专利名称：安非他酮代谢物用于治疗炎性病症的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及安非他酮代谢物用于治疗炎性病症的用途。
背景技术：
免疫驱动的炎性事件是许多慢性炎性疾病的重要原因，在这些慢性 炎性疾病中，长期的炎症引起组织破坏并导致广泛的损伤，最终导致被 影响器官的衰竭。这些疾病的原因还不清楚，因为其似乎来源于个体免 疫系统的自身启动，故通常将其称为自身免疫病。病症包括涉及多个器
官的那些病症，比如系统性红斑狼疮(SLE)和硬皮病。其它类型的自 身免疫疾病可涉及特定组织或器官比如肌肉骨骼组织(类风湿性关节 炎、强直性脊推炎)、胃肠道(克罗恩病和溃疡性结肠炎)、中枢神经系 统(阿尔茨海默病、多发性硬化、运动神经元病、帕金森病和慢性疲劳 综合征)、胰腺p-细胞(胰岛素依赖型糖尿病)、肾上腺(艾迪生病)、 肾脏(古德帕斯丘综合征、IgA肾病、间质性肾炎)、外分泌腺(干燥 综合征(Sjogren's syndrome)和自身免疫性胰腺炎)以及皮肤(银屑 病和特应性皮炎)。
此外，有些慢性炎性疾病其病因或多或少是已知的，但其炎症仍是 慢性且持续的。这些疾病也表现出大块组织/器官的破坏，包括以下病 症如骨关节炎、牙周病、糖尿病肾病、慢性阻塞性肺病、动脉粥样硬 化(artherosclerosis )、移植物抗宿主病、慢性盆腔炎、子宫内膜异位症、 慢性肝炎和结核病。在这些疾病中，组织破坏常损伤器官功能，导致生 命质量的进行性降低和器官衰竭。这些病症是发展中世界的主要发病原 因，并且当前治疗对其疗效很差。
皮肤结构的炎症(皮炎)是一组常见的病症，其包括光化性角化病、 酒渣鼻、寻常痤疮、变应性接触性皮炎、血管性水肿、特应性皮炎、大 疱性类天疱疾(bullous pemiphigoid)、皮肤药物反应、多形红斑、红斑 狼疾(lupus erythrametosus )、日光性皮炎、4艮屑病、银屑病关节炎、 硬皮病和荨麻渗。这些疾病通过各种疗法来治疗，其中许多疗法具有非常严重的副作用。
当前免疫驱动病症的疾病緩解性治疗(如果有的话)包括中和抗体、 细胞毒素、皮质类固醇、免疫抑制剂、抗组胺剂和抗毒萆碱剂。这些治 疗常与不方便的施用途径和严重的副作用相关，导致顺应性问题。此外， 某些药物种类仅对某些类型的炎性疾病有效，例如抗组胺剂仅对鼻炎有 效。
安非他酮是市售的抗抑郁剂，因其中枢作用机制而抑制5-羟色胺和去 甲肾上腺素的重吸收。安非他酮代谢物在文献中被描述为在多种中枢神经 系统疾病中具有治疗作用。
发明内容
出乎意料地，发现所选的安非他酮代谢物是细胞因子的调节剂并且具 有抗炎性能。祁^据本发明，利用通式(I)化合物或其盐治疗例如上述的炎 ，性病症
具体实施例方式
虽然安非他酮本身在LPS诱导的细胞因子释放模型中具有非常弱的 细胞因子调节活性，但式(I)化合物却是令人惊讶地有效的细胞因子调节 剂。安非他酮被非立体选择性地代谢成式(I)的全部4种对映体，但是这 些化合物仅占所述母体药物的4^P代谢的相对较小的比例。
用于本发明的化合物是手性的，应当理解，本发明包括式(I)的任何 非对映异构体和对映异构体。式(I)的优选的非对映异构体或对映异构体 具有4艮小或不具有单胺重吸收活性，但是显示出有效的细胞因子调节活 性。可利用合适的体外和体内方法测定这些活性。特别优选的化合物包括 非对映异构体的赤式对(erythro-pair)和单个的赤式对映异构体。这些特别优选的化合物是(lS，2R)-赤式-2-(l，l-二甲基乙基)^-l-(3-氯苯基)丙烷 -1-醇和(1议，28)-^4'-2-(1，1-二甲基乙基)絲-1-(3-氯苯基)丙烷-1-醇。应当 理解，用于本发明的化合物包括药学活性盐，例如盐酸盐。
