专利名称：：一种口服纳米生白术结肠片及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及临床应用的一种口服纳米生白术结肠片及其制备方法，属医药技术研究领域。
背景技术：
：随着人口老龄化、饮食习惯改变以及社会、心理等因素的影响，便秘已成为困扰现代人生活质量的重要因素之一。慢性便秘是由多种病因引起的常见临床症状，主要表现为大便千结、便次减少、排便困难、便意缺失等。功能性慢传输型便秘主要表现为结肠动力减弱或(和)障碍，粪便推进速度减慢，排空迟缓。该病可发生于任何年龄，但以老人和妇女为主，一般病程较长，慢性功能性便秘目前国内外无特效治疗药物，西药副作用较大，临床上滥用泻剂的情况屡见不鲜，更加重了病情的发生发展。近年来，寻找开发高效低毒价廉的天然药物成为世界新药研发领域的热点。中医学早在两千多年前就对本病有所认识，在历代医家的临床实践中积累了不少有效经验方，但由于各家认识的差异性，导致推广应用的困难。白术治疗便秘首见于汉代医圣张仲景，《伤寒论》第174条"伤寒八九日，风湿相搏，身体烦疼，不能自转侧，不呕不渴，脉浮虚而涩者，桂枝附子汤主之。若其人大便硬，小便自利者，去桂加白术汤主之"。《中华本草》亦指出脾虚不能为胃行其津液，肠道失润，可重用白术加味"运化脾阳"以行津液而润肠道。《新医药学杂志》1978年第4期刊登了魏龙骧先生医话四则，其中《白术通便秘》一说介绍了重用生白术治疗便秘的经验。时至今日，许多学者进行了关于生白术对家兔离体肠管活动的研究和临床实践，结果不相一致。我们对113例患者用药后的观察结果是，单味生白术普通水煎剂治疗慢性功能性便秘总有效率为76.99%，并且对虚性便秘尤其是阴虚与脾胃气虚者效果最佳，与文献报道的生白术具有增强结肠集团推进性蠕动并能促进胃肠分泌功能观点一致。我们临床观察表明生白术虽服用后起效较慢(一般8-12小时)，但便质变软并且不会产生腹痛、水泻等刺激性泻剂的副作用，而且排便间隔时间、排便费力程度等均有较大改善，同时腹胀减轻，便意感增强。动物实验结果显示:在3h粪便湿重、3h粪便含水量和3-24h粪便湿重方面，水煎剂效果优于泽马可；实验过程中我们未发现小鼠有腹泻的情况，即使在含水量较大的粪便中仅仅是比较柔软而没有稀水或者不成形粪便排出，这与临床实验部分吻合。这些都提示生白术一方面能促进肠道运动，另一方面能加强"大肠主液"这一功能的恢复正常。但是普通水煎剂仍存在从上消化道就开始释放吸收，用药量大且使用不便等缺点。为增进生白术治疗便秘的功效，我们借鉴前人经验，在反复实验的基础上创制了纳米生白术结肠控释片，显著提高了疗效。
发明内容为了解决现有生白术普通水煎剂从上消化道就开始释放吸收，且使用不便的不足，本发明提供了一种口服纳米生白术结肠片，显著提高了疗效。本发明采用的技术方案是一种口服纳米生白术结肠片，是以生白术纳米粉为原料药，以果胶钙为主要衣膜材料制成。其中，纳米级的生白术粉显著提高制剂生物利用度，减少用药剂量，降低不良反应；果胶钙不溶于水，也不被胃及小肠内存在的酶降解，但能被结肠内容物(主要是某些细菌产生的果胶酶)所降解，故能保护制剂顺利通过胃及小肠而到达结肠，并在结肠发生衣膜降解、定位释放药物，靶向效果可靠。目前诸多报道重用生白术治疗便秘的日服剂量为60g120g，而纳米生白术结肠片的日服剂量为15g30g。本发明还提供上述口服纳米生白术结肠片的制备方法，是将生白术药材干燥后经纳米粉碎机粉碎得到过400目~1200目筛细粉；提取生白术多糖液作为润湿剂；果胶与氯化钙反应制得果胶钙混悬液用于包衣；用生白术纳米粉和生白术多糖液压制素片后包衣即可。