抑制淀粉样蛋白沉积的方法和化合物的制作方法

专利名称：：抑制淀粉样蛋白沉积的方法和化合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及可用于治疗淀粉才羊变性的方法和组合物。具体地说，本发明提供了用于抑制、预防或治疗例如胰岛中淀粉样蛋白沉积的方法和组合物。
背景技术：
：淀粉样变性是指特征为存在淀粉样蛋白的病症。淀粉样蛋白是一个类名，它是指一类不同但是特异的细胞内和细胞外蛋白沉积物，其与多种不同疾病有关。虽然其出现不同，但是所有淀粉样蛋白沉积物都具有共同的形态特征，包括它们可用特定染料(例如刚果红)染色，绿")。它们还具有共同的超微结构特征和共同的X-射线衍射以及红夕卜光谱。淀粉样变性在临床上可分为原发型、继发型、家族型和/或独立型。独立型淀粉样变性是趋于牵涉单一器官系统的淀粉样变性。不同的淀粉样变性还可以通过沉积物中存在的蛋白的类型来表征。例如，神经变性疾病例如瘙痒病、牛海绵状脑炎、Creutzfeldt-Jakob疾病等的特征是在中枢神经系统中出现和积聚着耐蛋白酶形式的蛋白酶传染性因子蛋白(称为AScr或PrP-27)。类似地，阿尔茨海默氏病一另一种神经变性疾病的特征是亲刚果性(congophilic)血管病、神经炎斑块和神经原纤维缠结，所有这些都具有淀粉样蛋白的特征。在该病症中，斑块和血管淀粉样蛋白是由p蛋白形成的。其它疾病例如在青少年和成人中开始发作的糖尿病、长期血液透析的并发症和长期炎症或浆细胞恶液质的后发病的特征是淀粉样蛋白的系统积聚。在每一这些病症中，不同的淀粉样蛋白原性蛋白参与淀粉样蛋白沉积。已知胰岛淀粉样多肽(IAPP)能够形成原纤维，这样的原纤维沉积在II型糖尿病患者的胰腺中，形成沉积物。一旦这些淀粉样蛋白沉积物已形成，没有任何能在原位显著减少或清除沉积物的已知治疗或疗法。
发明内容本发明提供了可用于治疗淀粉样变性的方法和组合物。本发明特别公开了用于抑制、预防和治疗例如胰岛中淀粉样蛋白沉积的方法和组合物，其中欲治疗的淀粉样蛋白沉积物是例如与胰岛淀粉样多肽(IAPP)有关的具有至少一些P-折叠结构的淀粉样蛋白沉积物。本发明方法包括给个体施用能抑制、减轻或分裂淀粉样蛋白沉积物例如与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物的治疗化合物。因此，本发明组合物和方法可用于在发生这样的淀粉样蛋白沉积的病症例如糖尿病中抑制淀4分样变性。在一个实施方案中，提供了在个体中抑制淀粉样蛋白沉积、特别是与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积的方法，其中是给所述个体施用有效量的IAPP抑制化合物或其可药用盐，以抑制所述与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积。这样的化合物包括下述通式化合物或其可药用酯、酸或盐<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中C是碳，N是氮，1、m、o、p和q独立地为0或1;n是0-3的整数；W是氢或者在生理pH为阴离子的基团；Y是在生理pH为阴离子的基团；R'和W独立地为氩、烷基、在生理pH为阴离子的基团，或者R和R2与它们所连接的氮可以一起形成未取代或取代的在杂环中有3-7个原子的杂环；f是氢、卤素、巯基或羟基；R4、R5、和R6独立地为氢或卣素；且A是氬或C:-"烷基。优选的治疗化合物包括3-(3-羟基-l-丙基)氨基-l-丙磺酸；2-氨基-5-磷酸戊酸(2-amino-5-phosphovalericacid);4-苯基-1-(3'-磺基丙基)-1，2，3,6-四氲吡啶；环己基氨基磺酸；0-磷酸-L-丝氨酸；六氟戊二酸；3-氨基-2-羟基-l-丙磺酸；8-甲氧基-5-壹啉磺酸；和3-二曱基氨基-l-丙磺酸，在附图10-14中描述的化合物，和它们的可药用酯、酸或盐。在另一个实施方案中，提供了在个体中抑制淀粉样蛋白沉积、特别是与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积的方法，其中是给所述个体施用有效量的IAPP抑制化合物或其可药用酯、酸或盐，以抑制所述与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积。