专利名称：一种石榴皮总酚的制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药和保健领域，具体是一种可食植物提取物及其应 用领域，尤其涉及石榴皮中提取和纯化一种具有抗菌活性的石榴皮总 酚的方法，由该方法获得的石榴皮总酚作为制备抗菌和抗氧化药物， 或此类药物的辅助剂治疗各种妇科疾病和癌症的用途。
背景技术：
妇科疾病是指妇女生殖系统感染所引起的疾病。由于女性生殖器 官的特殊性，加之繁重的工作和社会压力等因素，导致妇科疾病呈现 逐年上升趋势，其临床表现多种多样，病因复杂且常伴有多种严重并 发症，对女性的生活和工作带来了很大影响。
据WHO的调査表明中国41%的女性患者有不同程度的阴道炎症。 已婚女性，尤其在农牧区和边远地区发病率高达70%以上。这些地区， 卫生条件极其落后，妇科疾病现已成为急需解决的区域性疾病之一， 已引起相关部门的重视。
石榴皮是石榴科植物石榴(/^m'cagramm/m丄.)的干燥果皮。秋 季果实成熟后收集，晒干。石榴皮作为传统中药在我国历版药典中均 有收载，具有涩肠止泻，止血，驱虫等作用。用于治疗细菌性痢疾、 阿米巴痢疾、小儿消化不良、烧伤、化脓性中耳炎，脱肛，白带，虫 积腹痛等。现代药理研究显示其具有杀灭精子、防止性病传播、抗菌、 抗病毒、抗癌等独特的活性。
石榴总酚是一类具有总酚羟基化合物的总称，包括鞣花单宁、没 食子单宁、鞣花酸、没食子酸、儿茶素、花色素、绿原酸、阿魏酸等 多种化合物，具有抗氧化、抗衰老、抗癌防癌、抗菌、润肤美容、降血压和预防心脑血管疾病等多种生理和药理作用。与茶多酚和葡萄多 酚相比，石榴总酚的抗氧化性和抗菌活性更高，抗动脉粥样硬化作用 更为显著因此石榴多酚在食品、医药和日用化学品等领域显示出巨大 的应用价值。
鞣花酸是一个最有效的抗氧化剂，它能清除人体内致癌物，抑制 致癌物代谢，具有抗氧化、抗菌、抑制人体免疫缺陷病毒的性能。还 具有凝血、降压、镇静功能。在食品制作、饲料生产方面，鞣花酸可 以防止和延缓食品氧化、词料出现酸败变质作用。
因此，含鞣花酸类天然产物广泛应用于药品、保健品、化妆品、 食品领域。
发明专利(申请号为200710106039.1)"—种石榴皮提取物及 其制备方法"，公开了一种以石榴皮为原料，经溶剂提取和柱层析纯 化等方法得到安石榴苷含量高的提取物；发明专利(申请号为 200510002081.x)"—种石榴皮制备鞣花酸的方法"，公开了一种以石 榴皮为原料，经溶媒萃取、蒸发浓縮、酸化水解及结晶等过程制备高 纯度鞣花酸的方法。都与本发明的目的与方法有区别。
经过专利检索，没有发现与本发明类似的制备石榴皮总酚及其应 用在抗菌活性方面的文献。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以石榴皮为原料，经溶剂提取、浓缩、 大孔吸附树脂吸附一解吸、干燥等步骤制备石榴皮总酚的方法。本发 明以大量被人们废弃的占石榴20-30%的石榴皮作为原料，对于增加 农产品的附加值和综合利用率方面起很大的作用。采用本发明所述的 方法获得的石榴皮总酚中鞣花酸含量高，工艺简单，不含有机溶剂残 留物、无毒无害、符合食品、药物等领域的质量安全认证要求。同时， 由该方法获得的石榴皮总酚作为制备抗菌、抗氧化和抗癌药物的用 途，或此类药物的辅助剂的用途。本发明所述的一种石榴皮总酚的制备方法，按下列步骤进行
a、 采集新鲜石榴皮，清洗破碎后加入10-40倍量的提取溶剂水 或甲醇或乙醇或丙酮溶液，在温度20-6(TC下浸泡提取，提取时间 0.5-3个小时，提取卜3次，过滤，合并滤液，除去药渣；
b、 将步骤a的提取液，于温度30-4(TC浓縮，干燥得到石榴皮 总酚提取物，其中总酚含量达到38%，鞣花酸含量为4%;
c、 或将步骤a的提取液，于温度4(TC浓縮至无乙醇味，加水稀 释后，通过大孔吸附树脂，用水洗脱杂质后，再用含水乙醇溶液洗脱， 流出液经减压浓縮，干燥，得到石榴皮总酚纯化物，总酚含量达到 60-80%,其中鞣花酸含量达到40-50%。
步骤a中提取溶剂浓度为20-80%含水甲醇、乙醇或丙酮溶液。
步骤b干燥采用真空干燥或低温真空喷雾干燥或冷冻干燥。
步骤c加水量为1-5倍。
步骤c洗脱杂质用水量为2-5倍体积。
步骤c乙醇的浓度范围30-100%，用量为4-5倍体积
步骤c大孔吸附树脂为苯乙烯骨架的弱极性大孔吸附树脂，如
DlOl、 D141、 AB-8、 HPD-100、 HPD-300、 HPD-450、 HPD-750型。 所述的制备方法获得的石榴皮总酚作为制备治疗抑菌、抗氧化和
抗癌药物的用途。
所述的制备方法获得的石榴皮总酚作为制备治疗抑菌、抗氧化和
抗癌药物辅助剂的用途。
本发明所述的制备方法获得的石榴皮总酚具有很好的抗菌活性，
