专利名称：藻酸双酯钠在制备改善心脏功能药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属中药的医药用途，主要涉及中药藻酸双酯钠在制备改善心脏功能 药物中的应用，适合制备心脏缺血再灌注后预防心脏功能损伤药物的场合。
技术背景心脏功能不全是冠心病的严重并发症，临床上冠心病除以心绞痛和急性心 肌梗死表现外，相当一部分病人逐渐出现不同程度的心脏功能不全,且有较多病 人以顽固性心力衰竭居多。诸多抗心力衰竭药物疗效不甚理想，特别是对由急 性冠状动脉综合征引起的心脏损伤和死亡。临床上很多情况如冠脉成形术、溶 栓疗法、冠状动脉旁路手术等，都面临着缺血再灌注后心脏功能损伤的问题。 为此，怎么防止局部缺血再灌注损伤是相当受关注的问题。目前这方面的治疗 主要依赖西药，而在利用中药保护心脏功能方面的研究未有突破性进展。因此， 如何发展祖国传统医学，利用我国特有资源，发挥中医药在保护冠心病并发心 脏功能不全方面的治疗特色，具有重要的临床意义和社会效益。鉴于这样的背 景进行了本发明，其目的是提供用于由局部缺血再灌注引起的心脏功能障碍或 心肌损伤的预防或治疗剂，其通过不同于现有疗法的机理呈现出有效性。藻酸双酯钠是以海藻酸为基础原料，用化学方法引入有效基团合成而得的 一种硫酸多糖，为半合成海洋药物，属酸性多糖类物质，藻酸双酯钠的平均分子量在12000—17000，它是一种线型阴离子聚电介质，具有类肝素样的生 理活性，但无肝素样的毒副作用，乃新型类肝素海洋药物[1]。既往临床实践及 实验研究证实，藻酸双酯钠具有阴离子聚电介质的线型结构，可增加红细胞表 面的阴性电荷，增强相互间的排斥力、故能阻抗红细胞之间或红细胞与血管壁 之间的粘附，因而具有明显的降低血液粘度的作用，同时具有抗凝血作用，其 效力相当于肝素的1/3 1/2，有明显的降血脂、扩张血管、降血压及降血糖等 功能[2，3'4]。藻酸双酯钠临床主要用于缺血性脑血管病如脑血栓、脑栓塞、短暂 性脑缺血发作及心血管疾病如高血压病、高脂血症、冠状动脉粥样硬化性心脏 病、心绞痛等疾病的防治。此外，也可用于治疗慢性阻塞性肺疾病、肺源性心 脏病、肾病综合征、皮肤病、糖尿病周围神经病、播散性血管内凝血、慢性肾 小球肾炎及出血热等[5]。但是，迄今为止，并不清楚藻酸双酯钠是否可以作为 一种直接保护缺血再灌注后心脏功能损伤的治疗药物，因此，有待在此基础上对藻酸双酯钠进行二次开发。 发明内容本发明的目的是提供中药藻酸双酯钠在制备改善心脏功能药物中的应用。 所述藻酸双酯钠的应用主要是在制备心脏缺血再灌注后预防心脏功能损 伤药物中的应用。为观察藻酸双酯钠对缺血再灌注后心脏心脏功能的直接保护作用，本发明采用离体心脏灌流技术(Langendorff模型)，以排除活体实验中各种神经、体 液因素对心脏功能的影响。结果发现，藻酸双酯钠能够直接改善缺血再灌注后 的心脏功能不全，且该作用与藻酸双酯钠拮抗炎症因子TNF-a的表达，抑制与 炎症有关的通路p38和JNK通路的激活有关。本发明所述的藻酸双酯钠可与药效学允许的药用赋形剂组合制备成制剂。本发明所述的藻酸双酯钠与药用赋形剂制备的制剂形式主要包括液体制 剂和固体制剂。固体制剂主要包括颗粒剂、片剂、胶囊剂(含软胶囊)、滴丸 剂。液体制剂主要包括口服液体制剂和注射液体制剂。所述制剂的给药形式主要包括口服给药和静脉给药。本发明的有益效果是1)对中药藻酸双酯钠的药理作用进行二次开放， 拓展了藻酸双酯钠的药用范围；2)利用藻酸双酯钠的改善心脏功能作用，将 藻酸双酯钠应用于各种心脏缺血再灌注后心脏功能不全情况的治疗。