这样的化合物包括下述通式化合物其中a1、a2、a3、a4、a4口a^虫立i也为亚烷基、0、S、或-nh-;m和n(对于每个独立的A基团)独立地为0或1;1、p和q独立地为0、1或2;R7、R8、R9、R11、R12、R"、和R"独立地为氩、烷基、脂环基、杂环基或芳基，并且相邻的R基团(例如W和R8)可形成未取代或取代的环或杂环。在一个实施方案中，R"可以是阴离子。优选的治疗化合物包括1,2，3,4-四氩异喹啉和在附图1-9中描述的化合物。在另一实施方案中，本发明涉及在患有与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积的个体中减轻淀粉样蛋白沉积的方法，该方法包括给所述个体施用有效量的IAPP抑制化合物或其可药用酯、酸或盐，以减轻与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积。本发明治疗化合物是通过能有效地抑制与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积的途径给个体施用的。合适的给药途径包括口服、透皮、皮下、舌下、颊、静脉内和腹膜内注射。治疗化合物可以与可药用载体一起给药。本发明还提供了用于治疗淀粉样变性的药物组合物。所述药物组合物包含能有效地抑制与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积的量的本发明治疗化合物与可药用载体。附图概述附图1-14描述的是在说明书中描述的化合物的示例性化学结构。具体实施方式通过下述定义来更充分地阐述本发明。"淀粉样蛋白"包括与IAPP有关的淀粉样蛋白，其包括但不限于基本上由IAPP亚单位构建的p-折叠淀粉样蛋白。"抑制"淀粉样蛋白沉积包括阻止或停止与IAPP有关的淀粉样蛋白形成例如原纤维形成，抑制或减緩已患有淀粉样变性的个体中的与IAPP有关的淀粉样蛋白进一步沉积，和减轻或逆转患有进行性淀粉样变性的个体中的与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积。对淀粉样蛋白沉积的抑制是相对于未治疗个体、或者相对于治疗前的治疗个体确定的，例如通过在临床上测定糖尿病患者胰腺功能的改善来确定的。本发明治疗化合物的适用的可药用酯、酸或盐在本发明范围内，例如碱金属盐、碱土金属盐、较高化合价阳离子盐(例如铝盐)、多阳离子反荷离子盐或铵盐。当化合物是阴离子化合物时，优选的可药用盐是钠盐。也包括其它盐，例如在其可药用范围内的盐酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐。本发明治疗化合物可以在可药用载体中施用。本文所用的"可药用载体"包括与化合物的活性相容并且对于个体来说是生理可接受的任何以及所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。可药用载体的实例是緩沖标准盐水(O.15MNaCl)。对于任何常规介质或辅剂，除了其必须与治疗化合物相容以外，还要考虑其在适于药物施用的组合物中的应用。还可以向本发明组合物中，惨入补充活性化合物。本文所用的"阴离子基团"是指在生理pH带负电荷的基团。优选的阴离子基团包括羧酸根、硫酸根、磺酸根、亚磺酸根、氨基磺酸根、四唑基、磷酸根、膦酸根、亚膦酸根、和硫代膦酸根或其官能等同物。阴离子基团的"官能等同物"包括生物电子等排物，例如羧酸根的生物电子等排物。生物电子等排物包括标准的生物电子等排物和非标准的生物电子等排物。标准和非标准的生物电子等排物是本领域已^口的(参见侈'H口Silverman,R.B.TheOrganicChemistryofdrugDesignandDrugAction,AcademicPress,Inc.:SanDiego,CA,1992,pp.19-23)。特别优选的阴离子基团是羧酸根。术语"烷基"包括饱和脂族基团，包括直链烷基、支链烷基、环烷基(脂环族烷基)、烷基取代的环烷基、和环烷基取代的烷基。在优选的实施方案中，直链或支链烷基在其骨架中具有30或少于30个碳原子(例如对于直链是C-C3。，对于支链是C广C3。)，更优选在骨架中具有20或少于20个碳原子。同样，环烷基可在其环结构中具有4-10个碳原子，更优选具有5、6或7个碳原子。此外，术语烷基既包括"未取代的烷基"，也包括"取代的烷基"，取代的烷基是指在烃骨架的一个或多个碳上具有取代基以代替氢的烷基。