10mg～50mg/ml。
在本发明提供的甲羟茋苷药物组合物中，甲羟茋苷的浓度应不低于2.5mg/ml。根据本发明人进行的药理学活性试验结果，甲羟茋苷单次有效给药剂量约为5mg/kg体重或以上；根据本领域内常规的体表面积计算法，与这些剂量相对应的人用剂量(以70kg体重计算)应当为56mg/次以上。显然，如果采用1~20ml的常规临床注射剂规格，则其溶液中所需甲羟茋苷浓度应当不低于2.5mg/ml。
本发明所用的溶剂可以显著提高甲羟茋苷在溶液中的溶解度，同时提高甲羟茋苷药物组合物在低温保存时的稳定性，由此实现甲羟茋苷的浓度不低于2.5mg/ml，以利于药物制剂的制备和临床用药。
鉴于本发明之溶液可以采用生理盐水、注射用水等稀释，因此本领域技术人员可以理解，当应用本发明的溶剂时，即使甲羟茋苷的浓度低于2.5mg/ml，也应当属于本发明的范围。
在本发明提供的甲羟茋苷药物组合物中，所述溶剂还可进一步包含水。
以体积计，所述溶剂优选包含50～80％的乙醇，0～50％的丙二醇以及余量的水。
优选的，所述溶剂为含有一定量丙二醇的混合溶剂，以体积计，所述溶剂包含30％～80％的乙醇，10％～40％的丙二醇，以及余量的水。
更优选的，以体积计，所述溶剂包含40％～60％的乙醇，10％～30％的丙二醇，以及余量的水。
最优选的，以体积计，所述溶剂包含50％的乙醇，30％的丙二醇，以及余量的水。
本发明提供的甲羟茋苷药物组合物中，所述混合溶剂中的水可以是纯化水、注射用水、生理学上可接受的氯化钠溶液或葡萄糖溶液(例如，0.9％氯化钠水溶液、5％葡萄糖溶液、或葡萄糖氯化钠溶液)、或生理学上可接受的缓冲溶液，例如Na2CO3-NaHCO3缓冲液、Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液、Tris缓冲液和Hepes缓冲液等。当所述甲羟茋苷药物组合物用于不同途径给药时，可以根据需要从上述种类的水中加以选择，例如，用于注射给药时，通常溶剂中的水应为注射用水、生理盐水、或缓冲液等；用于口服给药等时，通常可用纯化水。
优选的，所述混合溶剂中的水为pH6.0～9.0的生理学上可接受的缓冲溶液，例如pH约为6.0～9.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液等。
更优选的，所述混合溶剂中的水优选为pH为7.5～9.0的生理学上可接受的缓冲溶液。
最优选的，所述混合溶剂中的水为pH约8.5的生理学上可接受的缓冲溶液，例如pH8.5的Na2CO3-NaHCO3缓冲液或Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液等。
本发明提供的甲羟茋苷药物组合物可用于胃肠外注射给药。其中，用于静脉给药时，可直接滴注给药或将上述甲羟茋苷注射液稀释于0.9％氯化钠注射液或5％葡萄糖注射液滴注给药；用于肌内给药时，可直接注射给药或以生理盐水稀释至适当浓度后给药。本发明的甲羟茋苷药物组合物还可以用作口服给药溶液，以及其它适合采用溶液形式给药的制剂。
因此，本发明提供的甲羟茋苷药物组合物的剂型可为注射液、口服溶液、喷剂等。
进一步的，本发明提供的甲羟茋苷药物组合物含有单位剂量的活性成分，单位剂量可以含甲羟茋苷5～1500mg，优选含甲羟茋苷10～500mg，更优选含甲羟茋苷50～200mg，在本发明的一个优选实施方式中，含甲羟茋苷50mg。
包含单位剂量甲羟茋苷的溶液体积可以为0.5～250ml，优选1～20ml，更优选1～10ml，在本发明的一个优选实施方式中，溶液体积为5ml。
本发明提供的甲羟茋苷药物组合物还可以任选含有其它药学上常规使用的药用辅料，例如，本发明的甲羟茋苷药物组合物可任选增加混悬液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇、甲基纤维素等；可任选含有合适的稳定剂或抗氧剂，如亚硫酸氢钠、维生素C等；当用于口服给药时，还可添加适当的矫味剂等，以改善口感。
