鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大和/或心室肥厚药物中的用途的制作方法

专利名称：鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大和/或心室肥厚药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明属制药领域，涉及中药有效成分鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大
(myocardial hypertrophy)禾口/或A、室月巴厚(ventricular hypertrophy)药 物中的用途。
背景技术：
慢性心功能不全又称充血性心力衰竭(Congestive heart failure, CHF)， 是多种病因所致心脏泵血功能降低，不能排出足够的血液以满足全身组织器 官代谢需要的一种临床综合症，临床病死率很高。
以往临床对CHF的治疗重点是使用强心苷类正性肌力作用药物和利尿药。 大量临床资料表明，所有加强心肌收縮力、改善血流动力学类药物虽然可短 期达到一定改善症状的效果，但不能防治心室肥厚，也不能降低患者病死率， 甚至有的正性肌力药物如磷酸二酯酶抑制剂和3 -受体激动剂长期使用反而 能增加心衰患者心律失常的发生率、猝死率及远期死亡率。目前强心苷类药 物仍用于治疗心衰，因其可改善患者的血流动力学症状，众多文献报道此类 药物对生命的影响是中性，即不縮短患者生命，但也不延长患者生命，同时 对心室肥厚的防治也无益处。
80年代以后，人们逐渐认识到心肌肥大、心室肥厚是心力衰竭的特征， 同时也是决定心力衰竭发病率、病程进展和死亡率的重要因素。心室肥厚通 常涉及心室结构的改变，即发生心室重构(remodeling)。心室重构包括心肌 细胞肥大、间质细胞如成纤维细胞增殖、胶原增生；同时心室肥厚也影响心脏的功能，其顺应性降低，射血功能受到明显影响。随着心肌肥大、心室肥 厚的发生和发展，心律失常、心衰、猝死的发生率提高。因此，心肌细胞肥 大、心室肥厚是CHF的病理核心，使用药物干预和逆转心肌肥大、心室肥厚
是防治CHF的有效手段。
近年对CHF的治疗策略己发生改变，从短期的改善血流动力学措施转为 长期的修复性防治。目的是通过抑制与心肌肥大、心室肥厚的相关刺激和介 导因素，从而改善心肌的生物学功能。目前大量研究表明心肌肥大、心室肥 厚与肾素一血管紧张素一醛固酮系统活性增强、神经内分泌因子的持续激活、 交感神经系统持续兴奋有关。有临床研究表明，采用血管紧张素转换酶抑制 剂或P-受体阻滞剂类药物防治CHF，可防止或延缓心肌肥大、心室肥厚的发 展，即使在治疗的早期，有些药物对血流动力学的改变不明显，但对心肌仍 有长期的生物学效应。例如交感神经抑制药e受体阻滞剂能防止心肌肥大、 心室肥厚的发展并降低心律失常、心衰、猝死的发生率，从80年代的禁用到 现在的建议早用。美国和欧洲心衰治疗指南认为所有病情稳定的CHF患者 均需应用3受体阻滞剂，除非有禁忌症，而且要尽早应用，不要等到其它疗 法无效时再用。同样，CHF患者除非有禁忌症或不能耐受，也需长期使用血管 紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂。
受早期西医理论的影响，上世纪五、六十年代，我国防治CHF的中药研 究着力于发掘具有强心苷类正性肌力作用的药物和有效成分。近年，随着神 经内分泌因素可能较血流动力学因素对心衰的恶化起更大作用理论的形成以 及人们对于心肌肥厚危害性的认识，对于具有调节神经内分泌因素作用以及 具有对抗心肌肥厚作用的中药及活性成分的研究更显重要。