这样的取代基可包括例如卣素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸酯基(phosphonato)、次罅酯基(Phosphinato)、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基曱酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、或芳族或杂芳族基团。本领域技术人员应当理解，如果适当的话在烃链上被取代的部分自身可以被取代。环烷基可以被例如上述取代基取代。"芳烷基"是被芳基取代的烷基(例如苯基甲基(苄基))。在本文中，术语"芳基"包4舌5-元和6-元芳族基团，其中可包含0-4个杂原子，例如苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、嚅唑、噻唑、三口坐、四唑、吡唑、吡，定、吡。秦、P达，秦和嘧口定等。芳基还包括多环稠合芳基例如萘基、喹啉基、吲哚基等。在环结构中具有杂原子的芳基也可以称为"芳杂环"、"杂芳基"或"杂芳族化合物"。芳环可以在一个或多个环位点上被如上所述的取代基取代，例如被卣素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸酯基、次磷酸酯基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基曱酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、或芳族或杂芳族基团取代。芳基还可以与非芳族的脂环或杂环稠合或桥接以形成多环(例如四氩萘)。术语"链烯基，，和"炔基"包括不饱和脂族基团，其在链长和取代方面与上述烷基类似，但是分别含有至少一个双键和三键。除非具体指明碳原子的数目，"低级烷基"是指如上所定义的烷基，但是在其骨架结构中具有1-10个、更优选l-6个碳原子。同样，"低级链烯基"和"低级炔基，，具有类似链长。优选的烷基是低级烷基。术语"杂环基，，或"杂环基团"包括3-元-10-元环结构、更优选4-元-7-元环，所述环结构包含1-4个杂原子。杂环基包括吡咯烷、四氢呋喃、硫杂环戊烷(thiolane)、哌。定、哌。秦、吗啉、内酯、内酰胺例如氮杂环丁烷酮、磺内酰胺、磺酸内酯等。杂环可以在一个或多个环位点上被如上所述的取代基取代，例如被卣素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸酯基、次磷酸酯基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟曱基、氰基、叠氮基、杂环基、或芳族或杂芳族基团取代。术语"多环基"或"多环基团"包括两个或更多个环(例如环烷基、环烯基、环炔基、芳基和/或杂环)，其中有两个或更多个碳原子是两个相邻环所共有的，例如这些环是"稠合环"。经由非相邻原子连接的环称为"桥接，，环。多环的每个环都可以被如上所述的取代基取代，例如被卣素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸酯基、次磷酸酯基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基曱酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟曱基、氰基、叠氮基、杂环基、或芳族或杂芳族基团取代。术语"杂原子"包括除了碳或氢之外的任何元素的原子。优选的杂原子是氮、氧、硫和磷。本文所用术语"芳基醛"包括式Ar-C(0)H化合物，其中Ar是芳基(如上所述的芳基)，且-C(O)H是甲酰基或醛基。应当指出，某些本发明化合物的结构包括不对称碳原子。因此应当理解，除非另有指明，否则由于这样的不对称而产生的异构体(例如所有对映异构体和非对映异构体)包括在本发明范围内。通过标准分离技术和通过立体化学控制的合成能够以基本上纯的形式获得这样的异构体。此外，在适当时，烯烃或炔烃可包括E-或Z-几何构型。在实施方案中，本发明方法和组合物抑制、预防和治疗胰岛中的淀粉样蛋白沉积，其中所要治疗的淀粉样蛋白沉积是与胰岛淀粉样多肽(IAPP)有关的淀粉样蛋白沉积物，例如具有至少一些(3-折叠结构的淀粉样蛋白沉积物。本发明方法包括给个体施用能抑制、减轻或分裂与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物的治疗化合物。