本发明还提供了含甲羟茋苷的药物组合物在制备治疗或预防缺血性心血管疾病的药物中的应用。
药效学试验结果表明，与空白对照组和阳性药对照组相比，甲羟茋苷注射液对脑缺血和冠脉缺血具有显著的治疗作用。
本发明经过大量试验研究，探索出一种采用混合溶剂改善药物溶解度的方法。将该方法用于药物制备，可以提供含有根据已知研究成果测算的有效治疗量的甲羟茋苷的溶液，由此，本发明使得药学活性成分甲羟茋苷能够以治疗有效量应用于临床，此与现有的技术水平相比有质的改进和提高。动物试验及溶液稳定性试验表明，本发明提供的甲羟茋苷药物组合物安全有效、稳定性良好，因此，该溶液具有较佳的临床应用前景。
具体实施例方式为了更好地理解本发明的本质，下文通过对本发明较佳实施方式的描述，详细说明但不限制本发明。
在以下试验中所使用的甲羟茋苷均由昆明翔昊科技有限公司提供，纯度99.1％，批号20060302。
本发明所用其它试验材料，如无特别说明，均为市售购买产品。
1.甲羟茋苷注射液的制备材料无水乙醇(或乙醇)，分析纯；纯水，自制；0.9％氯化钠溶液，以纯水配制；氯化钠葡萄糖溶液，以注射用水配制；丙二醇，分析纯，磷酸盐缓冲溶液，以适量磷酸氢二钠及磷酸二氢钠及纯水配制，溶液pH8.5～9.0。
实施例1一、处方原料 用量甲羟茋苷 250.00g无水乙醇 3.50L注射用水 至 5.00L制成 1000支二、制法无水乙醇3.50L，加入甲羟茋苷250.00g，40℃超声使溶，注射用水定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，灌封于1000支安瓿瓶中。临用时以0.9％氯化钠注射液或5％葡萄糖注射液稀释至适当浓度。
实施例2一、处方原料 用量甲羟茋苷 50.00g无水乙醇 2.00L制成 1000支二、制法取处方量乙醇，加入甲羟茋苷50g，40℃超声使溶，乙醇定容至刻度，0.2μm微孔滤膜过滤，灌封于1000支安瓿瓶中。
实施例3一、处方原料 用量甲羟茋苷 100.00g丙二醇 1.50L无水乙醇 2.50LNa2HPO4-NaH2PO4缓冲液 至 5.00L制成 1000支二、制法量取2.50L无水乙醇，加入1.50L丙二醇以及磷酸盐缓冲液，混匀，加入甲羟茋苷100.00g，超声使溶，缓冲液定容至刻度。过0.45μm的微孔滤膜，粗滤。续滤液过0.22μm的微孔滤膜，过1万截留分子量的聚醚砜膜除热原。棕色瓶充氮气灌封。
实施例4一、处方原料 用量甲羟茋苷 100.00g丙二醇 0.40L无水乙醇 0.80L0.9％氯化钠溶液至2.00L制成 1000支二、制法量取处方量无水乙醇、丙二醇，混匀，加入甲羟茋苷100.00g，40℃超声使溶，0.9％氯化钠溶液定容至刻度。过0.45μm的微孔滤膜粗滤。续滤液过0.22μm的微孔滤膜，1万截留分子量的PES膜除热原。棕色瓶充氮气灌封。临用时以0.9％氯化钠注射液或5％葡萄糖注射液稀释至适当浓度。
实施例5一、处方原料 用量甲羟茋苷 150.00g丙二醇 1.25L乙醇 10.50L葡萄糖氯化钠溶液 至25.00L制成 1000瓶二、制法量取处方量乙醇、丙二醇以及氯化钠葡萄糖溶液，混匀，加入甲羟茋苷150.00g，40℃超声使溶，氯化钠葡萄糖溶液定容至刻度。0.45μm的微孔滤膜粗滤。续滤液过0.22μm的微孔滤膜，1万截留分子量的PES膜除热原。棕色瓶充氮气灌装。
2.甲羟茋苷口服溶液的制备实施例6一、处方原料 用量甲羟茋苷 200.00g丙二醇 0.50L乙醇 3.00L纯水 至 10.00L分装成 1000支二、制法量取处方量乙醇、丙二醇及纯水，混匀，加入110.00g甲羟茋苷，40℃超声使溶，纯水定容至刻度。0.45μm微孔滤膜过滤后，分装到1000支玻璃瓶中。
3.甲羟茋苷在不同溶剂及混合溶剂中的溶解度比较实施例6pH对甲羟茋苷溶解度的影响一、材料去离子水；氢氧化钠；盐酸。
