专利名称：一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺。
背景技术：
积雪草6^^//""^^/(^(1^ )UrBan为伞形科植物，植物学家林奈(Li皿aeus: Carolus)于1764年将积雪草归入天胡荽属(/f^/raa i)Ve)，并定名为ffydraco0^e w/art'cfl L.。在1879年，德国人UrBan根据花瓣的排列以及果实的棱数将其从 天胡荽属中的独立出来并建立积雪草属(<^"^//一，积雪草归入该属并更名为 Cewte〃aoy/a"ca(L.)Urb.。积雪草主要分布于南北半球热带和亚热带地区，主产 地为南非、印度、斯里兰卡、马来西亚、印度尼西亚、澳大利亚、日本等，我 国亦产积雪草。积雪草在中国的药用历史已达二千多年之久，民间常用于治疗 感冒、扁桃腺炎、传染性肝炎、痢疾、跌打损伤、疔疮肿毒、外伤出血等。积 雪草现代药理学研究和应用有了很大发展，表明积雪草可用于治疗抑郁症、皮
肤创伤、胃溃疡、传染性肝炎、皮肤病和流行性脑脊髓膜炎等。
积雪草的化学成分复杂，主要有三萜类、黄酮类、挥发油类、多炔烯类等。 其中三萜类化合物是主要的药效成分，包括积雪草苷、积雪草苷A、波热模苷、 波热米苷、参枯尼苷、异参枯尼苷、积雪草酸、羟基积雪草波热米酸、马达积 雪草酸等。积雪草总苷是从积雪草中提取得到的皂苷类物质的总称，主要由三 萜苷类物质组成，其中代表性成分主要有积雪草苷(Aisaticoside， CAS No.: 16830-15-2)、积雪草苷A(Asaiticoside A; Madecassoside， CAS No.: 34540曙22國2) 和积雪草苷B (AsaiticosideB， CASNo.: 125265-68-1)。积雪草苷A也叫羟基 积雪草苷，积雪草苷B和积雪草苷A是一对同分异构体。积雪草苷A和积雪草 苷B与积雪草苷相比多了一个羟基，极性差异较大，积雪草苷A和积雪草苷B 的差异只在于其中一个甲基归属不同，且两个不同的归属处于邻位关系，极性 差异较小。
积雪草苷(a)、积雪草苷A(b)与积雪草苷B(c)的结构式如下<formula>formula see original document page 4</formula>
研究表明积雪草苷具有促进伤口愈合，治疗疤痕的药理作用。 积雪草苷在医药、化妆品等领域已有广泛的应用前景，而目前大多采用柱 层析方法从积雪草总苷中分离制备积雪草苷，该方法存在操作周期长、溶剂消 耗多、成本高等缺点，导致高纯度积雪草苷价格高，所以非常有必要寻找高效 分离制备积雪草苷的工艺方法来改变现有积雪草苷的制备方法，以降低其生产 成本并提高其生产效率。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种溶剂结晶法制备高纯度积 雪草苷的工艺。
包括如下步骤
1) 积雪草总苷用溶剂I溶解后进行固液分离，得到积雪草总苷溶液；
2) 积雪草总苷溶液中加入溶剂II进行结晶，然后经固液分离后得到固形物 与结晶母液两部分，最后固形物经真空干燥后得到高纯度积雪草苷产品。
步骤l)中溶剂I为甲醇或二甲基甲酰胺(DMF)，加入量为2.5-100 mL / g积 雪草总苷。步骤2)中溶剂II为丙酮、乙腈、乙醚、乙酸乙酯或水，加入量为溶 剂I加入量的0.5~10倍。步骤l)和步骤2)中固液分离方法为过滤或离心。
本发明中的高纯度积雪草苷是指纯度大于90%的积雪草苷产品，通过一次 结晶制备得到，积雪草苷收率可达80%以上。温度对结晶过程的影响不大，可 在室温进行，结晶时间通常在12小时以上。若需要更高纯度的积雪草苷产品， 可采用多次结晶的方式，例如经两次结晶可得到95%以上纯度的积雪草苷产品。 另外，结晶母液富含积雪草苷A与积雪草苷B，可进一步加以利用。
本发明具有过程简单、生产成本低、污染少、产品积雪草苷收率和纯度高 等优点，适合于工业化生产。
附图是一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺流程简图。
具体实施例方式
以下用实施例对本发明的工艺方法作进一步的说明。本发明的保护范围不 受实施例的限制，本发明的保护范围由权利要求书决定。
积雪草总苷原料购自广西昌洲天然药业有限公司，经检测其中积雪草苷质
量含量为30.0%,积雪草苷A与积雪草苷B质量含量合占49.5%。 实施例中所用的分析条件如下
薄层色谱(TLC)分析条件硅胶G254薄板，展开剂为正丁醇一乙酸乙酯 一水=4: 1: 5 (取上层溶液使用)，显色剂为10%的浓硫酸乙醇溶液。
高效液相色谱(HPLC)分析条件AgilentllOO液相色谱分析系统，色谱柱为 Phenomenex C-18 column SynergiTM Fusion - RP 80A (4jx, 150 mmx4.60 mm ID), 流动相乙腈一水(50:50)，流速lmL/min,柱温3(TC，紫外检测波长205nm。 实施例1
取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入1000mL二甲基甲酰胺(100mL 溶剂I/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加 入5000mL丙酮(溶剂I加入量的5倍)于室温下进行结晶，24h后经过滤得到 固形物，固形物经真空干燥后得到l.lg积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为 93%,积雪草苷收率为31%。 实施例2
取10 g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入200 mL甲醇(20 mL溶剂1/ g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入800mL 水(溶剂I加入量的4倍)于30'C进行结晶，18h后经过滤得到固形物，固形物 经真空干燥后得到2.2g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为92%，积雪草苷 收率为67%。 实施例3
