专利名称：：使用亲和色谱法纯化蛋白质的精氨酸洗涤液的制作方法
技术领域：
：本申请案涉及蛋白质纯化。具体来说，本申请案涉及纯化与介质结合的蛋白质的方法，所述方法是利用使至少一种含有精氨酸或精氨酸衍生物的洗涤液通过所述介质，且收集经纯化的蛋白质。
背景技术：
：随着重组蛋白技术的出现，所关注蛋白质可使用工程改造成表达所述蛋白质的经培养的真核或原核宿主细胞系来产生。所需重组蛋白于医药应用的用途通常取决于能够可靠地从杂质(诸如宿主细胞蛋白、蛋白质变异体和来自培养基的化合物)中回收足够含量的蛋白质。常规蛋白质纯化方法被设计成是基于尺寸、电荷、溶解度和疏水性程度的差异来从杂质中分离所关注蛋白质。所述方法包括色谱法，诸如亲和色谱法、离子交换色谱法、尺寸排阻色谱法、疏水性相互作用色谱法、固定金属亲和色谱法和羟基磷灰石色谱法。这些方法常常利用可设计成选择性粘附所关注蛋白质或杂质的分离介质。在结合-洗脱模式(bind-elutemode)中，所需蛋白质与分离介质选择性结合且通过不同溶剂从介质分别洗脱。在导流模式(flow-throughmode)中，杂质与分离介质特异性结合，而所关注蛋白质并不结合，由此可回收"导流"中的所需蛋白质。当前纯化蛋白质(诸如抗体)的方法包括两个或两个以上色谱步骤。举例来说，所述蛋白质纯化方案中的第一步可包括利用所关注蛋白质与固定捕获剂之间的特异性相互作用的亲和色谱法步骤。蛋白A吸附剂尤其适用于蛋白质(诸如含有Fc区的抗体)的亲和捕获。然而，使用蛋白A色谱法进行蛋白质纯化存在诸多缺点。在一些情况下，蛋白A捕获剂的渗漏导致经洗脱的蛋白质产物受污染，而在其它情况下，亲和捕获并不从所关注蛋白质中分离蛋白质变异体(诸如蛋白质的聚集形式)。另外，在中和pH值后，蛋白A洗脱汇集物中会形成不同程度的混浊度和/或沉淀。这一混浊度和/或沉淀会导致经中和的蛋白A洗脱汇集物中产物大量损失。因此，需要减少产物损失且提高洗脱汇集物中的产物纯度的纯化方法。
发明内容本发明部分涉及从含有产物(诸如抗体)和一或多种杂质的负载流体中分离产物的方法，所述方法是利用使所述负载流体通过结合所述产物的介质，接着使至少一种含有精氨酸或精氨酸衍生物的洗涤液通过所述介质，且使用洗脱液收集所述产物。一方面，提供一种分离产物的方法。所述方法包含提供包含产物和一或多种杂质的负载流体和使所述负载流体与可在适合于结合所述产物的条件下结合产物的介质接触，由此获得经结合的介质。所述方法进一步包含使所述经结合的介质与一或多种包含精氨酸或精氨酸衍生物的洗涤液接触，由此获得经洗涤的介质。所述方法进一步包含在适合于洗脱产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触。接着可收集包含产物的洗脱物。也可将产物进一步纯化和/或调配以供治疗使用。在此方面的一些实施例中，产物是蛋白质，例如治疗性蛋白。在某些实施例中，产物是抗体。在特定实施例中，所述抗体是针对以下一种或针对以下一种而产生生长和分化因子-8(GrowthandDifferentiationFactor墨8，GDF-8)、白细胞介素-13(IL-13)、白细胞介素-22(IL-22)、A-(3、晚期糖基化终产物受体(ReceptorforAdvancedGlycationEndproduct,RAGE)和5T4。在一些实施例中，产物是抗原结合片段。在一些实施例中，产物是融合蛋白。在特定实施例中，产物是Ig-融合蛋白。在某些实施例中，产物是Fc-蛋白、免疫结合物、细胞因子、白细胞介素、激素或治疗性酶。在此方面的一些实施例中，所述介质是基质、树脂或色谱柱。在特定实施例中，介质是蛋白A色谱柱，例如重组蛋白A柱，或蛋白G色谱柱，例如重组蛋白G柱。在此方面的一些实施例中，所述洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约0.1M到约2.0M。在某些实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约O.lM到约0.9M。在一实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约1M。在某些其它实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约1.1M到约2.0M。在其它实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约0.5M到约1.0M。在其它实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度大于约0.5M且小于约2.0M。在另一实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度大于约0.5M且小于约1.0M。在特定实施例中，精氨酸衍生物为乙酰精氨酸、胍丁胺、羟基精氨酸(arginicacid)、N-a-丁酰基-L-精氨酸或N-a-特戊酰基精氨酸。在此方面的一些实施例中，洗涤液的pH值为约4.5到约8.0。在某些实施例中，洗涤液的pH值大于约4.5且小于约8.0。在一些实施例中，洗涤液的pH值为约7.5。在此方面的一些实施例中，洗脱液包含以下一种氯化钠、精氨酸或精氨酸衍生物、甘氨酸、HEPES和乙酸。在某些实施例中，洗脱缓冲液具有约2.0到4.0的pH值。在一特定实施例中，洗脱缓冲液具有约3.0的pH值。在此方面的某些实施例中，杂质中的一或多者为宿主细胞蛋白、核酸、产物变异体、内毒素、蛋白A、蛋白G、病毒或其片段、来自细胞培养基的成分或产物变异体，例如经由二硫键键结的(underdisulfide-bonded)产物、低分子量产物、高分子量产物、截短产物和/或错折叠产物。在至少一种杂质与产物结合的一些实施例中，使经结合的介质与一或多种通过经结合的介质的洗涤液接触，由此去除至少一种与产物结合的杂质。在此方面的某些实施例中，洗脱物包含经分离的产物且与洗漆液中使用小于约0.1M的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述经分离的产物的纯度增加。在一些实施例中，洗脱物包含经分离的产物，且与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述产物与至少一种杂质的比率增加。在某些实施例中，洗脱物包含产物，其中与洗涤液中使用小于约0.1M的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述产物与宿主细胞蛋白的比率增加。在其它实施例中，洗脱物包含产物，其中与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述产物与宿主细胞蛋白的比率增加。在此方面的另一实施例中，与洗涤液中使用小于约0.1M的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，洗脱物的混浊度降低。在一些实施例中，与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，洗脱物的混浊度降低。另一方面，提供一种分离抗体的方法。所述方法包含提供包含所述抗体和一或多种杂质的负载流体，和使所述负载流体与蛋白A介质或蛋白G介质接触，其中所述介质可在适合于结合所述抗体的条件下结合抗体，由此得到经结合的介质。方法进一步包含使所述经结合的介质与一或多种洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含浓度大于0.5M且小于约l.OM的精氨酸或精氨酸衍生物，由此提供经洗涤的介质。方法进一步包含在适合于洗脱抗体的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触；和收集包含抗体的洗脱物。由于实施这种方法，因此与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸的相应方法中所回收的洗脱物相比，所述洗脱物中的抗体与宿主细胞蛋白的比率增加且洗脱物具有降低的混浊度。在此方面的一些实施例中，洗涤液的pH值大于约5.0且小于约8.0。另一方面，提供一种降低包含产物的洗脱物混浊度的方法。所述方法包含提供包含10所述产物和一或多种杂质的负载流体，和使所述负载流体与介质接触，其中所述介质可在适合于结合产物的条件下结合产物，由此提供经结合的介质。方法进一步包含使所述经结合的介质与一或多种洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸或精氨酸衍生物，由此提供经洗涤的介质。方法进一步包含在适合于洗脱产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触，由此产生包含产物的洗脱物，和中和所述洗脱物的pH值。方法提供与洗涤液中不使用可检测到的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比混浊度降低的洗脱物。在此方面的一些实施例中，经中和的洗脱物的pH值介于约6.5与约8.2之间。在某些实施例中，洗涤液包含浓度大于0.5M且小于约l.OM的精氨酸或精氨酸衍生物。在一些实施例中，洗涤液的pH值大于5.0且小于约8.0。在此方面的一些实施例中，方法并不包含阴离子上游吸附过滤。在某些实施例中，将洗脱物中的产物进一步纯化和/或调配以供治疗使用。另一方面，提供一种降低包含产物的洗脱物混浊度并减少杂质的方法。所述方法包含提供包含所述产物和一或多种杂质的负载流体，和使所述负载流体与介质接触，其中所述介质可在适合于结合产物的条件下结合产物，由此提供经结合的介质。方法进一步包含使所述经结合的介质与一或多种洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸或精氨酸衍生物，由此提供经洗涤的介质。方法进一步包含在适合于洗脱产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触，由此产生包含产物的洗脱物，和中和。方法提供洗脱物，其中与洗涤液中不使用可检测到的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述洗脱物中的产物与至少一种杂质的比率增加且其中洗脱物具有降低的混浊度。