根据本发明的式(I)化合物用于治疗炎性疾病，包括但不限于涉及 多个器官的自身免疫病，比如系统性红斑狼疮(SLE)和硬皮病，涉及 特定组织或器官比如肌肉骨骼组织(类风湿性关节炎、强直性脊推炎)、 胃肠道(克罗恩病和溃疡性结肠炎)、中枢神经系统(阿尔茨海默病、 多发性硬化、运动神经元病、帕金森病和慢性疲劳综合征)、胰腺P-细 胞(胰岛素依赖型糖尿病)、肾上腺(艾迪生病)、肾脏(古德帕斯丘综 合征、IgA肾病、间质性肾炎)、外分泌腺(干燥综合征和自身免疫性 胰腺炎)以及皮肤(银屑病和特应性皮炎)的自身免疫疾病，慢性炎性 疾病比如骨关节炎、牙周病、糖尿病肾病、慢性阻塞性肺疾病、动脉粥 样硬化(artherosclerosis )、移植物抗宿主病、慢性盆腔炎、子宫内膜异 位症、慢性肝炎和肺结核，IgE介导的(I型)超敏性比如鼻炎、哮喘、 过敏症和皮炎。皮炎病症包括光化性角化病、酒渣鼻、寻常痤疮、变应 性接触性皮炎、血管性水肿、特应性皮炎、大疱性类天疱疮(bullous pemiphigoid )、皮肤药物反应、多形红斑、红斑狼裔(lupus erythrametosus )、日光性皮炎、4艮屑病、4艮屑病关节炎、硬皮病和^麻 渗。还可治疗眼睛的病症，比如糖尿病视网膜病变、黄斑变性、脉络膜 新生血管膜、黄斑嚢样水肺、视网膜前膜(epi-retinal membrane)和 黄斑裂孔(macular hole )、干眼、葡萄膜炎和结膜炎。
根据本发明，这些化合物可在患者还施用或联合施用选自以下的另 一种治疗剂时使用，所述治疗剂为皮质类固醇(实例包括皮质醇、可的 松、氢化可的松、双氢可的松、氟氢可的松、强的松、强的松龙、去氟 可特、氟尼缩松、氯地米松、甲基强的松龙、去炎松、倍他米松和地塞 米松)，緩解病情的抗风湿药(DMARD)(实例包括柳氮磺胺吡啶、金 硫苹果酸盐(aurothiomalate )、布西拉明、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、来 氟米特、甲氨喋呤、咪唑立宾、青霉胺和水杨酸偶氮磺胺吡啶)、免疫 抑制剂(实例包括硫唑嘌呤、环孢菌素、霉酚酸酯(mycophenolate))， COX抑制剂(实例包括醋氯芬酸、阿西美辛、阿氯酚酸(alcofenac )、 阿明洛芬、阿洛普令(aloxipirin)、氨芬酸、氨基比林、安特非宁 (antraphenine)、阿司匹林、阿扎丙宗、贝诺酯、苯哺洛芬、千达明、布替布芬、塞来昔布、氯乙唤(chlorthenoxacine)、水杨酸胆碱、氯美 辛(chlometacin )、右旋酮洛芬、双氯芬酸、二氟尼柳、依莫法宗、依 匹唑、依托度酸、氯苯泰松、联苯乙酸、芬布芬、芬氯酸、氟比洛芬、 格拉非宁、水杨酸羟乙酯、布洛芬、吲咮美辛、吲哚洛芬、酮基布洛芬、 酮咯酸、乳酰基氨基苯乙醚(lactyl phenetidin)、氯索洛芬、甲灭酸、 安乃近、莫非保松、莫非唑酸、萘丁美酮、萘普生、尼芬那宗、奥沙美 辛、非那西丁、旅布宗(pipebuzone)、普拉洛芬、异丙安替比林、丙喹 酮、洛芬昔布、水杨酰胺、双水杨酯、舒林酸、舒洛芬、瘗拉米特、替 诺立定、托芬那酸、佐美酸)、中和抗体(实例包括依那西普(etanercept) 和英夫单抗)、抗生素(实例包括多西环素和米诺环素)。
可采用任何合适的施用途径。例如，口服、局部、胃肠外、眼睛、 直肠、阴道、吸入、口腔、舌下和鼻内递送途径中任何途径都可以是合 适的。活性剂的剂量将取决于所述病症的性质和程度、患者的年龄和状 况、以及本领域技术人员公知的其它因素。典型的剂量是0.1mg (例如 10mg)至100mg，每日l至3次给予。
下述方案和合成举例说明了式I化合物的制备。
2-溴-l-(3-氯苯基)丙烷-l-酮(2)
向带有滴液漏斗的三颈2L圆底烧瓶中加入3-氯苯丙酮(1) (110 g0.65 mol)和770 mlCH3CN。在氮气下将所得反应混合物冷却至0*C。 起初在0"C向溶液中滴加溴(33.4 ml, 0.65 mol)，但是在加入过程中(加 入约1/4溴时)除去冰浴[注通过30 %偏亚硫酸氢钠水溶液净化反应。 将反应混合物温热至30匸直到开始启动反应(放出气体以及脱色)。整 个添加过程进行1.5小时。添加完成后，然后将反应混合物冷却至O"C， 小心地加入碳酸氢钠饱和溶液(~550ml)。分层，用二氯甲烷萃取水层 (3 x 440ml)。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥、过滤并在真空下浓 缩得到浅黄色固体(152g，定量收率)，其不需要任何进一步纯化而直 接用于下一步骤中。
1H-NMR (500 MHz, CDCI3) 5H 7.99 (s, 1H)， 7.88 (d， 1H), 7.55 (d， 1H), 7.41 (m， 1H)， 5.20 (m， 1H), 1.89(d, 3H).