因此，本发明组合物和方法可用于在发生这样的淀4分样蛋白沉积的病症例如糖尿病中抑制淀粉样变性。在一个实施方案中，提供了在个体中抑制与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积的方法，其中是给所述个体施用有效量的IAPP抑制化合物或其可药用酯、酸或盐，以抑制所述与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积。这样的化合物包括下述通式化合物或其可药用酯、酸或盐R3I)o—(Y)p其中C是碳，N是氮，1、m、o、p和q独立地为0或1;n是0-3的整数；W是氢或者在生理pH为阴离子的基团；Y是在生理pH为阴离子的基团；Ri和W独立地为氢、烷基、在生理pH为阴离子的基团，或者W和R2与它们所连接的氮可以一起形成未取代或取代的在杂环中有3-7个原子的杂环；113是氢、卤素、巯基或羟基；R4、R5、和R6独立地为氢或卣素；且A是氢或C,-"烷基。在一个实施方案中，W优选为-C00H;Y优选为-C00H、-S03H、-P03H、或-OP(O)(OH)2;R"尤选为H、Me或羟基丙基；R"尤选为H、Me或-S03H;RM尤选为H、F、或OH;当R1和R2与它们所连接的氮一起形成未取代或取代的杂环时，优选的基团包括(R1NR2)。(W),——(A)m—()n—FT基可以是取代或未取代的直链、支链或环状烷基例如环己基。优选的治疗化合物包括3-(3-羟基-l-丙基)氨基-1-丙磺酸；2-氨基-5-磷酸戊酸；4-苯基-1-(3'-磺基丙基)-1,2，3，6-四氢吡咬；环己基氨基磺酸；0-磷酸-L-丝氨酸；六氟戊二酸；3-氨基-2-羟基-l-丙磺酸；8-甲氧基-5-喹啉磺酸；和3-二甲基氨基-l-丙磺酸，在附图10-14中描述的化合物，和它们的可药用酯、酸或盐。在另一个实施方案中，提供了在个体中抑制与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积的方法，其中是给所迷个体施用有效量的IAPP抑制化合物或其可药用酯、酸或盐，以抑制所述与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积。这样的化合物包括下述通式化合物或其可药用酯、酸或盐其中A1、A2、A3、A4、八5和a6独立;也为亚烷基、0、S、或-NH-;m和n(对于每个独立的A基团)独立地为0或1;1、p和q独立地为0、1或2;R7、R8、R9、R'°、R11、R12、R13、和R"独立地为氩、烷基、脂环烃基、杂环基或芳基，并且相邻的r基团(例如lT和rs)可形成未取代或取代的环或杂环。在一个实施方案中，r"可以是阴离子。优选的治疗化合物包括1,2，3,4-四氩异喹啉和在附图1-9中描述的化合物。本发明另一方面包括用于治疗淀粉样变性的药物组合物。在本发明方法中，可将如上所述的治疗化合物以能有效地抑制淀粉样变性或减轻淀粉样蛋白沉积的量掺入到药物组合物的可药用载体中。在本发明方法中，是通过给个体施用本发明治疗化合物来抑制个体中的淀粉样蛋白沉积。术语个体包括其中发生淀粉样变性的活生物体。个体的实例包括人、无尾猿、猴子、奶牛、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠、和其转基因变种。可用已知方法以能有效地抑制个体中淀粉样蛋白沉积或减轻淀粉样蛋白沉积的剂量和治疗持续时间给欲治疗的个体施用本发明组合物。达到治疗效果所需的治疗化合物的有效量可随因素例如在个体中的治疗位点已沉积的淀粉样蛋白的量、个体的年龄、性别、和体重、以及治疗化合物抑制个体中淀粉样蛋白沉积或减轻淀粉样蛋白沉积的能力而变。可调节给药方案以提供最佳治疗反应。例如，几份均分剂量可每日施用，或者可随着治疗情境的急迫程度有比例地降低剂量。活性化合物可通过诸如口服、舌下、颊、透皮、皮下、静脉内、和腹膜内给药这样的途径施用。根据给药途径，可用材料将活性化合物包衣以保护化合物不受酸、酶以及其它可使化合物失活的天然条件的影响。可将本发明化合物配制以确〗果在体内正确分布。例如，可将本发明治疗化合物配制在脂质体中。对于制备脂质体的方法，参见例如美囯专利4，522，811;5,374,548;和5，399,331。