专利名称：：一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法仕+Amt一禾中积、胃^忌、，酉費7jc角串iJHR胃帛忌、，^白勺7^去技木领域本发明涉及一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法。
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：积雪草Ce"fe//flos/""ca(L.)Urban为伞形科积雪草属植物，在许多国家和地区传统医药领域中的应用有悠久的历史，我国中医中药对积雪草的内服和外用已有两千年的历史。积雪草味苦、辛，性寒，归肝、脾、肾、胃经。古药典记载主要用于治疗湿热黄疸、中暑腹泻、砂淋血淋、痈肿疮毒、跌打损伤等病症。现代药理学研究和应用表明，积雪草可用于治疗抑郁症、皮肤创伤、胃溃疡、传染性肝炎、皮肤病和流行性脑脊髓膜炎等。积雪草的药理作用同它的化学成分是密不可分的。积雪草的化学成分十分复杂，其主要成分有三萜类、多炔烯烃类、黄酮类和挥发油类等。此外，积雪草中还含有氯原酸、内消旋肌醇、黄酮醇、脂肪酸、天胡荽碱、甾醇、蜡、叶绿素、烃类、木脂素类、糖、鞣质和多元酚类等成分。积雪草的化学成分中，三萜类皂苷及其皂苷元是研究的最早、生物学活性研究较深入的一大类组分，其中积雪草酸、羟基积雪草酸、多米诺积雪草酸等是其重要的活性成分。积雪草总苷是从积雪草中提取得到的皂苷类物质的总称，主要由三萜苷类物质组成，其主要成分包括积雪草苷(Asiaticoside，CASNo.:16830-15-2，分子式为(:48&8019，分子量为959.12)、羟基积雪草苷(Madecassoside，CASNo.:34540-22-2,分子式为C48H7802Q，分子量为975.12)和多米诺积雪草苷(Terminoloside，CASNo.:125265-68-1，分子式为C48H78O20，分子量为975.12)。积雪草总苷元是指上述皂苷类成分的糖苷键断裂后生成的糖苷配基(苷元)，分别是积雪草酸(Asiaticacid，CASNo.:464-92-6，分子式为C3。H4805，分子量为488.70)、羟基积雪草酸(Madecassicacid,CASNo.:18499-4l画7，分子式为C30H48O6，分子量为504.70)、多米诺积雪草酸(Terminolicacid，CASNo.:564-13-6，分子式为C3。H4806，分子量为504.70)。羟基积雪草苷也叫积雪草苷A，特米诺苷也叫做积雪草苷B，两者是一对同分异构体，同样羟基积雪草酸和特米诺酸也是一对同分异构体。它们差异只在于其中一个甲基归属不同，且两个不同的归属处于邻位关系，性质差异较小。它们的结构式分别如下积雪草苷羟基积雪草苷多米诺积雪草苷积雪草酸羟基积雪草酸多米诺积雪草酸积雪草总苷元的药理作用十分广泛，资料显示，积雪草总苷元可用于治疗烧伤性瘢痕、防止冠心病、心肌梗死、脑血栓、脑梗塞、增强记忆、皮肤增白等。近期的研究表明，积雪草总苷元还具有抗抑郁、抗纤维化、抗菌、抗肿瘤和抗氧化等功效。由于积雪草总苷成分的糖苷键较易断裂，因此其作为药物制剂的稳定性难以控制，而积雪草总苷元在化学性质上比总苷稳定。而且以积雪草酸为例，积雪草苷在胃肠道内代谢转化为积雪草酸，给药时直接使用积雪草酸来代替积雪草苷，则无须经过胃肠道细菌的代谢，使活性作用更直接。因此以积雪草总苷元代替总苷制备药物制剂，可以克服积雪草总苷给药剂量难以控制和药物制剂不稳定等问题。因此，积雪草总苷元的生产制备对更好地利用积雪草资源具有重要的意义。目前，积雪草总苷元制备方法主要是从积雪草原草中直接提取，辅以萃取、层析等纯化过程而获得，不仅耗费大量溶剂，而且较为费时费力。另外，积雪草中总苷元的含量明显低于总苷，因此从积雪草中直接获得的总苷元的量相对较少，而积雪草总苷的分离纯化方法比较成熟，此外皂苷类物质较易水解，因此从积雪草总苷出发进行水解而获得积雪草总苷元是一种有效的途径。本发明拟在无机酸的水溶液中水解积雪草总苷结合结晶工艺制备积雪草总苷元。本发明积雪草总苷元主要由积雪草酸、羟基积雪草酸和多米诺积雪草酸组成，这三种组分的质量含量^90%。本方法积雪草总苷元产品收率和纯度高，产品可用原料药或者进一步分离得到不同的积雪草酸产品；积雪草总苷元产品作为药物的应用范围包括治疗皮肤创伤、抗抑郁、抗阿尔茨海默病以及保肝、保护心脑血管和诱导肿瘤细胞凋亡等；同时该方法工艺过程简单、所需投资少、易于实现工业化。
发明内容本发明的目的是提供一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法。方法的步骤如下1)在有机溶剂1、水和无机酸的混合溶液中加入积雪草总苷原料，在45~80°C下水解124h;2)水解液减压浓縮除去有机溶剂I，沉淀后过滤，得沉淀物；3)沉淀物晾干后加入有机溶剂II溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得积雪草总苷元产品。其中步骤1)中的有机溶剂I为甲醇或乙醇，有机溶剂I、水和无机酸的混合溶液中有机溶剂I的体积百分比为1090%;步骤l)中的无机酸为盐酸或硫酸，有机溶剂I、水和无机酸的混合溶液中无机酸的浓度为0.1-2.0N;步骤l)中的水解温度为45~80°C,其中较佳温度为55~78°C;步骤l)中的水解时间为1~24h，其中较佳水解时间为215h;步骤3)中的有机溶剂II为甲醇或乙醇，有机溶剂H的用量为530mL/g沉淀物(沉淀物经晾干后称量)；步骤3)中的水的用量为有机溶剂II体积的816倍。步骤l)中有机溶剂I的作用是增加积雪草总苷原料的溶解度，积雪草总苷原料加入到有机溶剂I、水和无机酸的混合溶液中宜形成均相溶液，若有沉淀，需要过滤掉。水解反应和水解液减压浓縮除去有机溶剂I过程中产生沉淀属于正常现象。本发明积雪草总苷元主要由积雪草酸、羟基积雪草酸和多米诺积雪草酸组成，这三种组分的质量含量^90%。本方法积雪草总苷元产品收率和纯度高，产品可用原料药或者进一步分离得到不同的积雪草酸产品；积雪草总苷元产品作为药物的应用范围包括治疗皮肤创伤、抗抑郁、抗阿尔茨海默病以及保肝、保护心脑血管和诱导肿瘤细胞凋亡等；同时该方法工艺过程简单、所需投资少、易于实现工业化。附图是积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的工艺流程简图。具体实施方式本发明所使用的积雪草总苷原料购自广西昌洲天然药业有限公司，经检测积雪草总苷质量含量为80.3%，其中积雪草苷的质量含量为30.0%，羟基积雪草苷与多米诺积雪草苷的质量含量合占50.3%。积雪草总苷和积雪草总苷元含量采用高效液相色谱法(HPLC)测定，采用外标法定量。采用AgilentllOO液相色谱分析系统，分析条件如下EclipseXDB—C18反相柱((D4.6mmx250mm，5nm，Agilent);采用梯度洗脱，流速0.6mL/min;柱温为35'C;检测波长210nm。表1HPLC法测定积雪草总苷和积雪草总苷元的流动相梯度<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>以下用实施例对本发明的工艺方法作进一步的说明。本发明的保护范围不受实施例的限制，本发明的保护范围由权利要求书决定。实施例1在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为10%,硫酸的当量浓度为O.lN;三口烧瓶放入65'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入10g积雪草总苷原料，水解24h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得3.7g;收集晾干后的沉淀物加入18.5mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入333mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得2.5g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量84.1%。实施例2在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和盐酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为20%，盐酸的当量浓度为0.5N;三口烧瓶放入65'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入20g积雪草总苷原料，水解10h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得7.4g;收集晾干后的沉淀物加入74mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1184mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得5.28积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.1%。