2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-酮(3)
在带有冷凝器和滴液漏斗的三颈2L圆底烧瓶中，将粗制的2-溴 國l-(3-氯苯基)丙烷-l-酮(2 X 152 g, 0.65 mol )溶解在600 ml乙腈(HPLC 级)中。在室温和氮气下，向所得混合物中滴加叔丁胺(172.5 ml， 1.63 mol)。然后将反应混合物加热至回流约5小时。在此期间通过TLC分 析(二氧化硅，己烷乙酸乙酯，卯:10)监测反应进程。当原料耗尽时， 将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，用约250 ml乙酸乙酯清 洗所述珪藻土。滤液用2M KOH溶液(350 ml)清洗。分层，将有机 相用无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩至干，得到浅橙色油(147g,定量收 率)，其不需要任何进一步的纯化。
1H-NMR (500 MHz, CDCI3) 5H 7.98 (s， 1H), 7.87 (d, 1H)， 7.56 (d， 1H), 7.43 (m， 1H), 4.29 (m， 1H)， 2.04 (宽单峰,1H)' 1.35 (d， 3H), 1.05 (s， 9H).
2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇(4)
在2L圆底烧瓶中，将"7 g ( 0.65 mol)粗制的2-溴-1-(3-氯苯基) 丙烷-l-酮(3)溶解在1500 ml乙醇中。在氮气下将所得溶液冷却至0 t!，搅拌下分批加入NaBH4 (27.1 g， 0.72 mol)。添加过程中使温度保 持在低于5X:。完成最后的添加后，使反应混合物达到室温并通过TLC 分析(二氧化硅，己烷乙酸乙酯，50:50)进行监测。在原料耗尽(约1小时)时，加入147 ml HCl ( 37% )直到观察到pH为1。然后加入 在最少量水中的固体KOH (~25g)直到将pH调节到7-8。减压下浓缩 混合物。将所得残留物进一步用在最少量水中的固体KOH (~25g)碱 化，调节pH至10-11。将混合物萃取到TBME ( 2 x 500mL )中。合并 有机层，用盐水清洗，用无水MgS04干燥、浓缩得到粗的褐色油。
纯化通过在硅胶上的梯度洗脱色语(己烷乙酸乙酯，90/10—己 烷乙酸乙酯，5:95)上纯化所述粗物质(127g)。合并单个点的级分并 在减压下浓缩至恒重。这样得到作为非对映异构体混合物的低熔点固体 (90.6g，收率58%)。
1H-NMR (500 MHz, CDCI3) S 7.16-7.37 (m， 10H，两个非对映异构体 )，4.55 (d， 1H， 主要的异构体)，3.84 (d， 1H，次要的异构体)，3.08 (m, 1H,主要的异构体)，2.61 (m， 1H， 次要的异构体)，1.15 (s， 9H,主要的异构体)，1.14 (s， 9H，次要的异构体)，1.01 (d， 3H,次要的 异构体)，077 (d， 3HA要的异构体)
13C-NMR (125 MHz' CDCI3) 5H 145.16, 144.19, 134.12, 134.00， 129.63, 129.42， 129.22， 127.65， 127.25， 126.97， 126.30, 125.57， 125.14， 124.35， 74.24， 71.95， 54.54, 51,84， 51.32, 51.29， 30.34, 30.18， 30.04, 20.39， 18.83， 17.81.