鱼腥草为三白草科植物蕺菜(Houttuynia cordata Thunb.)的干燥地上 部分。鱼腥草的主要化学成分为挥发油和黄酮，挥发油成分含鱼腥草素和月桂醛等。鱼腥草素钠(sodium houttuyfonate)自1971年确定其化学成分 以后即可人工合成，价格便宜。现代研究证实鱼腥草及鱼腥草素钠主要药理 作用为抗病原微生物、抗炎、提高免疫力等，而用于心血管疾病的相关报道 较少，仅见鱼腥草注射液在临床上用于治疗冠心病的报道，因其具有扩张冠 状动脉血管，从而对于冠心病心绞痛具有一定效果；有报道鱼腥草注射液具 有治疗肺心病的作用；鱼腥草提取物灌注蟾蜍或蛙蹼可以使毛细血管扩张， 增加肾血流量和尿液分泌，利尿作用较强，临床上可以用于肾病性水肿的治 疗；另外本药还具有降低血脂、抑制血小板聚集、预防血栓形成、促进血液 循环等作用。但未见鱼腥草以及鱼腥草素钠具有防治心肌肥大、心室肥厚作 用的报道和应用。

发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供中药有效成分鱼腥草素钠在制药中的 新用途，具体涉及鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大和/或心室肥厚药物中的用 途。
本发明涉及的鱼腥草素钠是中药鱼腥草的挥发油成分鱼腥草素(又称癸 酰乙醛)的人工合成品(癸酰乙醛亚硫酸氢钠，CH3(CH2)8COCH2CHOHS03Na)。
本发明采用国内外学术界已广泛应用的异丙肾上腺素、L-甲状腺素钠和 腹主动脉不完全结扎三种方法制备整体动物的心肌肥大、心室肥厚模型；采 用乳鼠心肌细胞体外培养，肾上腺素诱导制备体外心肌细胞肥大模型。实验 结果揭示三种模型动物都出现全心指数和左心指数增加等心肌肥大、心室肥 厚的特征，进行鱼腥草素钠干预实验，结果证实鱼腥草素钠可明显抑制三种 模型动物心肌肥大、心室肥厚；体外实验显示肾上腺素可以诱导心肌细胞肥 大，鱼腥草素钠可以抑制心肌细胞的肥大。
本发明通过下述技术方案施行按本领域公知技术，小鼠每天皮下注射异丙肾上腺素2mg/kg，连续7天，制备小鼠心肌肥大、心室肥厚模型；SD大 鼠每天腹腔注射L-甲状腺素钠0.3mg/kg，连续7天，制备大鼠心肌肥大、心 室肥厚模型；SD大鼠腹主动脉不完全结扎手术制备压力超负荷型大鼠心肌肥 大、心室肥厚模型。模型动物分别灌服受试药鱼腥草素钠溶液、阳性药美托 洛尔(或卡托普利)或饮用水，观察大鼠血压和心率的变化，测定动物心脏 指数的变化，用放射免疫分析法测定左心室心肌组织的血管紧张素II (AngII) 和内皮素-1 (ET-1)含量、血浆中的环磷酸腺苷(cAMP)含量、血清中醛固 酮(ALD)以及肿瘤坏死因子(TNF-a)含量的变化，用消化法测定心肌组织 中羟脯氨酸含量的变化。乳鼠心肌细胞培养采用出生48小时内的乳鼠心室细 胞，体外细胞培养3天后开始用肾上腺素刺激并同时给予药物干预，测定干 预2天后心肌细胞的表面积以及细胞液中总蛋白含量。
本发明实验结果显示与正常对照组比较，模型对照组动物左心指数和 全心指数、心肌AngII、羟脯氨酸和ET1含量、血浆cAMP含量、血清ALD和 TNF-a含量明显升高；灌胃给予鱼腥草素钠(50 180mg/kg.d)可使心室肥 厚模型动物的心脏指数、心肌AngII、羟脯氨酸和ET1含量、血浆cAMP含量、 血清ALD和TNF-a浓度显著降低，在较大剂量时还具有降低血压和减慢心率 的作用。体外心肌细胞在肾上腺素刺激下表面积增大，细胞中总蛋白含量升 高；鱼腥草素钠(3X10—5和10—4 mol/L)能够抑制肾上腺素引起的细胞表面 积的增大并降低心肌细胞中总蛋白含量。另外，采用最大给药量法观察鱼腥 草素钠的安全性，小鼠一次性口服鱼腥草素钠2g/kg (此剂量约为动物实验最 小有效量的40倍)，观察14天，未见动物死亡和明显的中毒反应。
本发明实验表明鱼腥草素钠可降低左心指数和全心指数，降低心肌中 羟脯氨酸含量，体外可减小心肌细胞的表面积和总蛋白含量，提示鱼腥草素 钠具有抗心肌肥大、心室肥厚以及心肌纤维化作用；可降低血浆cAMP浓度，提示其具有抑制交感神经兴奋性作用；又可降低心肌组织Ang II和血浆ALD浓 度，说明鱼腥草素钠具有阻断肾素一血管紧张素—醛固酮系统活化的作用； 鱼腥草素钠还具有降低ET-1、 TNF-a等内分泌因子以及降低血压和减慢心率 等作用。且鱼腥草素钠毒性小，在有效剂量范围内使用安全。经药效学实验 剂量换算，所述的鱼腥草素钠临床成人安全、有效的口服剂量范围约为0.5 lg/天.人。
