专利名称：：来普霉素b的新用途及含有它的药物组合物和产品的制作方法
技术领域：
：本发明涉及来普霉素B的新的药物用途，具体涉及来普霉素B用于逆转肿瘤多药耐药的用途。
背景技术：
：肿瘤多药耐药(Multi-drugresistance,MDR)是指肿瘤细胞在化疗药物的诱导下，对多种化学结构相似或不同的其它化疗药物同时产生耐药的现象。多药耐药是肿瘤临床化疗失败的主要原因，大多数肿瘤患者的死因与肿瘤多药耐药直接或间接相关，因此，寻找肿瘤多药耐药逆转剂是抗肿瘤药物研究的重要方向之一。肿瘤多药耐药形成的分子机制十分复杂，其中主要的机制之一是肿瘤细胞多药耐药基因mdrl编码的产物P-糖蛋白(permeabiliaty-glycoprotein，简写为P-gp)表达水平升高。P_gp是一种跨膜蛋白，分子量约为170KD，在细胞内发挥着"药泵"的作用，在消耗ATP的条件下将细胞内的化疗药物逆浓度梯度泵出细胞外，使细胞内药物积聚减少，降低化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，使肿瘤细胞产生耐药。临床上使用的多种化疗药物，例如紫杉烷类、蒽环类、长春碱类等都是P-gp的底物。因此，当肿瘤细胞产生由P-gp蛋白表达水平升高引起的耐药时，肿瘤细胞将对多种结构和功能不同的化疗药物均产生耐药性，导致肿瘤化疗的失败。已知有多种因素可导致肿瘤细胞内P-gp的高表达，细胞毒性化疗药物诱导是其重要机制之一，而且，可以诱导多种肿瘤细胞和肿瘤组织的P-gP蛋白表达水平的升高。多药耐药肿瘤的治疗方案与传统意义上的癌症治疗有所不同，多药耐药肿瘤的治疗是针对临床癌症治疗过程中对细胞毒性化疗药物已经产生耐药或交叉耐药的肿瘤的治疗，其根本目的是通过某种途径有效逆转肿瘤的多药耐药性，恢复耐药肿瘤对化疗药物的敏感性，提高耐药肿瘤的治疗效果。肿瘤多药耐药现象是临床上有效治疗癌症的主要障碍之一，如何有效逆转肿瘤多药耐药也是长期以来一直困扰着人们的一个重大难题。虽然人们已经进行了诸多研究和尝试，包括使用单克隆抗体、免疫毒素、双重特异性抗体、反义脱氧核苷酸、核酶及白蛋白偶合的药物等等，尤其以P-gp蛋白为靶标的抑制剂，从二十世纪八十年代以来，已经先后产生了三代产品，但是，由于每一代产品都存在着不能被临床所接受的副作用。因此，迄今为止，仍未发现可以被临床所接受的有效逆转肿瘤多药耐药的药物。由此可见，寻找具有有效地逆转肿瘤多药耐药作用的药物对于临床医疗仍具有重要意义，这也是本发明所要解决的首要问题。来普毒素B(L印tomycinB，简称LMB)是一禾中由链毒菌Str印tomycesspp.产生的次级代谢产物，最初发现是一种有效的抗真菌剂。来普霉素B是一种常用的细胞核输出(nucleare邓ort)抑制剂，也是一种重要的细胞核输出的研究工具。来普霉素B可以调节染色体区域维护蛋白1(chromosomeregionmaintenance1，CRM1)依赖的细胞核输出，其作用机制为来普霉素B可以直接与CRM1结合，从而抑制CRM1和带有细胞核输出信号(nuclearexportsignal)的蛋白结合，最终导致由CRM1介导的细胞核输出的抑制。来普霉素B是一种不饱和支链脂肪酸，可以通透细胞，抑制某些蛋白由细胞核向细胞浆的转运。来普霉素B的系统名为(2E，5S，6R，7S，9R，10E，12E，15R，16Z，18E)-17-乙基-6-羟基-3，5，7，9，11，15-六甲基-19-[(2S，3S)-3-甲基_6_氧代-2，3-二氢妣喃-2-基]-8_氧代十九烷_2，10，12，16，18-五烯酸，其分子量为540.73，分子式为C33H4806，CAS登记号为87081-35-4，分子结构如下来普霉素B可以通过商业途径获得，例如从Sigma-Aldrich(St.LouisMissouri)等商业途径获得；也可以根据现有技术中公开的方法来制备，例如可以由链霉菌(Str印tomycessp.，ATCC39366)试样筛选单个分离物，产生高产分离物，经发酵提取获得。
发明内容本发明的目的是提供来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯用于逆转肿瘤多药耐药的用途，以及具有有效逆转肿瘤多药耐药作用的药物组合物或药物产品。本发明人意外发现，来普霉素B在不致引起明显副作用的较低浓度下，即能够有效调节某些多药耐药相关蛋白的表达水平及其亚细胞水平的动力学分布，可以有效逆转耐药肿瘤细胞的多药耐药，从而实现了上文所述的目的。本发明第一方面提供了来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯在制备用于逆转肿瘤多药耐药的药物中的用途。本发明第二方面提供了来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯与一种或多种其它抗肿瘤药物组合在制备用于抗肿瘤药物中的用途。本发明的第三方面提供了一种用于逆转肿瘤多药耐药的药物组合物，其包括治疗有效量的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯和任选的药学上可接受的赋形剂。本发明的第四方面提供了一种用于抗肿瘤的药物组合物，其包括i)治疗有效量的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯、ii)治疗有效量的一种或多种其它抗肿瘤药物、和iii)任选的药学上可接受的赋形剂。本发明的第五方面提供了一种用于抗肿瘤的药物产品，其包括i)包含于第一容器的治疗有效量的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯和任选的药学上可接受的赋形剂，和ii)包含于第二容器的治疗有效量的一种或多种其它抗肿瘤药物和任选的药学上可接受的赋形剂。本发明的第六方面提供了一种在罹患肿瘤的受试者中逆转肿瘤多药耐药的方法，该方法包括给所述受试者给予治疗有效量的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯。本发明的第七方面提供了一种在罹患肿瘤的受试者中抗肿瘤的方法，该方法包括给所述受试者同时、顺次或分别给予治疗有效量的i)来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯，和ii)一种或多种其它抗肿瘤药物。下面进一步详细地描述本发明。6根据本发明的第一方面，提供了来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯在制备用于逆转肿瘤多药耐药的药物中的用途。根据本发明的第一方面，所述的肿瘤对一种或多种选自以下的药物产生耐药烷化剂类其包括但不限于氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺等；抗代谢类其包括但不限于甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、阿糖胞苷、安西他滨等；抗肿瘤抗生素类其包括但不限于丝裂霉素、博来霉素类、放线菌素D、蒽环类例如柔红霉素、多柔比星、伊达比星、阿柔比星、米托蒽醌、表柔比星、普卡霉素等；铂类配合物其包括但不限于顺铂、卡铂、奥沙利铂等；植物来源的抗肿瘤药物紫杉烷类其包括但不限于紫杉醇、多西紫杉醇等，长春碱类其包括但不限于长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛等，三尖杉酯碱类其包括但不限于三尖杉酯碱(harringtonine或c印halotaxin)、高三尖杉酯碱等，喜树碱类其包括但不限于喜树碱、羟基喜树碱等，鬼臼脂素类其包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷等；影响激素功能的抗癌药物肾上腺皮质类其包括但不限于安鲁米特、雄激素、氟他胺、雌激素、他莫昔芬、孕激素等，促性腺激素释放激素类其包括但不限于亮丙瑞林、戈舍瑞林、奥曲肽、依西美坦(exemestane)等；其它抗癌药其包括但不限于门冬酰胺酶、维A酸等。