二芳基甲酮化合物在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法

本发明属于抗肿瘤药物领域，具体涉及二芳基甲酮化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病，人类因恶性肿瘤而引起的死亡率居所有疾病死亡率的第二位，成为仅次于心血管疾病的第二号“杀手”。2013年初，全国肿瘤登记中心发布的一版《2012中国肿瘤登记年报》表明，中国每年新发癌症病例约312万，因癌症死亡人数超过200万，这意味着每1分钟有6个人被确诊为癌症。目前全国癌症发病趋势严峻，发病率与死亡率呈持续上升趋势。癌症已成为严重威胁人类生命安全和影响人类生活质量的重大问题之一，由此而引发的问题也越来越成为社会经济发展的负担。

目前，肿瘤的治疗方法主要有手术治疗、放射治疗和药物治疗(化学治疗)，但很大程度上仍是以药物治疗为主。多数常见实体瘤如肺癌、肝癌、结肠癌及胰腺癌等仍缺乏有效药物，不少抗肿瘤药物在临床应用过程中产生耐药性。随着社会的科技进步，人类对癌症的认知已逐渐清晰，对某些癌症的预防和早期诊断的方法、技术和理论也日趋成熟，但尚不能完全治愈癌症，只能非常有限地延长癌症病人的存活时间。因此，新型抗肿瘤药物的研发势在必行，不断开发高效低毒的新型抗肿瘤药物，成为当前一项具有重要意义的研究工作。

二芳基甲酮化合物是一类重要的添加剂和化工中间体。早在20世纪50年代。二芳基甲酮化合物已在欧美等发达工业化国家得到广泛的应用。主要应用于塑料、医药、香料及电子工业等领域。在医药产品方面，二芳基甲酮化合物是抗组胺药哌克昔林、发作性睡眠治疗药莫达非尼以及新型强效脑血管扩张药氟苯桂嗪等的中间体。在香料方面，因为其具有玫瑰的香味，常被用作香料定香剂，同时还作为许多香水和皂用香精的原料。我国对二芳基甲酮化合物的开发应用起步较晚。直到20世纪90年代才陆续有二芳基甲酮装置建成投产。本申请人所在项目组自主合成了系列二芳基甲酮化合物，并于2016年在期刊Tetrahedron Letters公开了这些化合物的制备方法。未对其生物学活性进行评价。

技术实现要素：

本发明的目的是针对上述现状，提供系列二芳基甲酮类化合物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用，所述二芳基甲酮类化合物为下式之一：

进一步地，本发明提供的二芳基甲酮类化合物药学上可接受的盐是盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐及有机酸盐，如甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、醋酸盐、三氟乙酸盐、苯甲酸盐。

进一步地，所述的二芳基甲酮类化合物优选为式M11、M13、M15、M126、M131、M132，所述的药物为治疗肝癌、肺癌、乳腺癌、耐阿霉素的乳腺癌、胃癌、宫颈癌、神经胶质瘤的药物。

进一步地，所述的药物为治疗宫颈癌的药物。

进一步地，所述的二芳基甲酮类化合物优选为式M131、M132，所述的药物为治疗肝癌、肺癌、乳腺癌、耐阿霉素的乳腺癌、胃癌、宫颈癌、神经胶质瘤的药物。

进一步地，所述的二芳基甲酮类化合物优选为M131、M132，所述的药物为治疗耐阿霉素的乳腺癌的药物。

本发明的二芳基甲酮类化合物及其药学上可接受的盐作为活性成分与常规药用载体制成药物组合物。

本发明的二芳基甲酮类化合物及其药学上可接受的盐可通过常规方法制备成各种实用型药剂，如颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊、注射剂、悬浮剂或乳剂的药物。

本发明通过对所述的二芳基甲酮类化合物体外抗肿瘤活性评价、引起的肿瘤细胞病变效应及引起的肿瘤细胞凋亡活性评价，证实所述的二芳基甲酮类化合物具有很好的抑制不同种肿瘤细胞增殖的作用，对于阳性对照药物5-Fu和DOX呈现耐药性的MCF-7/ADR肿瘤细胞同样呈现了强的抑制效果。