在此方面的一些实施例中，经中和的洗脱物的pH值介于约6.5与约8.2之间。在某些实施例中，洗涤液包含浓度大于0.5M且小于约l.OM的精氨酸或精氨酸衍生物。在一些实施例中，洗涤液的pH值大于5.0且小于约8.0。在此方面的一些实施例中，方法并不包含阴离子上游吸附过滤。在某些实施例中，将洗脱物中的产物进一步纯化和/或调配以供治疗使用。本发明还涉及如本文随附的权利要求书中所述的各种方法和产物。除非另外规定，否则本文所使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解相同的含义。尽管与本文所述的那些方法和材料类似或等效的方法和材料可用于本发明的实施或测试，但适合的方法和材料如下所述。所有公开案、专利申请案、专利和本文所提及的其它参考案都以全文引用的方式并入。另外，材料、方法和实例仅为说明性的且不希望有限制性。本发明的其它特征和优势将由实施方式、图式和权利要求书而显而易见。图l是描绘在蛋白A柱步骤后测定GDF-8mAb-l的回收百分比(％)、混浊度、HCP("宿主细胞蛋白")和LRV("对数去除值")的实验结果的柱状图。图2是描绘在蛋白A柱步骤后测定GDF-8mAb-2的回收百分比(％)、混浊度、HCP和LRV的实验结果的柱状图。图3是描绘在蛋白A柱步骤后测定IL-13mAb-l的回收百分比(％)、混浊度、HCP和LRV的实验结果的柱状图。图4是描绘在蛋白A柱步骤后测定IL-22mAb的回收百分比(％)、混浊度、HCP和LRV的实验结果的柱状图。图5是描绘在蛋白A柱步骤后测定RAGEmAb的回收百分比(％)、混浊度、HCP和LRV的实验结果的柱状图。图6是描绘在蛋白A柱步骤后测定IL-13mAb-2混浊度的实验结果的柱状图。具体实施例方式本发明提供使用包括精氨酸洗涤液或具有精氨酸衍生物的洗涤液的程序从含有一或多种杂质的负载流体中纯化和回收产物的方法。本发明可应用于蛋白质的大规模制备以用于治疗和/或诊断目的。A.定义为了使本发明可更易于理解，定义如本文中所使用的某些术语。其它定义在整个实施方式中阐述。术语"产物"是指由人类或由天然过程产生的分子。"产物"可包括(但不限于)蛋白质，例如治疗性蛋白，包括Ig融合蛋白，包括含Fc蛋白。其它蛋白质包括免疫结合物、细胞因子、白细胞介素、激素、治疗性酶、病毒、治疗性血清、毒素、抗毒素、疫苗、血液成分或衍生物或任何类似产物。所述蛋白质可为分泌性蛋白。蛋白质可例如为抗体、抗体的抗原结合片段、可溶性受体、受体融合物、细胞因子、生长因子、酶或凝血因子。如本文中所使用，术语"产物"和"所关注蛋白质"可互换使用。如本文中所使用，术语"蛋白质"是指一或多种可充当单元的多肽。如本文中所使用，术语"多肽"是指经由肽键键联在一起的氨基酸的序列链。治疗性蛋白可例如为分泌性蛋白。治疗性蛋白包括抗体、抗体的抗原结合片段、可溶性受体、受体融合物、细胞因子、生长因子、酶或凝血因子，其中一些在下文进行更详细描述。以上蛋白质的列表在性质上仅为示范性的，且不希望为限制性叙述。所属领12域的技术人员应理解根据本发明可使用任何蛋白质且将能够按需要选择待产生的特定蛋白质。如本文中所使用，术语"条件培养基"是指通过分离方法(诸如离心和/或微过滤)从已暴露于宿主细胞的细胞培养基中去除细胞和细胞碎片所产生的上清液，所述宿主细胞可分泌所关注的所需重组多肽。条件培养基可例如含有所分泌的重组多肽或所关注产物；所选营养物(例如维生素、氨基酸、辅因子和矿物质)；其它生长因子/补充剂，包括胰岛素；和其它外源性或宿主细胞蛋白和杂质。术语条件培养基包括经澄清的条件培养基、经过滤的条件培养基和条件细胞培养基。术语"负载流体"是指含有待分离的产物和一或多种杂质的液体。在如下所述的本发明操作条件下使负载流体接触介质(例如，穿过介质)。术语"杂质"是指存在于溶液(诸如负载流体)中的任何外来或不合需要的分子。杂质可为同时存在于待纯化的所关注蛋白质的样品中的不同于待纯化的所关注蛋白质的生物大分子，诸如DNA、RNA或蛋白质。杂质包括例如不合需要的蛋白质变异体，诸如聚集蛋白质、错折叠蛋白质、经由二硫键键结的蛋白质、高分子量物质、低分子量物质和片段以及脱酰胺化物质；来自分泌待纯化的蛋白质的宿主细胞的其它蛋白质；宿主细胞DNA;来自细胞培养基的成分；为用于亲和色谱法的吸附剂的一部分、在先前纯化步骤期间浸入样品中的分子，例如蛋白A;内毒素；核酸；病毒，或上述任一种的片段。术语"介质"是指可在大分子分离过程期间经受与待分离产物的配体-生物大分子相互作用的亲和基质或树脂。所述介质可为(但不限于)蛋白A色谱柱或蛋白G色谱柱。术语"经结合的介质"是指与待分离的产物结合且也与一或多种杂质结合的介质。经结合的介质可利用在适合于结合产物的条件下使负载流体通过介质来形成。术语"经洗涤的介质"是指以一或多种洗涤液洗涤的经结合的介质，且至少一种洗涤液含有精氨酸或精氨酸衍生物。经洗涤的介质可通过使经结合的介质与一或多种洗涤液接触来形成，且至少一种洗涤液含有精氨酸或精氨酸衍生物。在经洗涤的介质中，待分离产物的纯度通常相对于经结合介质中的负载流体有所增加(即，产物与一或多种杂质的比率增加)。术语"结合-洗脱模式"是指一种产物制备技术，其中负载流体中所含的至少一种产物与介质(例如色谱树脂)结合。术语"抗体"是指任何免疫球蛋白或其片段，且涵盖包含抗原结合位点的任何多肽。本术语包括(但不限于)多克隆、单克隆、单特异性、多特异性、非特异性、人源化、人类、单链、嵌合、合成、重组、杂交、突变、移植和活体外产生的抗体。抗体片段包括Fab、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、dAb，其可保留抗原结合功能。通常，所述片段包括抗原结合域。术语"IL-13"是指白细胞介素-13，包括IL-13的全长未加工前体形式，以及从翻译后裂解得到的成熟形式。白细胞介素-13(IL-13)是一种由T淋巴细胞和肥大细胞分泌的先前表征的细胞因子(麦肯锡(McKenzie)等人(1993)美国国家科学院院刊(尸rac.胸/.Acad.Sc!'.C/SA)90:3735-39;博斯特(Bost)等人(1996)免疫学(/mm画〖。gy)87:663-41)。本术语还指IL-13的维持至少一些与成熟IL-13相关的生物学活性的任何片段和变异体，包括己经被修饰的序列。术语"IL-13"包括人类IL-13，以及源自脊椎动物物种的其它IL-13。数个待决申请案揭示了针对人类和猴IL-13的抗体、IL-13肽、载体和产生可用于本文所述的方法的这些的宿主细胞，例如美国申请公开案第2006/0063228A号和第2006/0073148号。所有这些公开案的内容都以全文引用的方式并入本文中。IL-13与IL-4共有数种生物学活性。举例来说，IL-4或IL-13均可引起B细胞中的IgE同型转换(汤金森(Tomkinson)等人(2001)免疫学杂志(J./wmwoZ.)166:5792-5800)。另外，已在哮喘患者中报告细胞表面CD23和血清CD23(sCD23)的含量增加(桑切斯-格雷罗(Sanchez-Guererro)等人(1994)过敏49:587-92;蒂罗伦左(DiLo腿o)等人(1999)过敏与哮喘会刊(她rgyAw/ww尸rac.)20:119-25)。另外，IL-4或IL-13均可上调II型MHC和低亲和力IgE受体(CD23)于B细胞和单核细胞上的表达，这导致抗原呈递增强和巨噬细胞功能得到调节(汤金森(Tomkinson)等人，见上)。这些观察结果说明IL-13在气道嗜酸粒细胞增多(airwayeosinophilia)和气道高反应性(airwayhyperresponsiveness，AHR)的发展中起重要作用(汤金森(Tomkinson)等人，见上；威尔斯-卡普(Wills-Karp)等人(1998)科学(Srie打ce)282:2258-61)。因此，抑制IL-13可适用于改善某些炎症性和/或过敏性病状的病理学，所述病状包括(但不限于)呼吸病症，例如哮喘;慢性阻塞性肺病(chronicobstructivepulmonarydisease,COPD);涉及气道炎症的其它病状、嗜酸粒细胞增多、纤维化和过量粘液产生，例如囊肿性纤维化和肺纤维化；异位性病症，例如异位性皮肤炎、荨麻疹、湿疹、过敏性鼻炎；皮肤(例如异位性皮肤炎)、胃肠器官(例如炎症性肠疾病(inflammatoryboweldisease,IBD)，诸如渍疡性结肠炎和/或克罗恩氏病(Crohn'sdisease))、肝(例如硬化、肝细胞癌)的炎症性和/或自身免疫病状；硬皮病；肿瘤或癌症(例如软组织或实体肿瘤)，诸如白血病、胶质母细胞瘤和淋巴瘤，例如霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin'slymphoma);病毒感染(例如HTLV-1);其它器官的纤维化，例如肝纤14维化(例如由B型和/或C型肝炎病毒引起的纤维化)。术语"GDF-8"是指生长和分化因子-8和结构上或功能上与GDF-8有关的因子，例如BMP-ll和属于TGF-p超家族的其它因子。本术语是指GDF-8的全长未加工前体形式，以及从翻译后裂解得到的成熟和前肽(propeptide)形式。术语还指GDF-8的维持至少一些与成熟gdf-8相关的生物学活性的任何片段和变异体，包括已经被修饰的序列。已揭示人类GDF-8以及其它脊椎动物物种(包括鼠类、狒狒、牛类和鸡)GDF-8的氨基酸序列，例如US2004-0142382、US2002-0157125和麦克弗伦(McPherron)等人(1997)美国国家科学院院刊(/W淑.Aca"d.U.S.A.)，94:12457-12461'所有所述参考案的内容都以全文引用的方式并入本文中。针对GDF-8的中和抗体的实例揭示于例如US2004-0142382中，且可用于治疗或预防需要增加肌肉组织或骨密度的病状。示范性疾病和病症包括肌肉和神经肌肉失调，诸如肌肉萎縮症(包括杜兴氏肌肉萎縮症(Duchenne'smusculardystrophy);肌萎縮性侧索硬化；肌肉萎縮；器官萎缩；脆性；腕管综合症；充血性阻塞性肺病；骨骼肌减少症、恶病质和其它肌肉消耗综合症；脂肪组织病症(例如肥胖)；2型糖尿病；葡萄糖耐受不良；代谢综合症(例如综合症X);由损伤(诸如灼伤或氮平衡失调)诱发的胰岛素抵抗；骨退行性疾病(例如骨关节炎和骨质疏松症)。