所述的药物优选以下药物紫杉烷类其包括但不限于紫杉醇、多西紫杉醇等，长春碱类其包括但不限于长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛等，三尖杉酯碱类其包括但不限于三尖杉酯碱(harringtonine或c印halotaxin)、高三尖杉酯碱等，喜树碱类其包括但不限于喜树碱、羟基喜树碱等，鬼臼脂素类其包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷等。根据本发明的第一方面，所述的肿瘤可以是医学上已知的任何肿瘤，包括恶性肿瘤和/或癌症。优选地，所述的肿瘤(包括恶性肿瘤和/或癌症)包括(但不限于)恶性肿瘤，包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、头和颈癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴系统的造血肿瘤，包括但不限于白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非_霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett's氏淋巴癌；骨髓系统的造血肿瘤，包括但不限于急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；间质成因的肿瘤，包括但不限于纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、成纤维神经瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；以及其他肿瘤，包括但不限于黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、外生性色素颈瘤(xenoderomapigmentosum)、甲状腺滤囊癌和卡波氏肉瘤。更优选地，所述的肿瘤选自那些因化疗药物诱导而产生对一种或多种化疗药物产生耐药的那些肿瘤(和/或癌症)，特别是包括，但不限于，淋巴系统的造血肿瘤如白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett's氏淋巴癌，乳腺癌，结肠癌，肾癌，肝癌，肺癌例如小细胞肺癌和非小细胞肺癌。进一步优选的是白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett's氏淋巴癌、乳腺癌、肝癌、肺癌(例如小细胞肺癌和非小细胞肺癌)。基于本发明的第一方面提供的来普霉素B的新医疗用途，在本发明第二方面，提供了来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯与一种或多种其它抗肿瘤药物组合在制备用于逆转肿瘤多药耐药和/或抗肿瘤药物中的用途。根据本发明的第二方面，所述的肿瘤对一种或多种选自以下的药物产生耐药烷化剂类其包括但不限于氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺等；抗代谢类其包括但不限于甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、阿糖胞苷、安西他滨等；抗肿瘤抗生素类其包括但不限于丝裂霉素、博来霉素类、放线菌素D、蒽环类例如柔红霉素、多柔比星、伊达比星、阿柔比星、米托蒽醌、表柔比星、普卡霉素等；铂类配合物其包括但不限于顺铂、卡铂、奥沙利铂等；植物来源的抗肿瘤药物紫杉烷类其包括但不限于紫杉醇、多西紫杉醇等，长春碱类其包括但不限于长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛等，三尖杉酯碱类其包括但不限于三尖杉酯碱(harringtonine或c印halotaxin)、高三尖杉酯碱等，喜树碱类其包括但不限于喜树碱、羟基喜树碱等，鬼臼脂素类其包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷等；影响激素功能的抗癌药物肾上腺皮质类其包括但不限于安鲁米特、雄激素、氟他胺、雌激素、他莫昔芬、孕激素等，促性腺激素释放激素类其包括但不限于亮丙瑞林、戈舍瑞林、奥曲肽、依西美坦(exemestane)等；其它抗癌药其包括但不限于门冬酰胺酶、维A酸等。所述的药物优选以下药物紫杉烷类其包括但不限于紫杉醇、多西紫杉醇等，长春碱类其包括但不限于长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛等，三尖杉酯碱类其包括但不限于三尖杉酯碱(harringtonine或c印halotaxin)、高三尖杉酯碱等，喜树碱类其包括但不限于喜树碱、羟基喜树碱等，鬼臼脂素类其包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷等。如本文使用的，术语"其它抗肿瘤药物"是指不同于来普霉素B的任何抗肿瘤药物，所述的其它抗肿瘤药物可以是已经用于临床的抗肿瘤药物，也可以是尚未用于临床但有抗肿瘤活性的抗肿瘤药物。该"其它抗肿瘤药"可以与来普霉素B共同逆转肿瘤多药耐药，即该"其它抗肿瘤药"也产生逆转肿瘤多药耐药的作用；或者，在来普霉素B发挥逆转作用的同时，该"其它抗肿瘤药"可以产生抗肿瘤作用；或者，在来普霉素B发挥逆转作用的同时，来普霉素B与该"其它抗肿瘤药"共同产生抗肿瘤作用，由此获得更好的治疗方案。根据本发明的第二方面，所述的"其它抗肿瘤药物"包括但不限于烷化剂类其包括但不限于氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺等；抗代谢类其包括但不限于甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、阿糖胞苷、安西他滨等；抗肿瘤抗生素类其包括但不限于丝裂霉素、博来霉素类、放线菌素D、蒽环类例如柔红霉素、多柔比星、伊达比星、阿柔比星、米托蒽醌、表柔比星、普卡霉素等；铂类配合物其包括但不限于顺铂、卡铂、奥沙利铂等；植物来源的抗肿瘤药物紫杉烷类其包括但不限于紫杉醇、多西紫杉醇等，长春碱类其包括但不限于长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛等，三尖杉酯碱类其包括但不限于三尖杉酯碱(harringtonine或c印halotaxin)、高三尖杉酯碱等，喜树碱类其包括但不限于喜树碱、羟基喜树碱等，鬼臼脂素类其包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷等；影响激素功能的抗癌药物肾上腺皮质类其包括但不限于安鲁米特、雄激素、氟他胺、雌激素、他莫昔芬、孕激素等，促性腺激素释放激素类其包括但不限于亮丙瑞林、戈舍瑞林、奥曲肽、依西美坦(exemestane)等；其它抗癌药其包括但不限于门冬酰胺酶、维A酸等。