应用4,17β-二羟基雄-4-烯-3-酮治疗癌症的制作方法

专利名称：：应用4,17β-二羟基雄-4-烯-3-酮治疗癌症的制作方法应用4,17/3-二羟基雄-4-烯-3-酮治疗癌症本发明涉及4，170-二羟基雄-4-烯-3-酮(在后文中称为4-羟基睾酮)及其盐和酯的新应用、它们的制备方法、含有它们的药物组合物、以及所述化合物在哺乳动物中预防和治疗某些疾病、特别是癌症中的应用。在西方世界中，乳腺癌是仅次于结肠直肠癌的最常见的癌症疾病，尽管事实上它几乎只影响女性。在德国，乳腺癌占女性中诊断出的所有癌症类型的大约20%。在大多数病例中，治疗方法包括外科切除肿瘤(乳房肿瘤切除术)，或者如果肿瘤的大小不允许保留乳房治疗的话，则完全切除患病的乳房。在这两种情况下，手术后都接着进行药物治疗。乳腺癌症特有的并发症是高度可能转移扩散到其它器官中，特别是肝、脑、骨和皮肤。因此，手术后继续药物治疗(辅助治疗)。该治疗也是为了防止疾病的局部复发。如果切除的肿瘤表现出雌激素受体，则使用抗雌激素药物(他莫昔芬(Tamoxifen)或芳香化酶抑制剂)。缺乏雌激素受体则使用细胞抑制药物进行术后药物治疗。他莫昔芬与雌激素受体(ER)结合并阻断雌激素的生长促进效应。芳香化酶抑制剂阻断从雄性激素前体(c-19-类固醇)产生雌激素的最后一步。它们或者与酶的活性位点不可逆结合(芳香化酶失活剂，即甾族芳香酶抑制剂4-羟基雄烯二酮(福美司坦(Formestane)=兰他隆(Lentaron⑧)，或l衣西美i旦(Exemestane)(P可i若新(Aromasin))，或者竞争性抑制酶的细胞色素p450部分(非甾族芳香酶抑制剂阿那曲唑(Anastrozol)(瑞宁得(Arimidex))和来曲唑(Letrozol)(弗隆(Femara))。如果乳腺癌表现出Her2neu基因的过表达，则静脉给药针对该细胞表面蛋白的抗体，例如曲妥珠单抗(Trastuzumab)(赫赛汀(Herceptin))。基础和临床数据表明，雄激素的芳香化代谢物，即雌激素，是参与了与某些激素依赖性癌症、例如乳腺、子宫内膜和卵巢癌的生长有关的病理性细胞变化的激素。芳香化酶最近已经被认为是能够在肿瘤中直接合成雌二醇的酶。内源性雌激素最终是以雄烯二酮或睾酮作为直接前体形成的。雌激素在乳腺组织中、特别是在肿瘤细胞本身中的局部产生，已经被认为对疾病的疗法是非常重要的。在这种情况下，由酶芳香化酶进行的类固醇环A的芳香化以及它的抑制，被认为在抗乳腺癌方法中发挥了重要作用。因此，在本发明之前，处理女性乳腺癌的常规治疗性方法，除了基于雌激素受体拮抗剂或治疗性抗体的其它概念之外，集中于芳香化酶抑制作用本身。因此，据报道被赋予了芳香化酶抑制作用的类固醇物质已有描述，例如V-睾内酯[美国专利2,744,120]、4-羟基-雄-4-烯-3，17-二酮及其酯[参见，例如，美国专利4,235,893]、10-(1，2-丙二烯基)-雌-4-烯-3，17-二酮[美国专利4,289,762]、10-(2-丙炔基)-雌-4-烯-3,17-二酮[J.Amer.Chem.Soc，103,3221(1981)和美国专利4,322,416]、19-硫代雄烯二酮衍生物(欧洲专利申请100566)、雄-4,6-二烯-3,17-二酮、雄-l,4，6-三烯-3,17-二酮[英国专利申请2，100,601A]和雄-l,4-二烯-3，17-二酮[CancerRes.(Suppl.)41,3327(1982)]。但是，使用雌激素受体(ER)拮抗剂和芳香化酶抑制剂进行的临床研究显示，这些化合物不能对肿瘤的增殖和/或生长发挥显著的和充分的抑制作用。