GDF-8(又称肌肉生长抑制素(myostatin))是一种分泌性蛋白并且是结构上相关生长因子的转化生长因子-P(TGF-P)超家族的成员，所述生长因子全部都具有生理学上重要的生长调节和形态形成性质(金斯利(Kingsley)等人(1994)基因和发育(Gct"Z)".),8:133-146;胡德莱斯(Hoodless)等人(1998)微生物学与免疫学的当前课题(Q^r.r甲"脸威o,./m謹o/.),228:235-272)。类似于TGF-(3，人类GDF-8是以375个氨基酸长的前体蛋白形式合成。前体GDF-8蛋白形成均二聚体。在加工期间，于Arg-266处裂解去氨基末端前肽。所裂解的前肽(称为"潜伏相关肽"(latency-associatedpeptide,LAP))可保持与所述均二聚体非共价结合，由此使复合物失活(宫园(Miyazono)等人(1988)生物化学杂志(丄S!'o/.C/zem.)263:6407-6415;威克菲尔德(Wakefield)等人(1988)生物化学杂志(义5!'oLC/em.)263:7646-7654;布朗(Brown)等人(1990)生长因子(GtowAFactors),3:35-43;和提思(Thies)等人(2001)生长因子(Grav^/z,18:251-259)。成熟GDF-8与前肽的复合物通常被称为"小潜伏复合物"(简崔(Gentry)等人(1990)生物化学Woc/i麵勿)，29:6851-6857;德里克(Derynck)等人(1995)自然,316:701-705;和马萨戈(Massague)(1990)细胞生物学年评(A"".Ce〃編,),12:597-641)。也已知其它蛋白质与成熟GDF-8结合且抑制其生物学活性。所述抑制性蛋白包括卵泡抑素(follistatin)和卵泡抑素相关蛋白(伽姆(Gamer)等人(1999)发育生物学(Dev.5!'o/"),208:222-232)。术语"RAGE"是指晚期糖基化终产物受体。RAGE是免疫球蛋白超家族的多配体细胞表面成员。RAGE由胞外域、单跨膜域和胞质尾组成。受体的胞外域由一个V型免疫球蛋白域、接着两个C型免疫球蛋白域组成。RAGE也存在可溶性形式(sRAGE)。RAGE是一种模式识别受体，其结合数种不同内源性分子，引起多种细胞反应，包括细胞因子分泌、细胞氧化应激增加、轴突长出和细胞迁移。RAGE的配体包括晚期糖基化终产物(advancedglycationendproduct,AGE),其在长期高血糖状态下形成。除AGE外，RAGE的已知配体包括具有为淀粉样沉积物和促炎介质特征的(3-折叠原纤维的蛋白质，包括S100/钙粒蛋白(calgranulins)(例如S100A12、S100B、S100A8-A9)、血清淀粉样蛋白(serumamyloid,SAA)(纤丝形式)、p-淀粉样蛋白(A-|3)和高迁移率族box-1染色体蛋白1(highmobilitygroupbox-1chromosomalprotein1，腹GB1，也称为两性蛋白(amphoterin))。RAGE由许多细胞类型(例如，内皮细胞和平滑肌细胞、巨噬细胞和淋巴细胞)表达，且在许多不同组织(包括肺、心脏、肾、骨骼肌和脑)中表达。在慢性炎症状态(诸如类风湿性关节炎和糖尿病性肾病)下，表达增加。尽管生理功能尚不清楚，但RAGE与炎症反应有关且可能在包括成肌细胞分化和神经发育在内的多种发育过程中具有作用。许多重要人类病症与RAGE配体的产生增加相关或与RAGE自身的产生增加相关。这些病症包括例如许多慢性炎症性疾病，包括类风湿性和牛皮癣性关节炎和肠道疾病、癌症、糖尿病和糖尿病性肾病、淀粉样变性、心血管疾病和脓毒病。举例来说，已显示RAGE配体中的一种，HMGB-1，在鼠类脓毒病的两个模型中是致命性的晚期介质，且认为RAGE与配体(诸如HMGB1)之间的相互作用在脓毒病和其它炎症性疾病的发病机制中发挥重要作用。术语"A-(3"是指脑中的淀粉样蛋白斑块的主要成分。A-f3肽是一种称为淀粉样前体蛋白(amyloidprecursorprotein,APP)的较大跨膜糖蛋白的39-43个氨基酸的4-kDa内部片段。由于不同分泌酶对APP的蛋白水解加工，因此A-(3主要以短形式(长度为40个氨基酸)和长形式(长度范围为42-43个氨基酸)存在。APP的疏水性跨膜域的一部分见于A-p的羧基末端处，且可解释A-P聚集成斑块的能力，尤其在长形式的情况下。淀粉样蛋白斑块积累于脑中最终导致神经元细胞死亡。与这种神经恶化相关的身体症状表示阿茲海默氏症(Alzheimer'sdisease,AD)的特征。淀粉样蛋白斑块积累于脑中也与唐氏综合症(Down'ssyndrome)和其它认知病症相关。已将APP蛋白中的数种突变与AD的存在相关联(参见例如，勾特(Goate)等人,自然(Nature)349:704，1991(缬氨酸717变为异亮氨酸);沙尔捷哈兰(ChartierHarlan)等人自然(Nature)353:844,1991(缬氨酸717变为甘氨酸)；默雷尔(Murrell)等人，科学(Science)254:97,1991(缬氨酸717变为苯丙氨酸)；穆兰(Mullan)等人，自然-遗传学(NatureGenet.)1:345,1992(使赖氨酸595-甲硫氨酸596变为天冬酰胺595-亮氨酸596的双突变)，其中每一参考案均以全文引用的方式并入本文中)。认为所述突变通过增加或改变APP加工为A-(3，尤其APP加工为增加量的A-P长形式(即，A-(31-42和A-pi-43)而引起AD。认为其它基因(诸如早老蛋白基因，PS1和PS2)中的突变间接影响APP的加工而产生增加量的长形式A-P(参见哈代(Hardy),TINS20:154,1997，其以全文引用的方式并入本文中)。在某些实施例中，根据本发明纯化抗-A-P抗体。如本文中所使用，术语"IL-22"是指白细胞介素-22，包括IL-22的全长未加工前体形式，以及从翻译后裂解得到的成熟形式。本术语还指IL-22的维持至少一些与成熟IL-22相关的生物学活性的任何片段和变异体，包括已经被修饰的序列。术语"IL-22"包括人类IL-22,以及其它脊椎动物物种IL-22。人类和啮齿动物IL-22以及针对IL-22的抗体的氨基酸和核苷酸序列揭示于例如美国申请公开案第2003-0157106号、第2005-0153400号、第2005-0042220号和第2005-0158760号和美国专利第6，939，545号中。所有这些公开案的内容都以全文引用的方式并入本文中。白细胞介素-22(IL-22)是一种先前表征的II型细胞因子，其显示与IL-10的序列同源性。其表达在T细胞中被IL-9或刀豆球蛋白A(ConcanavalinA，ConA)上调(劳'杜穆蒂尔(DumoutierL.)等人(2000)美国国家科学院院刊(PracWa"AcWSc!'USA)97(18):10144-9)。研究已显示IL-22mRNA的表达在活体内响应于脂多糖(LPS)投与而诱发，和IL-22调节表示急性期反应的参数(劳《杜穆蒂尔(DumoutierL.)等人(2000)见上；德皮特曼(PittmanD.)等人(2001)基因与免疫(Ge""/mmim!'ty)2:172)，和通过使用中和抗-IL-22抗体降低IL-22活性在小鼠胶原蛋白诱发性关节炎(mousecollagen-inducedarthritis,CIA)模型中改善炎症性症状。因此，IL-22拮抗剂(例如中和抗-IL-22抗体和其片段)可用于活体内诱发免疫抑制，例如用于治疗自身免疫病症(例如关节炎病症，诸如类风湿性关节炎)；呼吸病症(例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD));例如皮肤(例如牛皮癣)、心血管系统(例如动脉粥样硬化)、神经系统(例如阿茲海默氏症)、肾(例如肾炎)、肝(例如肝炎)和胰腺(例如胰腺炎)的炎症性病状。术语"宿主细胞蛋白(hostcellprotein,HCP)"是指在细胞培养或发酵期间由宿主细胞产生的非产物蛋白质。因此，在一些实施例中，含有产物的洗脱物具有以小于百万分之一百(100ppm)HCP(例如小于约50ppm或小于约20ppm)存在的HCP。HCP组合物极不均匀且依赖于蛋白质产物和所用的纯化程序。在生物产品得到用于治疗用途的任何上市批准之前，必须根据ICH和FDA准则来定量测量产物中污染蛋白质(诸如HCP)的含量。术语"柱流出物"是指在负载循环期间或在正施加负载的时期中离开介质或柱的液体。B.实施方式本发明提供使用包括用精氨酸或精氨酸衍生物洗涤经结合的介质的程序从含有一或多种杂质的负载流体中纯化和回收产物的方法。在一优选实施例中，所述介质是蛋白A色谱柱。在一实施例中，产物是蛋白质，例如治疗性蛋白，包括肽抗体。在其它实施例中，所述产物是分泌性蛋白；融合蛋白，例如受体融合蛋白或Ig-融合蛋白，包括Fc-融合蛋白；可溶性受体；生长因子；酶；凝血因子；含Fc蛋白；免疫结合物；细胞因子；白细胞介素；激素；或治疗性酶。在本发明的其它实施例中，产物是蛋白质，例如抗体，其具有Ch2/Ch3区并因此适合通过蛋白A色谱法纯化。术语"CH2/CH3区"是指免疫球蛋白分子Fc区中的与蛋白A相互作用的那些氨基酸残基。在一些实施例中，所述Ch2/Ch3区含有完整Ch2区，接着是完整CH3区。在其它实施例中，CH2/CH3区含有免疫球蛋白的Fc区。含有CH2/CH3区的蛋白质的实例包括抗体、免疫粘附素和融合蛋白，其包括与CH2/CH3区融合或结合的所关注蛋白质。在某些实施例中，当将负载流体加载到介质上时，至少一种杂质与介质和/或产物结合，且使用至少一种含有精氨酸或精氨酸衍生物的洗涤液来去除与介质和/或产物结合的杂质。所述蛋白质可为分泌性蛋白。蛋白质可为抗体、抗体的抗原结合片段、可溶性受体、受体融合物、细胞因子、生长因子、酶或凝血因子。在本发明的一些实施例中，使用本发明的方法纯化的蛋白质是抗体或其抗原结合片段。如本文中所使用，术语"抗体"包括包含至少一个且通常两个VH域或其部分和/或至少一个且通常两个VL域或其部分的蛋白质。在某些实施例中，所述抗体是两个免疫球蛋白重链和两个免疫球蛋白轻链的四聚体，其中所述免疫球蛋白重链和轻链通过例如二硫键相互连接。