本发明经实验证实，鱼腥草素钠具有防治心肌肥大、心室肥厚作用，可 制备防治心肌肥大和/或心室肥厚的药物，进而可预防或延缓心衰的发生、发 展，减少心肌肥大、心室肥厚患者心律失常、心衰、猝死的发生率。其作用 机制与抑制肾素一血管紧张素一醛固酮系统活性，抑制神经内分泌因子激活， 抑制交感神经的持续兴奋有关。鱼腥草素钠可抑制导致心肌肥大、心室肥厚 的有关剌激、介导因素，从而改善患者心肌肥大、心室肥厚的症状和心肌的 生物学功能。动物实验证明鱼腥草素钠安全范围大，最大给药量高于药物有 效量数十倍。
本发明的有益效果突出体现在鱼腥草素钠可以人工合成，合成方法成 本低廉，反应条件温和，非常适于工业化生产。鱼腥草素钠具有抗心肌肥大、 心室肥厚作用，未见明显急性毒性，将其进一步开发应用于防治CHF，对于改 善心衰患者的生活质量，降低心律失常的发生率、猝死率及远期死亡率具有 重要意义。
据统计，CHF发病率约为1.0%_1.5%。 65岁以上人口的年平均发病率达 10%左右。尽管在过去10 20年中，对CHF的治疗取得了很大进步，但CHF 患者的5年病死率仍高达50%。有研究分析认为，CHF的预后与恶性肿瘤一样， 甚至比恶性肿瘤更差。因此，CHF—旦发展到血流动力学变化明显之时，靠强 心苷类药物治疗绝非上策。尽早使用具有抑制肾素一血管紧张素一醛固酮系统活性，抑制神经内分泌激活及抑制交感神经持续兴奋的药物，从而防治心 肌肥大、心室肥厚的症状，改善心肌的生物学功能，具有更大价值。本发明 提供的鱼腥草素钠具有上述防治心肌肥大、心室肥厚的新的药用作用，可使 其临床用途得以推广。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于 说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之 后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰 同样落入本发明权利要求书所限定的范围。
实施例1:鱼腥草素钠抗异丙肾上腺素致小鼠心室肥厚实验
1. l实验动物昆明种小鼠，体重20 22g;购于中科院上海实验动物中 心，饲养于上海中医药大学实验动物中心SPF绿实验室。
1.2药品和试剂鱼腥草素钠(批号070103)，上海青平药业有限公司
产品；盐酸异丙肾上腺素注射液(批号5E20010)，上海禾丰制药有限公司 产品；酒石酸美托洛尔片(批号0605002)，阿斯利康制药有限公司产品。
1. 3鱼腥草素钠受试液的制备称取鱼腥草素钠适量，临用前加温水超 声溶解，配成浓度为4.5、 9mg/ml的溶液。
1.4实验方法选用雄性健康小鼠，随机分为5组(每组11只)正常 对照组，模型对照组，鱼腥草素钠小、大剂量组(90、 180mg/kg)和美托洛 尔阳性对照组(60mg/kg)。除正常对照组外，其他各组小鼠每天皮下注射异 丙肾上腺素2mg/kg，每天一次，连续7天，造成心肌肥厚模型。正常对照组 小鼠每天皮下注射等容量的生理盐水，每天一次，连续7天。治疗组在给予 异丙肾上腺素后，灌胃给予鱼腥草素钠或美托洛尔，正常对照组、模型对照组灌胃给予等容量的饮用水，连续7天。禁食不禁水14h后，取血和心肌进 行如下各项测定。
1.4. 1小鼠心脏指数的测定小鼠称重，摘眼球取血备用，脱颈椎处死， 快速打开胸腔取心脏，用滤纸吸干水分，去除心房组织，沿室壁剪开，分离 左、右心室，电子天平准确称取左心室重量和全心重量。计算全心重量/体重
(HW/BW)比，左心室重量/体重(LVW/BW)比，分别记为全心指数，左心室指数。
1.4.2血浆cAMP含量测定取血，加EDTA溶液50uL抗凝，血液低温 离心机4000rpm低温离心10min，取上清液供测定cAMP含量。
1.4.3心肌组织中AngII含量的测定取心室组织准确称重后迅速剪碎， 加入预冷的生理盐水进行匀浆，制成2%组织匀浆液，3500r/min低温离心 15min，取上清液，用于AngII含量的测定。
1.5实验结果
小鼠皮下注射异丙肾上腺素7天后，模型对照组与正常对照组比，左心 指数和全心指数均有明显升高(p〈0.01);鱼腥草素钠90、 180mg/kg和美托 洛尔60mg/kg灌胃给药7天后，左心指数和全心指数均比模型对照组显著降 低(p<0. 05， p〈0. 01)，结果见表l。