所述的药物优选以下药物紫杉烷类其包括但不限于紫杉醇、多西紫杉醇等，长春碱类其包括但不限于长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛等，三尖杉酯碱类其包括但不限于三尖杉酯碱(harringtonine或c印halotaxin)、高三尖杉酯碱等，喜树碱类其包括但不限于喜树碱、羟基喜树碱等，鬼臼脂素类其包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷等。根据本发明的第二方面，所述的肿瘤可以是医学上已知的任何肿瘤，包括恶性肿瘤和/或癌症。优选地，所述的肿瘤(包括恶性肿瘤和/或癌症)包括(但不限于)恶性肿瘤，包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、头和颈癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴系统的造血肿瘤，包括但不限于白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非_霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett's氏淋巴癌；骨髓系统的造血肿瘤，包括但不限于急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；间质成因的肿瘤，包括但不限于纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、成纤维神经瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；以及其他肿瘤，包括但不限于黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、外生性色素颈瘤(xenoderomapigmentosum)、甲状腺滤囊癌和卡波氏肉瘤。更优选地，所述的肿瘤选自那些因化疗药物诱导而产生对一种或多种化疗药物产生耐药的那些肿瘤(和/或癌症)，特别是包括(但不限于)淋巴系统的造血肿瘤如白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett's氏淋巴癌，乳腺癌，结肠癌，肾癌，肝癌，肺癌例如小细胞肺癌和非小细胞肺癌。进一步优选的是白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett's氏淋巴癌、乳腺癌、肝癌、肺癌(例如小细胞肺癌和非小细胞肺癌)。在本发明的第三方面，提供了一种用于逆转肿瘤多药耐药的药物组合物，其包括治疗有效量的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯和任选的药学上可接受的赋形剂。在本发明的第四方面，提供了一种用于逆转肿瘤多药耐药和/或抗肿瘤的药物组合物，其包括i)治疗有效量的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯、ii)治疗有效量的一种或多种其它抗肿瘤药物和iii)药学上可接受的赋形剂。根据本发明的第四方面，所述的其它抗肿瘤药物包括但不限于烷化剂类其包括但不限于氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺等；抗代谢类其包括但不限于甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、阿糖胞苷、安西他滨等；抗肿瘤抗生素类其包括但不限于丝裂霉素、博来霉素类、放线菌素D、蒽环类例如柔红霉素、多柔比星、伊达比星、阿柔比星、米托蒽醌、表柔比星、普卡霉素等；铂类配合物其包括但不限于顺铂、卡铂、奥沙利铂等；植物来源的抗肿瘤药物紫杉烷类其包括但不限于紫杉醇、多西紫杉醇等，长春碱类其包括但不限于长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛等，三尖杉酯碱类其包括但不限于三尖杉酯碱(harringtonine或c印halotaxin)、高三尖杉酯碱等，喜树碱类其包括但不限于喜树碱、羟基喜树碱等，鬼臼脂素类其包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷等；影响激素功能的抗癌药物肾上腺皮质类其包括但不限于安鲁米特、雄激素、氟他胺、雌激素、他莫昔芬、孕激素等，促性腺激素释放激素类其包括但不限于亮丙瑞林、戈舍瑞林、奥曲肽、依西美坦(exemestane)等；其它抗癌药其包括但不限于门冬酰胺酶、维A酸等。所述的药物优选以下药物紫杉烷类其包括但不限于紫杉醇、多西紫杉醇等，长春碱类其包括但不限于长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛等，三尖杉酯碱类其包括但不限于三尖杉酯碱(harringtonine或c印halotaxin)、高三尖杉酯碱等，喜树碱类其包括但不限于喜树碱、羟基喜树碱等，鬼臼脂素类其包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷等。在本发明的第五方面，提供了一种用于逆转肿瘤多药耐药和/或抗肿瘤的药物产品，其包括i)包含于第一容器中的治疗有效量的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯和药学上可接受的赋形剂、ii)包含于第二容器中的治疗有效量的一种或多种其它抗肿瘤药物和药学上可接受的赋形剂以及iii)关于该药物产品的使用说明书。将来普霉素B与所述的其它抗肿瘤药物分别置于不同容中，对于它们在顺次或分别给药时是非常有益的。当然，如果所述的其它抗肿瘤药物是多种的情况下，这些"其它抗肿瘤药物"可以同时置于一个容器中，也可以分别置于不同的容器中。如果多种所述"其它抗肿瘤药物"分别置于不同的容器中，则对于来普霉素B与所述的多种"其它抗肿瘤药物"在顺次或分别给药时是非常有益的。本领域技术人员清楚，这些情况也涵盖在本发明的范围内。根据本发明的第五方面，所述的其它抗肿瘤药物包括但不限于烷化剂类其包括但不限于氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺等；抗代谢类其包括但不限于甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、阿糖胞苷、安西他滨等；抗肿瘤抗生素类其包括但不限于丝裂霉素、博来霉素类、放线菌素D、蒽环类例如柔红霉素、多柔比星、伊达比星、阿柔比星、米托蒽醌、表柔比星、普卡霉素等；铂类配合物其包括但不限于顺铂、卡铂、奥沙利铂等；植物来源的抗肿瘤药物紫杉烷类其包括但不限于紫杉醇、多西紫杉醇等，长春碱类其包括但不限于长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛等，三尖杉酯碱类其包括但不限于三尖杉酯碱(harringtonine或c印halotaxin)、高三尖杉酯碱等，喜树碱类其包括但不限于喜树碱、羟基喜树碱等，鬼臼脂素类其包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷等；影响激素功能的抗癌药物肾上腺皮质类其包括但不限于安鲁米特、雄激素、氟他胺、雌激素、他莫昔芬、孕激素等，促性腺激素释放激素类其包括但不限于亮丙瑞林、戈舍瑞林、奥曲肽、依西美坦(exemestane)等；其它抗癌药其包括但不限于门冬酰胺酶、维A酸等。