抗体或其一部分可从任何来源获得，包括(但不限于)啮齿动物、灵长类动物(例如人类和非人类灵长类动物)、骆驼类、鲨鱼以及重组产生，例如嵌合、人源化和/或活体外产生(例如通过所属领域的技术人员所熟知的方法)。18术语抗体的"抗原结合片段"中所涵盖的结合片段的实例包括(i)Fab片段，即由VL、VH、CL和CH1域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，即包含在铰链区由二硫桥键联的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CHl域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH域组成的Fv片段；(v)dAb片段，其由VH域组成；(vi)骆驼类或骆驼化可变域，例如VHH域；(vii)单链Fv(scFv);(viii)双特异性抗体；禾B(ix)与Fc区融合的免疫球蛋白的一或多个抗原结合片段。此外，尽管Fv片段的两个域VL和VH由单独基因编码，但可使用重组方法，通过使其能够形成为单蛋白质链(其中VL和VH区配对形成单价分子)的合成连接子将其接合(称为单链Fv(scFv);参见例如，伯德(Bird)等人(1988)科学"c/匿e)242:423-26;休斯顿(Huston)等人(1988)美国国家科学院院刊脂/.AcfldUD85:5879-83)。所述单链抗体也希望涵盖于术语抗体的"抗原结合片段"中。这些抗体片段是使用所属领域的技术人员已知的常规技术来获得，且以与完整抗体相同的方式评估片段的功能。在一些实施例中，术语"抗原结合片段"涵盖单域抗体。单域抗体可包括互补决定区为单域多肽的一部分的抗体。实例包括(但不限于)重链抗体、天然缺少轻链的抗体、源自常规4链抗体的单域抗体、工程化抗体和不同于源自抗体的那些的单域骨架。单域抗体可为此项技术中的任一者或任何未来单域抗体。单域抗体可源自任何物种，包括(但不限于)小鼠、人类、骆驼、美洲驼、山羊、兔、母牛和鲨鱼。根据本发明的一方面，如本文中所使用的单域抗体是称为缺少轻链的重链抗体的天然存在的单域抗体。所述单域抗体例如揭示于WO9404678中。为明确起见，这种源自天然缺少轻链的重链抗体的可变域在本文中称为VHH或纳米抗体以使其区别于4链免疫球蛋白的常规VH。这类VHH分子可源自例如骆驼、美洲驼、单峰驼、羊驼和原驼的骆驼科(Camelidae)物种中所产生的抗体。除骆驼科外的其它物种可能产生天然缺少轻链的重链抗体；这类VHH在本发明的范围内。抗原结合片段可任选地进一步包括增强例如稳定性、效应细胞功能或补体固定中的一或多者的部分。举例来说，抗原结合片段可进一步包括聚乙二醇化部分、白蛋白或者重链和/或轻链恒定区。另外，本发明的方法可用于纯化小分子免疫药物(SMIPTM)类药物(Trubion制药公司，华盛顿州西雅图(TrubionPharmaceuticals,Seattle,WA))。SMIP是包含对于相关结构(cognatestructure)(诸如抗原、反受体(counterreceptor)等)的结合域、具有一个半胱氨酸残基或无半胱氨酸残基的铰链区多肽和免疫球蛋白CH2和CH3域的单链多肽(亦参见www.trubion.com)。SMIP和其用途与应用揭示于例如美国公开专利申请案第2003/0118592号、第2003/0133939号、第2004/0058445号、第2005/0136049号、第2005/0175614号、第2005/0180970号、第2005/0186216号、第2005/0202012号、第2005/0202023号、第2005/0202028号、第2005/0202534号和第2005/0238646号以及其相关专利族成员中，其全部都以全文引用的方式并入本文中。除了"双特异性"或"双功能性"抗体，抗体所具有的每一结合位点相同。"双特异性"或"双功能性"抗体是具有两个不同重链/轻链对和两个不同结合位点的人工杂合抗体。双特异性抗体可通过包括杂交瘤的融合或Fab'片段的连接在内的多种方法来产生。参见例如，宋斯维莱(Songsivilai)和拉赫曼(Lachmann),临床与实验免疫学(C"Vz./mm画Z.)79:315-321(1990);克斯特林(Kostelny)等人，免疫学杂志(J.//nmw"oZ.)148,1547-1553(1992)。在蛋白质是抗体或其片段的实施例中，其可包括至少一个或两个全长重链和至少一个或两个轻链。或者，抗体或其片段可仅包括抗原结合片段(例如Fab、F(ab')2、Fv或单链Fv片段)。抗体或其片段可为单克隆或单特异性抗体。抗体或其片段也可为人类、人源化、嵌合、CDR移植或活体外产生的抗体。在其它实施例中，抗体具有选自例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。在另一实施例中，抗体具有选自例如k或X的轻链。在一实施例中，改变(例如突变)所述恒定区以改变抗体的性质(例如增加或减少以下一或多者Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基的数目、效应细胞功能或补体功能)。通常，抗体或其片段与预定抗原特异性结合，例如与例如神经退化性、代谢、炎症性、自身免疫和/或恶性病症的病症相关的抗原。可通过本发明的方法分离的示范性抗体包括(但不限于)针对RAGE、A-(3肽、白细胞介素-13(IL-13)、白细胞介素-22(IL-22)、5T4和生长和分化因子-8(GDF-8)的抗体。用于本文所述的方法的抗体制剂可来自许多来源，包括(但不限于)免疫动物的血清、腹水流体、杂交瘤或骨髓瘤上清液、源自培养表达所述抗体分子的重组细胞系的条件培养基，或源自产抗体细胞的细胞提取物。在本发明的一实施例中，产物是来自产抗体重组细胞系的条件培养基的抗体。尽管基于本文的揭示内容，在不同细胞系之间和各种不同的抗体产物之间会存在一些变化，但使本文的本发明适应于抗体蛋白与产生细胞系的特定组合是完全处在所属领域技术人员的能力范围内。在某些实施例中，当将负载流体加载到介质时，至少一种杂质与介质和/或产物结合，且使用至少一种含有精氨酸或精氨酸衍生物的洗涤液来去除与介质和/或产物结合的杂质。在本发明的一实施例中，纯化产物含有小于60%的杂质(例如宿主细胞蛋白)，在一实施例中小于40%的杂质，在一实施例中小于20%的杂质，在一实施例中小于10%的20杂质，在一实施例中小于5%的杂质，在一实施例中小于3%的杂质，且在另一实施例中小于1%的杂质。杂质包括(但不限于)不合需要的蛋白质变异体，诸如聚集蛋白、高分子量物质、低分子量物质和片段以及脱酰胺化物质；来自分泌待纯化的蛋白质的宿主细胞的其它蛋白质；宿主细胞DNA;来自细胞培养基的成分；为用于亲和色谱法的吸附剂的一部分、在先前纯化步骤期间浸入样品中的分子，例如蛋白A和蛋白G;内毒素；核酸；病毒，或上述任一种的片段。用于本文所述的方法中的介质为例如亲和色谱柱、疏水性相互作用色谱柱、固定金属亲和色谱柱、尺寸排阻色谱柱、渗滤、超滤、病毒去除过滤和/或离子交换色谱柱、蛋白A色谱柱或蛋白G色谱柱。蛋白A色谱柱可为例如PROSEP-Atm(密理博公司，英国(Millipore，U.K.))、蛋白A琼脂糖FASTFLOW(通用电气医疗集团，新泽西州皮斯卡塔韦(GEHealthcare,Piscataway,N丄))、TOYOPEARL650M蛋白A(东槽达公司，宾夕法尼亚州费城(TosoHassCo.,Philadelphia,Pa.))或MabSelectTM柱(通用电气医疗集团，新泽西州皮斯卡塔韦(GEHealthcare,Piscataway,N丄))。在使介质与负载流体接触之前，可能有必要调节诸如pH值、离子强度和温度以及在一些情况下不同种类物质的添加等参数。因此，任选步骤是通过用溶液(例如用于调节pH值、离子强度等或用于引入洗涤剂的缓冲液)洗涤介质来进行介质的平衡，从而产生产物的结合和纯化的必要特征。在本发明的一实施例中，用含有精氨酸或精氨酸衍生物的洗涤液来平衡和洗涤蛋白A柱，由此产生纯化所述产物的必要特征。在本发明的一实施例中，可使用含有盐(例如约100mM到约150mMNaP04、约100mM到约150mM乙酸钠和约100mM到约150mMNaCl)的溶液来平衡蛋白A柱。平衡缓冲液的pH值可在约6.0到约8.0的范围内。在一实施例中，平衡缓冲液的pH值为约7.5。平衡缓冲液可含有约10mM到约50mM的Tris。在另一实施例中，缓冲液可含有约20mM的Tris。使介质(例如蛋白A柱)与负载流体接触后，洗涤经结合的介质。根据本发明，用于本文所述的方法中的洗涤液含有精氨酸或精氨酸衍生物。所述精氨酸衍生物可为(但不限于)乙酰精氨酸、胍丁胺、羟基精氨酸、N-ct-丁酰基-L-精氨酸或N-a-特戊酰基精氨酸。洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度介于约0.1M与约2.0M之间(例如0.1M、0.4M、0.5M、1.0M、1.5M或2.0M)，或介于约0.5M与约1.0M之间(例如0.5M、0.6M、0.7M、0.8M、0.9M或1.0M)。在某些实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约0.1M、0.2M、0.3M、0.4M、0.5M、0.6M、0.7M、0.8M或0.9M。在某些实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约1.1M、1.2M、1.3M、1.4M、1.5M、1.6M、1.7M、1.8M、1.9M或2.0M。在某些实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度大于约0.5M且小于约2.0M(例如0.55M、0.75M、1.0M、1.25M、1.5M或1.75M或2.0M)，或大于约0.5M且小于约1.0M(例如0.55M、0.75M或1.0M)。在一实施例中，精氨酸的浓度不为1M。在一些实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度大于1M。在一些实施例中，洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度小于1M。