表l.对异丙肾上腺素致心肌肥厚模型小鼠心脏指数的影响(5±s，n=ll)
Hj 剂量(mg/kg) 左心指数(mg/g)~~全心指数(mg/g)
_正常对照 3. 418±0. 202;*4. 410±0. 226**~
模型对照 3.861 ±0.197 4.959 ±0.234
鱼腥草素钠 90 3. 687 ±0.185* 4. 663 ±0. 185**
180 3. 657±0. 201* 4. 733±0. 219*
美托洛尔 60 3. 435 ±0. 287**4. 508 ±0. 300**
注与模型对照组比伞P〈0.05; **p〈0.01
9与正常对照组比较，模型对照组小鼠血衆cAMP含量明显升高(p〈0.01); 鱼腥草素钠90、 180mg/kg和美托洛尔60mg/kg灌胃给药7天后，血浆cAMP 含量比模型对照组显著降低(p〈0.01)，结果见表2。
表2.对异丙肾上腺素致心肌肥厚模型小鼠血浆cAMP的影响(5土s)
样本数(n) 剂量(mg/kg) cAMP(pmol/mL)
~正常对照 ^ 60.850 ±17.506**~~
模型对照 11 167.654±72.445
鱼腥草素钠 11 90 48.583±17. 155**
11 180 45.099±10.019** 美托洛尔 11__71. 580±31. 504**
注与模型对照组比伞p〈0.05; ,<0.01
与正常对照组比较，模型对照组小鼠心肌组织AngII含量明显升高 (p<0.01)。鱼腥草素钠90、 180mg/kg和美托洛尔60mg/kg灌胃给药7天后， 心肌组织AngII含量比模型对照组显著降低(p〈O.OD，结果见表3。
表3.对异丙肾上腺素致心肌肥厚模型小鼠心肌组织AnglI含量的影响(S土s， n=ll)
组别剂量(mg/kg) AngII (pg/mg.prot)
正常对照 48.754±8.687** 模型对照 67. 816 ±6. 244
鱼腥草素钠9042.610±7.539** 180 50. 265 ±8. 970**
美托洛尔__45. 295±11. 100**
注与模型对照组比承p〈0.05; **p<0. 01 实施例2:鱼腥草素钠抗L-甲状腺素钠致大鼠心室肥厚实验
2. 1实验动物SD种大鼠，雄性，体重150 170g，购于中科院上海实 验动物中心，词养于上海中医药大学实验动物中心SPF级动物实验室。
2.2药品和试剂鱼腥草素钠(批号070103)上海青平药业有限公司 产品；L-甲状腺素钠(L-Thy，批号WA1331)， Sigma公司产品；卡托普利 (Captopril，批号061005)，上海衡山药业有限公司产品；内皮素(ET-1)试剂盒(批号070620)，购于北京北方生物技术研究所;羟脯氨酸试剂盒(批
号20070623)，考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(批号20070515)，购自南京 建成试剂公司。
2.3鱼腥草素钠受试液的制备称取鱼腥草素钠适量，临用前加温水超 声溶解，配成浓度为2. 5、 5mg/ml的溶液。
2.4 L-甲状腺素钠溶液的制备精密称取L-甲状腺素钠，临用前用生理 盐水配成浓度为250mg/L的混悬液备用。
2.5实验方法选用健康SD大鼠，随机分为5组(每组10只)正常对 照组，模型对照组，鱼腥草素钠小、大剂量组(50、 100mg/kg)，卡托普利阳 性对照组(40mg/kg)。除正常对照组外，其余各组动物每天腹腔注射L-甲状 腺素钠0.25mg/kg，每天一次，连续7天，造成心肌肥厚模型；正常对照组 腹腔注射等容量的生理盐水，每天一次，连续7天。造模第一天开始各组动 物每天灌胃给药或等容量饮用水，每天一次，连续9天。禁食不禁水14h后， 进行如下各项分析。
2.5.1大鼠心脏指数的测定大鼠称体重(BW)后麻醉，取血，打开胸 腔取心脏，用滤纸吸干水分，冰上操作，去除心房组织，沿室壁剪开，分离 左、右心室，电子天平准确称量左心室重量(LVW)和全心重量(HW)。计算 全心重量/体重(HW/BW)比，左心室重量/体重(LVW/BW)比，分别记为全心 指数(HW/BW)，左心指数(LVW/BW)。