例如，基于他莫昔芬⑧的治疗具有例如快速免疫(tachyphylaxy)(治疗失败)的缺点，并且它在某些细胞中的作用类似于雌激素(例如，血栓形成和子宫内膜癌的风险)的事实，成为他莫昔芬⑧用药不能超过3到5年的原因。更新的药物例如芳香化酶抑制剂在原则上只能用于绝经后的女性中，此外，它们只对ER阳性的肿瘤有效。可以显示(J.Szelei等，"Androgen-InducedInhibitionofProliferationinHumanBreastCancerMCF7CellsTransfectedwithAndrogenReceptor",(在雄激素受体转染的人类乳腺癌MCF7细胞中雄激素诱导的增殖抑制)，Endocrinol.,138,no.4，1406-1412，1997)，稳定转染的表达AR的细胞通过引起细胞增殖的结束获得响应雄激素的能力。最近的矛艮道(J.Ortmann等，"Testosteroneand5a-dihydrotestosteroneinhibitinvitrogrowthofhumanbreastcancercelllines",(睾酮禾口5o;-二氢睾酮体外抑制人类乳腺癌细胞系的生长)，Gynecol.Endocrinol.2002;16:113-120)显示，睾酮和5a-二氢睾酮(DHT)可以在某些细胞系中抑制细胞的增殖。睾酮本身具有类似的效应。但是其临床应用性由于它经历快速代谢成为雌二醇或二氢睾酮(DHT)的事实而受阻。由局部芳香化酶活性在乳腺癌内导致的从睾酮局部形成雌二醇，促进了癌症的生长。因此，对于在雄激素受体(AR)阳性细胞和组织中行使类似睾酮的作用(特别是合成代谢作用)、并且不被芳香化酶代谢或不被还原酶转化为DHT的新颖的AR特异性化合物，存在很高的需求。根据本发明，在意外的新情况下发现了4,17/3-二羟基雄-4-烯-3-酮的疗效，能够进行有价值的医学应用。因此，本发明涉及4,17/3-二羟基雄-4-烯-3-酮或其盐或酯在预防或治疗乳腺癌(特别是导管型、髓性和小叶型乳腺癌)、子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢上皮癌、子宫(输卵管)癌、乳腺良性增生变化或改变、纤维腺瘤、巨乳症(围绝经期-绝经期后)、乳腺病、肌瘤和从它们衍生的继发或转移肿瘤中的应用。本发明的"应用"可以包括特定的化合物、或含有它作为主要活性物质与适合的载体和/或稀释剂一起的药物组合物对于所述适应症的治疗或预防方法，它也包括在所述药物组合物制备中的应用。根据本发明的发现，4，17/5-二羟基雄-4-烯-3-酮特别适合在女性或男性患者中预防和/或治疗乳腺癌。本发明的药物组合物还可以含有有效量的雌激素受体拮抗剂和/或芳香化酶抑制剂(与本文公开的本发明的化合物不同的化合物)、和/或细胞抑制剂和/或针对Her2neu的抗体。因为本发明的化合物可以直接在靶细胞或靶组织中最有效地行使它们的作用，而对所治疗的患者没有全身性影响，本发明的药物组合物优选被配制成用于局部给药，在待治疗的耙位点进行局部治疗。本发明的化合物表现出雄激素受体(AR)结合亲和性。在除了乳腺癌细胞之外的大多数细胞中，只要表现出AR，它们就能够诱导合成代谢作用。在乳腺癌细胞中，它们诱导凋亡。这些化合物既不是芳香化酶的底物，也不是芳香化酶的代谢产物，因此不具有被芳香化酶所代谢的物质的负作用。此外，本发明的化合物不是5a-还原酶的底物。因为这些物质不是能够像例如睾酮这样容易代谢的物质，这极大地促进了它们对肿瘤细胞的抑制作用，并且它们还对肿瘤细胞本身行使凋亡效应。因此，这些物质在乳腺癌细胞的治疗中可能比目前用于治疗这两种类型的乳腺癌的物质系列更加有效。