质谱242，在+veESI中
HPLC分析赤式异构体72.85%,苏式异构体25.51%
通过制备型手性HPLC得到2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇的 单个的赤式异构体及苏式非对映异构体对，其中利用了 330 x 50 CHIRALPAK AD20 pm柱，流动相90/10 CCV乙醇+l。/。二乙胺，流速 60 ml/分钟，UV检测波长230 nm，温度25"C。利用该方法分离99 g 粗的2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇，得到
(-H赤式)-2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇(5 )
30.3 g浅褐色油
保留时间10.1分钟
HPLC分析(230 nm下的面积％ ) >98异构体纯度>99
(+)-(赤式)-2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇(6 )
29.6g黑褐色油
保留时间11.7分钟
HPLC分析(230 nm下的面积％ ) >97 异构体纯度>99
(+/-)-(^"式)-2-叔丁基氨基-1-(3-氯苯基)丙烷-1-醇(7 )
18.5 g浅褐色油
保留时间12.4和14.6分钟
HPLC分析(230 nm下的面积％ ) >98.5
非对映异构体纯度>99
(+/-)-(赤式)-2-叔丁基氨基-1-(3-氯苯基)丙烷-1-醇(8 )
以下试验提供本发明的证据。 LPS小鼠试验
通过腹膜内(i.p.) ( 5 ml/kg)或口服(10 ml/kg )施用方式给7周 龄的Balb C ByJ小鼠(24-28g)施用载体或测试物。30分钟后通过腹 膜内注射lmg/kgLPS而刺激这些动物。LPS刺激2小时后，在异氟烷 浅麻醉下通过眼眶后穿刺将血液样品采集到普通管内(normal tube )。 使样品在室温下凝结，然后在6000g和4t:下旋转3分钟。血清储存在 -20匸直到使用。利用ELISA技术一式两份地分析血清中TNFa和IL-10 水平。
以最高剂量施用的安非他酮(3)对LPS诱导的TNFa分泌具有小的 影响，但其对IL-10分泌没有影响。还原形式的安非他酮(7)(苏式外 消旋体)和(8)(赤式外消旋体)二者均具有细胞因子调节作用。(7)是最有效的药剂，在所有施用剂量下均抑制TNFa，并在较高剂量下促进 IL-10的分泌。(7 )是效力相当小的细胞因子调节剂(最高剂量下对TNFa 具有小的抑制作用)，并且在任何剂量下对IL-10都不具有真正的作用。
赤式对映体(5 )和(6 ) 二者均具有良好的细胞因子调节性能。(5 ) 抑制LPS刺激之后TNFa的产生，但是对IL-10水平没有影响。然而， (6)既抑制TNFa又促进IL-lO的分泌。这两种分子都具有细胞因子调 节性能，更表明了它们作为抗炎和免疫调节治疗剂的潜能。
角叉菜胶足爪试验
对禁食(18小时)的雄性Wistar大鼠(105-130g)称重，通过将 右后足浸入汞中直至胫跗关节而读取汞器官充满度测量仪 (plethysmometer )的基础读数。随后，通过口服灌胃(10 ml/kg )施 用载体、参比物和测试物。处理后半小时，将0.1ml在0.9%盐水中的 2%角叉菜胶注射到所述右后足的足底下(subplanatar )区域。在施用 角叉菜胶后第l、 2、 3、 4和5小时时利用器官充满度测量仪再次测量 右足。足爪体积的影响以足爪体积随时间的曲线下面积表示。活性(足 爪体积的抑制)以相比于载体对照的抗炎活性％表示。
化合物(5)和(6)分别显示出对足爪内角叉菜胶诱导的足肺胀具 有剂量依赖性抗炎作用。
大鼠佐剂试验
在第0天，通过向右足内足下注射弗氏佐剂(乳酪分支杆菌 (3fj;c(7^ic^"/w附Ai/0^cm附)在矿物油中的悬液)对雄性Wistar大鼠 (180-200 g)进行接种。以相同方式将含有0.9%盐水的假接种物注射 到相匹配的雄性Wistar大鼠中。在第2天，对动物进行称重。在第3、 4、 7、 9和11天，对动物进行称重，并且利用器官充满度测量仪将足爪 浸没至胫跗关节来测量右后足爪和左后足爪。在第11天，选择左后足 体积增加20 %的大鼠用于继续研究。在同一天，给继续研究的大鼠口 服施用测试物(10 ml/kg在蒸镏水中)，从此开始每天施用一次，直到 完成研究。在第11、 14、 15、 16、 18和21天测量左后足爪和右后足爪 的体积。化合物(5)和(6) 二者均具有抗佐剂性关节炎的保护作用。(5) 在最高的两个剂量下降低足爪肿胀，而(6)则在所有剂量(3、 10和 30mg/kg)下均抑制足爪炎症。