2. 5. 2心肌组织中羟脯氨酸含量以及ET-1含量测定取心室组织准确称 重后迅速剪碎，加入预冷的生理盐水进行匀浆，制备成10%的组织匀浆液， 3500r/min低温离心15min，取上清液进行羟脯氨酸含量以及ET-1含量测定。
2.6实验结果与正常对照组比，模型对照组大鼠左心指数和全心指数均有明显升高
(p〈0.01);鱼腥草素钠50、 100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药9天后， 左心指数和全心指数均比模型对照组显著降低(p〈0.05， p〈O.OD，结果见表 4。
表4.对L-甲状腺素致心肌肥厚模型大鼠心脏指数的影响(5±s)
组别样本数 (n)剂量 (mg/kg )左心指数 (mg/g)全心指数 (mg/g)
正常对照92. 802±0. 166**3. 666 ±0. 180**
模型对照103. 977±0. 2915. 191 ±0. 330
鱼腥草素钠10503. 712±0. 262*4. 886 ±0. 346*
101003. 702±0. 181*4. 820±0. 226**
卡托普利10403. 435 ±0. 366**4. 519±0. 501**
注与模型对照组比求p〈0. 05;林p〈O.Ql
与正常对照组比，模型对照组大鼠心肌组织羟脯氨酸含量有明显升高
(p<0. 01);鱼腥草素钠50mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药9天后，心肌 组织羟脯氨酸含量均比模型对照组显著降低(p<0.01， p<0.05)，鱼腥草素钠 100mg/kg可降低心肌组织羟脯氨酸含量，但与模型对照组比未见统计学意义， 结果见表5。
表5.对L-甲状腺素致心肌肥厚模型大鼠心肌组织羟脯氨酸含量的影响(5±s)
组别样本数剂量羟脯氨酸
(n)(mg/kg)(ug/mg. prot)
正常对照90. 378 ±0. 083**
模型对照100. 490 ±0. 080
鱼腥草素钠10500. 400 ±0. 040氺承
101000. 440±0. 109
卡托普利9400. 351 ±0. 147*
注与模型对照组比承P〈0. 05; **p<0. 01心肌组织ET-1含量均比模型对照组显著降低(p<0. 01)，结果见表6。
表6.对L-甲状腺素致心肌肥厚模型大鼠心肌组织ET-1含量的影响(S±s)
Hj 样本数(n)剂量(mg/kg)ET-1 (pg/mL)
正常对照 ^ 205.835±113.661** 模型对照10 594.412±155.906
鱼腥草素钠 1050 326.891 ±101.665** 10100 258.254 ±88.207**
卡托普禾U_^_^_243. 639 ±66. 722**
注与模型对照组比—p〈0. 05; **p〈0. 01 实施例3:鱼腥草素钠抗腹主动脉不完全结扎大鼠心肌肥厚作用
3.1实验动物SD种大鼠，雄性，体重220 250g，购于中科院上海实 验动物中心，词养于上海中医药大学实验动物中心SPF级动物实验室。
3.2药品和试剂鱼腥草素钠(批号0711-3)，上海青平药业有限公司 产品；卡托普利(Capt叩ril，批号070704)，上海衡山药业有限公司产品； 血管紧张素II试剂盒(批号20080420)，醛固酮测试试剂盒(批号20080420)， 肿瘤坏死因子测试试剂盒(批号20080530)，均购于北京北方生物技术研 究所；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(批号20070515)，购自南京建成试剂公 司。
3.3鱼腥草素钠受试液的制备称取鱼腥草素钠适量，临用前加温水超 声溶解，配成浓度为2. 5、 5mg/ml的溶液。