图1是实验步骤的具体图解。图2是藻酸双酯钠对离体心脏功能各指标的影响。图3是藻酸双酯钠对离体缺血再灌注后心脏冠脉流出液中心脏损伤标志物 CK和LDH释放的影响。图4是藻酸双酯钠对离体心脏组织和心脏灌流液中TNF-a量的影响。图5是藻酸双酯钠对炎症相关通路p38， JNK和ERK通路表达的影响。
具体实施方式
本发明结合实施例和附图作进一 步的说明。实施例1大鼠离体心脏全心缺血/再灌注模型 (1)实验药物藻酸双酯钠注射液为青岛海尔药业有限公司产品，原药(50 g丄—1)以纯水 为溶剂，临用前以Krebs-Henseleit (KH, mmol'L": NaCl 118.3，KC1 4.74，K2HP04 1.18， MgS04 1.2， NaHC03 24.9， CaCl2 1.25，葡萄糖ll.l)液稀释至所需浓度的藻酸双酯钠溶液备用。(2)实验步骤 清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，体重250 300g。 大鼠击昏脱颈髓后仰卧固定于鼠板上，开胸暴露心脏，快速取出心脏置于 盛4'CKH液的培养皿中使其暂时冷停跳。充分暴露其主动脉根部，将离体心脏 悬挂于Langendor璃体心脏灌流装置上行主动脉逆行恒压[100cmH20(1 cmH20=0.098 kPa)]灌注KH液。37°〇恒温并以95%02和5%(202混合气体持续充 气。心脏剪去左心耳，经左房插入尖端带有水囊的导管至左室，然后通过压力 传感器，接MEDLAB系统，通过微调注水器调节左心室舒张末压(left ventricular end diastolic pressure, LVEDP)维持在4 8 mmHg范围。记录左心室发展峰压 (left ventricular developed pressure, LVDP)、 LVEDP、左室内压等容相最大上 升及下降速率(+dp/dtmax， -dp/dtmax)和心率(heart rate, HR)。记录冠脉流量 (coronary flow, CF)。实验大鼠分组如下所有心脏在干预前先给予20 min的KH液灌注平衡期，然后做以下分组 (1)，正常对照组，给予KH液灌注60min (Al组)；(2)缺血对照组，20 min 全心缺血期后再给予60min的KH液复灌期(A2组)；(3)藻酸双酯钠组，20 min 全心缺血期后再给予含藻酸双酯钠0.3 mg/L (A3组)，1 mg/L (A4组)，3 mg/L (A5 组)，10mg/L(A6组)，30mg/L(A7组)，或100mg/L(A8组)的KH液复灌60 min。连续记录各项心脏功能指标，参见图l，图中a:平衡期；b: KH液灌注期； C:全心缺血期；d: KH液复灌期；e:含各浓度藻酸双酯钠的KH液复灌期。实施例2藻酸双酯钠对大鼠离体心脏缺血再灌注后心脏功能的影响(1) 记录平衡20min时的心脏功能各项指标。对正常对照组大鼠，平衡 后再灌注60 min期间每10 min记录一次心脏功能指标。对缺血对照组和藻酸双 酯钠组缺血后再灌注的60 min期间每10 min记录一次心脏功能指标。同时收集 冠脉流出液测定其中的CK和LDH的含量。(2) 结果参见图2、图3，全心缺血再灌注后和正常对照组相比，LVDP， +dp/dtmax， -(1 他11^乂降低，LVEDP升高，CF减少，HR无明显改变，CK、 LDH释放进 入冠脉流出液的量显著增多。在藻酸双酯钠治疗组观察到，和缺血对照组相比， 1 30mg/L的藻酸双酯钠再灌注60min使得LVDP， +dp/dtmax， -dp/dtmax升高，LVEDP降低，CF增加，HR无明显改变，，CK、 LDH释放进入冠脉流出 液的量减少。0.3 mg/L的藻酸双酯钠对上述各项心脏功能无明显改善作用。