所述的药物优选以下药物紫杉烷类其包括但不限于紫杉醇、多西紫杉醇等，长春碱类其包括但不限于长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛等，三尖杉酯碱类其包括但不限于三尖杉酯碱(harringtonine或c印halotaxin)、高三尖杉酯碱等，喜树碱类其包括但不限于喜树碱、羟基喜树碱等，鬼臼脂素类其包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷等。10在本发明的第六方面，提供了一种在罹患肿瘤的受试者中有效逆转肿瘤多药耐药的方法，该方法包括给所述受试者以治疗有效量的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯。优选的，所述的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯是以药物组合物的形式给予患者，更优选是以药剂的形式给予患者。在本发明的第七方面，提供了一种在罹患肿瘤的受试者中有效逆转肿瘤多药耐药和/或抗肿瘤的方法，该方法包括给所述受试者同时、顺次或分别给予治疗有效量的i)来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯，和ii)一种或多种其它抗肿瘤药物。优选的，所述的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯和一种或多种其它抗肿瘤药物是以药物组合物的形式给予患者，更优选是以药剂的形式给予患者。或者，优选的，所述的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯和一种或多种其它抗肿瘤药物是以药物产品的形式供临用前共同给药于患者。将来普霉素B与所述的其它抗肿瘤药物顺次或分别给药时，通过本发明所提供的药物产品将来普霉素B与所述的"其它抗肿瘤药物"分别置于不同容器中，这种方案对于实现本发明是非常有益的。如用于本文的，术语"受试者"是指罹患本发明所述肿瘤(包括恶性肿瘤和癌症)的动物，优选哺乳动物，例如猪、狗、猫、牛、羊等家畜和人类。更优选是人类。根据本发明的研究结果，本领域技术人员可以容易地确定有效量。一般地，在将来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯用于本发明所述用途时，治疗有效量可以是1.0-4500iig/kg体重/天，优选10-4500yg/kg体重/天，更优选10-450yg/kg体重/天。可以将一天的剂量在一天中一次性全部给与受试者，也可以在一天内将需要的剂量分成两个、三个、四个或更多个小剂量以合适的间隔给药。所述小剂量可以配制成单元剂量形式，例如每个单元剂量形式含有含由日总剂量细分适宜次数的相应量。另外，在与来普霉素B联合应用于有效逆转肿瘤多药耐药和/或抗肿瘤时，本文所述的其它抗肿瘤药物的剂量可以是它们的临床常规使用剂量，或者低于临床常规使用剂量，以便获得最佳的治疗效果。所述的其它抗肿瘤药物的临床常规使用剂量是本领域公知的，并且可以从许多论著中找到。在需要对所述的其它抗肿瘤药物进行剂量调整时，本领域的临床医生根据其临床经验是容易确定的。另一方面，来普霉素B和其它抗肿瘤药物在具体的临床案例中，它们的具体使用剂量可因多种因素而需要作相应的调整，这些因素包括但不限于受试者病况的严重程度，受试者的年龄、性别、体重，给药途径，药物剂型等等。来普霉素B的获得途径或方法已在前文述及。另外，来普霉素B分子结构的碳链一端有游离羧基，其可以与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。合适的盐形式包括例如铵盐、碱金属盐和碱土碱金属盐(例如锂盐、钠盐、钾盐、镁盐、^盐等)、与有机碱形成的盐(例如节星青霉素盐、N-甲基-D-葡萄糖胺盐、海巴胺盐(hydrabaminesalts))以及与例如精氨酸、赖氨酸等氨基酸形成的盐。另一方面，来普霉素B分子结构的碳链一端有游离羧基，其可以与含有羟基的化合物形成药学上可接受的酯，例如形成甲酯、乙酯、丙酯、苄酯等。本领域技术人员根据其掌握的专业知识容易制备上述的药学上可接受的盐或药学上可接受的酯。另外，来普霉素B及其药学上可接受的盐或酯的任何结晶形式、溶剂化物、异构体等均应涵盖在本发明的范围内。考虑到本发明提及的化合物有益的药理学特性，它(们)可以配制到多种药物形式中用于给药。为了制备本发明的药物组合物，有效量来普霉素B及其药学上可接受的盐或酯(或者，和其它抗肿瘤药)作为活性成分与药学上可接受的赋形剂(亦可称为载体、辅料、介质等)充分混合，赋形剂可以采用多种形式，取决于希望给药的制剂的形式。这些药物组合物理想的是适合的单元剂型，优选用于口服、直肠给药、经皮给药或肠道外注射。例如，在口服剂型组合物的制备中，可使用任何常用的药物介质，例如，在口服液体药剂例如混悬剂、糖浆剂、酏剂和溶液剂的情况下，使用水、二元醇、油、醇等是优选的；在粉末剂、丸齐U、胶囊剂和片剂的情况下使用固体赋形剂如淀粉、糖、高岭土、润滑齐U、粘合剂、崩解剂等是优选的。由于给药容易，片剂和胶囊剂是最有利的口服单位剂型，在这样的情况下，使用固体药物载体显然是有利的。对于肠道外给药的组合物，虽然可以包括其它成分，例如助溶成分，但是载体通常含有无菌水，至少占大部分。例如，可制备可注射的溶液，其中赋形剂包括生理盐水、葡萄糖溶液或生理盐水和葡萄糖溶液的混合物。也可制备可注射的混悬剂，在这样的情况下，可使用合适的液体载体、助悬剂等。还例如，可以制备供临床应用之前临时复溶的粉末剂用于注射使用，本领域技术人员清楚，冷冻干燥技术在此种情况下通常是非常有用的。在适用于经皮给药的组合物中，载体任选含有渗透增强剂和/或合适的润湿剂，任选与比例较小的任何性质的合适添加剂结合，添加剂对皮肤不产生显著的有害影响。所述添加剂可促进对皮肤的给药和/或有助于制备所需组合物。这些组合物可以多种方式给药，例如作为透过皮肤起作用的贴片、作为点滴剂(spot-on)或作为软膏。以剂量单元形式配制上述药物组合物对于方便给药和用量的一致性是特别有益的。在说明书和权利要求中所用的单位剂型指的是物理上地不连续的、合适作为单位剂量的单位，每个单位含有预定量的活性成分，适于产生所需的治疗效果，并与需要的药物载体结合。这样的单位剂型的例子是片剂(包括划痕片剂或包衣片剂)、胶囊、丸剂、粉剂包、扁囊剂(wafers)、可注射的溶液或悬浮液、茶匙剂、汤匙剂等，及其分隔开的多重剂量组合。根据本发明的研究结果，已经发现，在0.013nM的低浓度下来普霉素B可以有效调节某些多药耐药相关蛋白的表达水平及其亚细胞水平的动力学分布，从而有效逆转耐药肿瘤细胞的多药耐药。结果表明，来普霉素B可以显著逆转紫杉醇诱导的人急性T淋巴细胞白血病CCRF-CEM/T256的多药耐药，说明来普霉素B可以有效逆转细胞毒性化疗药物诱导的肿瘤多药耐药，恢复耐药肿瘤对化疗药物的敏感性，提高耐药肿瘤的治疗效果。