实施例3在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为30%，硫酸的当量浓度为l.ON;三口烧瓶放入6(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入30g积雪草总苷原料，水解8h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得11.2§;收集晾干后的沉淀物加入168mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入2352mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得7.8g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.3%。实施例4在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和盐酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为40%，盐酸的当量浓度为1.5N;三口烧瓶放入60。C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入40g积雪草总苷原料，水解6h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得14.7g;收集晾干后的沉淀物加入294mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入3528mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空千燥后得10，2g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.5%。实施例5在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为50%，硫酸的当量浓度为2.0N;三口烧瓶放入55'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入50g积雪草总苷原料，水解9h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得18.3g;收集晾干后的沉淀物加入457.5mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入4575mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得12.5g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.4%。实施例6在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和盐酸的混合溶液500mL,其中甲醇的体积百分比为60%，盐酸的当量浓度为2.0N;三口烧瓶放入55'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入20g积雪草总苷原料，水解12h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得7.5g;收集晾干后的沉淀物加入225mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1800mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得4.6g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.1%。实施例7在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为70%,硫酸的当量浓度为1.6N;三口烧瓶放入5(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入30g积雪草总苷原料，水解18h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得11.5g;收集晾干后的沉淀物加入115mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1840mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得8.0g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量88.9%。实施例8在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和盐酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为80%，盐酸的当量浓度为1.2N;三口烧瓶放入50'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入40g积雪草总苷原料，水解20h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得15.3g;收集晾干后的沉淀物加入229.5mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入3213mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得10.1g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量85.5%。实施例9在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为90%，硫酸的当量浓度为0.8N;三口烧瓶放入45"C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入20g积雪草总苷原料，水解24h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得7.8g;收集晾干后的沉淀物加入156mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1872mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得5.6g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量77.8%。实施例10在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为20%，硫酸的当量浓度为0.6N;三口烧瓶放入65'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入30g积雪草总苷原料，水解8h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得ll.lg;收集晾干后的沉淀物加入277.5mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入2775mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得7.1g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量91.0%。实施例11在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为40%，硫酸的当量浓度为0.2N;三口烧瓶放入65'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入40g积雪草总苷原料，水解9h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得14.6g;收集晾干后的沉淀物加入146mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入2336mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得10.3g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.3%。实施例12在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为60%，硫酸的当量浓度为0.4N;三口烧瓶放入6(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入25g积雪草总苷原料，水解10h;水解液减压浓缩除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得9.1g;收集晾干后的沉淀物加入136.5mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1911mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得6.4g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.5%。