更为具体的制备方法包括以下步骤(1)生白术纳米粉及多糖液的制备将生白术药材干燥后经纳米粉碎机粉碎得过400目~1200目筛细粉，生白术多糖液的制备取白术生药饮片400g，加4~8倍量75%乙醇回流1~2次，每次2h，过滤；药渣加8倍量水煎煮3次，每次1.5h，合并水煎液，浓縮至400ml(相当于生药lg/ml)，静置，离心；上清液加入乙醇调至75%,静置；抽滤，将沉淀用蒸馏水溶解，离心，上清液加乙醇调至75%，静置，抽滤，沉淀用无水乙醇反复洗漆后用400ml蒸馏水溶解，即得多糖水溶液；(2)果胶钙的制备取低甲氧基果胶(甲氧基含量<5~10%或酯化度<30~50%)60~120g，加入重蒸水400~500ml，浸泡l~2h，搅拌24h使充分溶解；取10gCaCl2加重蒸水至200ml使成3~6%溶液并缓缓倒入果胶溶液中，两液混合搅拌2h，密闭4'C放置24h，部分吸水后，再通过挤压、离心去除大部分水分，40。C真空干燥48h左右，粉碎过80120目筛；用原子吸收分光光度计测得钙含量(控制在6~12%左右为佳)；(3)生白术素片的制备将生白术纳米粉加生白术多糖液制软材、制颗粒，干燥，整粒，加硬脂酸混合均匀，压片；(4)生白术片芯的包结肠衣取果胶钙加水在胶体磨中研细形成混悬液，加入1.5~2.5%丙烯酸树脂(EudragitL30D)，0.10.2%邻苯二甲酸酯和0.1%司盘-80，混合均匀，为结肠包衣溶液；将包衣锅加热至35'C，片芯置于包衣锅中滚动，喷入包衣液，喷枪压控制在24kg/cm2，喷至片芯流动不畅，吹热风干燥，风温约6080'C，吹干后重复以上操作，至片芯增重达10~15%左右时，干燥即可。本发明的口服纳米生白术结肠片，采用在胃和小肠不溶解，而只在结肠才溶解的包衣材料，从而达到将药物转运到结肠释放的目的，即达到全结肠释药，分布均匀，不在上消化道释药，提高结肠病变部位的药物浓度，有利于治疗。口服纳米生白术结肠片还显著减少口服剂量，发挥药物最佳疗效，减少药物不良反应，使用方便。具体实施例方式在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体的制备实施例和应用实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。实施例l:口服纳米生白术结肠片的制备(1)纳米生白术粉的制备将生白术药材干燥后经纳米粉碎机粉碎得过400目~1200目筛细粉，生白术多糖液的制备取白术生药饮片400g，加4~8倍量75%乙醇回流1~2次，每次2h，过滤；药渣加8倍量水煎煮3次，每次1.5h，合并水煎液，浓縮至400ml(相当于生药lg/ml)，静置，离心；上清液加入乙醇调至75%，静置；抽滤，将沉淀用蒸馏水溶解，离心，上清液加乙醇调至75%，静置，抽滤，沉淀用无水乙醇反复洗涤后用400ml蒸馏水溶解，即得多糖水溶液；(2)果胶钙的制备取低甲氧基果胶(甲氧基含量<5~10%或酯化度<30~50%)60~120g，加入重蒸水400~500ml，浸泡l~2h，搅拌24h使充分溶解；取10gCaCl2加重蒸水至200ml使成3~6%溶液并缓缓倒入果胶溶液中，两液混合搅拌2h，密闭4'C放置24h，部分吸水后，再通过挤压、离心去除大部分水分，40'C真空干燥48h左右，粉碎过80120目筛；用原子吸收分光光度计测得钙含量(控制在6~12%左右为佳)；(3)生白术素片的制备将生白术纳米粉加生白术多糖提取液制软材、造颗粒，干燥，整粒，加硬脂酸混合均匀，压片；(4)生白术片芯的包结肠衣取果胶钙加水在胶体磨中研细形成混悬液，加入1.5%~2.5%丙烯酸树脂(EudragitL30D)，0.1%-~0.2%邻苯二甲酸酯和0.1%司盘-80，混合均匀，为结肠包衣溶液；将包衣锅加热至35'C，片芯置于包衣锅中滚动，喷入包衣液，喷枪压控制在24kg/cn^喷至片芯流动不畅,吹热风干燥，风温约6080。