二、方法以0.2N氢氧化钠及0.2N盐酸溶液调节去离子水，使pH为5.0~12.0。精密量取上述溶液各20ml，分别加入适量甲羟茋苷，40℃超声20min，溶液过饱和，室温下静置8小时后，0.45μm微孔滤膜过滤，该滤液为甲羟茋苷在不同pH值水溶液中的饱和溶液。HPLC法测定滤液中的甲羟茋苷含量，计算甲羟茋苷的溶解度。
三、结果结果如表1所示。结果表明，室温下，当溶剂pH值≤11.0，甲羟茋苷水溶液的溶解度均低于0.5mg/ml；溶剂pH值12，甲羟茋苷浓度约为1.0mg/ml，其终溶液pH约为11.3。
表1.pH对甲羟茋苷溶解度的影响

实施例7甲羟茋苷在乙醇-水溶液以及生理盐水中的溶解度一、材料无水乙醇分析纯；纯水，自制；0.9％氯化钠注射液。
二、方法以无水乙醇和纯水配制系列浓度为15％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％(v/v)的乙醇水溶液。精密量取水、无水乙醇、0.9％氯化钠注射液(生理盐水)以及上述系列浓度的乙醇水溶液各20ml，分别加入适量甲羟茋苷，40℃超声20min，溶液过饱和，室温下静置8小时后，0.45μm微孔滤膜过滤，该滤液为甲羟茋苷在不同浓度乙醇水溶液中的饱和浓度。采用HPLC法测定滤液中的甲羟茋苷含量，计算甲羟茋苷的溶解度。
三、结果结果如表2所示。结果表明，室温下，甲羟茋苷在纯水以及生理盐水中的溶解度均低于0.06mg/ml，在无水乙醇中溶解度约6.23mg/ml，最高溶解度是在一定浓度范围的乙醇水溶液中，例如，在70％(v/v)乙醇水溶液中，甲羟茋苷溶解度高达52mg/ml。在50％~95％乙醇水溶液中，甲羟茋苷溶解度大于20mg/ml，均高于其在无水乙醇中的溶解度。结果表明，50％~95％乙醇水溶液对甲羟茋苷具有“潜溶”作用。
表2.甲羟茋苷在乙醇-水溶液以及生理盐水(NS)中的溶解度

实施例8甲羟茋苷在丙二醇-水溶液中的溶解度一、材料1，2-丙二醇，分析纯；纯水，自制。
二、方法以丙二醇和纯水配制系列浓度自20％(v/v)起的丙二醇水溶液。精密量取丙二醇以及上述系列浓度溶液各20ml，分别加入适量甲羟茋苷，40℃超声20min，溶液过饱和，室温下静置8小时后，0.45μm微孔滤膜过滤，该滤液为甲羟茋苷在不同浓度丙二醇水溶液中的饱和浓度。HPLC法测定滤液中的甲羟茋苷含量，计算甲羟茋苷的溶解度。
三、结果结果如表3所示。
结果表明，室温下，甲羟茋苷在丙二醇水溶液中的溶解度随着溶液中丙二醇浓度的增加，溶解度也相应增加，最高溶解度约20mg/ml。在35％的丙二醇水溶液中，甲羟茋苷的溶解度约为3.1mg/ml，该溶液不稳定，室温放置12小时后有溶质甲羟茋苷析出。
表3 甲羟茋苷在丙二醇-水溶液中的溶解度

实施例9甲羟茋苷在乙醇-丙二醇-水混合溶剂中的溶解度一、材料无水乙醇，分析纯；1，2-丙二醇，分析纯；纯水，自制。
二、方法精密量取45％、60％、75％(v/v)的乙醇水溶液，按体积比10∶1、10∶2、10∶2.5、10∶3、10∶4的比例精密加入丙二醇，制备混合溶剂。所得混合溶剂中，实际含丙二醇约为10％~30％(v/v)，含乙醇约32％~68％(v/v)。精密量取上述混合溶剂各20ml，分别加入适量甲羟茋苷，40℃超声20min，溶液过饱和，室温下静置8小时后，0.45μm微孔滤膜过滤，该滤液为甲羟茋苷在不同混合溶液中的饱和浓度。HPLC法测定滤液中的甲羟茋苷含量，计算甲羟茋苷的溶解度。
三、结果结果如表4所示。结果表明，(1)以60％、75％乙醇-水与丙二醇按照一定比例配制的混合溶剂，对甲羟茋苷的溶解度既高于混合前的乙醇-水溶液，也高于单一溶剂丙二醇，也就是说，相对于乙醇-水与丙二醇而言，一定比例范围的混合溶剂对甲羟茋苷具有“潜溶”作用。(2)鉴于本领域内的一般技术要求(采用乙醇作为注射用溶剂，其最高浓度约60％，以75％或60％的乙醇-水与丙二醇按照10∶2.0~10∶4.0的比例配制混合溶剂，此时溶液中乙醇的实际含量均不大于50％，甲羟茋苷的浓度均高于30mg/ml。