在其它实施例中，洗涤液可含有约0.1M到约0.9M的精氨酸或精氨酸衍生物。在某些实施例中，精氨酸或精氨酸衍生物的浓度可为约0.2M到约0.8M、约0.3M到约0.7M或约0.4M到约0.6M。在其它实施例中，洗涤液可含有约1.1M到约3.0M或约1.1M到约2.0M的精氨酸或精氨酸衍生物。在某些实施例中，精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约1.2M到约2.8M、约1.3M到约2.6M、约1.4M到约2.4M、约1.5M到约2.2M、约1.6M到约2.0M或约1.8M到约2.0M。在某些实施例中，精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约1.2M到约1.9M、约1.3M到约1.8M、约1.4M到约1.7M或约1.5M到约1.6M。洗涤液的pH值通常介于约4.5与约8.0之间，例如4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5禾n8.0。在一些情况下，洗涤液的pH值大于5.0且小于约8.0,例如5.5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0。洗涤液可含有20mM到50mM的Tris(例如20mM、30mM、40mM或50mM)。在一实施例中，用5柱体积的洗涤液洗涤经结合的介质，接着为洗脱步骤。在本发明的某些实施例中，产物可从经洗涤的介质(例如蛋白A柱)洗脱。为了从蛋白A柱洗脱产物，使经洗涤的介质与洗脱缓冲液接触。在一些实施例中，所述洗脱缓冲液含有约15mM到约50mM的NaCl。在其它实施例中，洗脱缓冲液可含有约50mM到约150mM的精氨酸或精氨酸衍生物。在其它实施例中，洗脱缓冲液可含有50mM到150mM的甘氨酸。洗脱缓冲液也可含有约20mM到约30mM的HEPES。洗脱缓冲液也可含有约25mM到约50mM的乙酸。洗脱缓冲液的pH值可在约2.0到约4.0的范围内。在一实施例中，洗脱缓冲液的pH值为约3.0。在洗脱抗体后可任选地清洗介质(即洗提和再生)。这一程序通常定期进行以使杂质在固相表面上的积累最少和/或使基质灭菌以避免产物受微生物污染。缓冲液成分可根据所属领域技术人员的知识来调节。样品缓冲液组成范围在以下实例中提供。并非所有缓冲液或步骤都是必要的，而提供仅是为了说明。如实例中所述，可使用高通量筛选法来有效地最优化蛋白A柱色谱法的缓冲条件。在方法的一实施例中，洗脱物包括经分离的产物且与洗涤液中使用小于约0.1M的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述经分离的产物的纯度增加。22在另一实施例中，洗脱物包括经分离的产物，且与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述产物与至少一种杂质的比率增加。在一些情况下，洗脱物含有产物，且与洗涤液中使用小于约0.1M的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述产物与宿主细胞蛋白的比率增加。洗脱物可包括产物且与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述产物与宿主细胞蛋白的比率增加。混浊度提供对不溶性产物、不溶性杂质和产物与杂质的不溶性复合物的度量。混浊度也可由亚细胞微粒和细胞碎片引起。一般而言，洗脱物混浊度越低，产物质量越合乎需要。混浊度可使用此项技术中已知的方法来测定。举例来说，可使用散射测浊法(nephelometricmethods)(贝克(Baker)等人，生物技术动向(TrendsBiotechnoU2002年4月；20(4):149-56)或光学密度。光学密度通常通过在约320nm到约650nm的范围下测量吸光度来测定。在一些情况下，与洗涤液中使用小于约0.1M的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法中的洗脱物混浊度相比，所述洗脱物的混浊度降低。在某些方法中，与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述洗脱物的混浊度降低。在某些实施例中，本发明的方法使得含有产物的洗脱物混浊度降低。在其它实施例中，与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，本方法使得含有产物的洗脱物混浊度降低以及杂质减少。在某些实施例中，本方法并不包括使用任何另外的上游过滤，例如阴离子上游吸附过滤。尽管可单独使用本发明的纯化方法，但其可与其它纯化技术组合使用。在一实施例中，在采用本文所述的方法的同时，可使用一或多种工艺(例如)来制备负载流体以降低污染物或杂质负载挑战。在一些情况下，使用一或多种工艺来加工洗脱物，例如去除洗脱物中的污染物或杂质。本发明还涉及一种根据本文所述的方法制备的产物。一般而言，通常将需要进一步分离和/或纯化根据本发明分离的产物且根据标准方法将其调配以用于医药用途。关于蛋白质，参见例如蛋白质纯化原理与实践(7VWe!'"PKn/i'ca"o"尸""c/pZesa"d尸racrice)第2^f,施普林格出版社(Springer-Verlag),纽约(NewYork),1987;苏'杰*希金斯(Higgins，S丄)和本嚼奴姆斯(Hames，B.D.)(编)，以及马'皮多伊彻(Deutscher,M.P.),马'莱洒蒙(Simon,M丄)，杰纟内阿贝尔森(Abelson,J.N.)(编)，蛋白质纯化指南酶学方去(Gm'defoiVofe/w尸Kn/i'cariowMef/i。(is1五nz:ymoZog;y)(酶学方7去系歹U(MethodsinEnzymologySeries),第182巻)，学术出版社(AcademicPress),1997，以引用的方式23并入本文中。所属领域的技术人员应理解所用的准确技术将依产物的特征而变化。具有药理学活性的本发明产物将适用于制备药物。可将这些药物投与个体或者可先加以调配来通过任何可利用的途径传递，所述途径包括(但不限于)非经肠(例如静脉内)、皮内、皮下、经口、经鼻、经支气管、经眼、透皮(局部)、透粘膜、经直肠和经阴道途径。根据此项技术中已知的方法，将产物的医药组合物调配为与其预期投药途径相容，参见例如，"雷明登氏药学的理论与实践(Remington:TheScience&PracticeofPharmacy)",第19版，威廉姆斯公司(Williams&Williams),(1995),和"医师桌上手册(Physician'sDeskReference)",第52版，医药经济公司(MedicalEconomics),新泽西州蒙特威尔(Montvale，N丄)(1998)。在一些实施例中，使用无菌水(例如SWFI)、缓冲生理盐水(例如磷酸盐缓冲生理盐水)、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)或其适合的混合物调配产物。可使用本文所述的方法回收的产物的非限制性实例包括蛋白质或肽，例如抗体、抗体片段、重组蛋白、天然分泌性蛋白、工程化而被分泌的蛋白质或肽、由细胞产生的非蛋白产物或上述产物的组合。实例本发明进一步通过下列实例来说明。所述实例的提供仅用于说明性目的。不应将其理解为以任何方式限制本发明的范围或内容。进行实验以在使用亲和介质作为分离工艺一部分的方案中鉴别适用于分离由细胞细菌或组织产生的产物的方法。在这些实验中，使用MabSelectTM蛋白A柱结合所述产物。GDF-8mAb-1:蛋白A洗漆缓冲液在HCP和混浊度降低以及产物回收率方面的比狡首先使用高通量筛选(HTS)法对各种洗涤液进行评估。起初用来自中国仓鼠卵巢("CHO")细胞培养工艺的条件培养基装载MabSelectTM蛋白A柱。接着使MabSelect树脂成浆且将100pL树脂浆料分配于96孔微量滴定板的各孔中。接着用评估中的测试溶液洗涤所述微量滴定板的各孔，且随后用低pH值缓冲液洗脱。通过A320测定来自各孔的洗脱汇集物的峰值混浊度且通过A280测定产物回收率。基于HTS实验的结果，选择产生最高回收率和最低混浊度的测试溶液来使用小规模柱条件搜索运作(columnscoutingrun)进行进一步测试。在柱条件搜索运作中，用含有10mMTris、100mMNaClpH7.5的缓冲液平衡MabSelect蛋白A柱，且装载含有GDF-8mAb-l的CHO条件培养基。接着用5柱体积(CV)的平衡缓冲液冲洗所述柱，且随后用5CV评估中的测试溶液洗涤。随后以低pH值缓冲液洗脱经结合的产物。通过A320或通过浊度计测量经中和的峰值混浊度，通过A280测定产物回收率，且通过ELISA测定HCP含量。用于初始评估的柱尺寸是直径0.5cm或1.1cm和床高度8cm到25cm。表1总结实例1中所述的所有实验的柱操作条件。表1:MabSeiectTM蛋白A柱操作条件柱操作的阶溶液组成体积(柱体积)线速度(cmhr-"盘平衡10mMTris、100mMNaCl，dH7.5》360/450装载条件培养基不适用240装载后冲洗10mMTris、100mMNaCl，dH=7.5240洗涤1可变(参见表2)300洗脱前冲洗10mMTris、lOOmMNaCl,oH=7.5450洗脱50mMNaCl、100mML-精氨酸盐酸盐，。H=1503.0中和2MHEPES,dH=8.0添加5.0%(v/v)洗脱后冲洗50mMTris，pH=8.5450洗提6M盐酸胍150洗提后冲洗10mMTris、100mMNaCl，pH=7.5150/450储存16%(v/v)乙醇4360对于每一次运作，用5柱体积的10mMTris、100mMNaCl(pH7.5)平衡MabSeiectTM蛋白A柱且随后装载到约35毫克产物/毫升树脂上。接着用l柱体积的平衡缓冲液和5柱体积(CV)的评估中的测试洗涤液(参见表2)冲洗柱。在洗涤阶段后用5CV的10mMTris、100mMNaCl(pH7.5)冲洗。接着用100mML-精氨酸、50mMNaCl(pH3.0)从柱洗脱经结合的产物。随后用2MHEPES(pH8.0)将产物汇集物中和到pH7.5。用2CV的6M盐酸胍洗提柱。