在本文的上下文中，使用的主要縮写及其含义概述如下MDR(肿瘤)多药耐药P-gpP-糖蛋白LMB来普霉素B，来源Sigma公司C腿染色体区域维护蛋白1(hromosomeregionmaintenancel)12MDR(肿瘤)多药耐药CCRF-CEMHumanacutelymphoblasticleukemia，人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞，对化疗药物敏感，来源购自美国斯隆_凯特林癌症中心(MemorialSloan-KetteringCancerCentre)。培养/保存条件含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基，5%C02、37t:条件下培养。CCRF-CEM/T256CCRF-CEM细胞经紫杉醇诱导产生的对紫杉醇具有256倍耐药的耐药细胞，同时对其它化疗药物也产生了交叉耐药。CCRF-CEM/T256细胞可以直接从美国斯隆_凯特林癌症中心通过业购得，也可诱导产生；本发明所用的该细胞是在CCRF-CEM/T155(其购自美国斯隆_凯特林癌症中心)基础上诱导产生的，诱导方法是在T155细胞传代的过程中，用亚致死浓度的紫杉醇持续剌激，使细胞的耐药倍数继续升高至256倍。培养或保存条件含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基，5%C02、37。C条件下培养。Vin.长春碱，来源北京丰力富生物公司D肌柔红霉素，来源Sigma公司MRP多药耐药相关蛋白MRP1多药耐药相关蛋白1LRP肺癌相关蛋白，具体实施例方式下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。实施例1、LMB对CCRF-CEM/T256细胞多药耐药的影响实施例1A、LMB对CCRF-CEM/T256细胞紫杉醇耐药的影响(细胞活件试验)取一块24孔板，分别在每个孔中加入0.5ml的1.OX106的CCRF-CEM细胞。向第一列孔(A列)中分别加入0.2iU二甲基亚砜，作为空白对照；其余五列(B-F列)作为实验组。首先，向每个孔中加入O.2iU的浓度为O.00176iig/ml的LMB(0.013nM，精密称取一定量的LMB，溶于70%的甲醇溶液中)；然后，按24孔板上B-F列的顺序，每列分别加入0.2iU的不同浓度梯度的紫杉醇溶液(精密称取0.64mg紫杉醇，溶于1.Oml二甲基亚砜中，按l:IO等比稀释):0.000064mg/ml、0.00064mg/ml、0.0064mg/ml、0.064mg/ml、0.64mg/ml。另外取一块24孔板，分别在每个孔中加入0.5ml的1.OX106的CCRF-CEM/T256细胞。向第一列孔(A列)中分别加入0.2iU二甲基亚砜，作为空白对照；其余五列(B-F列)作为实验组。首先，向每个孔中加入0.2ill的浓度为0.00176iig/ml的LMB(0.013nM);然后，按24孔板上B-F列的顺序，每列分别加入0.2的不同浓度梯度的紫杉醇溶液0.00064mg/ml、0.0064mg/ml、0.064mg/ml、0.64mg/ml、6.4mg/ml。将以上两块24孔板在37C、5%C02条件下培养48小时，然后将每列四孔中的细胞液移入一个孔中，用移液枪轻轻吹打，使其混合均匀，取出50iU细胞，将其混悬液于1.5ml的EP管中，加入50iU的O.04%的胎盼蓝(trypanblue)溶液，混合均匀后，将细胞悬液点于细胞计数板上，在显微镜下进行活细胞计数，蓝染的细胞为死细胞，不在计数之列，实验重复三次，记录结果，并计算半数细胞抑制浓度IQ。值，实验结果见下表1。表1、LMB对CCRF-CEM/T256细胞紫杉醇耐药的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>实施例1B、LMB对CCRF-CEM/T256细胞夺叉耐药的影响(细胞活件试验)取一块24孔板，分别在每个孔中加入0.5ml的1.OX106的CCRF-CEM细胞。向第一列孔(A列)中分别加入0.2iU二甲基亚砜，作为空白对照；其余五列(B-F列)作为实验组。首先，向每个孔中加入0.2ill的浓度为0.00176iig/ml的LMB(0.013nM);然后，按24孔板上B-F列的顺序，每列分别加入0.2ill的不同浓度梯度的长春碱(Vinblastin)溶液(精密称取4.25mg长春碱，溶于1.0ml二甲基亚砜中，按l:5等比稀释)0.0068mg/ml、0.034mg/ml、0.17mg/ml、0.85mg/ml、4.25mg/ml。另外取一块24孔板，分别在每个孔中加入0.5ml的1.OX106的CCRF-CEM/T256细胞。向第一列孔(A列)中分别加入0.2iU二甲基亚砜，作为空白对照；其余五列(B-F列)作为实验组。首先，向每个孔中加入0.2ill的浓度为0.00176iig/ml的LMB(0.013nM);然后，按24孔板上B-F列的顺序，每列分别加入0.2的不同浓度梯度的长春碱溶液(精密称取4.32mg长春碱(以硫酸盐计)，溶于1.0ml二甲基亚砜中，按l:2等比稀释)0.27mg/ml、0.54mg/ml、l.08mg/ml、2.16mg/ml、4.32mg/ml。再取一块24孔板，分别在每个孔中加入0.5ml的1.OX106的CCRF-CEM细胞。向第一列孔(A列)中分别加入O.2iU二甲基亚砜，作为空白对照；其余五列(B-F列)作为实验组。首先，向每个孔中加入0.2iil的浓度为0.00176iig/ml的LMB(0.013nM);然后，按24孔板上B-F列的顺序，每列分别加入0.2ill的不同浓度梯度的柔红霉素(Daunorubicin)溶液(精密称取l.15mg柔红霉素(以盐酸盐计)，溶于1.0ml二甲基亚砜中，按l:5等比稀释)0.00184mg/ml、0.0092mg/ml、0.046mg/ml、0.23mg/ml、l.15mg/ml。再另外取一块24孔板，分别在每个孔中加入0.5ml的1.0X106的CCRF-CEM/T256细胞。向第一列孔(A列)中分别加入0.2iU二甲基亚砜，作为空白对照；其余五列(B-F列)作为实验组。首先，向每个孔中加入0.2ill的浓度为0.00176iig/ml的LMB(0.013nM);然后，按24孔板上B-F列的顺序，每列分别加入0.2的不同浓度梯度的柔红霉素溶液0.00184mg/ml、0.0092mg/ml、0.046mg/ml、0.23mg/ml、l.15mg/ml。将以上四块24孔板在37C、5%C02条件下培养48小时，然后将每列4孔中的细胞液移入一个孔中，用移液枪轻轻吹打，使其混合均匀，取出50iU细胞，将其混悬液于1.5ml的EP管中，加入50iU的0.04%的胎盼蓝溶液，混合均匀后，将细胞悬液点于细胞计数板上，在显微镜下进行活细胞计数，蓝染的细胞为死细胞，不在计数之列，实验重复三次，记录结果，并计算半数细胞抑制浓度IC5。值，实验结果见下表2、3。表2、LMB对CCRF-CEM/T256细胞长春碱耐药的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表3、LMB对CCRF-CEM/T256细胞柔红霉素耐药的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>实施例2、LMB对CCRF-CEM/T256细胞多药耐药相关蛋白的影响:实施例2A、对细胞表gP-ct表汰水平的影响收集IX106的CCRF-CEM细胞，按1:2传代于两个新的细胞培养瓶中；另收集2Xl(f的CCRF-CEM/T256细胞，按l:2传代于四个新的细胞培养瓶中。