C，吹干后重复以上操作，至片芯增重达10%~15%左右时，干燥即可。附h口服纳米生白术结肠片质量标准外观性状完整光洁，色泽均匀，无异物，无杂斑，有效期内保持不变。片芯为灰黄色(近于生白术原药材色泽)，衣膜淡棕色，片重1.0g±0.05g;日服剂量1520片。片重差异包衣前查片芯的重量差异取20片称重，将每片片重与平均片重比较，超出差异限度的药片不得多于2片，并不得有l片超出限度l倍。硬度和脆碎度应用孟山都硬度计法和罗许脆碎仪法测定，Fr《3(%)。崩解度吊篮法检查。在人工胃液及人工肠液中2小时内未有裂缝、崩解或软化等，在人工结肠液中l小时内全部溶散或崩解并通过筛网。溶出度浆法，37'C土rC恒温，转速100r/min，取6片放入人工结肠液中，并按规定时间取样，测定指标成分含量(以白术内酯I为指标成份或以原药材纳米粉为标准对照品，254nrn测吸收度)20min内释放量大于80%。含量均匀度取10片分别测定每片的相对含量，按《中国药典》法检查判断符合要求。附2:一、人工结肠液配制方法1.大鼠结肠液制备取大鼠5只，体重200300g，正常饲养，每天灌胃给予2%果胶液2mL/只，连续3日后处死，结扎盲肠，取其内容物，称重后按1.5g/100ml的比例加入磷酸盐缓冲液(pH-7.0)。2.兔结肠液配制取兔一只，体重2.0kg左右，处死后结肠盲肠，其内容物置于100mL磷酸盐缓冲液中(pH-7.0)。二、生白术指标成分及检测波长的确立生白术为菊科植物白术Atractylodesmacro-cephalaKoidz.的干燥根茎。具有健脾益气、燥湿利水、止汗安胎功效。白术根茎中含挥发油、倍半萜内酯化合物、多炔醇类化合物等，其中白术内酯类成分(白术内酯I、II等)为白术的抗炎、抗癌有效成分。经药理实验表明，该类成分具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的作用，尤其白术内酯I药理作用明显，为白术的主要活性成分，故确定其为白术质量控制的主要指标。在进行白术药材HPLC色谱指纹图谱研究中，我们采用AgilentTC-C18色谱柱(250mmX4.6mm,5|im);以甲醇:水(65%100%)连续梯度洗脱，体积流速为1.0ml/min的条件下进行10批样品的分析。在分析时进行全波长紫外扫描，考察不同波长下全数据。结果显示，检测效果受波长影响较大，经比较后表明在254nm色谱峰形最好，出峰数目适中，各色谱峰相互之间分离度较好，故检测波长定在254nm(实际白术内酯I最大吸收波长为220nm;白术内酯II最大吸收波长为276nm等，因该制剂是以单味中药材生白术为原料制成，故也可以以原药材纳米粉为标准对照品进行化学成分释放度检査)。实施例2:本发明药效学实验1.材料生白术从安徽蚌埠市药材公司购进，用烟台慧宝设备制造有限公司生产的CW-15型纳米粉碎机制备出纳米粉，由江苏联环制药有限公司扬州制药厂用生产设备加工成型O压制成0.1g素片并包结肠衣；②挤出滚圆法制备微丸并包结肠衣。实验动物兔、小鼠，均由扬州大学实验动物中心提供。2.方法与结果2.1生白术结肠微丸对小鼠小肠内钡餐、印度墨汁推进速度的影响2.1.1生白术结肠微丸对小鼠小肠内钡餐推进速度的影响取体重20~25gICR小鼠40只，雌雄各半，24h禁食不禁水，随机分为正常组、生白术微丸组、生白术结肠微丸组及麻仁软胶囊组。