用4CV的10mMTris、100mMNaCl(pH7.5)从柱去除所述胍，随后储存于16%乙醇(4CV)中。所有柱操作均在室温下进行。表2中列出评估HCP和峰值汇集物混浊度降低的各种洗涤液。当使用1MNaCl对照洗涤液时(图1)，在蛋白A洗脱汇集物中观察到严重的沉淀和产物损失。另外，通过蛋白A柱步骤的HCP清除率小于1log1Q。与诸如10%异丙醇(IPA)、0.5M盐酸胍(GuHCl)或2MTris-HCl的替代性洗涤液相比，精氨酸洗涤液更有效地减少HCP和降低洗脱汇集物混浊度，同时维持良好的产物回收率(图l)。25表2:所评估的洗涤液列表<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>实例2GDF-8mAb-2:蛋白A洗涤缓冲液在HCP和混浊度降低以及产物回收率方面的比逡使用MabSelectTM蛋白A柱小规模地纯化来自CHO细胞培养工艺的含有GDF-8mAb-2的条件培养基。用于初始评估的柱尺寸是直径0.5cm或1.1cm和床高度8cm到25cm。用于GDF-8mAb-2纯化的蛋白A操作条件以及评估HCP和峰值汇集物混浊度降低的洗涤液与实例1中所用的那些相同(所评估的测试溶液参见表2)。当使用1MNaCl对照洗涤液时(图2)，在蛋白A洗脱汇集物中观察到严重的沉淀和产物损失。另外，通过蛋白A柱步骤的HCP清除率小于1log1Q。与诸如10%异丙醇、0.5M盐酸胍(GuHCl)或2MTris-HCl的替代性洗涤液相比，精氨酸洗涤液更有效地去除HCP和降低洗脱汇集物混浊度，同时维持产物回收率大于75%(图2)。实例3IL-13mAb-l:蛋白A洗涤缓冲液在HCP和混浊度降低以及产物回收率方面的比铰起初使用高通量筛选(HTS)法对通过蛋白A柱步骤的数种洗涤液的混浊度降低和HCP减少进行评估。用MabSelectTM树脂装填25mL柱且装载CHO细胞条件培养基到每毫升树脂25mglL-13mAb-1的最终负载挑战。接着使树脂成浆且将100^L树脂浆料分配于96孔微量滴定板的各孔中。接着用评估中的测试溶液洗涤所述微量滴定板的各孔，且用50mM甘氮酸、35mMNaCl(pH3.0)洗脱经结合的产物。表3列出本研究中所评估的所有洗涤液。通过A320测定来自各孔的洗脱汇集物的峰值混浊度且通过A280测定产物回收率。表3:以1号HTS筛评估的洗涤液<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>*带电的十六烷基三甲基溴化铵(lmM=CMC)**3-[(3-胆酰胺丙基)-二甲基-铵]-1-丙烷磺酸盐通过比较经中和的洗脱汇集物的标准化A320值来评定评估中的洗涤液的有效性。五种测试溶液，精氨酸、CaCl2、盐酸胍、IPA和Tris比1MNaCl对照洗涤液更有效地降低经中和的峰值汇集物混浊度值。使用小规模柱条件搜索运作进一步测试精氨酸、CaCl2、Tris禾CIIPA。使用1.1cm(直径)X8cm(床高度)的柱进行这些评估。使用在室温下操作的MabSelectTM蛋白A柱小规模地纯化来自CHO细胞培养的含有所述单克隆抗体的条件培养基。对于这些运作将负载挑战定为30mg/mL树脂。表4中总结用于条件搜索运作的操作条件。简单说来，平衡MabSdectTM蛋白A柱且装载含有IL-13mAb-1的CHO细胞条件培养基。接着用5柱体积的高盐缓冲液、接着5柱体积的评估中的洗涤液洗涤所述柱。接着用一系列低盐溶液洗涤柱而为洗脱步骤作准备。接着用50mM甘氨酸、15mMNaCl(pH3.0)洗脱经结合的产物。通过浊度计测量经中和的峰值混浊度，通过A280测定产物回收率，且通过ELISA测定HCP含量。本实验的结果总结于图3中。表4:用于条件搜索运作的操作条件操作溶液组成柱体积流速(cm(CV)hr-1)平衡150mMNaCl、20mMTris:pH=7.5300装载条件培养基300装载后冲洗l.OMNaCl、20mMTris:dH=7.5300洗涤测试溶液300洗脱前冲洗135mMNaCl、50mMTris;pH=7.5300洗脱前冲洗25mMNaCl、lOmMTris;pH=7.5300洗脱15mMNaCl、50mM甘氨酸dH=3.05(3CV峰300值体积)洗提6.0M盐酸胍300储存16%(v/v)乙醇300中和2.0MTris;dH8.51%(v/v)300当使用1MNaCl对照洗涤液时，经中和的峰值汇集物混浊度值为约20NTU，且显著低于实例1和2中所报告的值。与1MNaCl对照组相比，精氨酸、CaCh禾PTris更有效地降低经中和的峰值汇集物混浊度。然而，在有效降低经中和的峰值汇集物混浊度的三种洗涤液中，精氨酸更有效地减少HCP而不影响产物回收率。通过用0.4M精氨酸(pH5.0)洗涤液的MabSelectTM蛋白A步骤的HCP减少是用1MNaCl对照洗涤液的对应值3.5倍高(图3)。实例4IL-22mAb:蛋白A洗涤缓冲液在HCP和混浊度降低以及产物回收率方面的比较起初使用HTS法对通过蛋白A柱步骤的数种洗涤液的混浊度降低和HCP减少进行评估。用MabSelectTM树脂装填25mL柱且装载CHO细胞条件培养基到每毫升树脂25mgIL-22mAb的最终负载挑战。接着使树脂成浆且将100树脂浆料分配于96孔微量滴定板的各孔中。接着用评估中的测试溶液洗涤所述微量滴定板的各孔，且用低pH值缓冲液洗脱经结合的产物。接着用高pH值缓冲液中和洗脱汇集物且通过A320测定峰值混浊度并通过A280测定产物回收率。基于HTS实验的结果，选择产生最高回收率和最低混浊度的测试溶液来使用小规模柱条件搜索运作进行进一步测试，其条件总结于表5中。表5:用于柱条件搜索运作的测试条件28<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>如图4中所示，所有测试条件产生相当的产品回收率。用于运作2中的精氨酸洗涤液和用于运作5中的Tris洗涤液使HCP减少最大。然而，用于运作2中的精氨酸洗涤液具有比用于运作5中的Tris洗涤液接近2倍低的混浊度值。实例5RAGEmAb:蛋白A洗涤缓冲液在HCP和混浊度降低以及产物回收率方面的比较起初使用HTS法对通过蛋白A柱步骤的数种洗涤液的混浊度降低和HCP减少进行评估。用MabSelectTM树脂装填25mL柱且装载CHO细胞条件培养基到每亳升树脂25mgRAGEmAb的最终负载挑战。接着使树脂成浆且将100树脂浆料分配于96孔微量滴定板的各孔中。接着用评估中的测试溶液洗涤所述微量滴定板的各孔，且用低pH值缓冲液洗脱经结合的产物。接着用高pH值缓冲液屮和洗脱汇集物且通过A320测定峰值混浊度并通过A280测定产物回收率。对于大多数测试溶液，HTS实验产生可接受的回收率和混浊度。基于这些结果和先前经验，评估精氨酸且选择作为这种产物的洗涤条件。用5柱体积(CV)的20mMTris、150mMNaCl(pH7.5)平衡5cm(d)X23cm(h)MabSdectTM蛋白A柱且随后装载到约35毫克产物/毫升树脂。接着用5CV的0.5M精氨酸、50mMTris(pH7.5)洗涤所述柱。在洗涤阶段后用3CV的39mMNaCl、5mMTris(pH7.5)进行洗脱前冲洗。接着用22mMNaCl、50mM甘氨酸(pH3.0)从柱洗脱经结合的产物且用2.0MTris(pH8.2)中和到pH7.5。用5CV的50mMNaOH、500mm硫酸钠洗提柱且储存于5CV的16%(v/v)乙醇、50mMTris(pH7.5)中。所有柱操作均在室温下进行且总结于表7中。表7:用于柱条件搜索运作的操作条件操作溶液组成柱体积流速(CV)(cmhr")平衡150mMNaCl、20mMTris:300dH7.5装载条件培养基300洗涤0.5M精氨酸、50mMTris，300dH7.5洗脱前冲洗39mMNaCl、5mMTris:dH3007.5洗脱22mMNaCl、50mM甘氨酸；5(3CV峰值体积)300dH3.0洗提50mMNaOH、500mM硫酸钠300储存16%(v/v)乙醇、50mMTris,300中和2.0MTris，dH8.20.9%(v/v)30030如图5中所示，精氨酸洗涤液产生可接受的产品回收率，同时提供所需水平的HCP去除和经中和的峰值混浊度降低。实例6A-BmAb:蛋白A洗涤缓冲液在HCP和混浊度降低以及产物回收率方面的比较首先使用高通量筛选(HTS)法对各种洗涤液进行评估。起初用来自中国仓鼠卵巢(CHO)细胞培养工艺的条件培养基装载MabSelect蛋白A柱。接着使MabSelect树脂成浆且将100^iL树脂浆料分配于96孔微量滴定板的各孔中。接着用评估中的测试溶液(参见表8)洗涤所述微量滴定板的各孔，且随后用低pH值缓冲液洗脱。通过A320测定来自各孔的洗脱汇集物的峰值混浊度且通过A280测定产物回收率。基于HTS实验的结果，选择产生最高回收率和最高HCP去除的测试溶液来使用小规模柱运作进行进一步测试。这些洗涤液是精氨酸和CaCl2。表8:所测试的HTS洗涤液洗涤赋形剂浓度NaCl0.5M、1.0M、1.5M、2.0M精氨酸0.5M、1.0M、1.5M、2.0MCaCl20.5M、1.0M、1.5M、2.0MTris0.5M、1.0M、1,5M、2.0M在柱运作中，使用1.6cm(直径)X15cm(床高度)的柱进行这些评估。用含有50mMTris、0.15MNaClpH7.5的缓冲液平衡MabSelect蛋白A柱，并装载含有A-(3mAb的CHO细胞条件培养基到40mg/mL。接着用2柱体积(CV)的平衡缓冲液冲洗所述柱，且随后用5CV的精氨酸或CaCl2洗涤。接着用10mMTris、10mMNaClpH7.5洗涤柱而为洗脱步骤作准备。随后用50mM甘氨酸、10mMNaClpH3.0洗脱经结合的产物。通过A320或通过浊度计测量经中和的峰值混浊度，通过A280测定产物回收率，且通过ELISA测定HCP含量。表9总结本实例中所述的所有实验的柱操作条件。表9:蛋白A柱操作条件柱操作溶液组成体积(CV)线速度(cm/hr)平衡50mMTris、0.15MNaClpH7.5<300装载条件培养基不适用<30031<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>表10显示A-pmAb洗涤实验的回收率和HCP值的结果。