两瓶CCRF-CEM细胞作为阴性对照组；两瓶CCRF-CEM/T256给以0.32yg/ml紫杉醇，作为阳性对照组；另外两瓶CCRF-CEM/T256细胞加以0.00176yg/ml的LMB，作为测定组。将加好培养基和血清的细胞均置于细胞培养箱内，在37C、5%C02条件下，培养48小时。分别收集2Xl(f个各上述试验组的细胞，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。用2%的甲醛溶液在室温下固定lOmin，用含有O.1%牛血清白蛋白和0.01%叠氮钠的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。在含有10%的标准兔血清(NRS)的磷酸盐缓冲溶液中，与抗P-gp蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的小鼠单克隆抗体(抗-P-糖蛋白克隆F4，SIGMA)，冰浴孵育lh，并以鼠的IgGl同型抗体作为平行对照。冰浴结束后，用磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞，用含有10%兔血清的磷酸盐缓冲溶液混悬细胞，加入结合有异硫氰酸荧光素(fluorescinisothiocyanate，FITC)的二抗(抗小鼠IgG(Fc特异性的)FITC缀合物F(ab')2，SIGMA)，在冰上孵育lh，用磷酸盐缓冲溶液漂洗三次，离心，收集细胞，用1%多聚甲醛(paraformaldehyde)固定后，用流式细胞仪测定细胞的荧光强度，各组样品细胞表面P-gp蛋白的表达水平用P-gp—抗样品的几何荧光强度与其同型抗体样品的几何荧光强度的比值标定，实验重复三次以上，结果见表4。表4、LMB对CCRF-CEM/T256细胞表面P-gp蛋白的表达水平的影响(n=4)试验组细胞表面P-gp蛋白的表达水平影响因数CCRF-CEM1.534±0.247*CCRF-CEM/T25627.164±6.737**CCRF-CEM/T256(LMB)23.892±7.377***12.05%1.表中数据*是CCRF-CEM细胞(化疗药物敏感肿瘤细胞)表面P-gp蛋白的表达水平；表中数据**是CCRF-CEM/T256细胞(多药耐药肿瘤细胞)表面P-gp蛋白的表达水平；表中数据***是在LMB影响下，CCRF-CEM/T256细胞(多药耐药肿瘤细胞)表面P-gp蛋白的表达水平。2."影响因数"是指LMB对多药耐药肿瘤细胞中耐药相关蛋白的影响程度，其计算方法为(数据**_数据***)/数据**。实施例2B、对细朐'内其它多药耐药相关蛋白(MRPs)的影响实施例2B1、对细胞内总P-ct表汰水平的影响收集1X106的CCRF-CEM细胞，按1:2传代于两个新的细胞培养瓶中；另收集2Xl(f的CCRF-CEM/T256细胞，按l:2传代于四个新的细胞培养瓶中。两瓶CCRF-CEM细胞作为阴性对照组；两瓶CCRF-CEM/T256给以0.32yg/ml紫杉醇，作为阳性对照组；另外两瓶CCRF-CEM/T256细胞加以0.00176yg/ml的LMB，作为测定组。将加好培养基和血清的细胞均置于细胞培养箱内，在37C、5%C02条件下，培养48小时。分别收集2X106个各上述试验组的细胞，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。用2%的甲醛溶液在室温下固定10min，用含有0.04X皂角苷(s即onin)、160.1%牛血清白蛋白和0.01%叠氮钠的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。用含有0.04%皂角苷和10%标准兔血清(NRS)的磷酸盐缓冲溶液混悬细胞，加入抗P-gp蛋白的小鼠单克隆抗体(抗-P-糖蛋白克隆F4，SIGMA)，冰浴孵育lh，并以鼠的IgGl同型抗体做为平行对照。冰浴结束后，用含0.04%的皂角苷的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。用含有0.04%皂角苷和10%兔血清的磷酸盐缓冲溶液混悬细胞，加入结合有异硫氰酸荧光素的二抗(抗小鼠IgG(Fc特异性的)FITC缀合物F(ab')2，SIGMA)，在冰上孵育lh，用含0.04%的皂角苷的磷酸盐缓冲溶液漂洗二次，用不含皂角苷的磷酸盐缓冲溶液漂洗一次，离心，收集细胞，用1%多聚甲醛固定后，用流式细胞仪测定细胞的荧光强度，各组样品细胞内P-gp蛋白的表达水平用P-gp—抗样品的几何荧光强度与其同型抗体样品的几何荧光强度的比值标定，实验重复三次以上，结果见表5。表5、LMB对CCRF-CEM/T256细胞内总P-gp蛋白的表达水平的影响(n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>1.表中数据*是CCRF-CEM细胞(化疗药物敏感肿瘤细胞)总P-gp蛋白的表达水平；表中数据**是CCRF-CEM/T256细胞(多药耐药肿瘤细胞)总P-gp蛋白的表达水平；表中数据***是在LMB影响下，CCRF-CEM/T256细胞(多药耐药肿瘤细胞)总P-gp蛋白的表达水平。2."影响因数"是指LMB对多药耐药肿瘤细胞中耐药相关蛋白的影响程度，其计算方法为(数据**_数据***)/数据**。实施例2B2、对细朐内多药耐药相关蛋白l(MRPl)表汰水平的影响收集1X106的CCRF-CEM细胞，按1:2传代于两个新的细胞培养瓶中；另收集2Xl(f的CCRF-CEM/T256细胞，按l:2传代于四个新的细胞培养瓶中。两瓶CCRF-CEM细胞作为阴性对照组；两瓶CCRF-CEM/T256给以0.32yg/ml紫杉醇，作为阳性对照组；另外两瓶CCRF-CEM/T256细胞加以0.00176yg/ml的LMB，作为测定组。将加好培养基和血清的细胞均置于细胞培养箱内，在37C、5%C02条件下，培养48小时。分别收集2X106个各上述试验组的细胞，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。用2%的甲醛溶液在室温下固定10min，用含有0.04X皂角苷、0.1%牛血清白蛋白和0.01%叠氮钠的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。用含有0.04%皂角苷和10%标准兔血清(NRS)的磷酸盐缓冲溶液混悬细胞，加入抗多药耐药相关蛋白l(MRPl)的小鼠单克隆抗体(抗-MRPl，SIGMA)，冰浴孵育lh，并以鼠的IgGl同型抗体做为平行对照。冰浴结束后，用含0.04%的皂角苷的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。用含有0.04%皂角苷和10%兔血清的磷酸盐缓冲溶液混悬细胞，加入结合有异硫氰酸荧光素的二抗(抗小鼠IgG(Fc特异性的)FITC缀合物F(ab')2，SIGMA)，在冰上孵育lh，用含0.04%的皂角苷的磷酸盐缓冲溶液漂洗二次，用不含皂角苷的磷酸盐缓冲溶液漂洗一次，离心，收集细胞，用1%多聚甲醛固定后，用流式细胞仪测定细胞的荧光强度，各组样品细胞内MRP1蛋白的表达水平用MRP1—抗样品的几何荧光强度与其同型抗体样品的几何荧光强度的比值标定，实验重复三次以上，结果见表6。