本发明所涉及的二芳基甲酮类化合物的制备，参照文献Tetrahedron Letters 2016，57，90–94的方法，具体以过渡金属钯为催化剂，以苯乙炔为酰化试剂，在吡啶的邻位诱导作用下，在芳环的邻位进行芳酰基化，得到最终酰化产物。

鉴于该类化合物的制备过程简单易行，原料价格低廉，易于获取；系列化合物可以通过构效关系研究来寻求其抗肿瘤作用靶点，为进一步药物开发提供有价值的导向作用。因此，本发明所述的二芳基甲酮类化合物为新药筛选提供了基础。

附图说明

图1系列二芳基甲酮化合物(40μg/mL)对于不同肿瘤细胞的抑制活性。

图2 M131(20μg/mL)、M15(40μg/mL)引起的肿瘤细胞HepG2、Hela、C6、MCF-7、MCF-7/ADR的病变效应。

图3化合物M131、M15、5-Fu浓度依赖的抑制肿瘤细胞HepG2、Hela、C6的活性。

图4化合物5-Fu(100μg/mL)、M131(10μg/mL)、M15(20μg/mL)引起的肿瘤细胞Hela凋亡检测图。

具体实施方式

通过以下详细说明结合附图可以进一步理解本发明的特点和优点。所提供的实施例仅是对本发明方法的说明，而不以任何方式限制本发明揭示的其余内容。

在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。【实施例1】化合物的体外抗肿瘤活性评价

供试肿瘤细胞：人类肝癌细胞HepG2、人类肺癌细胞A549、人类乳腺癌细胞MCF-7、耐阿霉素的人类乳腺癌细胞(MCF-7/ADR)、人类胃癌细胞SGC-7901、人类宫颈癌细胞Hela、人类神经胶质瘤细胞C6。

细胞培养：GIBCO DMEM培养基，10％胎牛血清和0.01％L-谷氨酰胺配制成培养液。培养的细胞株置于37℃、5％CO₂饱和湿度下常规培养传代，实验均用处于对数生长期的细胞。

体外抗肿瘤活性评价(MTT法)：

将以上肿瘤细胞分别铺板96孔板，在37℃，5％CO2培养箱培养长满单层后，弃去细胞培养液，分别加含不同浓度测试化合物的细胞维持液继续培养，以未经药物作用的细胞作为空白对照，以抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)及阿霉素(DOX)为阳性对照，每组设8个复孔，继续培养48h获72h。显微镜目测并分别记录细胞状况，每孔加MTT(5mg/mL)30μl继续培养4h，弃上清液，每孔加30μlDMSO，37℃孵育10min，酶标仪检测492nm波长处的吸光值(A492)。按以下公式计算平均抑制率：

抑制率＝(细胞对照组平均OD492值-药物组平均OD492值)/细胞对照组平均OD492值)×100％。

测试结果表明，上述所有二芳基甲酮化合物对于Hela、C6、HepG2、SGC-7901、A549、MCF-7、MCF-7/ADR肿瘤细胞增殖都有较强的抑制活性，其半数抑制浓度IC50如下表1所示。其中化合物M11、M13、M15、M-126、M131、M132具有最强的抑制效果，对于七种测试肿瘤细胞的平均IC50≤20μg/mL。

对于MCF-7/ADR肿瘤细胞，不仅对照药物DOX表现出了耐药性，另一种对照药物5-Fu也表现出了耐药性，阿霉素和5-Fu对于MCF-7/ADR肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)均超过了100μg/mL。而我们合成的系列二芳基甲酮化合物对于MCF-7/ADR肿瘤细胞仍然有很好的抑制效果，其中活性最好的化合物M131、M132，其IC50分别为3.9μg/mL和2μg/mL。除此以外，DOX对于其他六种肿瘤细胞有超强的抑制效果，平均IC50为2.5μg/mL，与M131、M132(对于七种肿瘤细胞的平均IC50为5.7μg/mL和5.2μg/mL)在相当水平，优于其他化合物。而5-Fu对于其他六种肿瘤细胞平均IC50为31.1μg/mL，与我们合成的化合物M-128μg/mL(平均IC50为31.1μg/mL)，M130(平均IC50为39.9μg/mL)，M149(平均IC50为34.5μg/mL)，M14(平均IC50为25.6μg/mL)在同一抑制水平，除此之外我们合成的其他化合物均比5-Fu具有对各种肿瘤细胞更强的抑制效果。