除正常组外，各组按0.2§/2(^,每天一次灌胃给药，5天后，各组药物中加钡0.01g，给药30min后，脱颈处死各组小鼠，打开腹腔，，分离肠系膜，剪取幽门至回盲部的肠管，轻轻将小肠拉直，测量其总长度，从幽门至钡餐前沿的距离作为钡餐在肠内推进距离，计算推进百分率(％)，结果如下正常组为59.17士2.62;生白术微丸组为63.33士3.85;生白术结肠微丸组为79.93士5.42;麻仁软胶囊组为75.41±3.61。2丄2生白术结肠微丸对小鼠小肠内印度墨汁推进速度的影响取体重2025glCR小鼠40只，雌雄各半，24h禁食不禁水，随机分为正常组、生白术微丸组、生白术结肠微丸组及麻仁软胶囊组。除正常组外，各组按0.2g/20g，每天一次灌胃给药，5天后，各组药物中加印度墨汁O.lml，给药30min后，脱颈处死各组小鼠，打开腹腔，，分离肠系膜，剪取幽门至回盲部的肠管，轻轻将小肠拉直，测量其总长度，从幽门至印度墨汁前沿的距离作为印度墨汁在肠内推进距离，计算推进百分率(％)，结果如下正常组为56.24士5.63;生白术微丸组为60.54士6.01;生白术结肠微丸组为76.58±4.27;麻仁软胶囊组为71.82±4.56。2.1生白术结肠微丸对小鼠肠内钡餐推进速度的影响取体重2025glCR小鼠40只，雌雄各半，随机分为正常组，空白对照组生白术微丸组、生白术结肠微丸组及麻仁软胶囊组。除正常组外，其余各组用复方地芬诺酯50mg/kg灌胃14天建立小鼠的慢传输便秘模型。造模期结束后，除正常组，空白对照组外，其余各组按0.2g/20g，每天灌胃一次给药14天。结束当日予200%硫酸钡糊状液0.5ml/只灌胃，记录时刻，待其排出第一粒白色粪便时再记录时刻，从而计算出口一肛传输时间(min)。结果如下正常组为142.75±13.24;空白对照组183.00±16.91;生白术微丸组150.00土12.03;生白术结肠微丸组为105.75±15.97;麻仁软胶囊组为160.75±1.50。2.2生白术结肠片对家兔麻醉后活体回肠收縮的影响取体重为2kg左右的兔子16只，雌雄各半，随机分为正常组、生白术素片组、生白术结肠片组及麻仁软胶囊组。其中除正常组外，各组按10mg/kg，每天一次灌胃给药，5天后，用2。/。乌拉坦溶液lg/kg给各组兔耳缘静脉缓缓注人，麻醉后，在兔右下腹回盲部作一34cm切口，止血后暴露回盲部4~5cm的回肠段，待描记回肠收縮的悬吊装置稳定后，先记录正常回肠收縮频率，然后分别用药，按10mg/kg灌胃，记录各给药组收縮频率，结果如下(次/min):正常组35.75±6.22;生白术素片组40.11士7.31;生白术结肠片组48.63士7.99;麻仁软胶囊组45.38±6.91。2.2生白术结肠片对家兔麻醉后活体结肠收縮的影响取体重为2kg左右的兔子16只，雌雄各半，随机分为正常组、生白术素片组、生白术结肠片组及麻仁软胶囊组。其中除正常组外，各组按10mg/kg，每天一次灌胃给药5天，禁食24h，急性处死家兔，迅速取出结肠头端(距结肠盲肠连接0.5cm处)和尾端(距盆骨缘5cm处)。用固定的两片平行刀片沿平滑肌纤维的方向取4条肌条:结肠头端纵行肌肌条(LMPC)、结肠头端环行肌肌条(CMPC)、结肠尾端纵行肌肌条(LMDC)和结肠尾端环行肌肌条(CMDC)。用眼科剪小心去除粘膜。将4条肌条分别安置在4个灌流肌槽(每个肌槽中均盛有5mL37'CKrebs液并持续供给95%02和5%C02混合气体。肌条在lg的前负荷下孵育lh左右)。