3. 4实验方法大鼠用3%戊巴比妥钠0. lml/100g腹腔注射麻醉，仰位固 定，打开腹腔，钝性分离腹主动脉，用内径为0.6mm的银夹不完全结扎左右 肾动脉之间的腹主动脉，使之外径狭窄至0. 6mm，制备压力超负荷性心肌肥厚 模型。假手术组动物仅分离腹主动脉后不做结扎。术后每天肌内注射青霉素1 X 104U/kg，共3天，预防感染。造模3天后除假手术组动物外其他动物随机 分组，开始灌胃给药。分组及给药情况如下假手术组(正常对照组)和模型对照组大鼠灌胃给予饮用水；鱼腥草素钠小、大剂量组(50、 100mg/kg)和 卡托普利阳性对照组(40mg/kg)灌胃给予鱼腥草素钠溶液或卡托普利药液。 每天给药一次，连续一个月。 一个月后，禁食不禁水14小时后测定如下各项 指标。
3.4.1血压和心率的测定经右颈总动脉插管，测收縮压、舒张压和平 均动脉压；测定心率。
3.4.2大鼠心脏指数的测定取血，打开胸腔取心脏，用滤纸吸干水分， 冰上操作，去除心房组织，沿室壁剪幵，分离左、右心室，电子天平准确称
量左心室重量(LVW)和全心重量(HW)。计算全心重量/体重(HW/BW)比， 左心室重量/体重(LVW/BW)比，分别记为全心指数(HW/BW)，左心指数 (LVW/BW)。
3.4.3心肌组织中AngII含量测定取心室组织准确称重后迅速剪碎，加 入预冷的生理盐水进行匀浆，制备成2%的组织匀浆液，3500r/min低温离心 15min，取上清液进行AngII含量测定。
3.4.4血清中醛固酮(ALD)和肿瘤坏死因子(TNF-a)含量的测定取血， 4000rpm低温离心10min，取上清液供测定ALD和TNF- a含量。
3. 5实验结果
与正常对照组比，模型对照组大鼠收縮压、舒张压以及平均压均有明显 升高(p<0.01， p<0.05)。鱼腥草素钠100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给 药1个月后，收縮压、舒张压和平均压比模型对照组显著降低(p〈0.05， p<0.01)，鱼腥草素钠100mg/kg可以减慢大鼠心率(p〈0. 05)，鱼腥草素钠 50mg/kg有降低收縮压、舒张压和平均压的趋势。结果见表7。
表7.对腹主动脉结扎致心肌肥厚模型大鼠血流动力学的影响(S±s，n=10)组别剂量收縮压舒张压平均压心率
(mg/kg)(mmHg)(mniHg)(mmHg)(次/分)
正常对照145. 354±13. 427林109. 880±13. 283*122. 223 ±12. 559**458. 1±30. 9
模型对照178. 055土29. 048127. 889±18. 645147. 055±21.959454. 3±22. 8
鱼腥草素钠50164. 200±18. 676116. 627±14. 021134. 629±16. 675444. 1±27.8
100154.957±24. 520*105. 632±21.407*124. 134±22. 337*428. 5±28. 8*
卡托普利40133. 116±17. 680林94. 551 ±16. 008**107. 521 ±14. 974**451.6±21. 5
注与模型对照组比水p〈0. 05; **p<0. 01
大鼠腹主动脉结扎1个月后，与正常对照组比，模型对照组大鼠左心指
数和全心指数均有明显升高(p〈0.01);鱼腥草素钠50、 100mg/kg和卡托普 利40mg/kg灌胃给药1个月后，左心指数和全心指数比模型对照组显著降低 (p<0. 05， p<0. 01)，结果见表8。
表8.对腹主动脉结扎致心肌肥厚模型大鼠心脏指数的影响(5±s， n=10)
组别剂量左心指数(mg/g)全心指数(mg/g)
(mg/kg)
正常对照2. 326±0. 192**2. 933 ±0. 226**
模型对照3. 200±0. 4953. 875 ±0. 540
鱼腥草素钠502. 856±0. 283*3. 438±0.297*
1002. 824±0. 155*3. 418±0. 195*
卡托普利402. 391 ±0. 189**3. 032±0. 190**
注与模型对照组比求p〈0. 05; **p<0. 01