表1系列二芳基甲酮化合物对于多种肿瘤细胞的抑制活性

表1中：a IC50：半数抑制浓度。IC50<20μg/mL记为+++，IC5020～50μg/mL记为++，IC50>50μg/mL记为+.b Dox,阿霉素，阳性对照；c 5-Fu，5-氟尿嘧啶,阳性对照。

40μg/mL系列二芳基甲酮化合物对于不同肿瘤细胞的抑制活性如图1所示。在40μg/mL时对于所有肿瘤细胞都表现出极强的抑制效果，其中对于A549细胞的抑制效应相对较差。在所有化合物中，M131、M132显示出最强的抗肿瘤活性。阳性对照药物5-Fu对于各种肿瘤细胞的抑制率相对较低，而另一种阳性对照药物DOX则除了对于MCF-7/ADR无明显的抑制效应外，对其他所有肿瘤细胞具有超强的抑制活性。

代表化合物M131、M15以及阳性对照药物5-Fu浓度依赖的抑制不同肿瘤细胞的活性如图2所示。M131、M15对所有肿瘤细胞呈现浓度依赖的抑制活性，在足够浓度的情况下可以达到使肿瘤细胞完全凋亡致死的效果。对照药物5-Fu呈现浓度依赖性不强，整体在5到40μg/mL时，对于肿瘤细胞抑制活性增加不明显，呈现比较均一的抑制效果。

【实施例2】化合物引起的肿瘤细胞病变效应

我们进一步用显微镜拍照记录了代表化合物M131、M15引起的Hela、C6、HepG2、MCF-7、MCF-7/ADR肿瘤细胞的细胞病变效应。具体实施方法如下：

将对数生长期的Hela、C6、HepG2、MCF-7、MCF-7/ADR肿瘤细胞分别铺板24孔板，在37℃，5％CO2培养箱培养长满单层后，弃去细胞培养液，分别加含20μg/mL M131、40μg/mL M15测试化合物细胞维持液继续培养，48h时显微镜目测并拍照细胞病变情况。

化合物引起的肿瘤细胞病变效应如图3所示。显微镜下未做处理的肿瘤细胞生长良好，贴壁牢固，形态饱满，边缘界限清晰。20μg/mL M131、40μg/mL M15处理48h即导致所有的肿瘤细胞凋亡，细胞以不同形式变圆，从培养板脱落。可见M131、M15对于多种肿瘤细胞强的抑制生长效应。

【实施例3】化合物引起的肿瘤细胞凋亡活性评价

本申请人进一步实施了化合物诱导肿瘤细胞凋亡试验，试验情况如下：对数生长期的Hela细胞铺板24孔板，长满单层后加入含10μg/mL M131、20μg/mLM15，100μg/mL阳性对照药物5-Fu的细胞维持液孵育，设定不加药物处理的细胞对照，大约48h后，收集细胞，运用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒在流式细胞仪上进行细胞凋亡的检测。

实验结果如图4所示表明，10μg/mL M131、20μg/mL M15可以强效诱发以上被检测肿瘤细胞的凋亡。在Hela细胞中，未做处理的阳性对照细胞凋亡率为3.2％，M131、M15处理48h分别促使98.2％以及88.8％的细胞发生凋亡，而阳性对照药物5-Fu处理的Hela细胞凋亡率仅为71.3％。

综上所述，本发明中系列二芳基甲酮化合物具有很好的抑制不同种肿瘤细胞的增殖作用，对于阳性对照药物5-Fu和DOX呈现耐药性的MCF-7/ADR肿瘤细胞同样呈现了强的抑制效果，显示了大的应用潜力。如果进一步在临床上进行研究，有希望制备有效对抗肿瘤疾病的药物。