β淀粉样蛋白结合蛋白的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是国际申请日为2011年4月13日、国际申请号为PCT/US2011/032269、进 入国家阶段的申请号为201180029833. 5、发明名称为" β淀粉样蛋白结合蛋白"的PCT申 请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及β淀粉样蛋白（Αβ )结合蛋白，编码所述蛋白质的核酸，产生所述蛋 白质的方法，包含所述蛋白质的组合物和所述蛋白质在状况例如淀粉样变性例如阿尔茨海 默氏病的诊断、治疗和预防中的用途。
【背景技术】
[0003] 阿尔茨海默氏病（AD)是特征在于认知能力的进行性丧失和特有的神经病理学特 征的神经变性病症，所述神经病理学特征包含在脑的几个区域中的β淀粉样蛋白（Αβ) 肽的沉积物、神经原纤维缠结和神经元丧失（Hardy和Selkoe，Science 297 :353, 2002 ; Mattson，Nature 431 :7004, 2004。与在阿尔茨海默氏病中观察到的那些非常类似的脑淀粉 样蛋白沉积物和认知损害也是唐氏综合征（21三体)的标志，所述唐氏综合征以800次出生 约1次的频率发生。
[0004] Αβ肽起于通过蛋白酶解加工的淀粉样蛋白前体蛋白质（APP)。这种加工通过命 名为α-、β-和Y-分泌酶的几种蛋白酶的合作活性实现，并且导致不同长度的许多特异 性片段。淀粉样蛋白沉积物主要由长度40或42个氨基酸（Αβ40，Αβ42)的肽组成。除了 人变体外，这还包括存在于除人外的生物特别是其他哺乳动物尤其是大鼠中的淀粉样蛋白 β (1-42)蛋白的同种型。在水环境中趋于聚合的这种蛋白质可以以非常不同的分子形式 存在。不溶性蛋白质的沉积与痴呆病症例如阿尔茨海默氏病的出现或进展的简单关联已证 明是不可信的。（Terry 等人，Ann. Neurol. 30 :572 - 580,1991 ;Dickson等人，Neurobiol. Aging 16:285 - 298,1995)。相比之下，突触和认知感知的丧失看起来与可溶形式的Αβ (1-42)更好地关联（Lue 等人，Am. J. Pathol. 155 :853_862，1999 ;]\1。1^3]1等人，八1111· Neurol. 46:860-866,1999)。
[0005] 在过去已针对单体Αβ (1-42)产生的多克隆和单克隆抗体无一证明产生所需疗 效，也不在动物和/或人中引起严重副作用。例如，来自在极老的ΑΡΡ23小鼠中的临床前研 宄的被动免疫接种结果指示治疗上相关的副作用，所述小鼠每周接受一次针对N末端的抗 Αβ (1-42)抗体，共5个月。特别地，与盐水处理的小鼠相比较，这些小鼠显示微出血数目 和严重性中的增加（Pfeifer等人，Science 298 :1379, 2002)。在出血中的相似增加也对于 极老的（>24 个月）Tg2576 和 PDAPP 小鼠描述（Wilcock 等人，J Neuroscience 23 :3745-51， 2003 ;Racke 等人，J Neuroscience 25 :629-636,2005)。在两个品系中，抗 Αβ (1-42)的 注射导致微出血的显著增加。
[0006] WO 2004/067561 涉及 Αβ (1-42)肽的球形寡聚体（"球聚体（globulomers)"）和 用于制备其的过程。WO 2006/094724涉及不可扩散的球形A β (X - 38 .. 43)寡聚物， 其中X选自数目I .. 24。WO 2004/067561和WO 2006/094724进一步描述球聚体的限制 性蛋白酶解获得所述球聚体的截短形式，例如Αβ (20 - 42)或Αβ (12-42)球聚体。WO 2007/064917描述了重组形式的淀粉样蛋白β肽(下文称为N-Met Αβ (1-42))及其球聚 体形式的克隆、表达和分离。数据暗示存在Αβ折叠且装配成Αβ球聚体的淀粉样蛋白纤 丝独立途径，所述A β球聚体显示一种或多种独特表位(下文称为球聚体表位)。因为球聚 体表位在AD患者和APP转基因小鼠的脑中检测出，并且球聚体与神经元特异性结合且阻断 LTP，所以球聚体代表病理学相关的A β构象子。已发现可溶性A β球聚体基本上通过与P/ Q型突触前钙通道相互作用发挥其有害作用，并且这种相互作用的抑制剂因此对于淀粉样 变性例如阿尔茨海默氏病的治疗是有用的（W0 2008/104385)。