与正常对照组比，模型对照组大鼠心肌组织AngII含量有所升高。鱼腥草 素钠50、 100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药l个月后，心肌组织AngII 含量比模型对照组显著降低(p<0.01， p<0.05)，结果见表9。
表9.对腹主动脉结扎致心肌肥厚模型大鼠心肌组织AnglI的影响(5士s)
组别样本数(n)剂量(mg/kg)AngII (pg/mg. prot)
正常对照9133. 187±20. 331
模型对照10140. 459±15. 161
鱼腥草素钠1050101. 004±10. 707**
1010094. 497 ±6. 558林
卡托普利1040122. 121 ±18. 064*
注与模型对照组比承P〈0. 05; **p〈0.01
15与正常对照组比，模型对照组大鼠血浆中ALD含量明显升高(p<0.01)。
鱼腥草素钠50、 100mg/kg和卡托普利40mg/kg灌胃给药1个月后，血浆中ALD
含量比模型对照组显著降低(p〈0.01， p〈0.05);与正常对照组比，模型对照
组大鼠血桨中TNF-a含量明显升高(p<0.05)。鱼腥草素钠50、 100mg/kg和
卡托普利40mg/kg灌胃给药1个月后，血浆中TNF- a含量比模型对照组显著
降低(p<0.05)，结果见表IO。
表10.对腹主动脉结扎致心肌肥厚模型大鼠血浆ALD、 TNF-a的影响(5±s， n=10)
Hii SJS ALD (ng/mL) TNF-a~~( (ng/raL)~~
_(mg/kg)_
~~正常对照 0. 455±0. 113**
模型对照 0.811 ±0.258
鱼腥草素钠 50 0.486±0. 175**
100 0. 648±0. 129*
卡托普禾J_￡2_0. 392 ±0. 086**
注与模型对照组比+P〈0. 05; **p〈0. 01 实施例4:鱼腥草素钠对体外肾上腺素诱导的心肌细胞肥大模型的影响
4.1实验动物SD大鼠乳鼠，出生48小时内，购于中科院上海实验动 物中心。
4.2药品和试剂鱼腥草素钠(批号0711-3)，上海青平药业有限公司 产品；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(批号20070515)，购自南京建成试剂公 司。
4. 3鱼腥草素钠受试液的制备称取鱼腥草素钠适量，临用前加培养液 超声溶解过滤，配成浓度为3X10—5和10—4 mol/L的溶液。
4.4实验方法取新生48小时内SD乳鼠左心室，消化分离心肌细胞进 行培养。在培养成功的心肌细胞培养液中加入肾上腺素或者肾上腺素加不同 受试药物共同孵育培养2天。然后测定心肌细胞表面积以及心肌细胞蛋白含
1. 340±0. 176* 1. 524±0. 155 1.266±0. 324* 1. 157±0. 357* 1.280±0. 246*4.5.实验结果
4.5.1对心肌细胞表面积的影响与正常对照组比较，模型对照组细胞
表面积明显增大(p<0.05)，鱼腥草素钠浓度为3X10—5和10—4 mol/L能够抑 制肾上腺素引起的细胞表面积的增大(p<0.05)。结果见表ll。
表ll.鱼腥草素钠对心肌细胞表面积的影响(5±s)
组别1.、/. 1 - 、1,/f 样本数剂量细胞表面积
(n)(mol/L)(um2/cell)
正常对照15323786. 31 ±9290. 93**
模型对照15429430. 08±1105. 05
鱼腥草素钠1523X10—521405. 95±7879. 20**
15410—420648. 82 ±8436. 12**
注与模型对照组比承p〈0. 05; **p〈0. 01
4.5.2对心肌细胞总蛋白含量的影响与正常对照组比较，模型对照组 细胞总蛋白含量明显增多，鱼腥草素钠浓度为3X10—5和l(T mol/L能够降 低心肌细胞中总蛋白含量(p〈0.05)。结果见表12。
表12.鱼腥草素钠对心肌细胞总蛋白含量的影响(5士s)
组别样本数剂量(g/ 5X108cell )
(n)(mol/L)
正常对照100. 0450±0. 0105*
模型对照100. 0538 ±0. 0086