记录肌条的自发收縮活动。待描记结肠收縮的悬吊装置稳定后，记录各组收縮频率，结果如下(waves/min):正常组生白术素片组生白术结肠片组麻仁软胶囊组LMPC0.8±0.80.9±0.41.6±2.41.3±0.5CMPC0.7±0.61.3±0.92.1±1.91.4±0.4LMDC6.2±1.77.5±1.910.9±3.38.7±4.0CMDC10.1±3.011.2±3.316.7±2.212.5±2.7可见与正常组相比，生白术结肠片能显著增加结肠各部位肌条的收縮频率(差异有统计学意义)，且效果较生白术素片组与麻仁软胶囊组显著。实验观察表明生白术结肠制剂对小鼠小肠内钡餐有明显推进作用，对家兔在体回肠的收縮幅度与频率有明显增高作用。进一步小鼠便秘模型药效学实验也表明单味生白术结肠通便效果是肯定的。2.3生白术结肠片对小鼠便秘模型的影响2.3丄材料生白术购自安徽蚌埠市药材公司，用烟台慧宝设备制造有限公司生产的CW-15型纳米粉碎机制备出纳米粉，由江苏联环制药有限公司扬州制药厂用该纳米粉以及本实验室提取的生白术多糖液加工成型①压制成0.1g素片并包结肠衣；②挤出滚圆法制备微丸并包结肠衣。实验动物均由扬州大学实验动物中心提供。2.3.2方法2.3.2.1分组与造模取雌性小鼠42只，体重18-23g，随机分为6组，分别为正常组，空白对照组，西药对照组，缓释剂低，中，高剂量组，每组7只，适应性词养3天，作为正常饲养期；用复方苯乙哌啶灌胃14天，作为便秘的造模期；用自制灌胃针灌服生白术结肠定位释放颗粒14天，作为便秘治疗期。2.3.2.2检测指标正常饲养期、便秘造模期和自然恢复期结束当日予200%硫酸钡糊状液0.5ml/只灌胃，记录时刻，待其排出第一粒白色粪便时再记录时刻，从而计算出口一肛传输时间。各期结束后，各组小鼠单笼词养，上午lhOO灌胃给药，下午14:00收集3h粪便，称重，电子天平称其重量(粪便湿重)，放在表面皿中微波炉高火烘烤5分钟，称得干重，含水量=(湿重一干重)/湿重X100。/。。次日上午ll:00收集3-24h粪便，如上法得出3-24h粪便粒数及3-24h含水量。2.3.3结果从口肛传输时间，3h，3-24h粪便粒数及3h，3-24h含水量来看，生白术结肠定位缓释的颗粒能有效的加快肠道传输，增加排便量、软化粪便从而改善便秘的症状，效果优于西药对照组，且以低剂量效果最佳。(详见表l,2，3,4，5)表l口-肛传输时间(min，^士s)分组N正常期模型期给药期正常对照组798.29±11.04106.86±33.97106.86±25.62空白对照组6107±18.49200±66.04170.83±21.68#西药对照组795.29±18.30208.57±45.50143.29±23.75*#缓释低剂量组794.14±14.53216.14±60.40117.29士21.70女O缓释中剂量组7102.43±13.44215.29±51.82140.86±23.50*#缓释高剂量组697.67±16.59215.17±49.91137.67±13.25*#与空白对照组相比女P〈0.01，*P<0.05;与西药对照组相比OP〈0.05;与正常组相比#P<0.01表23h粪便湿重(g,S土"分组N正常期模型期给药期正常对照组70.35±0.200.33±0.120.29±0.05空白对照组60.33±0.170.10±0.080.15±0.05#西药对照组70.24±0.060.06+0.060.23±0.07缓释低剂量组70.23±0.120.ll土O.110.36±0.07女〇*缓释中剂量组70.35