该预防或治疗概念的另一个有益作用是，即使在雌激素受体阴性(ER阴性)的肿瘤中细胞也高度可能是AR阳性的，因此即使是这些目前只用细胞抑制药物进行治疗的肿瘤也可以被4-羟基睾酮药理性处理，从而明显增加了乳腺癌激素治疗的范围。因为本发明的化合物是AR特异性化合物，但是不被芳香化酶代谢，它们可以通过AR完全行使它们与特定的治疗或预防应用有关的作用和效应。这使得本发明选择的化合物的概念与现有技术截然不同。这也解释了与之前4-羟基睾酮或其衍生物的治疗应用的基本区别。具体来说，US2，762,818A的公开内容没有超出使用4-羟基睾酮及其酯基于它们的雄性激素和合成代谢性质治疗雄激素缺乏状态本身。但是既没有意图也没有发现它提示了对乳腺癌细胞的活性或从中可以推导出针对本发明的疾病病症的疗效的作用。此外，US2003/0229063A致力于男性中雄激素与雌激素的低比例(导致内分泌紊乱)，仅仅为了该目的而使得4-羟基睾酮的应用只是基于所断定的芳香化酶抑制作用。在使用本发明的化合物进行的实验中，可以显示出这些物质具有极好的皮肤穿透能力，因此可以通过在患者需要治疗的的区域单纯局部施用例如含有治疗或预防有效量的本发明化合物的软膏、洗剂或霜剂等来实现对肿瘤生长的充分影响(直到凋亡)。在局部给药后，化合物穿透过皮肤，并在皮下脂肪组织中集中。在乳腺癌的情况下，药物可以局部施加在乳房的皮肤上，以便优选强亲脂的活性化合物透皮吸收，从而局部带到目的作用位点。活性化合物在导管周围的脂肪组织中集中。在长期治疗中，所治疗的乳房的脂肪物质显著减少。这种减少降低了具有雌激素形成能力的雌激素形成细胞的数量。活性化合物的亲脂性和疏水性导致活性化合物专门局部集中在脂肪组织中，因而不能显示出任何显著的全身性作用。根据本发明的优选实施方案，计划将药物直接局部施加到目的作用位点上或其附近。根据本发明，获得的结果是在有风险的组织(在预防中)或患病的组织(在治疗中)中足够的活性化合物局部水平，而在血液循环中没有发生活性化合物的明显吸收。因此，该实施方案的益处不仅在于局部使用本身，而且在于区域局部应用的方式使得活性化合物强集中于有风险的组织和/或患病的组织，而不是通过血液循环间接地进行。由于上述的治疗的主要靶疾病，特别是乳腺癌等，区域局部治疗或预防应用主要对女性患者进行，特别是在女性患者的乳房皮肤上，尽管同样的治疗原则也适用于男性乳腺癌。如果还要治疗转移性癌症和/或要针对它们进行预防，可以将本发明的药物局部施加到计划的作用位点上，其量使得在血液循环中也能发生明显的吸收，并因此建立起血清水平，它也将活性化合物运输到转移癌。也是在该应用中，还主要发生了在计划的作用位点、特别是转移癌症存在的位点上或附近的局部吸收。本发明的重要优点是也使用药物预防乳腺癌的可能性。特别有利的应用可能性是所谓的继发预防。在已经诊断出乳腺癌并治疗的女性或男性患者中，在同样的位点有一定的复发风险，也具有在对侧乳腺发生进一步癌症的高风险。在这两种情况下，具有ER继发癌症的情况是无法预测的。然后做过手术的和对侧的乳腺可以用本发明的药物进行预防性治疗。它也将阻止ER阴性癌症(在具有家族性乳腺癌易感性的患者中特别常见)的出现。在所谓的高风险女性的情况下，可以进行一级预防。可用于这种高风险组的选择标准，是例如在母亲一方的至少一位女性或男性一级亲属在45岁之前是或已经患有单侧或双侧乳腺癌，或母亲一方至少一位女性或男性一级亲属和其它的女性或男性亲属是或已经患有乳腺癌的事实。在大多数这样的病例中，疾病的隐藏原因是在两个已知的"乳腺癌基因"BRCA1和BRCA2之一中的遗传缺陷。