取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入lOOmL二甲基甲酰胺(lOmL溶 剂l/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入 300 mL水(溶剂I加入量的3倍)于室温下进行结晶，12h后经过滤得到固形 物，固形物经真空干燥后得到2.2§积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为92%， 积雪草苷收率为68%。 实施例4取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入50mL甲醇(5mL溶剂I/g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入100mL 乙腈(溶剂I加入量的2倍)于室温下进行结晶，8h后经过滤得到固形物，固 形物经真空干燥后得到2.6g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为94%，积雪 草苷收率为83%。 实施例5取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入33mL二甲基甲酰胺(3.3 mL溶 剂l/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入 33mL丙酮(溶剂I加入量的1倍)于室温下进行结晶，6h后经过滤得到固形 物，固形物经真空干燥后得到3.0g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为90%， 积雪草苷收率为91%。 实施例6取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入25mL甲醇(2.5 mL溶剂I/g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入12.5 mL 乙酸乙酯(溶剂I加入量的0.5倍)于室温下进行结晶，6h后经过滤得到固形物， 固形物经真空干燥后得到3.2g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为85%，积 雪草苷收率为92%。 实施例7取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入25mL二甲基甲酰胺(2.5 mL溶 剂l/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入 150mL乙酸乙酯(溶剂I加入量的6倍)于室温下进行结晶，6h后经过滤得到 固形物，固形物经真空干燥后得到2.9g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为 84%，积雪草苷收率为82°/。。 实施例8取10 g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入33 mL甲醇(3.3 mL溶剂I/g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入200mL 水(溶剂I加入量的6倍)于室温下进行结晶，8h后经过滤得到固形物，固形 物经真空干燥后得到2.7g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为92%，积雪草 苷收率为83%。 实施例9取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入50mL二甲基甲酰胺(5mL溶 剂l/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入350 mL水(溶剂I加入量的7倍)于室温下进行结晶，10h后经过滤得到固形 物，固形物经真空干燥后得到2.9g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为91%， 积雪草苷收率为89%。 实施例10取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入100 mL甲醇(10mL溶剂I/g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入800mL 水(溶剂I加入量的8倍)于室温下进行结晶，10h后经过滤得到固形物，固形 物经真空干燥后得到2.8g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为87%，积雪草 苷收率为81%。实施例11取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入200mL二甲基甲酰胺(20mL溶 剂l/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入 1800 mL乙醚(溶剂I加入量的9倍)于室温下进行结晶，12h后经过滤得到固 形物，固形物经真空干燥后得到3.3 g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为83%， 积雪草苷收率为91%。 实施例12取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入1000 mL甲醇(100 mL溶剂1/g 积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入10000 mL水(溶剂I加入量的10倍)于室温下进行结晶，36h后经过滤得到固形物， 固形物经真空干燥后得到1.7g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为80%，积 雪草苷收率为45%。 