±0.110.05±0.050.24±0.14缓释高剂量组60.37±0.170.12±0.110.18±0.16与正常组相比#P<0.01;与空白对照组相比女P〈0.01;与西药对照组相比OP〈0.05;与缓释剂高剂量组相比头P〈0.01表3<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>A与正常对照组相比，P<0.05;※与模型对照组相比，P<0.05;弁与阳性对照组相比，P<0.05表4<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>A与正常对照组相比，P<0.05;※与空白对照组相比，P<0.05;弁与西药对照组相比，P<0.0权利要求1、一种口服纳米生白术结肠片，是以生白术纳米粉和生白术多糖提取液为原料药，以果胶钙为主要衣膜材料制成。2、'一种制备权利要求l所说的口服纳米生白术结肠片制备方法，其特征在于，是将生白术药材干燥后经纳米粉碎机粉碎得到过400目~1200目筛细粉；制备生白术多糖液作为制片用润湿剂；果胶与氯化钙反应制得果胶钙混悬液用于包衣；用生白术纳米粉和生白术多糖液压制素片后包衣即可。3、根据权利要求2所述的口服纳米生白术结肠片的制备方法，其特征在于实施步骤是(1)生白术纳米粉及多糖液的制备将生白术药材干燥后经纳米粉碎机粉碎得过400目~1200目筛细粉。生白术多糖液的制备取白术生药饮片400g，加4~8倍量75%乙醇回流1~2次，每次2h，过滤；药渣加8倍量水煎煮3次，每次1.5h，合并水煎液，浓縮至400ml，静置，离心；上清液加入乙醇调至75%，静置；抽滤，将沉淀用蒸馏水溶解，离心，上清液加乙醇调至75%，静置，抽滤，沉淀用无水乙醇反复洗涤后用400ml蒸馏水溶解，即得多糖水溶液；(2)果胶钙的制备取低甲氧基果胶60120g，加入重蒸水400~500ml，浸泡l~2h，搅拌24h使充分溶解；取10gCaCl2加重蒸水至200ml使成3~6%溶液并缓缓倒入果胶溶液中，两液混合搅拌2h，密闭4'C放置24h，部分吸水后，再通过挤压、离心去除大部分水分，40。C真空干燥48h左右，粉碎过80120目筛；钙含量为6~12%;(3)生白术素片的制备将生白术纳米粉加生白术多糖提取液制软材、制颗粒，干燥，整粒，加硬脂酸混合均匀，压片；(4)生白术片芯的包结肠衣取果胶钙加水在胶体磨中研细形成混悬液，加入1.5~2.5%丙烯酸树脂，0.1~0.2%邻苯二甲酸酯和0.1%司盘-80，混合均匀，为结肠包衣溶液；将包衣锅加热至35'C，片芯置于包衣锅中滚动，喷入包衣液，喷枪压控制在24kg/cm2，喷至片芯流动不畅，吹热风干燥，风温约6080°C，吹干后重复以上操作，至片芯增重达10~15%左右时，干燥即可。全文摘要本发明属医药技术研究领域，涉及一种口服纳米生白术结肠片及其制备方法。所说的口服纳米生白术结肠片，是以生白术纳米粉和生白术多糖提取液为原料药，以果胶钙为主要衣膜材料制成。其制备方法是将生白术药材干燥后经纳米粉碎机粉碎得到过400目～1200目筛细粉；提取的生白术多糖液作为制片用润湿剂；果胶与氯化钙反应制得果胶钙混悬液用于包衣；用生白术纳米粉和生白术多糖液压制素片后包衣即可。本发明的口服纳米生白术结肠片，可安全通过上消化道到达结肠再释药；具有口服剂量小，减少药物副作用，使用方便等优点。文档编号A61K9/36GK101336950SQ200810021649公开日2009年1月7日申请日期2008年8月12日优先权日2008年8月12日发明者乐卜,平卜,荣胡申请人:扬州大学