专利名称：一种异黄酮类化合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种烟草添加剂，更具体地说，本发明涉及一种新颖的异黄 酮类化合物。同时，本发明还涉及所述化合物的制备方法及其在清除巻烟主 流烟气中的自由基方面的应用。
背景技术：
人类自发现烟草至今已有五百年的历史。作为一种特殊商品，烟草满足 了吸烟消费者生理和心理的需要。但是随着社会进步和科学技术的发展，有 关研究数据显示吸烟对人体健康有一定的影响，吸烟与健康的矛盾日益引起 人们的重视。
多年来，国内外烟草企业纷纷研究、应用各种先进的生产工艺技术，逐 步降低卷烟烟气中的有害成分，减轻吸烟对人体健康的影响。医学和自由基
生物学研究表明自由基是对人体健康有一定危害作用，而且卷烟烟气中也 含有一定量自由基，降低吸烟过程中产生的自由基是生产低危害香烟的有效
举措。 .
天然植物中含有大量抗氧化活性成分，这些成分可通过提供H"减少自 由基的产生，并可打断自由基氧化链反应，有效的清除卷烟烟气自由基。早 在70年代初北京卷烟厂就开始了在卷烟中添加罗布麻降低烟气自由基的研 究，与对比卷烟相比，烟气焦油自由基降低约27.4% ,气相自由基降低约 30.6%。此外其它植物，如生地、当归、酸麥仁、灵芝、肉桂、杜仲、枸杞、 丹参、肉苁蓉等的粗提物；以及许多中草药的提纯物，如五味子的多种成分、 甘草类黄酮、人参皂苷、芦丁、桑前素等，均具有类似功能。但针对异黄酮 类化合物至今尚未发现相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的异黄酮类化合物。 本发明的另一目的是提供一种从烟用添加剂木瓜浸膏中提取出本发朋 化合物的方法。
本发明进一步的目的是提供上述化合物在清除巻烟主流烟气中的自由
3基方面的用途。
本发明的目的通过下述技术方案予以实现。
*除非另有说明，本发明中所釆用的百分数均为质量百分数。 A.本发明从烟用添加剂木瓜浸膏中分离出了一种新的异黄酮类化合物，
新化合物的结构式为.
该化合物的命名为3， ， 4， ， 5，-三羟基-5, 7-二甲氧基异黄酮(3， ， 4， ， 5，
B. 本发明提供了所述新化合物的制备方法，该方法包括以下步骤
(1) 将木瓜浸膏用MCI柱脱色，分别用纯丙酮和85%~95%的甲醇洗脱， 丙酮洗下部分主要为叶绿素和脂肪酸；收集90%甲醇洗下部分，用粗硅胶拌 样，硅胶装柱进行硅胶柱层析；
(2) 用氯仿丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，其中，氯仿 丙酮=1:1的洗脱部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以30%~ 40%的甲醇为流动相，Zorbax SB_C18 column (9.4 x 250 mm, 5 pm)半制备 柱为固定相，紫外检测器检测波长为360 nm,每次进样50 pL，收集27. 5 min
色谱峰，多次累加后蒸干；
(3) 再次用纯甲醇溶解，再以甲醇为流动相，用Sephadex LH-20凝胶
柱层析分离，即得到所需化合物。
C. 本发明对上述化合物进行了清除卷烟主流烟气中自由基的效果试验， 化合物显示有确切的清除自由基效果，
本发明具有以下突出的优点(l)木瓜在我国分布广泛，原料供应充足； 而且本发明的化合物在木瓜中含量较高，分离容易，如果要工业应用，原料 容易获得。(2)采用了常规柱层析和高效液相色谱结合的制备方法，化合物 制备操作流程简单，所获得的本发明化合物纯度高，随后的工业化生产容易 实现。(3)该化合物具有良好的清除巻烟烟气中的自由基效果，可为烟草工 业降低卷烟烟气有害成分提供有价值的新化合物或先导性化合物。
_trihydroxy-5， 7—dimethoxyflavone)。