表4.甲羟茋苷在乙醇-丙二醇-水混合溶剂中的溶解度 注(1)*不含丙二醇；(2)甲羟茋苷在丙二醇中的溶解度约为20mg/ml4.甲羟茋苷药物组合物的药效学研究一.材料受试药物 甲羟茋苷注射液，按实施例3制备，批号20060106。
对照药品 注射用灯盏花素(粉针)，50mg/瓶，批准文号国药准字Z53020666，昆明龙津药业有限公司生产，批号20050616；尼莫地平片，20mg/片，批准文号国药准字H14022821，山西亚宝药业股份有限公司生产，批号050207。
实验动物 超重全雄SD大鼠，8～10月龄，体重400～500g；SPF级ICR小鼠，3～4周龄，雌雄兼用，体重18～24g；由昆明医学院实验动物中心提供，生产许可证SCXK(滇)2005-0008，发证机关云南省科学技术厅。
实验仪器 TMS-1024全自动生化分析仪，日本东京株市会社；C2000-4血凝仪及LBY-NS血小板聚集仪，北京普利生集团；BS110S电子分析天平，德国赛多利司有限公司；Centrifuge5810R冷冻离心机，Eppendorf公司；Millipore超纯水处理系统，美国Millipore公司。
实验试剂 红四氮唑(TTC)，试剂级，AMRESCO分装，批号0765，上海生工出品；AST(紫外动力学法、批号20050524)、LDH(紫外动力学法、批号20050511)测定试剂盒，上海科华科技有限公司出品；TT(批号105030)、PT(批号105023)、APTT(批号1110071)及FIB(批号1320062)测定试剂盒，上海太阳生物技术有限公司出品。
统计方法 采用DAS ver1.0软件进行统计分析，数据以x±SD表示，计量资料采用t检验，方差不齐用秩和检验，计数资料采用X2检验。
二.实验方法大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型雄性SD大鼠66只，体重400～500g，按体重随机分为6组假手术组；模型组；阳性对照灯盏花素注射液10mg/kg组；甲羟茋苷样品5、15mg/kg组；每组11只。实验时，用3％的水合氯醛以300mg/kg的剂量腹腔注射麻醉动物，颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉(CCA)，由CCA分叉处向头端依次游离，结扎颈外动脉(ECA)的所有分支，然后分离颈内动脉(ICA)，夹闭CCA。将做好的栓线经ECA主干切口缓缓向ICA入颅方向推进，以CCA分叉处为标记，推进约2.5cm到达大脑中动脉起始部，由此阻断了MCA的血液供应，扎紧ECA根部松扣，松开CCA，缝合皮肤，腹腔注射1ml生理盐水补充体液。1h后拔出栓线进行再灌注，恢复MCA的血液供应，完成局灶性脑缺血-再灌注模型。假手术组除了不插入线栓外，其余步骤相同。各组动物在手术完成即刻和缺血再灌注后6小时由尾静脉注射给药，假手术组和模型组注射等容量的生理盐水2ml/kg。
表5

以上标准满分为10分，分数越高，表明动物行为障碍越严重动物于术后6h和缺血再灌注后24小时，根据运动行为表现进行神经功能评分，以此作为脑功能障碍指标。评分标准见表5再灌注24h，经神经功能评分后，腹主动脉插管取血，一份分离血清于-20℃保存，用于AST、LDH的活性测定；一份用3.8％枸橼酸钠以1∶9抗凝，1400rpm离心10min制备富血小板血浆(PRP)，4000rpm离心10min制备贫血小板血浆(PPP)。按比浊法测定ADP-2Na诱导的血小板聚集率，ADP的终浓度为6mol/L，按试剂盒方法分别测定TT、PT、APTT及FIB。取血后快速断头取脑，放入冰生理盐水中去除嗅球、小脑和低位脑干，吸干水分称取脑重，沿冠状切成5片，置入5ml含有4％TTC及1mol/L K2HPO40.1ml的溶液中，避光于37℃温孵30min，其间每隔5~8min翻动一次。经染色后，正常脑组织呈玫瑰红色，而梗死组织呈白色，将梗塞部位剪下称重，以重量求面积法计算梗死组织重量占双侧大脑半球重的百分比作为脑梗塞范围。