实施例13取10 g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入200 mL甲醇(20 mL溶剂1/ g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入800mL 丙酮(溶剂I加入量的4倍)于冰水浴下进行结晶，12h后经过滤得到固形物， 固形物经真空干燥后得到2.2§积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为92%，积 雪草苷收率为67%。 实施例14取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入lOOmL二甲基甲酰胺(lOmL溶 剂l/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入 300mL丙酮(溶剂I加入量的3倍)于室温下进行结晶，10h后经过滤得到固 形物，固形物经真空干燥后得到2.2 g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为92%，积雪草苷收率为68%。 实施例15取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入33mL二甲基甲酰胺(3.3 mL溶 剂l/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入 33mL乙腈(溶剂I加入量的1倍)于室温下进行结晶，4h后经过滤得到固形 物，固形物经真空干燥后得到3g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为90%， 积雪草苷收率为91%。 实施例16取10 g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入25 mL甲醇(2.5 mL溶剂I/g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入12.5 mL 乙腈(溶剂I加入量的0.5倍)于室温下进行结晶，24h后经过滤得到固形物， 固形物经真空干燥后得到3.2￡积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为85%，积 雪草苷收率为92%。 实施例17取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入33mL甲醇(3.3 mL溶剂I/g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入200mL 乙酸乙酯(溶剂I加入量的6倍)于室温下进行结晶，18h后经过滤得到固形物， 固形物经真空干燥后得到2.7g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为92%,积 雪草苷收率为83%。 实施例18取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入50mL二甲基甲酰胺(5mL溶 剂l/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入 350mL乙酸乙酯(溶剂I加入量的7倍)于室温下进行结晶，12h后经过滤得 到固形物，固形物经真空干燥后得到2.9g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度 为91%,积雪草苷收率为89°/。。 实施例19取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入100mL甲醇(10mL溶剂I/g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入800mL 乙醚(溶剂I加入量的8倍)于4(TC进行结晶，14h后经过滤得到固形物，固形 物经真空干燥后得到2.8g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为87%，积雪草 苷收率为81%。 实施例20取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入1000mL二甲基甲酰胺(lOOmL 溶剂I/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加 入3000mL乙醚(溶剂I加入量的3倍)于45匸进行结晶，24h后经过滤得到 固形物，固形物经真空干燥后得到1.4g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为 73°/。，积雪草苷收率为35%。 实施例21取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入lOOmL二甲基甲酰胺(lOmL溶 剂l/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入 300mL丙酮(溶剂I加入量的3倍)于室温下进行结晶，8h后经过滤得到固形 物，固形物经真空干燥后得到2.2g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为92%， 积雪草苷收率为68%。将得到的2.9g积雪草苷产品加入烧杯中，加入30mL二甲基甲酰胺，溶解 后加入90mL丙酮于室温下进行二次结晶，8h后经过滤得到固形物，固形物经 真空干燥后得到1.8g积雪草苷产品。