脂质体可包含一个或多个能选择性地转运到具体细胞或器官("靶向部分")内并因此提供了药物的耙向递送(参见例如V.V.Ranade(1989)J.Clin.Pharmacol.29:685)。耙向部分的实例包括叶酸盐或生物素(参见例如Low等人的美国专利5,416,016);甘露糖苷(Umezawa等人，(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun,里1038);抗体(P.G.Bloeman等人.(1995)FEBSLett.140;M.Owais等人.(1995)Antimicrob.AgentsChemother.旦180);表面活性蛋白A受体(Briscoe等人.(1995)Am.J.Physiol.1233:134);gpl20(Schreier等人.(1994)J.Biol.Chem.，9090);还参见LKei羅en;M.L.Uukka腦(1994)FEBSLett.里123;J.J.Killion;I.J.Fidler(1994)Imm漏methods^273。在优选的实施方案中，将本发明治疗化合物配制成脂质体；在更优选的实施方案中，脂质体包括靶向部分。为了通过除非胃肠道途径之外的途径施用治疗化合物，可能需要材料一起施用。例如，可将治疗化合物在适当载体例如脂质体或稀释剂中施用给个体。可药用稀释剂包括盐水和适当緩沖溶液。脂质体包括水包油包水CGF乳剂以及常规脂质体(Strejan等人，(1984)J.Neuroimmunol.2:27)。治疗化合物还可以非胃肠道、舌下、颊、腹膜内、脊柱内、或脑内给药。分散体可在例如甘油、液体聚乙二醇、和其混合物、以及油中制备。在常规贮存和使用条件下，这些制剂可含有防腐剂以防止微生物生长。适于注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(溶于水的)或分散体和用于临时配制无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，组合物都必须是无菌的，并且是其程度使得能够进行注射的流体。其在制备和贮存条件下必须是稳定的，并且必须被保护以防止受微生物例如细菌和真菌作用的污染。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、和液体聚乙二醇等)、其合适的混合物、和才直物油。可例如通过〗吏用包衣例如卵磷脂、通过维持所需的粒径(对于分散体)、和通过使用表面活性剂来保持适当流动性。防止微生物的作用可通过各种抗菌剂和抗真菌剂例如paraben、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫汞4敬等来实现。在许多情况下，组合物优选包含等渗剂例如糖、氯化钠、或聚醇例如甘露醇和山的物质例如硬脂酸铝或明胶来实现。无菌注射溶液可通过按照需要将所需量的治疗化合物掺入在具有一种上述组分或上述组分混合物的适当溶剂中、然后过滤灭菌而制得。一般情况下，分散体可通过将治疗化合物掺入到含有基本分散体基质和所需其它上述组分的无菌载体中而制得。对于用于制备无菌注射溶液的无菌粉末，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其能由过滤灭菌的溶液获得活性组分(即治疗化合物)和任何其它所需组分的粉末。治疗化合物可口服给药，例如用惰性稀释剂或可同化的食用载体口服给药。还可以将治疗化合物和其它组分包封在硬壳或软壳明胶胶嚢中，压制成片，或者直接掺入到个体的饮食中。对于口服治疗给药，可将治疗化合物与赋形剂混合，并以吞咽片、舌下/颊片、锭剂、胶嚢、酏剂、悬浮剂、糖浆剂、糯米纸嚢剂等的形式给药。当然，治疗化合物在组合物和制剂中的百分比可以变化。治疗化合物在这样的治疗用组合物中的量是能获得适当剂量的量。尤其有利的是将非胃肠道给药用组合物配制成易于给药和剂量均匀性的单位剂型。本文所用的单位剂型是指适于作为单位剂量用于所治疗的个体的物理不连续单位；各单位含有经计算能产生所需治疗作用的预定量的治疗化合物以及所需的药物载体。关于本发明单位剂型的具体要求由并直接取决于(a)治疗化合物的独特特征以及想要达到的特定治疗作用，和(b)在混合用于治疗个体中淀粉样蛋白沉积的化合物的领域中的内在限制。活性化合物是以足以抑制个体中淀粉样蛋白沉积的治疗有效剂量给药的。相对于未治疗个体或在治疗前的相同个体，"治疗有效剂量"优选抑制淀粉样蛋白沉积和/或减少淀粉样蛋白沉积物至少约20%、更优选至少约40%、甚至更优选至少约60%,特别更优选至少约80%。