表6、LMB对CCRF-CEM/T256细胞MRP1蛋白表达水平的影响(n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>1.表中数据A是CCRF-CEM细胞(化疗药物敏感肿瘤细胞)MRP1蛋白的表达水平；表中数据^是CCRF-CEM/T256细胞(多药耐药肿瘤细胞)MRP1蛋白的表达水平；表中数据***是在LMB影响下，CCRF-CEM/T256细胞(多药耐药肿瘤细胞)MRP1蛋白的表达水平。2."影响因数"是指LMB对多药耐药肿瘤细胞中耐药相关蛋白的影响程度，其计算方法为(数据**_数据***)/数据**。实施例2B3、对细胞内LRP表汰水平的影响收集1X106的CCRF-CEM细胞，按1:2传代于两个新的细胞培养瓶中；另收集2Xl(f的CCRF-CEM/T256细胞，按l:2传代于四个新的细胞培养瓶中。两瓶CCRF-CEM细胞作为阴性对照组；两瓶CCRF-CEM/T256给以0.32yg/ml紫杉醇，作为阳性对照组；另外两瓶CCRF-CEM/T256细胞加以0.00176yg/ml的LMB，作为测定组。将加好培养基和血清的细胞均置于细胞培养箱内，在37C、5%(A条件下，培养48小时。分别收集2X106个各上述试验组的细胞，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。用2%的甲醛溶液在室温下固定10min，用含有0.04X皂角苷、0.1%牛血清白蛋白和0.01%叠氮钠的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。用含有0.04%皂角苷和10%标准兔血清(NRS)的磷酸盐缓冲溶液混悬细胞，加入抗肺癌耐药相关蛋白/主骨架蛋白(lungcancerrelatedprotein/mainvaultprotein，LRP/MVP)的小鼠单克隆抗体(抗-LRP，SIGMA)，冰浴孵育lh，并以鼠的IgGl同型抗体作为平行对照。冰浴结束后，用含0.04%的皂角苷的磷酸盐缓冲溶液漂洗两遍，离心，收集细胞。用含有0.04%皂角苷和10%兔血清的磷酸盐缓冲溶液混悬细胞，加入结合有异硫氰酸荧光素的二抗(抗小鼠IgG(Fc特异性的)FITC缀合物F(ab')2，SIGMA)，在冰上孵育lh，用含0.04%的皂角苷的磷酸盐缓冲溶液漂洗二次，用不含皂角苷的磷酸盐缓冲溶液漂洗一次，离心，收集细胞，用1%多聚甲醛固定后，用流式细胞仪测定细胞的荧光强度，各组样品细胞内LRP蛋白的表达水平用LRP—抗样品的几何荧光强度与其同型抗体样品的几何荧光强度的比值标定，实验重复三次以上，结果见表7。表7、LMB对CCRF-CEM/T256细胞LRP蛋白表达水平的影响(n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>1.表中数据*是CCRF-CEM细胞(化疗药物敏感肿瘤细胞)LRP蛋白的表达水平；表中数据**是CCRF-CEM/T256细胞(多药耐药肿瘤细胞)LRP蛋白的表达水平；表中数据***是在LMB影响下，CCRF-CEM/T256细胞(多药耐药肿瘤细胞)LRP蛋白的表达水平。2."影响因数"是指LMB对多药耐药肿瘤细胞中耐药相关蛋白的影响程度，其计算方法为(数据**_数据***)/数据**。本试验中的CCRF-CEM/T256细胞是由紫杉醇诱导产生的多药耐药肿瘤细胞，该部分试验结果从分子生物学水平上证明LMB可以降低多药耐药肿瘤细胞中某些耐药相关蛋白的水平，从而可以有效逆转耐药细胞的多药耐药。棚列3、糊ffl棘歸bm东千燥謝齐i隱成扁^<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>制备(按1000瓶暈配制):将处方量的甘露醇、EDTA-2Na和Na2HP03预先溶于约2500ml注射用水中，用INHC1调节溶液的pH约4.5，加入处方量的来普霉素B，在约40C的温度下充分搅拌，使药物溶解，加入活性碳2.5g，再在约40C的温度下搅拌30min，用0.45ym的微孔滤膜过滤两次。补加注射用水至5000ml，在无菌条件下用0.22ym的微孔滤膜过滤两次。将滤液无菌分装至10ml的西林瓶中，半压塞。将药液冷冻干燥[冷冻干燥程序可参考相关的药剂学论著]，压塞，即得本发明的来普霉素B的药物组合物，为冷冻干燥粉针剂形式。棚列4、棘歸B禾口敬歸白綱寸,东千燥謝齐l隱成扁l<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>制备(按1000瓶量配制)将处方量的甘露醇、EDTA-2Na和Na2HP03预先溶于约2500ml注射用水中，用INHC1调节溶液的pH约4.5，加入处方量的来普霉素B和盐酸柔红霉素，在约40C的温度下充分搅拌，使药物溶解，加入活性碳2.5g，再在约40C的温度下搅拌30min，用0.45ym的微孔滤膜过滤两次。补加注射用水至5000ml，在无菌条件下用0.22iim的微孔滤膜过滤两次。将滤液无菌分装至10ml的西林瓶中，再半加塞。将药液冷冻干燥[冷冻干燥程序可参考相关的药剂学论著]，压塞，即得本发明的来普霉素B联合柔红霉素的药物组合物，为冷冻干燥粉针剂形式。权利要求来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯在制备用于逆转肿瘤多药耐药的药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的肿瘤对一种或多种选自以下的药物产生耐药氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺；甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、阿糖胞苷、安西他滨；丝裂霉素、博来霉素类、放线菌素D;柔红霉素、多柔比星、伊达比星、阿柔比星、米托蒽醌、表柔比星、普卡霉素；顺铂、卡铂、奥沙利铂；紫杉醇、多西紫杉醇；长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛；三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱；喜树碱、羟基喜树碱；依托泊苷、替尼泊苷；安鲁米特、雄激素、氟他胺、雌激素、他莫昔芬、孕激素；亮丙瑞林、戈舍瑞林、奥曲肽、依西美坦；门冬酰胺酶、维A酸；和/或所述的肿瘤选自恶性肿瘤，该恶性肿瘤选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、头和颈癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌，淋巴系统的造血肿瘤，其选自白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett's氏淋巴癌，骨髓系统的造血肿瘤，其选自急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病，间质成因的肿瘤，其选自纤维肉瘤和横纹肌肉瘤，中枢和周围神经系统的肿瘤，其选自星形细胞瘤、成纤维神经瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤，以及其他肿瘤，其选自黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、外生性色素颈瘤、甲状腺滤囊癌和卡波氏肉瘤。3.