专利名称：一种含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法
技术领域：
本发明涉及润滑液领域，具体涉及一种新型医用生物滑液的制备方法
背景技术：
透明质酸(hyaluronic acid， HA)，又称玻璃酸，是Meyer和Palmer于1934 年最先从牛眼玻璃体中分离出来的一种高粘性物质。后来又有学者对HA的生理 功能、化学结构和临床上的应用进行了大量的研究。盐形式的HA可以包括透明 质酸钠、透明质酸钾、透明质酸镁、透明质酸钙或其他的透明质酸盐。
透明质酸是一种生物来源的粘多糖，在自然界分布广泛。已知的透明质酸存 在于各种动物组织中，例如脐带、滑液、玻璃体液、公鸡冠和各种结缔组织中。
人体中关节滑液是由关节滑膜细胞分泌，滑液覆盖在关节表面。HA是构成关 节软骨和滑液的主要成分。对关节生理功能的发挥起着至关重要的作用。在关节 中，关节盘、滑液、关节软骨均参与关节润滑，在生理负荷之下，滑液构成的液 膜在关节润滑中起主要作用，而在高负荷之下关节面之间可以发生接触，滑液构 成的边界润滑系统起主要作用。正常的关节软骨表面覆盖着很薄的表面活性磷脂 层，各个磷脂分子借助氢键相连形成了一层保护膜，在边界润滑中起主要作用。 高分子量的透明质酸作为一种液态薄膜与表面活性磷脂层相连，以保护其不受磷 脂酶A2的攻击，在边界润滑系统中起间接作用。另外，在滑液中还存在一种粘 性糖蛋白一润滑素，它被认为是表面活性磷脂的水溶性载体，是人类滑膜成纤维 细胞的巨核细胞刺激因子基因的表达产物，它和磷脂一起以脂蛋白的形式由滑膜 B型细胞分泌至滑液中，在磷脂从滑液沉积至关节软骨表面的过程中起到了载体 的作用。当发生骨性关节炎(0A)、类风湿性关节炎(RA)等其他感染性和非感 染性关节疾病时，HA在关节内的产生和代谢发生异常，滑液中HA的浓度和相对 分子质量(儉)明显降低，软骨发生降解和破坏，导致关节生理障碍。应用透明 质酸进行关节病的关节腔内注射治疗，旨在通过补充外源性HA，恢复滑液的润 滑功能，促进软骨的修复，改善关节功能。
迄今为止，大量的临床研究使用结果表明，HA对0A、 RA等关节疾病治疗效
果明确、安全，具有很好的临床应用前景。
目前，HA原料普遍采用的生产方法主要有两种 一种是从动物组织中提取； 另一种是微生物发酵法。提取法主要利用鸡冠、人脐带、牛眼的玻璃体等为原料， 进行生产，而且组织必须是新鲜采集，这样不但动物组织来源困难，且价格昂 贵，成本高，这给HA的生产带来了一定的困难；发酵法生产HA ，是利用链球
菌将廉价的葡萄糖转化为HA ，不依赖于动物器官，产量不受限制，但发酵法HA的 产量不高，生物相容性不如前者。本发明提供的通过细胞培养的方法提取透明质 酸的新方法，能够制备出具有更好的润滑功能、生物理化性能、生物安全性能的 含有高分子透明质酸的新型生物滑液。
发明内容
本发明的目的是针对传统的透明质酸的来源、成本、生物相容性、理化性能 等方面的不足而提出的一种新型含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法。该 方法的特点是通过培养动物或人的滑膜细胞、提取滑膜细胞分泌的透明质酸，经 过超滤后浓縮，制备成具有更好的润滑功能、生物理化性能、生物安全性能的含 有高分子透明质酸的新型生物滑液。
实现本发明目的的技术方案是这种含有高分子透明质酸的生物滑液的制备 方法是首先培养动物或人的能够产生透明质酸的滑膜细胞，然后从培养液中提取 滑膜细胞分泌的高分子透明质酸，并将提取了高分子透明质酸后的培养液经过超 滤后浓縮得沉集物，将提取的高分子透明质酸与所得沉集物按药用量溶解于生理 盐水中即制得含有高分子透明质酸的生物滑液。
该方法包括如下具体步骤
(1)培养动物或人的能够产生透明质酸的滑膜细胞取需要量的滑膜组织， 用组织块法培养滑膜细胞，然后用单细胞克隆法对滑膜细胞进行分型，得单细胞 群体悬液；
(2) 微载体培养将单细胞群体悬液接种入装有微载体的容器中培养；
(3) 滑膜细胞微载体培养上清中透明质酸的提取将TGF- e 、 TNF- a 、 EGF、 rhEGF或者HGF加入培养基，刺激后换液，留取培养上清液，并对培养上清液进 行离心，收集离心后的上清液，取需要量的上清液，经高效液相色谱提取分子量 大于100万的大分子透明质酸；
(4)对提取了大分子透明质酸后的滑膜细胞微载体培养上清的处理对提 取后的上清液进行充分离心、沉集处理，收集沉集样品，然后将收集的沉集样品 超滤浓縮；
(5)按药用量将提取的大分子透明质酸和超滤浓縮的沉集样品溶解于生理 盐水中，低温保存，制得含有高分子透明质酸的生物滑液。
其中所用动物或人的滑膜组织为兔、羊、小鼠、小型猪或人的关节的滑膜组织。