可在能够预测在人疾病中抑制淀粉样蛋白沉积或减少淀粉样蛋白沉积物的动物才莫型系统中测定4匕合物抑制淀粉样蛋白沉积或减少淀粉样蛋白沉积物的能力。化合物抑制淀粉样蛋白沉积的能力也可以通过使用例如ELISA分析在体外测定化合物抑制淀粉样蛋白沉积的能力来评价。可通过硫黄素T(ThT)分析、圓二色性(CD)或红外(IR)光谱法进一步测定化合物对淀粉样蛋白的二级结构的作用。CD和IR光谱法是特别有用的技术，因为所获得的信息能通过确定化合物对淀粉样蛋白折叠和/或原纤维形成的结构作用而直接测定出测试化合物预防或逆转淀粉样变性的能力。这与以前已知的测定淀粉样蛋白前体的细胞运输或淀粉样蛋白与细胞外基质蛋白之间的相互作用、仅间接提供潜在淀粉样蛋白抑制活性的方法不同。还应当指出，CD和IR光谱法还可检测能提高例如淀粉样蛋白p-折叠、从而稳定淀粉样蛋白原纤维的化合物。淀粉样蛋白沉积是多步过程。因此，用于治疗淀粉样变性的活性剂具有多种潜在作用方式。抑制淀粉样蛋白沉积的活性剂可以以一种或多种下述途径起作用，提供这些途径仅是举例说明而不是限制1.抑制或延迟溶液中蛋白的折叠；2.抑制或延迟低聚淀粉样肽聚集/延长成原纤维和/或沉积物；和3.分裂/溶解/修饰淀粉样蛋白原纤维和/或沉积物；类型1和2相当于阻止形成淀粉样蛋白沉积物(减緩或停止淀粉样蛋白沉积)，类型3相当于除去或修饰已经形成的沉积物(除去或减少现存的淀粉样蛋白沉积物)。通过下述实施例来进一步举例说明本发明，^旦这些实施例不是限制本发明。实施例1通过硫黄素T光谱法测定淀粉样蛋白原纤维形成的速度硫黄素T(ThT)结合形成p-折叠的淀粉样蛋白，使组织切片和原纤维在体外表现出黄色荧光。ThT荧光的测定可用作在不同条件下的淀粉样蛋白原纤维形成的灵敏测定。该测定方法已用于实验中以测定本发明化合物对淀粉样蛋白原纤维形成的影响。才法将合成的人IAPP(Bachem)溶于40%三氟乙醇中，并冷冻干燥成方便量取的等分试样。制备LAPP,然后立即通过将其溶于40%1,1,1，3，3，3-六氟-2-丙醇(HFIP)的水中以使肽维持oc螺线构象并且可溶来进行测定。制备ThT(2.5mM)的贮备液，即7.9mg在10mLTris-HClpH7.0中的溶液，并过滤(0.22pm)。将溶液保持在黑暗中直至使用。在44Qnm激发(狭缝5歷)、482nm发射(狭缝lQnm)以及搅拌下测定荧光。将25mlThT贮备液(终浓度为62.5^M)加到肽样本中，并在比色杯中补至lmL。将样本搅拌5分钟，然后读取数据。在最初的时间点(制备样本后5分钟)开始测定，然后在接下来的4-6小时和于室温培养过夜后定时测定。使用该方法发现，本文所公开的一些化合物(或如上所述的其盐)，即3-(3-羟基-1-丙基)氨基-l-丙磺酸；2-氨基-5-磷酸戊酸；4-苯基-1-(3'-磺基丙基)-1，2,3,6-四氢吡啶；环己基氨基磺酸；0-磷酸-L-丝氨酸；六氟戊二酸；8-曱氧基-5-喹啉磺酸；3-氨基-2-羟基-1-丙磺酸；和3-二曱基氨基-l-丙磺酸，以及1,2，3,4-四氬异p套啉能抑制或阻止与IAPP有关的原纤维集合。实施例2依据本发明公开内容，通过测定存在或不存在(3-折叠构象，进行圆二色性以确定一些治疗化合物阻止或抑制与IAPP有关的原纤维形成的活性。所得结果列在表l中。如下所述进^于该测定仪器和参数仪器JASCOJ-715分光偏振计小池/比色杯具有1.0mm通路长度的Hellma石英(QS)室温波长间隔250nm—190nm分辨率Q.1nm带宽1.0nm响应时间1秒扫描速度20nm/分钟光谱运行数目5该测定一一种共培养方法测定了化合物或物质抑制淀粉样蛋白原纤维集合的能力，例如测试在可溶性IAPP存在下淀粉样蛋白(3-折叠构象的存在。在和不在(即仅有水)緩沖剂存在下测定样本，这样做是测定使用离子緩冲剂(通常是磷酸盐)是否观察到竟争性作用。A.^又在水中测定加入比例为1:10[肽化合物]的所用组分；向含有化合物的水溶液中加入10(aL浓度为10mg/mL的IAPP贮备液(最终是100(ig肽)，使终体积为400jLil。测定最终分4斤溶液的pH以确保没有任何波动，并使用如上所述的参数累计光谱。B.在磷酸盐緩沖液中测定加入所需量的化合物以在10mM磷酸盐緩冲液，pH7中获得1:10的摩尔比。向含有化合物的该磷酸盐緩冲溶液中加入10|iL浓度为10mg/mL的IAPP贮备液(最终是100pg肽)，使终体积为400jil。