可用于生产抑菌、抗氧化和抗癌作用的药品或此类样品的辅助剂，能
克服人工合成的抗生素和西药药剂毒副作用大、价格高等缺点。
具体实施例方式
实施例1采集新鲜石榴皮lkg，清洗破碎，将碎石榴皮加入10倍量的提 取溶剂水，在温度2(TC下浸泡提取3次，提取时间0.5小时,过滤， 合并滤液，除去药渣；
将提取液，于温度3(TC浓缩，真空干燥，得到石榴皮总酚提取 物，其中总酚含量达到38%，鞣花酸含量为41
实施例2
采集新鲜石榴皮lkg,清洗破碎，将碎石榴皮中加入12倍量的 提取溶剂水，室温浸泡提取2次，时间1小时，过滤，合并滤液，除 去药渣；
将提取液，于温度4(TC浓縮至无乙醇味，加l倍量的水稀释后， 通过D101型大孔吸附树脂，用2倍体积的水洗脱杂质后，再用5倍 体积浓度为30%乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓縮，干燥，得到石 榴皮总酚纯化物，总酚含量达到65%,其中鞣花酸含量达到26%。
实施例3
采集新鲜石榴皮lkg,清洗破碎，将碎石榴皮中加入20倍量的 提取溶剂浓度为20%乙醇溶液，在温度3(TC下浸泡提取3次，每次 l小时，过滤，合并滤液，除去药渣；
将提取液，于温度35-C浓縮，低温真空喷雾干燥，得到石榴皮 总酚提取物，其中总酚含量达到22%，鞣花酸含量为2%。
实施例4
采集新鲜石榴皮lkg，清洗破碎，将碎石榴皮中加入25倍量的 提取溶剂浓度为40%甲醇溶液，在温度4(TC下浸泡提取2次，每次 l小时，过滤，合并滤液，除去药渣；
将提取液，于温度4(TC浓縮至无乙醇味，加3倍水稀释后，通 过AB-8型大孔吸附树脂，用3倍体积水洗脱杂质后，再用4倍体积 浓度为50%乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓縮，干燥，得到石榴皮 总酚纯化物，总酚含量达到60%，其中鞣花酸含量达到40。/。。实施例5
采集新鲜石榴皮lkg，清洗破碎，将碎石榴皮中加入35倍量的 提取溶剂浓度为50%丙酮溶液，在温度45。C下浸泡提取3次，每次 0.5小时，过滤，合并滤液，除去药渣；
将提取液，于温度4(TC浓縮，冷冻干燥得到石榴皮总酚提取物， 其中总酚含量达到30%，鞣花酸含量为3%;
实施例6
采集新鲜石榴皮lkg，清洗破碎，将碎石榴皮中加入25倍量的 提取溶剂浓度为70%乙醇溶液，在温度55"C下浸泡提取1次，时间 1.5小时，过滤，合并滤液，除去药渣；
将提取液，于温度4(TC浓縮至无乙醇味，加4倍水稀释后，通 过HPD-300型大孔吸附树脂，用4倍体积水洗脱杂质后，再用5倍体 积浓度为85%乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓縮，干燥，得到石榴皮 总酚纯化物，总酚含量达到70%，其中鞣花酸含量达到45%。
实施例7
采集新鲜石榴皮lkg，清洗破碎，将碎石榴皮中加入40倍量的 提取溶剂浓度为80%甲醇溶液，在温度58。C下浸泡提取2次，每次 l小时，过滤，合并滤液，除去药渣；
将提取液，于温度4(TC浓縮，真空干燥，得到石榴皮总酚提取 物，其中总酚含量达到35%，鞣花酸含量为3%。
实施例8
采集新鲜石榴皮lkg，清洗破碎，将碎石榴皮加入40倍量的提 取溶剂水，在温度58。C下浸泡提取2次，每次1.5小时，过滤，合 并滤液，除去药渣；
将提取液，于温度40'C浓縮至无乙醇味，加5倍水稀释后，通 过HPD-750型大孔吸附树脂，用5倍体积水洗脱杂质后，再用5倍体 积浓度为100%乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓縮，干燥，得到石榴皮总酚纯化物，总酚含量达到80%，其中鞣花酸含量达到50%。 实施例9
采集新鲜石榴皮lkg，清洗破碎，将碎石榴皮加入28倍量的提 取溶剂水溶液，在温度23'C下浸泡提取1次，提取时间0.5小时， 过滤，合并滤液，除去药渣；
将提取液，于温度32'C浓縮，低温真空喷雾干燥得到石榴皮总 酚提取物，其中总酚含量达到32%，鞣花酸含量为3.4%。
实施例10
釆集新鲜石榴皮lkg，清洗破碎，将碎石榴皮加入32倍量的提 取溶剂浓度为35%丙酮溶液，在温度45。C下浸泡提取3次，每次l 小时，过滤，合并滤液，除去药渣；
将提取液，于温度40。C浓縮至无乙醇味，加4倍水稀释后，通 过HPD-450型大孔吸附树脂，用3. 5倍体积水洗脱杂质后，再用4倍 体积浓度为60%乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓縮，干燥，得到石 榴皮总酚纯化物，总酚含量达到75%，其中鞣花酸含量达到46%。
实施例11