因为本发明的优选实施方案中的局部应用由于活性化合物的疏水性和高度安全性情况，实际上完全避免了它可能的全身性副作用，因此在存在具有相对低或平均风险的组织情况下，一级预防的适应症可以相对放宽松。可以在乳腺癌的迹象和症状可能发生的很久之前就开始进行预防。在优选的局部给药中，本发明的化合物或组合物优选在相对长的时间内应用(如果需要可以终生)，用药可以例如每天一次或两次。因为计划局部(局域)应用的本发明的活性物质优选以脂溶性形式提供，因此它们可以容易地穿透进入脂肪组织并局域执行它们的预防和/或治疗作用。因为本发明的局部使用的活性化合物由于它们的脂溶性而保持定位在乳房的脂肪组织中并在此显示出它们的目的作用，消除了全身使用诱导的任何可能的副作用。这种副作用的减少或消除使得预防应用明显更宽广。本发明的药物可以由患者自己使用，因此为此目的经常就诊医生是不必需的。按照局部给药的规则，本发明使用的活性化合物是脂溶性的，并且非常适合局部应用。正如前面己经描述过的那样，集中在乳房的脂肪组织中避免了全身性副作用。为了改善皮肤的穿透性，可以在本发明的药物中加入在现有工艺中已知促进这种穿透性的物质，例如透明质酸酶、二甲基山梨糖醇或DMSO(二甲基亚砜)。具体来说，局部给药主要表明用于一级预防(预防)、乳房保留治疗后与任何类型的辅助药物治疗伴随进行的二级预防(预防)、在"原位导管癌"手术后(DCIS，其后通常不进行任何辅助治疗)的二级预防(预防)和对侧乳腺癌预防。局部给药也特别适合于"新辅助"治疗的情况。这是指在手术前进行癌症的药物治疗以便减小其大小，从而允许进行乳房保留手术。在过去，这已经优先在ER阴性肿瘤的病例中进行，只是在最近才使用了芳香化酶抑制剂，在6个月内获得了有限的成功。最后，治疗可以用于浅表病变(例如皮肤转移癌)。一级预防涉及对具有发展癌症的一定风险的健康个体进行预防性治疗。因为本发明的化合物和药物组合物不是芳香化酶的底物，因此不能代谢成雌激素，并且不会男性化，因此它们也可以用于绝经前女性的乳腺癌一级预防。在二级预防中，该化合物和组合物可以单独使用，或与例如他莫昔芬、芳香化酶抑制剂、赫赛汀和/或细胞抑制药物组合使用，其中任何这样的组合都将扩大可治疗的细胞类型谱。本发明是基于发现4，17/3-二羟基雄-4-烯-3-酮(在后文中称为4-羟基睾酮)可以成功地用作药物活性物质。具体来说，可以显示，含有适当的载体和/或稀释剂以及作为主要活性物质的4-羟基睾酮的药物组合物，可以用于预防和/或治疗乳腺癌(特别是导管型、髓性和小叶型乳腺癌)、子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢上皮癌、子宫(输卵管)癌、乳腺的良性增殖性变化或改变、纤维腺瘤、巨乳症(围绝经期-绝经期后)、乳腺病、肌瘤和从它们衍生的继发或转移肿瘤。因此，本发明同样提供了4,17/3-二羟基雄-4-烯-3-酮(4-羟基睾酮)在制备(临床)预防和/或治疗哺乳动物中上述激素依赖性或激素受体调节的癌症的药物组合物中的应用。一般来说，本发明的化合物和药物制备物可以通过局部、口腔、直肠、肠胃外(例如肌肉或静脉注射或输注)、经皮和/或以储库制备物的形式给药。本发明的化合物4-羟基睾酮被公开在例如US2,762,818A中，并可以商购(例如从BulkNutrition,Graham,NC,USA;进一步的信息参见bulknutrition.com;WINKOSGmbHD-79189BadKrozingen,DE)。本发明还涉及所有的衍生物(特别是4，17/3-二羟基雄-4-烯-3-酮的具有其功能和/或结构特征的盐和酯)。