经HPLC检测，纯度为96%，积雪草苷总 收率为59%。 实施例22取10 g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入33 mL甲醇(3.3 mL溶剂1/ g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入200mL 水(溶剂I加入量的6倍)于室温下进行结晶，12h后经过滤得到固形物，固形 物经真空干燥后得到2.7g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为92%，积雪草 苷收率为83%。将得到的2.8g积雪草苷产品加入烧杯中，加入10 mL甲醇，溶解后加入60 mL水于室温下进行二次结晶，12h后经过滤得到固形物，固形物经真空干燥后 得到2.2 g积雪草苷产品。经HPLC检测，纯度为96%，积雪草苷总收率为69%。 实施例23取10 g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入33 mL甲醇(3.3 mL溶剂1/ g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入200mL 乙酸乙酯(溶剂I加入量的6倍)于室温下进行结晶，12h后经过滤得到固形物， 固形物经真空干燥后得到2.7g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为92%，积 雪草苷收率为83%。将得到的2.7 g积雪草苷产品加入烧杯中，加入9 mL甲醇，溶解后加入54 mL 乙酸乙酯于室温下进行二次结晶，12h后经过滤得到固形物，固形物经真空干燥后得到2.1 g积雪草苷产品。经HPLC检测，纯度为97%,积雪草苷总收率为66%。 实施例24取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入1000mL二甲基甲酰胺(lOOmL 溶剂I/g积雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加 入3000 mL乙醚(溶剂I加入量的3倍)于室温下进行结晶，12h后经过滤得到 固形物，固形物经真空干燥后得到3.4g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为 80%，积雪草苷收率为90%。将得到的3.4g积雪草苷产品加入烧杯中，加入340mL二甲基甲酰胺，溶 解后加入1020mL乙醚于室温下进行二次结晶，12h后经过滤得到固形物，固形 物经真空干燥后得到2.4g积雪草苷产品。经HPLC检测，纯度为97%，积雪草 苷总收率为85%。 实施例25取10g积雪草总苷原料加入烧杯中，加入50mL甲醇(5mL溶剂I/g积 雪草总苷)，溶解后过滤得到积雪草总苷溶液；积雪草总苷溶液中加入100mL 乙腈(溶剂I加入量的2倍)于室温下进行结晶，12h后经过滤得到固形物，固 形物经真空干燥后得到2.6g积雪草苷产品，经HPLC检测，纯度为94%，积雪 草苷收率为83%。将得到的2.6g积雪草苷产品加入烧杯中，加入15 mL甲醇，溶解后加入105 mL乙腈于室温下进行二次结晶，12h后经过滤得到固形物，固形物经真空干燥 后得到2.3 g积雪草苷产品。经HPLC检测，纯度为97%，积雪草苷总收率为77%。
权利要求
1.一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺，其特征在于包括如下步骤1)积雪草总苷用溶剂I溶解后进行固液分离，得到积雪草总苷溶液；2)积雪草总苷溶液中加入溶剂II进行结晶，然后经固液分离后得到固形物与结晶母液两部分，最后固形物经真空干燥后得到高纯度积雪草苷产品。
2. 根据权利要求1所述的一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺，其 特征在于所述步骤l)中溶剂I为甲醇或二甲基甲酰胺。
3. 根据权利要求1所述的一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺，其 特征在于所述步骤l)中溶剂I的加入量为2.5-100 mL/g积雪草总苷。
4. 根据权利要求1所述的一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺，其 特征在于所述步骤l)和步骤2)中固液分离方法为过滤或离心。
5. 根据权利要求1所述的一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺，其 特征在于所述步骤2)中溶剂II为丙酮、乙腈、乙醚、乙酸乙酯或水。
6. 根据权利要求1所述的一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺，其 特征在于所述步骤2)中溶剂II的加入量为溶剂I加入量的0.5~10倍。
全文摘要
本发明公开了一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺，工艺步骤如下1)积雪草总苷用溶剂I溶解后进行固液分离，得到积雪草总苷溶液；2)积雪草总苷溶液中加入溶剂II进行结晶，然后经固液分离后得到固形物与结晶母液两部分，最后固形物经真空干燥后得到高纯度积雪草苷产品。本发明一次结晶可制备纯度大于90％的积雪草苷产品，积雪草苷收率可达80％以上。若需要更高纯度的积雪草苷产品，可采用多次结晶的方式，例如经两次结晶可得到95％以上纯度的积雪草苷产品。另外，结晶母液富含积雪草苷A与积雪草苷B，可进一步加以利用。本发明具有过程简单、生产成本低、污染少、产品积雪草苷收率和纯度高等优点，适合于工业化生产。
文档编号A61P17/00GK101407536SQ20081016221
公开日2009年4月15日 申请日期2008年11月27日 优先权日2008年11月27日
发明者吕秀阳, 郑兴芳 申请人:浙江大学