100 mg/L的藻酸双酯钠对心脏功能有抑制作用，应避免使用。实施例3藻酸双酯钠对大鼠心脏组织和冠脉流出液中TNF-a含量的影响(1) 取正常对照组平衡后KH液灌流30 min和60 min时的冠脉流出液， 以及缺血组再灌注后30 min和60 min的冠脉流出液，一20 'C保存。实验结束 后将心脏迅速标记称重，一70"C冻存。取新鲜标本每个样本各100mg，抽提 全蛋白，测浓度后一7(KC冻存备用。测定收集的冠脉流出液和心脏组织中的 TNF-a含量。(2) 结果参见图4，缺血再灌注后心脏组织和冠脉流出液中的TNF-a含量均明显上 升，1 30 mg/L的藻酸双酯钠治疗降低了 TNF-a的表达。0.3 mg/L和100 mg/L 的藻酸双酯钠对TNF-a的表达无明显影响。实施例4藻酸双酯钠对大鼠心脏p38， JNK和ERK通路的影响(1) 实验结束后将心脏迅速标记称重，一70。C冻存。取新鲜标本每个 样本各100mg，抽提全蛋白，测浓度后一7(TC冻存备用。取40吗蛋白于8 % SDS-PAGE电泳后，转至PVDF膜。用5%脱脂牛奶室温封闭1 h，然后与 磷酸化p38单抗(l: 1000)，磷酸化JNK单抗(1: lOOO)或磷酸化ERK单抗(h 1000)4'C孵育过夜，之后与羊抗兔二抗(h 2500)和GAPDH(1: IOOOO)室温孵 育lh， ECL试剂显影检测阳性信号。以GAPDH表达水平作为内参。(2) 结果参见图5，全心缺血再灌注后和正常对照组相比，磷酸化p38和磷酸化JNK 的表达都增强。1 30 mg/L的藻酸双酯钠再灌注60 min后，磷酸化p38和磷 酸化JNK的表达均有减弱，但和正常对照组相比未降至正常水平。0.3 mg/L 和100 mg/L的藻酸双酯钠对磷酸化p38和磷酸化JNK的表达无影响。磷酸化 ERK在各组的表达均无差异。上述这些结果显示出藻酸双酯钠对心脏缺血再灌注损伤引起的心脏功能 恶化和心肌损伤有保护作用。此外，藻酸双酯钠发挥该保护作用的有效浓度范 围为1 30 mg/L。低于1 mg/L的剂量无明显保护作用。100 mg/L的剂量对心 脏功能有抑制作用。
权利要求
1. 一种藻酸双酯钠在制备改善心脏功能药物中的应用，其特征是在制备心脏缺血再灌注后预防心功能损伤药物中的应用。
2. 根据权利要求1所述的藻酸双酯钠的应用，其特征是所述药物的制 剂形式主要包括液体制剂和固体制剂。
3. 根据权利要求1所述的藻酸双酯钠的应用，其特征是固体制剂主要 包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、滴丸剂。
4. 根据权利要求1所述的藻酸双酯钠的应用，其特征是液体制剂主要 包括口服液体制剂和注射液体制剂。
5. 根据权利要求1所述的藻酸双酯钠的应用，其特征是所述药物的给 药方式包括口服给药和注射给药。
全文摘要
本发明提供中药藻酸双酯钠在制备改善心脏功能药物中的应用。主要是在制备心脏缺血再灌注后预防心脏功能损伤药物中的应用。本发明提供的藻酸双酯钠能够直接改善缺血再灌注后的心脏功能不全，且该作用与藻酸双酯钠拮抗炎症因子TNF-α的表达，抑制与炎症有关的通路p38和JNK通路的激活有关。本发明制备的药物制剂形式主要包括液体制剂和固体制剂。本发明对中药藻酸双酯钠的药理作用进行二次开放，拓展了藻酸双酯钠的药用范围；并利用藻酸双酯钠的改善心脏功能作用，将藻酸双酯钠应用于制备治疗各种心脏缺血再灌注后心脏功能不全情况的药物。
文档编号A61P9/10GK101284013SQ200810061910
公开日2008年10月15日 申请日期2008年5月12日 优先权日2008年5月12日
发明者莹 杨, 胡申江 申请人:浙江大学