三、实验结果(1)对模型大鼠神经功能障碍及脑梗塞范围的影响由表6可见，模型大鼠清醒后活动减少，出现不同程度的运动障碍，与假手术组相比差异显著。阳性对照灯盏花素、甲羟茋苷两剂量组，能明显减轻MCAO再灌注大鼠的神经功能障碍，显著降低脑梗塞范围。
表6.甲羟茋苷对MCAO大鼠神经功能障碍及脑梗塞范围的影响(X±SD)

与假手术组相比△△P＜0.01；与模型组相比*P＜0.05，**P＜0.01；(2)对模型大鼠ADP诱导的血小板聚集及凝血的影响由表7可见，造模大鼠纤维蛋白原含量明显增加，阳性对照灯盏花素能显著降低FIB的含量；甲羟茋苷15mg/kg能显著延长APTT时间，降低血小板聚集率，5mg/kg对FIB的含量有显著降低作用；其余各组对纤维蛋白原含量有降低趋势。
表7甲羟茋苷对MCAO再灌注大鼠血凝及血小板聚集的影响(X±SD)

与假手术组相比△P＜0.05；与模型组相比*P＜0.05，**P＜0.01；(3)对模型大鼠血清AST、LDH的影响由表8可见，模型大鼠血清LDH活性明显高于假手术组，阳性对照灯盏花素、甲羟茋苷两剂量组能显著降低造模大鼠LDH的释放，但对AST活性无明显影响。
表8 QHQ粉针对MCAO再灌注大鼠血清AST及LDH的影响(x±SD)

与假手术组相比△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组相比*P＜0.05，**P＜0.01四.结论在本实验室条件下，甲羟茋苷注射液于手术后即刻和缺血再灌注6h静脉注射5、15mg/kg，能明显减少MCAO再灌注大鼠的脑梗塞范围，使行为障碍程度得到明显改善，并能明显降低血清中LDH的释放，降低纤维蛋白原的含量，抑制血小板聚集率。结果表明甲羟茋苷注射液对缺血性心脑血管疾病有明显保护作用。
权利要求
1.一种含甲羟茋苷的药物组合物，其特征在于所述药物组合物是一种含甲羟茋苷的溶液，该溶液包含甲羟茋苷以及用于溶解甲羟茋苷的溶剂，以体积计，所述溶剂包含50％～90％的乙醇，0％～60％的丙二醇，其余量为水。
2.根据权利要求1所述的含甲羟茋苷的药物组合物，其特征在于所述甲羟茋苷在上述溶剂中的浓度为2.5mg～75mg/ml。
3.根据权利要求2所述的含甲羟茋苷的药物组合物，其特征在所述甲羟茋苷在上述溶剂中的浓度为10mg～50mg/ml。
4.根据权利要求1所述的含甲羟茋苷的药物组合物，其特征在于，以体积计，所述溶剂包含30～80％的乙醇，10～40％的丙二醇，其余量为水。
5.根据权利要求4所述的含甲羟茋苷的药物组合物，其特征在于，以体积计，所述溶剂包含50％的乙醇，30％的丙二醇，其余量为水。
6.根据权利要求1、4～5所述的含甲羟茋苷的药物组合物，其特征在于所述水为纯化水、注射用水、生理盐水、葡萄糖溶液、葡萄糖氯化钠溶液或缓冲溶液。
7.根据权利要求6所述的含甲羟茋苷的药物组合物，其特征在于所述缓冲溶液的pH值为6.0～9.0。
8.根据权利要求1所述的含甲羟茋苷的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型为注射液、口服溶液。
9.根据权利要求1所述的含甲羟茋苷的药物组合物在治疗或预防缺血性心脑血管病药物中的应用，其特征在于含甲羟茋苷的的药物组合物用于治疗或预防疾病为冠心病、脑梗死。
全文摘要
本发明涉及一种含甲羟茋苷的药物组合物溶液及其制备方法，该组合物包含甲羟茋苷以及用于溶解甲羟茋苷的溶剂。以体积计，所述溶剂包含50％～90％的乙醇，0％～60％的丙二醇以及剩余量的水。所述组合物中，甲羟茋苷的浓度可不低于2.5mg/ml。低温贮存时，该组合物的稳定性较好。该组合物可通过静脉滴注、肌肉注射等胃肠外途径给药，也可用于口服给药。
文档编号A61K47/10GK101036663SQ20071006581
公开日2007年9月19日 申请日期2007年4月18日 优先权日2007年4月18日
发明者胡琳, 胡群, 何金星, 戴家红, 赵金华 申请人:昆明翔昊科技有限公司