专利名称：一种制备高纯度积雪草苷的方法
技术领域：
本发明是一种从天然植物中提取有效成份的技术领域。具体是一种制备高纯度积雪草苷的方法。
背景技术：
积雪草为伞形科植物积雪草(Centella asiatica (L) Urban)的干燥全草或带根全草，又称雷公根、马蹄草、落得打，常年可采，资源丰富，生长在东南亚、澳大利亚、南非和中非热带地区，在很多国家的医药领域中应用已有悠久历史。积雪草性寒，味苦，具有清热利湿、解毒消肿之功效，主要用于湿热黄疸、中暑腹泻、痈肿疮毒、跌打损伤等症。积雪草中化学成分主要包括积雪草苷、羟基积雪草苷、参枯尼苷、积雪草酸、积雪草糖、山柰酚、槲皮素等。近年研究发现，积雪草提取物可有效促进皮肤损伤、局部胶原合成代谢，并在皮肤损伤后的组织修复方面有重要作用。近年来研究还发现，积雪草具有抗氧化、抗抑郁、保肝、抑制肿瘤细胞增生等作用。积雪草中积雪草苷分离方法主要包括硅胶柱层析法、大孔树脂吸附法、双水相萃、 超滤膜法分离、超临界(X)2流体萃取、高速逆流色谱法等，这些方法均存在一定缺点并且不利于工业化生产。其主要问题在于工艺复杂、物耗过大、得率低，处理量不大。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备高纯度积雪草苷的方法。本发明解决上述技术问题的技术方案如下1. 一种制备高纯度积雪草苷的方法之一，该方法是以积雪草为原料，用乙醇水溶液在超声波条件下制备初提液，初提液经初步除杂、富集和重结晶得到高纯度的积雪草苷； 具体操作步骤如下1)制备积雪草粗提物将积雪草粉碎，以5 15倍积雪草重量的质量浓度为75%乙醇水溶液浸泡，在 50°C条件下超声波提取4次，每次1小时，汇集4次提取液、过滤后将滤液减压浓缩得到浸膏。2)积雪草粗提取物的初步除杂将步骤1)制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，汇集3次萃取液下相水溶液、再用下相水溶液等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用。3)粗积雪草总苷制备用与步骤2)得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1 1的混合溶剂萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得粗积雪草总苷。4)粗积雪草苷的纯化
将步骤幻所得的粗积雪草总苷溶于甲醇，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为 90%乙醇水溶液溶解，在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷。2. 一种制备高纯度积雪草苷的方法之二，该方法以积雪草为原料，用水溶液在超声波条件下制备初提液，提取液经初步除杂、富集和重结晶得到高纯度的积雪草苷；具体操作步骤如下1)制备积雪草粗提物将积雪草粉碎，以5 15倍积雪草重量的水浸泡，在50°C条件下超声波提取4次， 每次1小时，汇集4次提取液、过滤，将滤液减压浓缩得到浸膏。2)除去多糖、叶绿素等将步骤1)制得的浸膏用10倍浸膏重量的水溶解，再加入10 15倍浸膏重量的无水乙醇，产生沉淀，将产生沉淀过滤，滤液浓缩得浸膏。3)除去溶于石油、乙酸乙酯的小极性物质将步骤2、制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，汇集3次萃取液下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用。4)粗积雪草总苷制备用与步骤3)得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1 1混合溶剂萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得粗积雪草总苷。5)粗积雪草苷的纯化将步骤4)所得的粗积雪草总苷溶于甲醇，过滤，滤液浓缩，再用质量浓度为90% 乙醇水溶液溶解后，在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷。上述的一种制备高纯度积雪草昔的方法之一中，步骤1)中，将积雪草粉碎，以10 倍积雪草重量的质量浓度为75%乙醇水溶液浸泡，在50°C条件下超声波提取4次，每次1 小时。上述的一种制备高纯度积雪草苷的方法之二中，步骤1)中，将积雪草粉碎，以10 倍积雪草重量的水浸泡，在50°C条件下超声波提取4次，每次1小时。上述的一种制备高纯度积雪草苷的方法之一中，步骤幻中，用与步骤幻得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为11混合溶剂萃取4次。上述的一种制备高纯度积雪草苷的方法之二中，步骤幻中，将步骤1)制得的浸膏用10倍浸膏重量水溶解，再加入10倍浸膏重量无水乙醇，将产生沉淀，除去多糖、叶绿素寸。本发明具有以下优势1.本发明以超声波为辅助，在一定温度下用质量浓度75%乙醇水溶液或纯水溶液对积雪草进行提取，该提取方法具有快速、彻底、效率高的优点，在生产过程中能缩短生产周期和提高积雪草苷的产率，乙醇可回收循环使用。2.本发明使用溶剂萃取的方法分离得到积雪草苷，未使用柱层析法或大孔树脂吸附法，处理量大，操作简单，易于放大及工业化生产。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。实施例1称取500g粉碎积雪草粉末，以2500ml质量浓度为75%乙醇水溶液浸泡，在50°C 条件下超声波提取4次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏20. 5g ；用200ml 水溶解浸膏，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为 1 1混合溶剂萃取3次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷7. 3g;加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90%乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷3. 3g，纯度为90%，得率 0. 66%。实施例2称取500g粉碎积雪草粉末，以5000ml质量浓度为75 %乙醇水溶液浸泡，在50°C 条件下超声波提取4次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏25. Ig ；用250ml 水溶解浸膏，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为 1 1混合溶剂萃取6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷9. 3g;加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90%乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷3. 8g，纯度为92%，得率 0. 76%。实施例3称取500g粉碎积雪草粉末，以7500ml质量浓度为75%乙醇水溶液浸泡，在50°C 条件下超声波提取4次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏28. 7g ；用290ml 水溶解浸膏，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为 1 1混合溶剂萃取6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷10. Ig ；加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90%乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷4. 8g，纯度为90%，得率 0. 96%。实施例4称取500g粉碎积雪草粉末，以2500ml水溶液浸泡，在50°C条件下超声波提取4 次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏35. 0g，用350ml水溶解浸膏，再加入 525ml无水乙醇，将产生沉淀过滤，滤液浓缩得27. 8g浸膏。用300ml水溶解浸膏后，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1 1混合溶剂萃取4 次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷10. 7g ； 加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90%乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷4. 7g，纯度为89%，得率为0. 94%。实施例5
