专利名称：甘遂饮片的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种中药甘遂饮片的质量控制方法。
背景技术：
当今世界在"回归大自然"思潮的影响下，许多国家寻找天然药物的呼 声日益高涨，而中药以其丰富的资源、独特的理论体系、特有的疗效和较低 的毒副作用等特点受到了世界各国的重视。但中药中含有复杂的成分，受各 方面因素的影响，质量难以稳定，大部分中药缺乏严格的质量控制方法和质 量标准，使之不能符合国际医药市场的要求，严重制约了我国中药行业的发 展。因此，将传统中药与现代科学技术相结合，建立切实可行的中药质量控 制方法及质量标准，实现中药现代化已成为必然趋势。
甘遂为大戟科植物甘遂A一02^j'a ^g謂i T. N. Liou ex T. P. Wang 的干燥块根，主产于陕西、河南、山东、甘肃、山西等地。甘遂性寒，味苦， 有毒，归肺、肾、大肠经，具有泻水逐饮的功能，在临床上多用于肝硬化腹 水、胸腔积液、水肿及二便不利等症。甘遂为一味毒性中药，生品仅限外用， 内服必须炮制。所以，目前在临床应用的有生甘遂和制甘遂两种规格。甘遂 中化学成分主要为巨大戟二萜酯类衍生物和少量三萜类化合物，还含有淀粉、 棕榈酸、蔗糖、柠檬酸、葡萄糖、草酸等。有关甘遂的成分研究方面的报道 较多，但多是对化学成分进行分离纯化方面的研究，未见质量控制方面的研 究报道。《中国药典》(2005年版一部)中甘遂饮片的质量控制主要通过粉末 鉴别和薄层层析鉴别，没有指标成分或有效成分的含量测定，这样难以保证 甘遂饮片的安全、有效，也限制了对甘遂的进一步研究开发。
发明内容
针对现有技术的上述不足，本发明所要解决的技术问题是提出一种可以 有效控制甘遂饮片质量的方法。应用本发明方法可以对甘遂饮片进行精确的 定量控制。
本发明的生、制甘遂饮片按照《中国药典》(2005年版一部)所公开的方 法制备而成。
本发明以从生、制甘遂饮片中分离得到的3-0- (2，3-二甲基丁酰基) -13-0-十二烷酰基巨大戟二萜醇和大戟二烯醇为指标，对甘遂饮片进行精确 的定量控制。式I是3-0- (2，3-二甲基丁酰基)-13-0-十二垸酰基巨大戟二 砲醇的化学结构式，式II是大戟二烯醇的化学结构式。
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生、制甘遂饮片的质量控制首先是其中3-0- (2， 3-二甲基丁酰基)-13-0-十二烷酰基巨大戟二萜醇和大戟二烯醇含量的控制，采用高效液相色谱法分别测定生、制甘遂饮片中3-0- (2，3-二甲基丁酰基)-13-0-十二垸酰基巨大
戟二萜醇和大戟二烯醇的含量
用高效液相色谱法测定生、制甘遂饮片中3-0- (2,3-二甲基丁酰基) -13-0-十二烷酰基巨大戟二萜醇的含量，色谱条件是以十八垸基硅垸键合硅 胶为填充剂；流动相为甲醇-水，梯度洗脱为(时间/甲醇的百分比)0 5分 钟/ 70% 85%， 5 55分钟/ 85% 95%;检测器为蒸发光散射检测器，蒸发温 度110°C，雾化温度80°C，气体流速1. 5L/min;柱温为35。C;进样量为 20ul;流速为1. lml/min;理论塔板数按3-0- (2，3-二甲基丁酰基)-13-0-十二垸酰基巨大戟二萜醇计算应不低于10000;
用高效液相色谱法测定生、制甘遂饮片中大戟二烯醇的含量，色谱条件 是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇-水，梯度洗脱为(时间 /甲醇的百分比)0 10分钟/ 90% 100%;检测器为蒸发光散射检测器，蒸 发温度U0。C，雾化温度80°C，气体流速1.5L/min;柱温为35。C;进样 量为20 u 1;流速为1. Oml/min;理论塔板数按大戟二烯醇计算应不低于10000。
本发明中，生甘遂饮片和制甘遂饮片中3-0- (2， 3-二甲基丁酰基)-13-0-十二垸酰基巨大戟二萜醇的含量不得少于0. 23 mg/g和0. 22mg/g;生甘遂饮 片和制甘遂饮片中大戟二烯醇的含量不得少于1. 22 mg/g和1. 19 mg/g。