精氨酸和CaCl2是减少宿主细胞蛋白和降低最终峰值汇集物混浊度的相当洗涤液。基于在洗涤期间较低的产物损失，选择0.5M精氨酸作为A-(3mAb工艺的洗涤液。实例7IL-13mAb-2:蛋白A洗涤缓冲液在HCP和混浊度降低以及产物回收率方面的比狡起初使用高通量筛选(HTS)法对通过蛋白A柱步骤的数种洗涤液的混浊度降低进行评估。用MabSelectTM树脂装填25mL柱且装载CHO条件培养基到每毫升树脂50mgIL-13mAb-2的最终负载挑战。接着使树脂成浆且将100]iL树脂浆料分配于96孔微量滴定板的各孔中。接着用评估中的测试溶液洗涤所述微量滴定板的各孔，洗脱经结合的产物，且中和酸性洗脱汇集物。对于HTS，组合地且以不同浓度使用各种赋形剂洗涤液、洗脱缓冲液和滴定剂。用于HTS的赋形剂洗涤液是氯化钙、氯化钠、Tris和精氨酸。用于HTS的洗脱缓冲液是甘氨酸、HEPES和乙酸加上不同浓度的NaCl。用于HTS的滴定剂是Tris、HEPES和咪唑。'使用A320作为代用品进行沉淀，通过比较经中和的洗脱汇集物的标准化A320值来评定洗涤液的有效性。精氨酸证实最有效地降低洗脱峰的A320读数。基于HTS实验的结果，选择产生最高回收率和最低混浊度的测试溶液来使用小规模柱条件搜索运作进行进一步测试。此举结果是对氯化钙、精氨酸和氯化钠(对照组)作为洗涤缓冲液在小规模柱试验中进行进一步测试。使用在室温下操作的MabSelectTM蛋白A柱小规模地纯化来自CHO培养工艺的含有IL-13mAb-2的条件培养基。用于初始评估的柱尺寸是直径1.1cm和床高度20cm到25cm。对于这些运作将负载挑战定为35mg/mL树脂。用于条件搜索运作的条件总结于表11中。表lh用于条件搜索运作的操作条件操作溶液组成柱体积(CV)流速(cmhr1)平衡150mMNaCl、50mMTris;pH=7.5300装载条件培养基-240装载后冲洗150mMNaCl、50mMTris;pH=7.5300洗涤测试溶液(参见表12)5300洗脱前冲洗10mMTris、NaCl浓度等于洗脱缓冲液，pH=7.53300洗脱参见表136CV(3CV峰值体积)300洗提50mMNaOH、500mM硫酸钠180储存16%(v/v)乙醇、50mMTris、150mMNaCI，pH=7.55300中禾口参见表13~1-5%.(v/v)表12:所评估的洗涤液列表参考溶液组成10.5M精氨酸、20mMTris，pH7.520.5M氯化钙、20mMTris，pH7.530.5M氯化钠、20mMTris，pH7.542.0M精氨酸、20mMTris,pH7.551.5M氯化鈣、20mMTris，pH7.56l.OM精氨酸、20mMTris，pH7.57l.OM氯化钙、20mMTris，pH7.572.0M精氨酸、20mMTris，pH7.533表13:所用的洗脱和滴定缓冲液列表<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>简单说来，平衡MabSelectTM蛋白A柱且装载含有IL-13mAb-2的CHO条件培养基。接着用5CV的中度盐缓冲液、接着5CV的评估中的洗涤液洗涤所述柱。接着用3CV的低盐溶液洗涤柱而为洗脱步骤作准备。接着用含有甘氨酸或乙酸作为缓冲物质的溶液(pH3.1)来洗脱经结合的产物。接着独立地用三种不同滴定剂中和此峰值汇集物。用浊度计测量经中和的峰值混浊度，通过A280测量产物回收率，且通过ELISA量化HCP含量。本实验的结果总结于图6中。在所试验的每一浓度下和在各种洗脱缓冲液的情况下(参见表13),发现精氨酸比氯化钙或氯化钠更有效地降低酸性和经中和的峰值汇集物混浊度。无论酸性汇集物是经Tris、HEPES或是咪唑滴定剂中和，这一发现都是一致的(参见表13)。另外，证明精氨酸洗涤液的作用并不局限于经中和的汇集物的最终、离散pH值。在7.5-8.2的pH值范围内(例如7.5、7.7、7.9、8.0、8.1禾B8.2)，经中和的峰值混浊度值随pH值增加而降低。然而，在这一相同范围内，使用精氨酸洗涤液总是产生NTU低于使用氯化钙的情况。对于所试验的各赋形剂洗涤液，所装载产物的回收率均大于95%。HTS数据表明通过用大于1.5M的氯化钙洗涤将会获得显著较小的回收率，这正是不试验这一浓度的原因。所检测的洗涤液物质不能根据峰值汇集物中HCP、HMW和蛋白A的最终浓度来区分。然而，对用l.OM精氨酸洗涤液洗脱的洗涤部分的分析一致揭露HCP的显著含量。洗涤部分中的HCP含量为约49000卯m,而峰值中仅为约22000ppm。这正是精氨酸洗涤液选择性去除HCP的证据。本文所引用的所有参考文献都以全文引用的方式并入本文中且用于所有目的，所述引用的程度就如同已特定地及个别地将各个公开案、专利案或专利申请案以全文引用的方式并入用于所有目的一般。在以引用的方式并入的公开案和专利或专利申请案与本说明书中所含的揭示内容相矛盾的情况下，本说明书希望取代和/或优先于任何所述矛盾的材料。本说明书和权利要求书中所用的所有表示成分数量、反应条件等的数字应理解为在所有情况下由术语"约"修饰。因此，除非与此相反地指出，否则本说明书和随附权利要求书中所述的数值参数为近似值，其可依设法通过本发明获得的所需性质而变化。最低限度且不试图限制将等同原则应用于权利要求书的范围，各数值参数应根据有效位数的数目和普通舍入方法来解释。如所属领域的技术人员将显而易见的，可在不脱离本发明的精神和范围的情况下对本发明作出修改和变化。本文所述的具体实施例仅是以实例方式提供且不希望以任何方式施加限制。希望本说明书和实例仅视为示范性的，而本发明的真实范围和精神由随附权利要求书来说明。3权利要求1.一种分离产物的方法，所述方法包含(a)提供包含产物和一或多种杂质的负载流体；(b)使所述负载流体与介质接触，其中所述介质可在适合于结合所述产物的条件下结合所述产物，由此提供经结合的介质；(c)使所述经结合的介质与一或多种通过所述经结合的介质的洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸，其中精氨酸的浓度不为1M，由此提供经洗涤的介质；(d)在适合于洗脱所述产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触；和(e)收集包含所述产物的洗脱物。2.—种分离产物的方法，所述方法包含-(a)提供包含产物和一或多种杂质的负载流体；(b)使所述负载流体与介质接触，其中所述介质可在适合于结合所述产物的条件下结合所述产物，由此提供经结合的介质；(c)使所述经结合的介质与一或多种通过所述经结合的介质的洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸，其中精氨酸的浓度为约0.1M到约0.9M,由此提供经洗涤的介质；(d)在适合于洗脱所述产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触；和(e)收集包含所述产物的洗脱物。3.—种分离产物的方法，所述方法包含(a)提供包含产物和一或多种杂质的负载流体；(b)使所述负载流体与介质接触，其中所述介质可在适合于结合所述产物的条件下结合所述产物，由此提供经结合的介质；(c)使所述经结合的介质与一或多种通过所述经结合的介质的洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸，其中精氨酸的浓度为约1.1M到约2.0M，由此提供经洗涤的介质；(d)在适合于洗脱所述产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触；和(e)收集包含所述产物的洗脱物。4.一种分离产物的方法，所述方法包含(a)提供包含产物和一或多种杂质的负载流体；(b)使所述负载流体与介质接触，其中所述介质可在适合于结合所述产物的条件下结合所述产物，由此提供经结合的介质；(c)使所述经结合的介质与一或多种通过所述经结合的介质的洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸衍生物，由此提供经洗涤的介质；(d)在适合于洗脱所述产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触；和(e)收集包含所述产物的洗脱物。5.根据权利要求l-4中任一权利要求所述的方法，其中所述产物为蛋白质。6.根据权利要求1-4中任一权利要求所述的方法，其中所述产物为抗体。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体对于生长和分化因子-8(GDF-8)具特异性。8.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体对于白细胞介素-13(IL-13)具特异性。9.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体对于白细胞介素-22(IL-22)具特异性。10.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体对于晚期糖基化终产物受体(RAGE)具特异性。11.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体对于A-(3具特异性。12.根据权利要求l-4中任一权利要求所述的方法，其中所述产物为抗原结合片段。13.根据权利要求1-4中任一权利要求所述的方法，其中所述产物为Ig-融合蛋白。14.根据权利要求1-4中任一权利要求所述的方法，其中所述产物为融合蛋白、含Fc蛋白、免疫结合物、细胞因子、白细胞介素、激素或治疗性酶。15.根据权利要求l-14中任一权利要求所述的方法，其中所述介质为蛋白A色谱柱。16.根据权利要求l-14中任一权利要求所述的方法，其中所述介质为蛋白G色谱柱。17.根据权利要求4所述的方法，其中所述洗漆液中的所述精氨酸衍生物的浓度为约0.1M到约2.0M。18.根据权利要求1所述的方法，其中所述洗涤液中的精氨酸的浓度为约0.1M到约0.9M。19.根据权利要求1所述的方法，其中所述洗涤液中的精氨酸的浓度为约1.1M到约2.0M。20.根据权利要求l所述的方法，其中所述洗涤液中的精氨酸的浓度为约0.5M。21.