[0007] 与Αβ的此类球聚体形式选择性结合的抗体已在WO 2007/064972、W0 2007/0628 52、W0 2008067464、W0 2008/150946 和 WO 2008/150949 中描述。例如，由 WO 2007/062852 和TO 2008/150949已知的几种单克隆抗体特异性识别Aβ (20-42)球聚体。
[0008] 存在关于开发生物制品例如Αβ结合蛋白的巨大的、未满足的治疗需要，所述Αβ 结合蛋白阻止或减慢疾病的进展而不诱导对人体的负面和潜在致死的作用。考虑到一般人 群渐增的寿命，和随着这种增加每年诊断有阿尔茨海默氏病或相关病症的患者数目中的伴 随增加，此类需要是特别显而易见的。进一步地，此类Αβ结合蛋白将允许正确诊断在经历 其症状的患者中的阿尔茨海默氏病，这是目前仅可在验尸后证实的诊断。另外，Αβ结合蛋 白允许阐明负责这种衰竭性疾病的蛋白质和其他生物因子的生物学性质。
【发明内容】
[0009] 本发明提供了能够结合可溶性Αβ球聚体例如如本文描述的Αβ (20-42)球聚 体的A β结合蛋白（或简单地"结合蛋白"）的新家族、CDR嫁接的抗体、人源化抗体及其片 段。应当指出本发明的结合蛋白还可以与除了本文描述的Αβ球聚体外的Αβ形式反应 (即，结合)，此类Αβ形式可以存在于具有淀粉样变性例如阿尔茨海默氏病的患者的脑中。 这些Αβ形式可以是或不是寡聚物或球聚体的。本发明的结合蛋白与之结合的Αβ形式 包括任何A β形式，其包含鼠/小鼠单克隆抗体m4D10与之反应的球聚体表位(下文称为 "m4D10")。m4D10及其性质在引入本文作为参考的WO 2007/062852中描述。此类Αβ形式 在下文称为"靶向Αβ形式"。进一步地，本发明还提供了用其抑制所述靶向Αβ形式的活 性的治疗方法，且提供用于治疗与所述靶向Aβ形式相关的疾病特别是淀粉样变性例如阿 尔茨海默氏病的组合物和方法。
[0010] 在一个方面，本发明提供了包含下述的结合蛋白：与下述至少90%等同的第一个 氨基酸序列
【主权项】
1. 一种抗体，其包含： 与SEQ ID N0:2或SEQ ID N0:3至少90%等同的第一种氨基酸序列，其中所述第一种 氨基酸序列包含由SEQ ID NO: 17-19组成的至少三个互补决定区；和 与SEQ ID NO: 1至少90%等同的第二种氨基酸序列，其中所述第二种氨基酸序列包含 由SEQ ID N0:20-22组成的至少三个互补决定区， 其中所述抗体不结合血小板因子4 (PF-4)。
2. 根据权利要求1的抗体，其中所述第一种氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少 90% 等同：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO:10 和 SEQ ID NO:11。
3. 根据权利要求1的抗体，其中所述第二种氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少 90% 等同：SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15 和 SEQ ID NO: 16。
4. 根据权利要求1 - 3中任一项的抗体，其包含： 与选自下述的氨基酸序列至少90%等同的第一种氨基酸序列：SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10 和 SEQ ID NO:11;和 与选自下述的氨基酸序列至少90%等同的第二种氨基酸序列：SEQ ID N0:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15 和 SEQ ID NO:16。