本发明以从生、制甘遂饮片中分离得到的3-0- (2,3-二甲基丁酰基) -13-0-十二烷酰基巨大戟二萜醇和大戟二烯醇为指标，建立了控制甘遂饮片 质量的HPLC-ELSD测定方法，可以对生、制甘遂饮片进行精确的定量控制。 本发明方法操作简便、快速，适用于生甘遂和制甘遂饮片的质量控制。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于 说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之 后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求书所限定的范围。 实施例1
(1) 取购自上海、安徽、四川、河北、甘肃的8批生甘遂饮片，粉碎成
细粉，称取约2g，精密称定，加氯仿10ml，超声两次，每次15分钟，滤过， 合并滤液，蒸干，残渣加氯仿定容至lml，制得供试品溶液。称取3-0- (2，3-二甲基丁酰基)-13-0-十二垸酰基巨大戟二萜醇对照品5mg,精密称定，加甲 醇溶解并定容至刻度，制得1.00mg/ml的对照品溶液。精密吸取上述对照品 溶液和供试品溶液各20ul，分别注入高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂，流动相为甲醇-水，梯度洗脱为(时间/甲醇的百分比)0 5 分钟/70% 85%、 5 55分钟/85% 95%，检测器为蒸发光散射检测器(蒸发 温度ll(TC，雾化温度80°C,气体流速1.5L/min)，柱温为35°C，流速 为1. lml/min进行测定和分析。
检测结果显示，6批生甘遂饮片中3-0- (2，3-二甲基丁酰基)-13-0-十 二烷酰基巨大戟二萜醇的含量范围为0. 29-1. 12mg/g;而购自甘肃的2批生甘 遂饮片中未见含有3-0- (2，3-二甲基丁酰基)-13-0-十二垸酰基巨大戟二萜 醇。
(2) 取购自上海、安徽、四川、河北、甘肃的8批生甘遂饮片，粉碎成 细粉，称取约1.2g，精密称定，加氯仿5ml，超声两次，每次15分钟，滤过， 合并滤液，蒸干，残渣加氯仿定容至10ml，制得供试品溶液。称取大戟二烯 醇对照品5mg，精密称定，加甲醇溶解并定容至刻度，得到0.50mg/ml的对照 品溶液。精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各20ul，分别注入高效液相 色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇-水，梯度洗脱为
(时间/甲醇的百分比)0 10分钟/ 90% 100%，检测器为蒸发光散射检测 器(蒸发温度110°C，雾化温度80°C，气体流速1. 5L/min)，柱温为35°〇， 流速为1. Oml/min进行测定和分析。检测结果显示，6批生甘遂饮片中大戟二烯醇的含量范围为
1. 52-4. 70mg/g;而购自甘肃的2批生甘遂饮片中未见含有大戟二烯醇。
通过本实施例可判定，购自甘肃的2批生甘遂饮片为不合格产品；其余
购自上海、安徽、四川和河北的6批生甘遂饮片为合格产品。 实施例2
(1) 取购自上海、安徽、河北及实验室自制的10批制甘遂饮片，按实 施例l (1)的方法测定其中的3-0- (2，3-二甲基丁酰基)-13-0-十二垸酰基 巨大戟二萜醇含量。结果，10批制甘遂饮片中3-0-(2， 3-二甲基丁酰基)-13-0-十二烷酰基巨大戟二萜醇的含量范围为0. 27-0. 92mg/g。
(2) 取购自上海、安徽、河北及实验室自制的10批制甘遂饮片，按实 施例l (2)的方法测定其中的大戟二烯醇含量。结果，IO批制甘遂饮片中大 戟二烯醇的含量范围为1. 49-4. 5mg/g。
通过本实施例可判定，购自上海、安徽、河北及实验室自制的10批制甘 遂饮片均为合格产品。
权利要求