根据权利要求4所述的方法，其中所述精氨酸衍生物为乙酰精氨酸、胍丁胺、羟基精氨酸(arginicacid)、N-a-丁酰基-L-精氨酸或N-a-特戊酰基精氨酸。22.根据权利要求1-21中任一权利要求所述的方法，其中所述洗涤液的pH值为约4.5到约8.0。23.根据权利要求1-21中任一权利要求所述的方法，其中所述洗涤液的pH值为大于4.5且小于约8.0。24.根据权利要求1-21中任一权利要求所述的方法，其中所述洗涤液的pH值为约7.5。25.根据权利要求1-24中任一权利要求所述的方法，其中所述杂质中的一或多者为宿主细胞蛋白、核酸、产物变异体、内毒素、蛋白A或蛋白G。26.根据权利要求1-24中任一权利要求所述的方法，其中所述杂质中的一或多者为病毒或其片段。27.根据权利要求1-26中任一权利要求所述的方法，其中所述洗脱液包含氯化钠、精氨酸或精氨酸衍生物、甘氨酸、HEPES和乙酸中的至少一种。28.根据权利要求1-27中任一权利要求所述的方法，其中所述洗脱液具有介于约2与约4之间的pH值。29.根据权利要求1-28中任一权利要求所述的方法，其中所述洗脱物包含经分离的产物且与洗涤液中使用小于约0.1M的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述经分离的产物的纯度增加。30.根据权利要求1-28中任一权利要求所述的方法，其中所述洗脱物包含经分离的产物，且与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，其中所述产物与至少一种杂质的比率增加。31.根据权利要求1-28中任一权利要求所述的方法，其中所述洗脱物包含产物，且与洗涤液中使用小于约0.1M的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，其中所述产物与宿主细胞蛋白的比率增加。32.根据权利要求1-28中任一权利要求所述的方法，其中所述洗脱物包含产物，且与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，其中所述产物与宿主细胞蛋白的比率增加。33.根据权利要求1-32中任一权利要求所述的方法，与洗涤液中使用小于约0.1M的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，其中所述洗脱物的混浊度降低。34.根据权利要求1-32中任一权利要求所述的方法，与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，其中所述洗脱物的混浊度降低。35.根据权利要求1-34中任一权利要求所述的方法，其中将所述洗脱物中的所述产物进一步纯化和/或调配以供治疗使用。36.—种产物，其是通过根据权利要求1-35中任一权利要求所述的方法而制备。37.根据权利要求1-35中任一权利要求所述的方法，其中在步骤(a)中至少一种杂质与所述产物结合且在步骤(c)中使所述经结合的介质与一或多种通过所述经结合的介质的洗涤液接触，从而去除所述至少一种与所述产物结合的杂质。38.—种分离抗体的方法，所述方法包含(a)提供包含所述抗体和一或多种杂质的负载流体；(b)使所述负载流体与蛋白A介质或蛋白G介质接触，其中所述介质可在适合于结合所述抗体的条件下结合所述抗体，由此提供经结合的介质；(c)使所述经结合的介质与一或多种洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸或精氨酸衍生物，其中精氨酸的浓度不为1M，由此提供经洗涤的介质；(d)在适合于洗脱所述抗体的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触；和(e)收集包含所述抗体的洗脱物，其中与洗涤液中不使用可检测量的精氨酸的相应方法中所回收的洗脱物相比，所述洗脱物中的所述抗体与宿主细胞蛋白的比率增加且其中所述洗脱物具有降低的混浊度。39.根据权利要求38所述的方法，其中在步骤(c)中所述洗涤液的pH值为约4.5到约8.0。40.根据权利要求38所述的方法，其中所述洗漆液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约0.1M到约0.9M。41.根据权利要求38所述的方法，其中所述洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约1.1M到约2.0M。42.根据权利要求38所述的方法，其中所述洗涤液中的精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约0.5M。43.—种降低包含产物的洗脱物混浊度的方法，所述方法包含(a)提供包含所述产物和一或多种杂质的负载流体；(b)使所述负载流体与介质接触，其中所述介质可在适合于结合所述产物的条件下结合所述产物，由此提供经结合的介质；(c)使所述经结合的介质与一或多种洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸或精氨酸衍生物，其中精氨酸的浓度不为1M，由此提供经洗涤的介质；(d)在适合于洗脱所述产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触，由此产生包含所述产物的洗脱物；和(e)中和所述洗脱物，其中与洗涤液中不使用可检测到的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述洗脱物具有降低的混浊度。44.根据权利要求43所述的方法，其中所述经中和的洗脱物的pH值介于约6.5与约8.2之间。45.根据权利要求43或44所述的方法，其中在步骤(c)中所述洗涤液包含浓度为约0.1M到约2.0M的所述精氨酸衍生物。46.根据权利要求43或44所述的方法，其中在步骤(c)中所述洗涤液包含浓度为约0.1M到约0.9M的精氨酸或精氨酸衍生物。47.根据权利要求43或44所述的方法，其中在步骤(c)中所述洗涤液包含浓度为约1.1M到约2.0M的精氨酸或精氨酸衍生物。48.根据权利要求43或44所述的方法，其中在步骤(c)中所述洗涤液包含浓度为约0.5M的精氨酸或精氨酸衍生物。49.根据权利要求43-48中任一权利要求所述的方法，其中所述洗涤液的pH值为约4.5到约8.0。50.根据权利要求43-49中任一权利要求所述的方法，其中所述方法并不包含阴离子上游吸附过滤。51.—种降低包含产物的洗脱物混浊度和减少杂质的方法，所述方法包含(a)提供包含所述产物和一或多种杂质的负载流体；(b)使所述负载流体与介质接触，其中所述介质可在适合于结合所述产物的条件下结合所述产物，由此提供经结合的介质；(c)使所述经结合的介质与一或多种洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸或精氨酸衍生物，其中精氨酸的浓度不为1M，由此提供经洗涤的介质；(d)在适合于洗脱所述产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触，由此产生包含所述产物的洗脱物；和(e)中和所述洗脱物，其中与洗涤液中不使用可检测到的精氨酸或精氨酸衍生物的相应方法相比，所述洗脱物中的所述产物与至少一种杂质的比率增加且所述洗脱物具有降低的混浊度。52.根据权利要求51所述的方法，其中在步骤(c)中所述洗涤液中的所述精氨酸衍生物的浓度为约0.1M到约2.0M。53.根据权利要求51所述的方法，其中在步骤(c)中所述洗涤液中的所述精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约0.1M到约0.9M。54.根据权利要求51所述的方法，其中在步骤(c)中所述洗涤液中的所述精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约1.1M到约2.0M。55.根据权利要求51所述的方法，其中在步骤(c)中所述洗涤液中的所述精氨酸或精氨酸衍生物的浓度为约0.5M。56.根据权利要求51-55中任一权利要求所述的方法，其中所述洗涤液的pH值为约4.5到约8.0。57.根据权利要求51-56中任一权利要求所述的方法，其中所述方法并不包含阴离子上游吸附过滤。58.—种分离产物的方法，所述方法包含(a)提供包含产物和一或多种杂质的负载流体；(b)使所述负载流体与介质接触，其中所述介质可在适合于结合所述产物的条件下结合所述产物，由此提供经结合的介质；(c)使所述经结合的介质与一或多种通过所述经结合的介质的洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸，其中精氨酸或精氨酸衍生物的浓度大于l.OM，由此提供经洗涤的介质；(d)在适合于洗脱所述产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触；和(e)收集包含所述产物的洗脱物。59.—种分离产物的方法，所述方法包含(a)提供包含产物和一或多种杂质的负载流体；(b)使所述负载流体与介质接触，其中所述介质可在适合于结合所述产物的条件下结合所述产物，由此提供经结合的介质；(c)使所述经结合的介质与一或多种通过所述经结合的介质的洗涤液接触，其中至少一种洗涤液包含精氨酸，其中精氨酸或精氨酸衍生物的浓度小于l.OM，由此提供经洗涤的介质；(d)在适合于洗脱所述产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触，和(e)收集包含所述产物的洗脱物。60.根据权利要求37到59中任一权利要求所述的方法，其中将所述洗脱物中的所述产物进一步纯化和/或调配以供治疗使用。全文摘要本发明涉及从包含产物和一或多种杂质的负载流体分离所述产物和/或降低混浊度和/或减少杂质的方法，所述方法是利用使所述负载流体通过介质，接着通过至少一种包含精氨酸或精氨酸衍生物的洗涤液，且使用洗脱液收集产物。本发明进一步涉及一种使用如本文所述的方法制备的产物。文档编号A61K39/395GK101511387SQ200780032985公开日2009年8月19日申请日期2007年9月7日优先权日2006年9月8日发明者克里斯托弗·加洛,孙淑君申请人:惠氏公司