适合的酯基团的例子包括但不限于直链、支链或环状或芳香族酰基基团，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基、庚酰基和苯甲酰基。酯可以与4和/或17羟基基团形成，优选与17羟基基团形成。其盐和酯也可以通过已知的方法制备(参见例如美国专利US2,762,818A)。本发明的化合物和药物制备物是合成代谢的类固醇，与AR阳性的细胞或组织中显示的雄激素受体结合后，执行它们的类似睾酮的作用。鉴于它们的治疗指数高，本发明的化合物可以安全地用于医药。例如，通过单次施用逐渐增加的剂量并在治疗后第七天进行测量，测定到的本发明化合物在小鼠中近似的急性毒性(LD5。)发现是可忽略的。本发明的化合物和药物制备物或组合物可以通过各种不同的剂型给药，例如以软膏、霜剂、洗剂、凝胶、喷雾剂或透皮膏药的形式、还包括储库剂型(包括颗粒)局部给药，以片剂、胶囊、糖衣或薄膜包衣的片剂、液体溶液或悬浮液的形式口服，以栓剂的形式直肠给药，以例如肌肉或静脉注射或输注肠胃外给药。按照优选的实施方案，本发明的化合物被设计用于局部给药。剂量依赖于患者的年龄、体重、状况和给药的途径；例如对于成年人来说，适合于口服给药的剂量可以在每剂大约IO到大约150-1000mg的范围内，每天1到5次。本发明包括含有本发明的化合物以及可药用的赋形剂(可以是载体或稀释剂)的药物制备物或组合物。含有本发明的化合物的药物组合物通常按照常规的方法制备，并以药物适合的形式给药。对于局部给药来说，药物优选被配制成软膏、霜剂、凝胶、乳液或洗剂。粉末或油制剂也是可能的。制剂的基料对于化妆品和制药工业
技术领域：
的专业人员来说是熟悉的，在此不需要更详细的解释。例如，可以使用植物油和脂肪例如杏仁油、花生油、橄榄油、桃仁油、蓖麻油、植物提取物、香精油，其它的植物蜡和合成的和动物的油、脂肪或蜡，卵磷脂，羊毛脂醇，胡萝卜素，香料，一元或多元醇，尿素，防腐剂和着色剂等。优选制剂是水包油或油包水的乳液。适合的药物的活性化合物含量可以为重量的0.0001和20%之间、优选为重量的0.6%到10%、更优选重量的1到5%的4-羟基睾酮或其盐或酯。常规的范围为重量的0.6到5%。如果为了促进皮肤渗透而与物质混合，当使用透明质酸酶时，它们的含量可以是例如重量的0.01到1%之间，优选为0.05到0.2%，当使用二甲基山梨糖醇或DMSO时，为重量的1到25%之间，优选为重量的5到10%之间。例如，固体口服形式可以与活性化合物一起含有的稀释剂例如乳糖、右旋糖、蔗糖、纤维素、玉米淀粉或土豆淀粉，润滑剂例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁或钙、和/或聚乙二醇，粘合剂例如淀粉、阿拉伯树胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮，解聚剂例如淀粉、藻酸、藻酸盐或淀粉羟基乙酸钠，泡腾混合物，染料，甜味剂，润湿剂例如卵磷脂、聚山梨酸酯、十二烷基硫酸盐，以及一般来说在药物制剂中使用的无毒和无药理活性的物质。所述药物制备物可以通过已知的方式制造，例如通过混合、成粒、压片、包糖衣或包膜工艺。用于口服给药的液体分散剂可以是例如糖浆、乳液和悬浮液。糖浆可以含有例如蔗糖或蔗糖与甘油和/或甘露糖醇和/或山梨糖醇作为载体。悬浮液和乳液可以含有例如天然树胶、琼脂、藻酸钠、果胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯醇作为载体。肌肉注射的悬浮液或溶液可以与活性化合物一起含有可药用的载体，例如无菌水、橄榄油、油酸乙酯、二醇例如丙二醇，以及如果需要的话，适量的盐酸利多卡因。