DSS诱导的结肠炎
在正常条件下飼养8-10周龄的BDF1雄性小鼠(~30g)。研究开始 时，将正常水换成3。/。硫酸葡聚糖溶液以诱导结肠炎症。同时，直肠内 施用埃他利特和阳性对照布地缩松，每日两次，施用7天。在第8天， 处死动物并取出大肠。评价下部三分之二的组织学严重程度(评分系统， l轻度至4重度)。评价小鼠的累积直肠出血分数、腹泻分数和累积潜血 测量值。
最高剂量的化合物(5)和(6) 二者均对口服硫酸葡聚糖诱导的组 织学分数具有显著的影响。(6)稍稍更有效，在较低剂量下可见大的改 善作用。这表明(5)和(6) 二者均可具有治疗炎性肠疾病的用途。
实验性自身免疫性脑炎
通过皮下注射弗氏完全佐剂(CFA)中的蛋白脂质蛋白质 (proteolipid protein, PLP)(用作致脑炎的接种物)对适应的SJL小鼠 致敏。以200 pl体积中的125吗PLP/300吗CFA的浓度皮下施用接种 物。48小时后，以20 jig/kg的剂量腹膜内注射百曰咳毒素(PTX)以 增加血脑屏障的渗透性。
从实验第一天起以10 mg/kg的剂量口服施用化合物(6 )，每日 一次， 直到结束。以25mg/kg的剂量腹膜内施用考帕松。在整个实验过程中， 进行小心的临床检查并称量体重以观察动物的健康状况。
发现化合物(6)彻底改善S几小鼠EAE模型的二度JJL。
权利要求
1. 化合物用于治疗或预防炎性病症的用途，其中所述化合物是式(I)化合物或其盐
2. 权利要求l的用途，其中所述病症是慢性退行性疾病，比如类 风湿性关节炎、骨关节炎或骨质疏松。
3. 权利要求l的用途，其中所述病症是慢性脱髓鞘疾病，比如多 发性硬化。
4. 权利要求l的用途，其中所述病症是呼吸疾病，比如哮喘或慢 性阻塞性肺病。
5. 权利要求l的用途，其中所述病症是炎性肠病，比如溃疡性结 肠炎或克罗恩病。
6. 权利要求l的用途，其中所述病症是皮肤病症，比如4艮屑病、 硬皮病或特应性皮炎。
7. 权利要求l的用途，其中所述病症是牙科疾病，比如牙周病或 齿龈炎。
8. 权利要求1的用途，其中所述病症是糖尿病肾病、狼疮肾炎、IgA 肾病或肾小球肾炎。
9. 权利要求l的用途，其中所述病症是系统性红斑狼疮。
10. 权利要求l的用途，其中所述病症是移植物抗宿主病。
11. 权利要求l的用途，其中所述病症是眼科病症。
12. 权利要求11的用途，其中所述眼科病症是与年龄相关的黄斑变性。
13. 权利要求ll的用途，其中所述眼科病症是糖尿病视网膜病变。
14. 权利要求ll的用途，其中所述眼科病症是脉络膜新生血管膜、黄斑囊样水肿、视网膜前膜和黄斑裂孔。
15. 权利要求ll的用途，其中所述眼科病症是干眼。
16. 权利要求ll的用途，其中所述眼科病症是葡萄膜炎。
17. 前述权利要求中任一项的用途，其中所述化合物是非对映异构 体对的外消旋或非外消旋混合物。
18. 权利要求17的用途，其中所述化合物是非对映异构体的赤式对 的外消旋或非外消旋混合物。
19. 前述权利要求中任一项的用途，其中所述化合物是(lS，2R)-^" 式'-2-(l,l-二甲基乙基)氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇或(lR,2S)-赤^; -2-(1,1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙烷-1-醇。
20. 前述权利要求中任一项的用途，其中对治疗对象还施用选自以 下的另一种治疗剂皮质类固醇、细胞毒素、抗生素、免疫抑制剂或非 甾体抗炎药。
21. 权利要求20的用途，其中以组合形式提供化合物(I)和所述 的另一种药剂。
全文摘要
式(I)化合物或其盐是可用于治疗或预防与T-细胞增殖相关的病症或由促炎细胞因子介导的病症的化合物。
文档编号A61P29/00GK101415410SQ200780008506
公开日2009年4月22日 申请日期2007年3月9日 优先权日2006年3月9日
发明者安德鲁·道格拉斯·巴克斯特, 约翰·布鲁, 罗宾·马克·班尼斯特 申请人:索塞R&D有限公司