鱼腥草素钠103X10—50. 0468 ±0. 0086*
1010—40. 0403 ±0. 0060**
注与模型对照组比水P〈0.05; **p〈0. 01 实施例5:急性毒性实验
5.1目的探索鱼腥草素钠一次性大剂量给药对机体可能产生的毒性反 应及其严重程度，以便对该药的安全性作出合理的评价。
5.2动物昆明种小鼠20只，体重18 22g只，雌雄各半，购于中科院
上海实验动物中心。
5.3受试药物及制备鱼腥草素钠(批号0711-3)，上海青平药业有限 公司产品；取鱼腥草素钠用热水超声溶解，配成最大浓度的混悬液。5.4方法及结果取健康小鼠20只，雌雄各半，禁食不禁水16小时后， 灌胃给予0.4m1/ 10g体重的上述鱼腥草素钠混悬液。给药后，以正常饮食、 饮水伺养，连续观察14天。给药后至14天，动物体重、活动、毛色、饮食、 精神状态良好，未见死亡，14天后解剖未见脏器异常。实验结果显示鱼腥草 素钠毒性很小，无法求出LD， 一次性最大安全给药量为2g/kg，是实验有效 量的40倍。因此认为该药临床应用安全。
由药效实验结果推算出鱼腥草素钠临床成人口服安全、有效剂量范围 0. 5 lg/人.天。
现代医学认为心肌肥大、心室肥厚是由于血流动力学异常和神经内分泌 紊乱相互作用的结果。心脏在应对多种原因引起的血流动力学异常时，自主 神经发生了一系列的变化。在心室肥厚的发病机制中神经内分泌因素较血流 动力学因素可能更为重要。现代医学发现参与心肌肥大心室肥厚的神经内分 泌因子和自分泌/旁分泌因子主要有儿茶酚胺、AngII、血管ET-1、 TNF-a 等。已发现，心脏超负荷时，局部交感神经活性提高，循环中儿茶酚胺含量 明显增加。血浆肾上腺素浓度与心室肥厚程度呈正相关。持久的交感神经兴 奋增强，除通过影响血流动力学和直接对心脏作用而诱发或加重心室肥厚外， 还引起肾素分泌过多，导致全身及心脏局部组织的肾素一血管紧张素一醛固 酮系统活化，并进一步使交感神经兴奋性增强、神经内分泌过度激活，形成 恶性循环。采用血管紧张素转化酶抑制剂和P受体阻滞剂具有阻断交感神经 兴奋性增强、神经内分泌过度激活所形成的恶性循环作用，其疗效已被近年 的临床实践所肯定。
本发明上述实施例的实验结果显示，鱼腥草素钠具有抗心肌肥大、心室 肥厚作用；可降低血桨cAMP浓度，提示其具有抑制交感神经兴奋性作用；鱼 腥草素钠可降低心肌组织AngII和血浆ALD浓度，说明鱼腥草素钠具有阻断肾 素一血管紧张素一醛固酮系统活化的作用；鱼腥草素钠还具有降低ET-1、TNF-a等因子以及降低血压和减慢心率的作用；这些可能是其抑制心肌肥大、
心室肥厚的作用机制。
本发明上述实施例的实验结果显示，鱼腥草素钠口服未见明显急性毒性。
权利要求
1、鱼腥草素钠在制备防治心室重构药物中的用途。
2、 鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大、肥厚性心肌病和慢性心力衰竭药物 中的用途。
3、 鱼腥草素钠在制备防治与心肌肥大和心衰相关的心律失常或猝死的药 物中的用途。
4、 根据权利要求1-3中任何一项所述的用途，其中，鱼腥草素钠临床成 人口服使用剂量为0.5 lg/天.人。
全文摘要
本发明公开了鱼腥草素钠在制药中的新用途，具体涉及鱼腥草素钠在制备防治心肌肥大和/或心室肥厚药物中的用途。本发明采用异丙肾上腺素、L-甲状腺素和腹主动脉不完全结扎三种制备心肌肥大、心室肥厚整体动物模型和体外培养心肌细胞、肾上腺素诱导的方法制备离体心肌细胞肥大模型。本发明实验结果表明鱼腥草素钠可降低模型动物左心指数和全心指数的增大，抑制体外心肌细胞的肥大，能降低血浆cAMP浓度、心肌组织Ang II和ET-1含量、血清TNF-α和ALD含量，还可降低血压和减慢心率。本发明实验结果提示鱼腥草素钠有抗心肌肥大、心室肥厚作用，其机制可能与抑制交感神经兴奋性、阻断肾素—血管紧张素—醛固酮系统活性、影响内分泌因子有关。
文档编号A61K31/121GK101618032SQ20081004359
公开日2010年1月6日 申请日期2008年7月4日 优先权日2008年7月4日
发明者陈长勋, 高建平 申请人:上海中医药大学