图1是本发明化合物高分辨质谱(HRESIMS); 图2是本发明化合物的核磁共振氢谱(H丽R); 图3是本发明化合物的核磁共振炭谱(nC腿R); 图4是本发明化合物的主要HBMC相关(—)。
具体实施方法
通过下面给出的具体实施例和典型应用实施例，可以进一步清楚地了解 本发明。但它们并不是对本发明保护范围的限定。 实施例1
所用的木瓜浸膏由云南玉溪万方天然产物有限公司提供。木瓜浸膏500 g用MCI柱脱色，分别用纯丙酮和90%的甲醇洗脱，丙酮洗下部分主要为叶 绿素和脂肪酸。收集90%甲醇洗下部分100 g,用粗硅胶200 g (80~100 目)拌样，2.0 kg硅胶(160 - 200目)装柱进行硅胶柱层析，氯仿丙酮 (1: 0 — 0: l)梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到8个部分(纯氯 仿、氯仿-丙酮20:1、氯仿-丙酮9:1、氯仿-丙酮8:2、氯仿-丙酮3:2、 氯仿-丙酮1:1、氯仿-丙酮20:1、纯丙酮)，其中氯仿-丙酮(l: l)洗脱部分 11.8 g用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以35%的甲醇为流动相， Zorbax SB-C18 column (9.4 x 250 mm, 5 —半制备柱为固定相，紫外检 测器检测波长为360 nm,每次进样50 pL,收集27. 5 min色谱峰，多次累 加后蒸干，再次用纯甲醇溶解，再以以35%的甲醇为流动相甲醇为流动相， 用S印hadex LH-20凝胶柱层析分离，即得到本发明所须的化合物。
实施例2
该实施例的过程与实施例l相同，只是釆用85%的甲醇洗脱，以30%的 甲醇为流动相。 实施例3
该实施例的过程与实施例l相同，只是釆用95%的甲醇洗脱，以40%的 甲醇为流动相。 实施例4 一一化合物的结构鉴定
所述的化合物为黄色无定形粉末；紫外光谱(溶剂为甲醇)，(log￡■) 310 (3.67), 246 (4.18), 210 (5. 79);红外光谱(溴化钾压片)v, 3384， 1658， 1615, 1548， 1508, 1426, 1125, 1047, 956, 863 cnT'; HRESIMS (附 图-l)显示其准分子离子峰m/z 353.0640 [M+Na] + (calcd 353.0637 ),结 合丽R谱确定其分子式为C17H1407,不饱和度为10。 'H和"C NMR谱(附图-2 和附图-3，数据归属见表-1)显示分子中有2个苯环(苯环上有4个次甲基 双键炭)，2个甲氧基(5c56. 7、 56.0), 1个羰基(&181. 7 ), 1个次甲基 双键(&154.1), l个双键季炭(Sel23. 1);结合对比文献数据可证实该化 合物为异环酮类化合物；进一步经腹BC相关(附图-4)证实C-5、 C-7位取 代为甲氧基，C-3'、 C-4'、 C-5，位取代为羟基，化合物的结构最终得到 确认。通过SCIFINDER数据库检索和文献查询证实该化合物为新化合物。
表-l化合物的1H和13C NMR数据No.(mult.)A (mult, Hz)
2154.1 d7.94 s
23.1 s
4181.7s
160.1 s
697.5 d6.58 d，J-2.2 HZ
7162.0s
896.0 d6.49 d,J= 2.2 HZ
9158.2s
10106.2 s
r122.7 s
2',6'105.3 d7.02， s
3',5'146.8 s
4,137.5 s
OMe-556.7 q3.70 s
OMe-756.0 q3.69 s
实施例5
一一用该化合物的清除卷烟烟气中的自由基