采用本发明所述方法获得的石榴皮多酚作为制备治疗抑菌、抗氧 化和抗癌药物的用途或作为制备治疗抑菌、抗氧化和抗癌药物辅助剂 的用途的实验
抗菌实验
(1) 、受试药物由本发明所述方法获得的总酚提取物和总酚 纯化物。
(2) 、试验菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、变形
杆菌、肺炎克雷伯菌、粪链球菌和白色念珠菌；标准菌大肠埃氏菌
ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC27853 和白色念珠菌ATCC10231。
(3) 、培养基MH琼脂培养基、MH肉汤培养基、沙保罗氏琼脂培养基、沙保罗氏肉汤培养基，由杭州天和微生物试剂有限公司生产。
(4) 、方法根据提取物性状，采用琼脂稀释法，分别用8种 受试药物对不同菌株进行抑菌试验。将各稀释度的提取物定量加入 相应的平皿中。用MH/沙保罗氏琼脂培养基定量倾注平板，使提取 物的终浓度分别为40、 20、 10、 5、 2.5、 1.25、 1.25、 0. 625mg/ml。 分别取MH/沙保罗氏肉汤液培养的上述各种试验菌，用灭菌生理盐 水配置成浓度为1X 107CFU/ml的菌液，每点接种5 u 1，细菌总数约 为0. 5X105CFU，同时设不含药物但接种与药物组等量试验菌的正常 对照，置37。C培养24h后观察结果。以同种菌株未生长的药物最高 稀释度为其MIC值。
(5) 、实验结果受试的样品对试验菌均有一定抗菌效果，其中 大孔吸附树脂纯化后的总酚抑菌效果最好。
权利要求
1、一种具有抗菌活性石榴皮总酚的制备方法，其特征在于按下列步骤进行a、采集新鲜石榴皮，清洗破碎后加入10-40倍量的提取溶剂水或甲醇或乙醇或丙酮溶液，在温度20-60℃下浸泡提取，提取时间0.5-3个小时，提取1-3次，过滤，合并滤液，除去药渣；b、将步骤a的提取液，于温度30-40℃浓缩，干燥得到石榴皮总酚提取物，其中总酚含量达到22—38％，鞣花酸含量为2—4％；c、或将步骤a的提取液，于温度40℃浓缩至无乙醇味，加水稀释后，通过大孔吸附树脂，用水洗脱杂质后，再用含水乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓缩，干燥，得到石榴皮总酚纯化物，总酚含量达到60-80％，其中鞣花酸含量达到40-50％。
2、 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤a中提取 溶剂浓度为20-80%含水甲醇、乙醇或丙酮溶液。
3、 根据专利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤b千燥采 用真空干燥或低温真空喷雾干燥或冷冻干燥。
4、 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤c加水量 为l-5倍。
5、 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤c洗脱杂 质用水量为2-5倍体积。
6、 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤c乙醇的 浓度范围30-100%，用量为4-5倍体积。
7、 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤c大孔吸 附树脂为苯乙烯骨架的弱极性大孔吸附树脂，如DlOl、 D141、 AB-8、 HPD-100、 HPD-300、 HPD-450、 HPD-750型。
8、 根据权利要求1所述的制备方法获得的石榴皮总酚作为制备治疗抑菌、抗氧化和抗癌药物的用途。
9、根据权利要求1所述的制备方法获得的石榴皮总酚作为制备 治疗抑菌、抗氧化和抗癌药物辅助剂的用途。
全文摘要
本发明涉及一种具有抗菌活性的石榴皮总酚制备方法及应用，该方法为将新鲜石榴皮，清洗破碎，烘干，采用溶剂提取法得到石榴皮总酚提取物或经加水稀释后，通过大孔吸附树脂吸附-解吸，浓缩，干燥制得石榴皮总酚纯化物。采用该方法得到的石榴皮总酚具有很好的抗菌和抗氧化活性，特别适于医药、保健领域，可用于生产抑菌、抗氧化和抗癌作用的药品或辅助剂，克服人工合成的抗生素和西药药剂毒副作用大、价格高等缺点。同时为石榴皮这一资源的综合开发利用提供了有效途径。
文档编号A61K36/185GK101428047SQ200810073030
公开日2009年5月13日 申请日期2008年12月16日 优先权日2008年12月16日
发明者婕 仲, 热依木古丽·阿布都拉, 罗玉琴, 阿吉艾克拜尔·艾萨 申请人:中国科学院新疆理化技术研究所