5. 权利要求1 _ 4的抗体，其中所述抗体选自：免疫球蛋白分子、二硫键合的Fv、单克 隆抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR嫁接的抗体、双抗体、人源化抗体、多特异性抗 体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab'、双特异性抗体、F (ab'）2和Fv。
6. 权利要求1 _ 6中任一项的抗体，其进一步包含具有选自SEQ ID NO: 27和SEQ ID NO:28的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链恒定区。
7. 根据权利要求1 - 7中任一项的抗体，其中所述抗体进一步包含选自下述的试剂： 免疫粘附分子；显像剂和治疗剂。
8. 根据权利要求1 _ 7中任一项的抗体，其中所述抗体具有人糖基化模式。
9. 一种分离的核酸，其编码权利要求1 _ 8中任一项的抗体。
10. -种载体，其包含权利要求9的分离的核酸。
11. 一种宿主细胞，其包含权利要求10的载体。
12. -种产生抗体的方法，其包括在足以产生所述抗体的条件下在培养基中培养权利 要求10的宿主细胞。
13. -种抗体，其根据权利要求11的方法产生。
14. 一种药物组合物，其包含权利要求1 - 8或14中任一项的抗体和药学可接受的载 体。
15. 权利要求14的药物组合物，其进一步包含至少一种另外的治疗剂。
16. -种用于释放抗体的组合物，所述组合物包含： (a) 制剂，其中所述制剂包含权利要求1 - 8中任一项的抗体和成分，其中所述抗体是 结晶的；和 (b) 至少一种聚合载体。
17. 权利要求1 - 8中任一项的抗体在制备用于治疗患有选自下述的疾病 或病症的受试者的药物中的用途：a 1-抗胰蛋白酶缺乏、Cl-抑制剂缺乏血管性水 月中、抗凝血酶缺乏血栓栓塞性疾病、库鲁病、克雅二氏病/羊瘙痒症、牛海绵状脑病、 Gerstmann-Straussler-Scheinker病、家族致命性失眠症、亨廷顿氏病、脊髓小脑性共济失 调、Machad 0-Jos印h萎缩、齿状红核苍白球肌萎缩症、额颞痴呆、镰状细胞性贫血、不稳定性 血红蛋白包涵体溶血、药物诱发的包涵体溶血、帕金森氏病、全身性AL型淀粉样变性、结节 性AL型淀粉样变性、全身性AA型淀粉样变性、前列腺淀粉样变性、血液透析淀粉样变性、遗 传性(冰岛）脑血管病、亨廷顿氏病、家族性内脏淀粉样变性、家族性内脏多神经病、家族性 内脏淀粉样变性、老年性全身性淀粉样变性、家族性淀粉样蛋白神经病、家族性心脏淀粉样 变性、阿尔茨海默氏病、唐氏综合症、甲状腺髓样癌和2型糖尿病（T2DM)。
【专利摘要】本发明涉及β淀粉样蛋白（Aβ）结合蛋白。本发明的抗体对于Aβ（20-42）球聚体或包含球聚体表位的任何Aβ形式具有高亲和力。还提供了制备本发明抗体的方法和使用本发明抗体的方法。
【IPC分类】A61P25-14, C07K16-18, A61P25-20, C12N15-13, A61P35-00, A61P25-16, A61P25-00, A61P7-00, A61P7-10, A61P7-02, A61K39-395, A61P3-10, A61P25-28
【公开号】CN104744591
【申请号】CN201510136184
【发明人】S.巴格霍恩, H.希伦, A.施特里宾格, S.吉艾西, U.埃伯特, L.贝纳特伊尔
【申请人】Abbvie德国有限责任两合公司, Abbvie 公司
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2011年4月13日
【公告号】CA2796339A1, CN102933601A, EP2558494A2, US8987419, US20110256138, US20150218261, WO2011130377A2, WO2011130377A3