实施例13在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入甲醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中甲醇的体积百分比为80%，硫酸的当量浓度为l.ON;三口烧瓶放入6(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入35g积雪草总苷原料，水解9h;水解液减压浓縮除去甲醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得12.8g;收集晾干后的沉淀物加入256mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入3072mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得9.0g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量91.1Q/。。实施例14在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为10%，硫酸的当量浓度为O.lN;三口烧瓶放入8(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入10g积雪草总苷原料，水解14h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得4.0g;收集晾干后的沉淀物加入20mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入360mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得2.6g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量85.0%。实施例15在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和盐酸的混合溶液500mL,其中乙醇的体积百分比为20%,盐酸的当量浓度为0.5N;三口烧瓶放入75'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入20g积雪草总苷原料，水解5h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得7.2g;收集晾干后的沉淀物加入72mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1152mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得5.1g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.5%。实施例16在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为30%，硫酸的当量浓度为1.0N;三口烧瓶放入7(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入30g积雪草总苷原料，水解4h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得11.0g;收集晾干后的沉淀物加入165mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入2310mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得7.8g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.8%。实施例17在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和盐酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为40%，盐酸的当量浓度为1.5N;三口烧瓶放入65"C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入40g积雪草总苷原料，水解5h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得14.7g;收集晾干后的沉淀物加入294mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入3528mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得9.5g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量91.1%。实施例18在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为50%，硫酸的当量浓度为2.0N;三口烧瓶放入65'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入50g积雪草总苷原料，水解5h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得18.4g;收集晾干后的沉淀物加入460mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入4600mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得12.1g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.5%。实施例19在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和盐酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为60%，盐酸的当量浓度为2.0N;三口烧瓶放入6(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入20g积雪草总苷原料，水解7h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得7.2g;收集晾干后的沉淀物加入216mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1728mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得4.5g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.1%。实施例20在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为70%，硫酸的当量浓度为1.6N;三口烧瓶放入55'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入30g积雪草总苷原料，水解12h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得11.1g;收集晾干后的沉淀物加入111mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1776mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得8.0g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.3%。实施例21在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和盐酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为80%，盐酸的当量浓度为1.2N;三口烧瓶放入5(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入40g积雪草总苷原料，水解18h;水解液减压浓縮除去乙醇，.沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得15.0g;收集晾干后的沉淀物加入225mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入3150mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得10.4g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量87.7%。实施例22在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为90%，硫酸的当量浓度为0.8N;三口烧瓶放入45"C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入20g积雪草总苷原料，水解24h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得7.6g;收集晾干后的沉淀物加入152mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1824mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得5.6g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量76.9%。实施例23在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为20%，硫酸的当量浓度为0.6N;三口烧瓶放入8(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入30g积雪草总苷原料，水解3h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得10.8g;收集晾干后的沉淀物加入270mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入2700mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得7.1g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量91.1%。实施例24在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为40%，硫酸的当量浓度为0.2N;三口烧瓶放入7(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入40g积雪草总苷原料，水解14h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得14.5g;收集晾干后的沉淀物加入145mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入2320mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得10.2g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量90.6%。实施例25在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为60%，硫酸的当量浓度为0.4N;三口烧瓶放入65'C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入25g积雪草总苷原料，水解10h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得9.2g;收集晾干后的沉淀物加入138mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1932mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得5.9g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量91.1。/。。实施例26在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为80%，硫酸的当量浓度为1.0N;三口烧瓶放入55"C的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入35g积雪草总苷原料，水解15h;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得12.8g;收集晾干后的沉淀物加入256mL乙醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入3072mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得8.1g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量91.0%。实施例27在1L带搅拌和水冷凝管的三口烧瓶中加入乙醇、水和硫酸的混合溶液500mL，其中乙醇的体积百分比为10%,硫酸的当量浓度为2.0N;三口烧瓶放入8(TC的恒温水浴中，开搅拌和冷凝水，加入15g积雪草总苷原料，水解lh;水解液减压浓縮除去乙醇，沉淀后过滤，得沉淀物，沉淀物晾干后称重得5.6g;收集晾干后的沉淀物加入140mL甲醇溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入1960mL水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得3.0g积雪草总苷元产品，产品经HPLC分析积雪草总苷元的质量含量87.2%。权利要求1.一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法，其特征在于，方法的步骤如下1)在有机溶剂I、水和无机酸的混合溶液中加入积雪草总苷原料，在45～80℃下水解1～24h；2)水解液减压浓缩除去有机溶剂I，沉淀后过滤，得沉淀物；3)沉淀物晾干后加入有机溶剂II溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得积雪草总苷元产品。2.根据权利要求1所述的一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法，其特征在于步骤l)中的有机溶剂I为甲醇或乙醇。3.根据权利要求1所述的一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法，其特征在于步骤l)有机溶剂I、水和无机酸的混合溶液中的有机溶剂I的体积百分比为1090%。4.根据权利要求1所述的一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法，其特征在于步骤l)中的无机酸为盐酸或硫酸。5.根据权利要求1所述的一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法，其特征在于步骤1)有机溶剂I、水和无机酸的混合溶液中无机酸的浓度为0.1~2.0N。6.根据权利要求1所述的一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法，其特征在于步骤l)中的水解温度为55~78°C。7.根据权利要求1所述的一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法，其特征在于步骤l)中的水解时间为2~15h。8.根据权利要求1所述的一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法，其特征在于步骤3)中的有机溶剂II为甲醇或乙醇。9.根据权利要求1所述的一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法，其特征在于步骤3)中有机溶剂II的用量为5~30mL/g沉淀物。10.根据权利要求1所述的一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法，其特征在于步骤3)中水的用量为有机溶剂II体积的8~16倍。全文摘要本发明公开了一种积雪草总苷酸水解制备积雪草总苷元的方法。方法的步骤如下1)在有机溶剂I、水和无机酸的混合溶液中加入积雪草总苷原料，在45～80℃下水解1～24h；2)水解液减压浓缩除去有机溶剂I，沉淀后过滤，得沉淀物；3)沉淀物晾干后加入有机溶剂II溶解、活性炭脱色、过滤，滤液加入水结晶，经过滤后得结晶物，结晶物再经真空干燥后得积雪草总苷元产品。本发明积雪草总苷元产品收率和纯度高，可用原料药或者进一步分离得到不同的积雪草酸；积雪草总苷元作为药物的应用范围包括治疗皮肤创伤、抗抑郁、抗阿尔茨海默病以及保肝、保护心脑血管和诱导肿瘤细胞凋亡等；同时该方法工艺过程简单、所需投资少、易于实现工业化。文档编号C07J63/00GK101456895SQ200910095290公开日2009年6月17日申请日期2009年1月8日优先权日2009年1月8日发明者吕秀阳,音李,郑兴芳申请人:浙江大学