根据权利要求2所述的用途，其中所述的肿瘤对一种或多种选自以下的药物产生耐药紫杉醇、多西紫杉醇、阿霉素、柔红霉素、长春碱、长春瑞滨；和/或所述的肿瘤选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、头和颈癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌、白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett's氏淋巴癌。4.来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯与一种或多种其它抗肿瘤药物组合在制备用于抗肿瘤的药物中的用途。5.根据权利要求4所述的用途，其中所述的肿瘤对一种或多种选自以下的药物产生耐药氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺；甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、阿糖胞苷、安西他滨；丝裂霉素、博来霉素类、放线菌素D;柔红霉素、多柔比星、伊达比星、阿柔比星、米托蒽醌、表柔比星、普卡霉素；顺铂、卡铂、奥沙利铂；紫杉醇、多西紫杉醇；长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛；三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱；喜树碱、羟基喜树碱；依托泊苷、替尼泊苷；安鲁米特、雄激素、氟他胺、雌激素、他莫昔芬、孕激素；亮丙瑞林、戈舍瑞林、奥曲肽、依西美坦；门冬酰胺酶、维A酸；所述的其它抗肿瘤药物选自氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺；甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、阿糖胞苷、安西他滨；丝裂霉素、博来霉素类、放线菌素D;柔红霉素、多柔比星、伊达比星、阿柔比星、米托蒽醌、表柔比星、普卡霉素；顺铂、卡铂、奥沙利铂；紫杉醇、多西紫杉醇；长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛；三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱；喜树碱、羟基喜树碱；依托泊苷、替尼泊苷；安鲁米特、雄激素、氟他胺、雌激素、他莫昔芬、孕激素；亮丙瑞林、戈舍瑞林、奥曲肽、依西美坦；门冬酰胺酶、维A酸；和/或所述的肿瘤选自恶性肿瘤，其选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、头和颈癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌，淋巴系统的造血肿瘤，其选自白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett's氏淋巴癌，骨髓系统的造血肿瘤，其选自急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病，间质成因的肿瘤，其选自纤维肉瘤和横纹肌肉瘤，中枢和周围神经系统的肿瘤，其选自星形细胞瘤、成纤维神经瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤，以及其他肿瘤，其选自黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、外生性色素颈瘤、甲状腺滤囊癌和卡波氏肉瘤。6.根据权利要求5所述的用途，其中所述的肿瘤对一种或多种选自以下的药物产生耐药紫杉醇、多西紫杉醇、阿霉素、柔红霉素、长春碱、长春瑞滨；所述的其它抗肿瘤药物选自紫杉醇、多西紫杉醇、阿霉素、柔红霉素、长春碱、长春瑞滨、依托泊苷；和/或所述的肿瘤选自肝癌、肺癌、白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett's氏淋巴癌。7.—种抗肿瘤的药物组合物，其包括i)治疗有效量的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯、ii)治疗有效量的一种或多种其它抗肿瘤药物和iii)药学上可接受的赋形剂。8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述的其它抗肿瘤药物选自氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺；甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、阿糖胞苷、安西他滨；丝裂霉素、博来霉素类、放线菌素D;柔红霉素、多柔比星、伊达比星、阿柔比星、米托蒽醌、表柔比星、普卡霉素；顺铂、卡铂、奥沙利铂；紫杉醇、多西紫杉醇；长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛；三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱；喜树碱、羟基喜树碱；依托泊苷、替尼泊苷；安鲁米特、雄激素、氟他胺、雌激素、他莫昔芬、孕激素；亮丙瑞林、戈舍瑞林、奥曲肽、依西美坦；门冬酰胺酶、维A酸。9.一种抗肿瘤的药物产品，其包含i)包含于第一容器中的治疗有效量的来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯和药学上可接受的赋形剂、ii)包含于第二容器中的治疗有效量的一种或多种其它抗肿瘤药物和药学上可接受的赋形剂以及iii)关于该药物产品的使用说明书。10.根据权利要求9所述的药物产品，其中所述的其它抗肿瘤药物选自氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺；甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、阿糖胞苷、安西他滨；丝裂霉素、博来霉素类、放线菌素D;柔红霉素、多柔比星、伊达比星、阿柔比星、米托蒽醌、表柔比星、普卡霉素；顺铂、卡铂、奥沙利铂；紫杉醇、多西紫杉醇；长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛；三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱；喜树碱、羟基喜树碱；依托泊苷、替尼泊苷；安鲁米特、雄激素、氟他胺、雌激素、他莫昔芬、孕激素；亮丙瑞林、戈舍瑞林、奥曲肽、依西美坦；门冬酰胺酶、维A酸。全文摘要本发明涉及来普霉素B的新用途及含有它的药物组合物和产品。本发明具体涉及来普霉素B或其药学上可接受的盐或酯在制备用于逆转肿瘤多药耐药的药物中的用途。应用本发明的方案，能够有效逆转耐药肿瘤细胞的多药耐药，并可用于抗肿瘤治疗。文档编号A61K31/366GK101732308SQ20081017733公开日2010年6月16日申请日期2008年11月17日优先权日2008年11月17日发明者关勇彪,朱金武申请人:中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所