静脉注射或输注的溶液可以含有例如无菌水作为载体，或优选它们可以采取无菌的、水性的、等渗的盐水溶液的形式。栓剂可以与活性化合物一起含有可药用的载体列、如可可脂、聚乙二醇、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯表面活性剂或卵磷脂。在靶肿瘤是雌激素受体(ER)阳性的情况下，本发明的化合物也可以与已知的雌激素受体拮抗剂(例如他莫昔芬⑧)和/或已知的芳香化酶抑制剂和/或已知的细胞抑制剂一起给药。因此，本发明的药物组合物也可以含有有效量的行使雌激素受体拮抗和/或芳香化酶抑制活性和/或细胞抑制活性的己知化合物。按照优选的实施方案，提供了4-羟基睾酮与适合的细胞抑制剂或细胞抑制剂组合的组合，特别是以可以局部给药的制备物的形式(例如霜剂)。适合的芳香化酶抑制剂的例子被公开在例如US2004/0018991Al中，包括类固醇芳香化酶抑制剂例如福美司坦和兰他隆、依西美坦、MDL18962、7a-取代的雄烯二酮衍生物、ATD、10-环氧乙垸和10-硫杂环丙烷-取代的雄激素、阿他美坦(atamestan)等，以及非类固醇的芳香化酶抑制剂例如伏氯唑(vorazol)、瑞宁得、来曲唑、法倔唑(fadrozol)和罗谷亚胺(rogletimid)。对于这些物质的命名以及它们的有效性，参见例如"RedList"(红色名单)，EditioCantor,Aulendorf(DE1999)。适合的细胞抑制剂和细胞抑制剂组合的例子包括例如AC±T——阿霉素(化学名多柔比星)与环磷酰胺(商标名Cytoxan)，含有或不含有泰素(Taxol)(化学名紫杉醇)或泰素帝(Taxotere)(化学名多烯紫杉醇)；CMF—一环磷酰胺、氨甲蝶呤和氟代尿嘧啶("5-FU"或5-氟尿嘧啶)；CAF—一环磷酰胺、阿霉素和氟代尿嘧啶("5-FU"或5-氟尿嘧啶)；CEF—一环磷酰胺、表柔比星(与阿霉素类似)和氟代尿嘧啶("5-FU"或5-氟尿嘧啶)；FAC——氟代尿嘧啶("5-FU"或5-氟尿嘧啶)、阿霉素和环磷酰胺。总的来说，特别是如果靶组织是雌激素受体阴性的情况下，本发明的化合物也可以与针对Her2neu的抗体例如曲妥珠单抗(赫赛汀⑧)一起给药。因此，本发明的药物组合物也可以含有有效量的执行拮抗Her2neu活性的已知化合物。下面的实施例对本发明进行了说明，但是不对其构成限制。实施例1本发明的化合物可以如下合成在第一步中，将2.5g睾酮溶解在100ml冷MeOH中。在加入9mlNaOH(2%)和17mlH202(30%)后，将混合物在4°C搅拌24小时。获得的环氧化物用冰-水沉淀。在第二步中，将2g干燥的环氧化物溶解在200ml含有2y。H2S04的乙酸中。将溶液在室温搅拌4小时。反应的产物用冰-水沉淀。然后，将反应产物用1%NaOH溶液清洗以水解乙酰基酯。纯的4-羟基睾酮的总产率在40-50%的范围内。实施例2本发明的用于局部给药的霜剂可以通过常规的方式使用下面量的成分进行配制。给出的量是每100g霜剂中的<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>获得的霜剂可以局部给药于女性或男性患者的患病乳腺组织上的皮肤上。实施例3本发明的凝胶可以通过常规的方式使用下面量的成分进行配制。给出的量是每100g凝胶中的4-羟基睾酮2.5g95度乙醇70.0g卡伯波(Carbopol)9800.5g十四烷酸异丙酯2.5g三乙醇胺0.5g纯水补足至100.0g实施例4本发明的用作喷雾剂的溶液可以通过常规的方式使用下面的配方进行制备。