l.卷烟的叶组为云南某品牌巻烟的叶组(上部烟叶为20%,中部烟叶为 40%，下部烟叶为30%，膨胀梗丝5%,烟草薄片5%)。采用醋酸纤维嘴棒, 嘴棒成型纸透气度为"00 CU;卷烟纸克重为50 g/m2、透气度为80 CU的， 水松纸透气度为200 CU。成品卷烟烟支的重量为0.93+0. 02 g,圆周为24. 5
6隱，长度为84 mm (其中嘴棒长度为25 mm)。
2.试验化合物用添加到巻烟过滤嘴丝束中，每支巻烟添加量为G. 5 ~5. 0 mg,并以未添加试验化合物的巻烟为对照。
卷烟用RM200型20孔道自动吸烟机在标准条件下吸烟，主流烟气粒相物 用44 mm剑桥滤片捕集，气相部分用采样管捕集；粒相自由基用含0. 05 mol/L N-特丁基_ cx -苯基氮硐的苯溶液为萃取剂从剑桥滤片溶出，并洗涤剑桥滤 片，定容得粒相自由基测试液。气相自由基用自由基采样管，以O. 05mol/L N-特丁基-a-苯基氮硐的苯溶液为吸收剂釆集，卷烟抽吸完后取出气相自由 基采样管，同时用少量吸收剂分3次冲洗通气内管外部和釆样管内壁，合并 吸收液和洗涤液，得气相自由基样品液。
用顺磁共振仪测定自由基，ESR分析实验条件中心磁场=3.385 T, 扫宽=0. 500 T,微波频率=1. 5 GHz,扫描时间=2 min,扫描次数=5, 放大倍数=103 ~105 (根据峰高进行调整)，样品用量20 pL;根据ESR图 谱中峰面积计算气相及粒相自由基数量的变化。
3.实验结果表明进行5次实验，和对照样相比，添加该化合物的卷烟 气相自由基降低率为22 - 28 %,粒相自由基降低率在18. 5-26. 7%之间， 该化合物对卷烟主流烟气中的自由基具有确切的清除效果。
权利要求
1.一种具有下述结构式的异黄酮类化合物
2. —种权利要求l所述化合物的制备方法，其特征在于该方法采用以 下步骤(1) 将木瓜浸膏用MCI柱脱色，分别用纯丙酮和85%~95%的甲醇洗脱， 丙酮洗下部分主要为叶绿素和脂肪酸；收集90%甲醇洗下部分，用粗硅胶拌 样，硅胶装柱进行硅胶柱层析；(2) 用氯仿丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，其中，氯仿 丙酮-l:l的洗脱部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以30%~ 40%的甲醇为流动相,Zorbax SB-CiS column (9.4 x 250 mm, 5 )Lim)半制备 柱为固定相，紫外检测器检测波长为360薩，每次进样50pL,收集27. 5min 色谱峰，多次累加后蒸干； (3)再次用纯甲醇溶解，再以甲醇为流动相，用S印hadex LH-20凝胶 柱层析分离，即得到所需化合物。
3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的木瓜浸膏由云 南玉溪万方天然产物有限公司提供。
4. 权利要求1所述的异黄酮类化合物在清除巻烟烟气中的自由基中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种具有新颖结构的异黄酮类化合物及其制备方法和应用。该化合物具有以右结构，本发明是将木瓜浸膏用MCI柱脱色，用硅胶柱层析初步分离，然后采用高效液相半制备色谱进一步分离，即可获得到该新化合物，命名为3’，4’，5’-三羟基-5，7-二甲氧基异黄酮。对该化合物进行了清除卷烟主流烟气中自由基的效果试验，实验结果显示化合物具有良好的清除自由基效果。
文档编号C07D311/00GK101538260SQ200910094408
公开日2009年9月23日 申请日期2009年4月28日 优先权日2009年4月28日
发明者徐祎然, 施红林, 李雪梅, 杨光宇, 鹏 范, 黄海涛 申请人:云南烟草科学研究院