称取500g粉碎积雪草粉末，以7500ml水溶液浸泡，在50°C条件下超声波提取4 次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏39. 7g，用400ml水溶解浸膏，再加入 400ml无水乙醇，将产生沉淀过滤，滤液浓缩得30. 5g浸膏。用400ml水溶解浸膏后，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，保留下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1 1混合溶剂萃取6 次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷11. 9g ； 加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90%乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷5. 2g，纯度为93%，得率为1. 04%。实施例6称取500g粉碎积雪草粉末，以5000ml水溶液浸泡，在50°C条件下超声波提取4 次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏37. 8g，用400ml水溶解浸膏，再加入 570ml无水乙醇，将产生沉淀过滤，滤液浓缩得29. Ig浸膏。用300ml水溶解浸膏后，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，保留下相水溶液。用汇集下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1 1混合溶剂萃取3 次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得积雪草总苷10. 2g ； 加入10倍量甲醇溶解积雪草总苷，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90%乙醇水溶液在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷4. 2g，纯度为93%，得率为0. 84%。
权利要求
1.一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，以积雪草为原料，用乙醇水溶液在超声波条件下制备初提液，初提液经初步除杂、富集和重结晶得到高纯度的积雪草苷；具体操作步骤如下1)制备积雪草粗提物将积雪草粉碎，以5 15倍积雪草重量的质量浓度为75%乙醇水溶液浸泡，在50°C条件下超声波提取4次，每次1小时，汇集4次提取液、过滤后将滤液减压浓缩得到浸膏；2)积雪草粗提取物的初步除杂将步骤1)制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，汇集3次萃取液下相水溶液、再用下相水溶液等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用；3)粗积雪草总苷制备用与步骤2)得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1 1的混合溶剂萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得粗积雪草总苷；4)粗积雪草苷的纯化将步骤幻所得的粗积雪草总苷溶于甲醇后，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90% 乙醇水溶液溶解，在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷。
2.一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，以积雪草为原料，用水溶液在超声波条件下制备初提液，提取液经初步除杂、富集和重结晶得到高纯度的积雪草苷；具体操作步骤如下1)制备积雪草粗提物将积雪草粉碎，以5 15倍积雪草重量的水浸泡，在50°C条件下超声波提取4次，每次 1小时，汇集4次提取液、过滤，将滤液减压浓缩得到浸膏；2)除去多糖、叶绿素等将步骤1)制得的浸膏用10倍浸膏重量的水溶解，再加入10 15倍浸膏重量的无水乙醇，产生沉淀，将产生沉淀过滤，滤液浓缩得浸膏。3)除去溶于石油、乙酸乙酯的小极性物质将步骤2、制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，汇集3次萃取液下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用；4)粗积雪草总苷制备用与步骤幻得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1 1混合溶剂萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脱色萃取液，减压浓缩脱色后的萃取液得粗积雪草总苷；5)粗积雪草苷的纯化将步骤4)所得的粗积雪草总苷溶于甲醇后，过滤，滤液浓缩后，再用质量浓度为90% 乙醇水溶液溶解，在室温条件下重结晶得到高纯度的积雪草苷。
3.根据权利要求1所述的一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，所述步骤1) 中，将积雪草粉碎，以10倍积雪草重量的质量浓度为75%乙醇水溶液浸泡，在50°C条件下超声波提取4次，每次1小时。
4.根据权利要求2所述的一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，所述步骤1) 中，将积雪草粉碎，以10倍积雪草重量的水浸泡，在50°C条件下超声波提取4次，每次1小时。
5.根据权利要求1所述的一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，所述步骤3) 中，用与步骤幻得到的下相水溶液同等体积的正丁醇与乙酸乙酯体积比为1 1混合溶剂萃取4次。
6.根据权利要求2所述的一种制备高纯度积雪草苷的方法，其特征在于，所述步骤2) 中，将步骤1)制得的浸膏用10倍重量水溶解，再加入10倍浸膏重量无水乙醇，将产生沉淀，除去多糖、叶绿素等。
全文摘要
本发明公开了一种制备高纯度积雪草苷的方法。该方法主要包括用乙醇水溶液在超声波条件下制备积雪草提取液，将提取液浓缩得到浸膏。浸膏溶液分别用石油醚、乙酸乙酯萃取后的水溶液，再用正丁醇、乙酸乙酯混合溶剂萃取，合并上相有机溶液，活性碳脱色，减压浓缩并真空干燥即得到积雪草总苷，总苷再重结晶可得到高纯度的积雪草苷。本工艺操作方法简单，操作工艺不经过层析柱分离，生产周期短，处理量大，产品纯度高，适合工业化大量生产。
文档编号C07J63/00GK102532244SQ20111045799
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月31日 优先权日2011年12月31日
发明者凌秀荣, 周敏, 唐新宗, 韦万兴 申请人:广西大学