测定最终分析溶液的pH以确保没有任何波动，并〗吏用如上所述的参数累计光谱。在这两个分析中，4要各自的测试组测定对照才羊本。该对照4又在400pl类似终体积的水或緩沖液中含有肽。首先收集对照的光谱(第一次测定)，最后收集测试组(最后测定)，以确j呆在测定期间肽不进行广泛聚集。使用对照组的光谱以与用处理样本获得的测定结果进行比较。共培养制备1mg/mL的IAPP在10mM磷酸盐緩沖液，pH7中的新鲜贮备液。加入所需量的化合物以在10mM磷酸盐緩冲液，pH7中获得1:10的摩尔比。在室温培养3天。用lOmM磷酸盐緩冲液，pH7将体积补足至400(iL。测定最终分析溶液的pH以确保没有任何波动，并使用如上所述的参数累计光谱。测定类似对照以进行比较。数据分析独立收集光谱图(对照和处理)，并测定在218nm的椭圓率改变。其最小值直接与样本中存在的P-折叠的量相关。记录正向和负向中的变化，并用相对值("有活性"或"无活性")表示所测定的化合物的活性。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>实施例3下面描述本发明化合物一钠盐形式的4-苯基-l-(3'-磺基丙基)-1，2，3，6-四氬吡咬的合成。在室温向4-苯基吡t定(15.5g，0.1mol)在丙酮(100mL)内的溶液中加入1，3-丙石黄内酯(12.2g,0.1mol)。然后将该混合物在回流温度加热过夜。将所得悬浮液冷却至室温。通过过滤收集固体，并用丙酮洗涤。向该固体(31g)在曱醇(500mL)内的溶液中分批加入硼氢化钠(10g，260mmo1),并将该混合物在室温搅拌2小时。加入蒸馏水(50mL)以^1坏过量硼氢化钠。将该混合物用曱醇(200ml)稀释，并用AmberliteIR-120离子交换树脂(H+形式，300g)中和。形成了白色沉淀。通过过滤除去沉淀和树脂，并在约100。C用蒸馏水(400mL)处理。将该混合物过滤，并用热的蒸馏水(2x200mL)洗涤。合并滤液和洗涤液，并浓缩至干。将残佘物与曱醇(3x200mL)—起蒸发，然后从乙醇-水{8:2(v/v))中重结晶，获得了4-苯基-1-(3'-磺基丙基)-1，2,3,6-四氢吡啶，其为白色结晶(26g，93%)。其'H和13C画R光语与结构相一致。向上面所得4-苯基-1-(3'-磺基丙基)-l,2,3,6-四氢吡啶(5.6g20mmol)在乙醇(180mL)内的溶液中加入氬氧化钠(1,2g，30mmol)。将该悬浮液在回流温度加热30分钟。然后将该混合物冷却至室温。通过过滤收集第一批产物(3.9g，64%)。将滤液浓缩至干，用乙醇将残余物重结晶，获得了第二批产物(2.0g，32%)。'HNMR(400MHz,D20):S1.85(五重峰，2H，J8.7，7.7Hz，2H-2'),2.39—2.45(m,4H,2H墨3'and2H-3)，2.59(t，2H,J5.6Hz，2H-2)，2.80(t，2H,J7.7H2,2H-l'),3.00(brs,2H'2H-6)，6.00(brs,IH,H陽5)，7.18—7.36(m,5H,Ar).13CNMR(100.6MHz，D20):S23.90(C-2')，29.01(C-3),51.69,51.76(C-2，C-3'),54.45(C-6),58.12(C-')，123.75(C-5),127.31,130.01，131.24(Ar)，136.89(C-4),142.47(Ar).等同物本领域技术人员将认识到，或者能够使用至多常规实验来得到本文所描述的具体操作的多个等同物。这样的同等物在本发明范围内，并且为下述权利要求所覆盖。在本申请中引用的所有参考文献、公开的专利、和出版的专利申请都引入本发明以作参考。权利要求1.下式化合物或其可药用酯、酸或盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗特征是与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物的疾病其中C是碳，N是氮，1、m、o和p独立地为0或1；q为0；n是1-3的整数；W是氢或者选自羧酸根、亚磺酸根和磺酸根的阴离子基团；Y是选自羧酸根、亚磺酸根和磺酸根的阴离子基团；R3是氢、卤素、巯基或羟基；R4、R5和R6独立地为氢或卤素；且A是氢或C1-C6烷基。2.