给出的量是每100g溶液中的4-羟基睾酮2.5g95度乙醇70.0g十四垸酸异丙酯2.5g纯水补足至100.0g实施例5片剂每片重量0.150g，含有25mg活性物质，可以如下制造:组成(用于10000片)4，17j8-二羟基雄-4-烯-3-酮250g乳糖800g玉米淀粉415g滑石粉30g硬脂酸镁5g将4,17/3-二羟基雄-4-烯-3-酮、乳糖和一半的玉米淀粉混合；然后迫使混合物通过0.5mm筛孔大小的筛网。将玉米淀粉(10g)悬浮在温水中(90ml)，将获得的糊状物用于使粉末成粒。将颗粒干燥，在1.4mm筛孔大小的筛网上粉碎，然后加入剩余量的淀粉、滑石和硬脂酸镁，仔细地混合并加工成片剂。实施例6可以制备每剂0.200g并含有20mg活性物质的胶囊。500颗胶囊的组成4，17/3-二羟基雄-4-烯-3-酮乳糖玉米淀粉硬脂酸镁10g80g5g5g该剂型被包囊在两片硬的明胶胶囊中，每个胶囊的剂量为0.200g。实施例7将MCF-7细胞在RPMI1640培养基中于37。C下生长，直到细胞数达到大约lx1()S个细胞/ml。然后，在4份同样的MCF-7细胞样品中加入二氢睾酮(DHT)或4-羟基睾酮(4-0HT)，以获得其不同的浓度，即10-7M、10—8M或10-9M，并通过活细胞计数测定细胞的进一步生长。在37。C的温育过程中，在3、6和9天后进行细胞计数。测定没有加入活性药剂的MCF-7细胞的生长作为对照。对MCF-7细胞增殖的抑制结果对于DHT或4-OHT的化合物浓度分别为10—7M、10—SM禾Q10—9M，显示在图1A、1B禾B1C中，并与对照进行了比较。结果证实了在使用本发明的化合物4-羟基睾酮的情况下显著增加了对MCF-7细胞增殖的抑制作用，明显比4-二氢睾酮的作用更强，比对照尤为强。4-OHT与DHT相比功效增加得令人吃惊，可以用4-OHT能够牢固地与雄激素受体(AR)特异性结合并引发合成代谢/凋亡作用而不是雄激素作用的效应来解释。另一方面，DHT优先激发雄激素作用。实施例8以10位女性患者组进行了双盲临床试验。在该临床试验中，特别关注患者的耙乳腺癌组织关于孕酮受体(PR)以及特别是关于雌激素受体(ER)的激素受体状态；患者的癌症被假定主要是雄激素受体(AR)阳性的。在该组中，6位患者具有组织学确定的恶性乳腺癌(C.mammae)。本研究的亚组中5位患者的肿瘤被发现是孕酮受体(PR)阴性的，特别是雌激素受体(ER)阴性的(状态等级0(零))。对于Her-2-neu来说，三位患者显示出阴性状态，一位具有中度(等级1)、另一位具有强烈的(等级2)受体状态。第六位患者确定存在恶性乳腺癌，但是癌组织的量太低而不能确定受体状态。其余的四位患者没有显示出恶性疾病，而是表现出具有正常的或患有乳腺疾病的乳腺组织。所有的10位女性患者使用4-羟基睾酮作为活性剂进行局部的和局域的治疗，向定位于乳房的靶皮肤部分局部施加实施例2中描述的霜剂。在为期三个月的给药期间每天一次的连续局部用药后，对治疗效果进行临床研究。6位患有恶性乳腺癌的患者的结果显示在下面的表1中，同时显示了1到5号患者被确定的受体状态。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>在这些迄今为止进行了治疗后研究的女性中，通过乳房造影法测定，三位患者显示出乳腺癌组织的明显好转。尽管该癌症亚组第六位患者的肿瘤受体状态尚不清楚，但在该病例中仍有确定的明显的临床好转。对于剩下的4位没有恶性疾病状况的患者来说，值得注意的是，在局部给药过程中，明显正常或表现出乳腺病的组织有明显的组织减小的趋势。