1、一种甘遂饮片的质量控制方法，其特征是该方法包括对生、制甘遂饮片中3-O-(2，3-二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇和大戟二烯醇含量的测定用高效液相色谱法测定生、制甘遂饮片中3-O-(2，3-二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇的含量，色谱条件是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇-水，梯度洗脱为0～5分钟/70％～85％、5～55分钟/85％～95％；检测器为蒸发光散射检测器，蒸发温度110℃，雾化温度80℃，气体流速1.5L/min；柱温为35℃；进样量为20μl；流速为1.1ml/min；理论塔板数按3-O-(2，3-二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇计算应不低于10000；用高效液相色谱法测定生、制甘遂饮片中大戟二烯醇的含量，色谱条件是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇-水，梯度洗脱为0～10分钟/90％～100％；检测器为蒸发光散射检测器，蒸发温度110℃，雾化温度80℃，气体流速1.5L/min；柱温为35℃；进样量为20μl；流速为1.0ml/min；理论塔板数按大戟二烯醇计算应不低于10000。
2、 根据权利要求1所述的甘遂饮片的质量控制方法，其特征是 用高效液相色谱法测定生、制甘遂饮片中3-0-(2,3-二甲基丁酰基)-13-0-十二垸酰基巨大戟二萜醇含量的方法包括如下步骤将甘遂饮片粉碎成细粉，称取约2g，精密称定，加氯仿10ml，超声两次， 每次15分钟，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加氯仿定容至lml，制得供试品 溶液；称取3-0- (2，3-二甲基丁酰基)-13-0-十二垸酰基巨大戟二萜醇对照品 5mg，精密称定，加甲醇溶解并定容至刻度，制得1.00mg/ml的对照品溶液；精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各20 U 1，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积值计算甘遂饮片中3-0-(2,3-二甲基丁酰基)-13-0-十二烷酰基巨大戟二萜醇的含量；用高效液相色谱法测定生、制甘遂饮片中大戟二烯醇含量的方法包括如 下步骤将甘遂饮片粉碎成细粉，称取约1.2g，精密称定，加氯仿5ml，超声两 次，每次15分钟，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加氯仿定容至10ml，制得供 试品溶液；称取大戟二烯醇对照品5mg，精密称定，加甲醇溶解并定容至刻度，制得 0. 50mg/ml的对照品溶液；精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各20^1，分别注入高效液相色谱 仪，记录色谱图，按峰面积值计算甘遂饮片中大戟二烯醇的含量。
3、根据权利要求1或2所述的甘遂饮片的质量控制方法，其特征是生 甘遂饮片和制甘遂饮片中3-0- (2，3-二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大 戟二萜醇的含量不得少于0. 23 mg/g和0. 22mg/g;生甘遂饮片和制甘遂饮片 中大戟二烯醇的含量不得少于1. 22 mg/g和1. 19 mg/g。
全文摘要
本发明公开了一种甘遂饮片的质量控制方法。该方法包括对生、制甘遂饮片中3-O-(2，3-二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇和大戟二烯醇含量的测定。本发明以分离得到的3-O-(2，3-二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇和大戟二烯醇为指标，建立了控制甘遂饮片质量的HPLC-ELSD测定方法，操作简便、快速，适用于生甘遂和制甘遂饮片的质量控制。
文档编号A61K36/47GK101618060SQ200810043590
公开日2010年1月6日 申请日期2008年7月2日 优先权日2008年7月2日
发明者丁文平, 修彦凤, 张永太, 贝 施, 靖 王, 王海颖 申请人:上海中医药大学