下式化合物或其可药用酯、酸或盐在制备药物中的用途，所述药物用于减少与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中C是碳，N是氮，1、m、o和p独立地为O或l;q为0;n是l-3的整数；W是氩或者选自羧酸根、亚磺酸根和磺酸根的阴离子基团；Y是选自羧酸根、亚磺酸根和磺酸根的阴离子基团；W是氪、卣素、巯基或羟基；R4、RS和116独立地为氢或卣素；且A是氢或d-Q烷基。3.下式化合物或其可药用酯、酸或盐在制备药物中的用途，所述药物用于抑制与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中C是碳，N是氮，1、m、o和p独立地为O或l;q为0;n是1-3的整数；W是氢或者选自羧酸根、亚磺酸根和磺酸根的阴离子基团；Y是选自羧酸根、亚磧酸根和磺酸根的阴离子基团；W是氢、卤素、巯基或羟基；R4、115和W独立地为氢或卤素；且A是氢或C,-Q烷基。4.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述化合物选自六氟戊二酸；3,3-二(三氟曱基)-2,2,4，4-四氟-1,5-戊二酸；2,2,3，3-四氟-l,4-丁二酸；2，2,4，4-四氟-1,5-戊二酸；六氟-l,3-丙二亚磺酸；2,2-二氟-1,3-丙二酸和其可药用酯、酸或盐。5.权利要求4的用途，其中所述化合物为六氟戊二酸或其可药用酯或盐。6.权利要求1-5中任一项的用途，其中所述与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物出现在胰岛中。7.权利要求1-5中任一项的用途，其使得IAPP原纤维形成被抑制。8.权利要求1-5中任一项的用途，其使得与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物;故抑制。9.一种选自以下的化合物3,3-二(三氟甲基)-2，2，4,4-四氟-1,5-戊二酸；2,2，4，4-四氟-l，5-戊二S臾；和3-羟基-2，2，4，4,4-五氟-3-苯基丁酸，或其可药用酯、酸或盐。10.—种药物组合物，其包含4又利要求9的化合物和可药用载体。11.权利要求9的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗特征是与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物的疾病。12.权利要求9的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于减少与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物。13.权利要求9的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于抑制与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物。14.权利要求11-13中任一项的用途，其中所述与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物出现在胰岛中。15.权利要求11-13中任一项的用途，其使得IAPP原纤维形成被抑制。16.权利要求1-5中任一项的用途，其使得与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物;故抑制。17.权利要求1-8和11-16中^f壬一项的用途，其基本如本文及其实施例所述。18.权利要求9的化合物，其基本如本文及其实施例所述。19.权利要求10的组合物，其基本如本文及其实施例所述。全文摘要本发明提供了可用于治疗淀粉样变性的方法和组合物。本发明特别提供了用于抑制、预防或治疗例如胰岛中淀粉样蛋白沉积的方法和组合物，其中所述淀粉样蛋白沉积物是与胰岛淀粉样多肽(IAPP)有关的淀粉样蛋白沉积或沉积物。本发明方法包括给个体施用能抑制与IAPP有关的淀粉样蛋白沉积物的治疗化合物。因此，本发明组合物和方法可用于在发生这样的淀粉样蛋白沉积的病症例如糖尿病中抑制淀粉样变性。文档编号A61K31/47GK101396352SQ20081014985公开日2009年4月1日申请日期2000年5月24日优先权日1999年5月24日发明者A·古普塔,D·F·韦弗,D·米格内奥尔特,W·A·沙雷克,X·孔申请人:贝卢斯健康(国际)有限公司