该临床研究的结果显示了本发明的含有4-羟基睾酮(4-0HT)的药物组合物的两个主要的重要作用。首先，4-OHT在縮小癌性组织方面显示出了极好的功效。其次，也是更令人吃惊的，即使是ER阴性的癌细胞也可以被有效地治疗。综合起来，在本发明中做出的发现支持了4-OHT能够通过AR有效地起作用以及最终可以实现凋亡的概念。因此，本发明的发现使得有价值的治疗和/或预防治疗可行。在包含辅助治疗的其它有用的应用中，新辅助治疗是特别重要的，通过利用肿瘤体积的明显减小帮助后续的外科治疗计划或使之得以实行。实施例9患有双侧乳腺癌和皮肤转移癌的42岁患者，在手术后每天用实施例2的霜剂进行治疗。经过4周的治疗后，皮肤转移癌消失了。实施例10对患有大乳腺癌(直径12cm)大块肿瘤扩散和转移性肝病的50岁患者进行部分肿瘤切除术以及然后每日使用实施例2中的霜剂进行治疗。在治疗下，该患者表现出肿瘤没有进一步生长，甚至减小了不能切除的肿瘤块。实施例11对患有晚期乳腺癌并且肿瘤扩散到淋巴的74岁患者进行为期10周的每日治疗。肿瘤的体积发生了明显的减小，并且在患病的淋巴结中不再有肿瘤细胞了。权利要求1.4，17β-二羟基雄-4-烯-3-酮或其盐或酯在制备预防或治疗乳腺癌(特别是导管、髓性和小叶乳腺癌)、子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢上皮癌、子宫(输卵管)癌、乳腺的良性增殖性变化或改变、纤维腺瘤、巨乳症(围绝经期-绝经期后)、乳腺病、肌瘤以及从它们衍生的继发或转移肿瘤的药物组合物中的应用。2.4，17/3-二羟基雄-4-烯-3-酮或其盐或酯，其用于预防或治疗乳腺癌(特别是导管、髓性和小叶乳腺癌)、子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢上皮癌、子宫(输卵管)癌、乳腺的良性增殖性变化或改变、纤维腺瘤、巨乳症(围绝经期-绝经期后)、乳腺病、肌瘤以及从它们衍生的继发或转移肿瘤。3.预防或治疗乳腺癌(特别是导管、髓性和小叶乳腺癌)、子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢上皮癌、子宫(输卵管)癌、乳腺的良性增殖性变化或改变、纤维腺瘤、巨乳症(围绝经期-绝经期后)、乳腺病、肌瘤以及从它们衍生的继发或转移肿瘤的方法，包括给需要这种治疗的患者施用有效量的4，170-二羟基雄-4-烯-3-酮。4.根据权利要求3的方法，其中4,17i3-二羟基雄-4-烯-3-酮与有效量的雌激素受体拮抗剂和/或芳香化酶抑制剂和/或细胞抑制剂和/或针对Her2neu的抗体一起施用。5.根据权利要求3或4的方法，其中所述施用是局部的。6.药物组合物，其含有适当的载体和/或稀释剂以及4,17/3-二羟基雄-4_烯_3_酮作为主要活性物质，用于女性或男性患者的预防和/或治疗。7.根据权利要求6的药物组合物，还含有有效量的雌激素受体拮抗剂和/或芳香化酶抑制剂和/或细胞抑制剂和/或针对Her2neu的抗体。8.根据权利要求6或7的药物组合物，配制用于局部给药。全文摘要本发明涉及了4，17β-二羟基雄-4-烯-3-酮(在后文中称为4-羟基睾酮)的新应用、制备它们的方法、含有它们的药物组合物、以及使用所述化合物在哺乳动物中不论肿瘤的雌激素受体的状态如何而预防和/或治疗乳腺癌的应用。文档编号A61P5/26GK101443016SQ200780017205公开日2009年5月27日申请日期2007年5月11日优先权日2006年5月12日发明者亚历山大·托拜厄斯·塔希曼申请人:亚历山大·托拜厄斯·塔希曼