由上述技术方案可知，本发明提供的含有高分子透明质酸的生物滑液的制备 方法是通过细胞培养的方法提取透明质酸的新方法，其的优点是
1. 利用高分子透明质酸的镇痛、保护软骨细胞、促进滑膜合成透明质 酸、抑制出血与纤维蛋白沉着等作用，可有效的保护关节紊乱病中的受损的 滑膜并改善滑液的分泌。
2. 本发明制备的生物滑液组合将保护滑膜、修复关节滑膜与改善滑液 的分泌结合在一起，是一种理想的生物滑液组合，可以用于将来制备成非常 具有开发和应用前景的生物滑液。
3. 本发明制备的生物滑液具有更好的关节润滑功能、生物理化性能、 流变学性能、生物安全性能。
4. 本发明方法中的高分子HA经过高效液相色谱提取，通过离心、沉集 后超滤保证了提取的HA的纯度。
5. 将本发明中的细胞培养法生产HA与动物组织提取法生产HA，及细菌 发酵法提取法生产HA进行比较，比较结论分别见下列两表
动物组织提取法和细胞培养法生产HA的比较
项目提取法细胞培养法
在原料中与蛋白质和其他粘多糖形易于分离纯化，纯度高，生
存在状态成复合体，分离纯化复杂物相容性，理化性能好。
取决与动物组织原料，基本无法控可通过细胞培养的精确的
制， 一般为(0.1 2.5) X104进行控制， 一般为1X107
品质与产量取决与动物组织原料的品质与数量品质控制精确，产量无限制
成本高低细菌发酵法和细胞培养法生产HA的比较项目发酵法细胞培养法
在发酵液中游离存在，纯度难易易于分离纯化，纯度高，生
存在状态保证物相容性，理化性能好。
可通过发酵培养参数进行调控，可通过细胞培养的精确的
处*一般为(1.0~4.0) X106进行控制， 一般为ixio7
品质与产量原料来源简单，成本较高品质控制精确，产量无限制
成本较高低
图1为乳兔细胞培养后提取的HA图。 图2为正常人的滑膜培养后高效液相色谱提取的HA图。 图中纵坐标表示信号大小，横坐标表示时间。
具体实施例方式
因细胞培养在具体操作中会涉及到较多数据条件，本发明无法一一列举， 下面实施例仅用于对本发明的具体操作步骤进行详细说明。
实施例l:
一、乳兔关节滑膜细胞的分离、培养、鉴定
1、 取出生24小时乳兔颞下颌关节关节盘双板区处的滑膜组织，组织块法培养。
2、 单细胞克隆法对滑膜细胞进行分型。 (1)单细胞克隆
收集适应性培养基培养滑膜细胞至半汇合状态，吸出所有培养液离心,直径 0. 22um滤孔的滤膜过滤。取一瓶处于对数生长期的细胞常规消化、离心、计数。 细胞稀释成每100uL约含50个细胞，打匀，点种。在倒置显微镜下观察96孔 板，将只有单个细胞的序号记录下来，然后仅给单个细胞孔加培养液 150~200uL，置C02培养箱培养。培养86 96小时后进行观察。挑选生长良好的 单细胞克隆孔，先吸除旧培养液，用平衡盐溶液Hanks洗1 2次，用需要量胰蛋 白酶消化。置于倒置显微镜下观察，当细胞离开底物悬浮后， 一并吸入管中，移
入另一瓶中，再补加需要量克隆培养液，置C02温箱中继续培养、增量，使之形 成新的细胞群体。
(2)滑膜细胞的鉴定 光镜观察常规HE染色,显微镜下观察细胞形态，倒置显微镜下观察细胞的 形态及生长状况。
细胞免疫化学1 : 100的鼠抗人Vimentin单克隆抗体、鼠抗人CDe8单克隆 抗体免疫反应，显微镜下观察细胞形态。
透射电镜观察细胞2.5%戊二醛前固定，1.0%四氧化锇后固定，梯度脱水， 环氧树脂包埋,超薄切片，乙酸双氧铀和枸橼酸铅染，40kV透射电镜观察。
流式细胞仪检测细胞经FACS缓冲液重悬，离心，去上清，分别与鼠抗人 Fibronectin单克隆抗体、鼠抗人CD14单克隆抗体及对应的同型对照IgG(阴性 对照)，于4° C孵育45min，洗涤细胞，对应加入FITC标记的羊抗鼠IgG， 4° C 避光条件下孵育30min，洗涤细胞，加入2%多聚甲醛固定，流式细胞仪检测。
(3)于微载体中培养的滑膜细胞分泌的生物滑液中含有的HA的含量与牙 周膜细胞分泌的滑液中HA的含量的比较-
由于牙周膜细胞为典型的成纤维细胞，而滑膜细胞为成纤维样细胞，故采用 放射免疫试剂法通过试剂盒检测将两者进行比较。
结果为于微载体中培养的滑膜细胞分泌的生物滑液的上清液中可以测得 HA的含量为3.9~7.7mg/ml
提取培养的牙周膜细胞分泌的滑液的上清液中可以测得HA的含量为 0.7~1.5mg/ml
通过与典型的成纤维细胞的比较后，能够证明培养的滑膜细胞分泌HA的功 能较强。
二、微载体培养
将100ml浓度为2X 107L的细胞悬液，接种入含500mg微载体的搅拌培养瓶 中间歇搅拌培养8h后持续搅拌培养。微载体培养细胞l、 5、 7、 9天生长形态观 察、摄影及计数，每隔ld取样以结晶紫法计数细胞密度绘制生长曲线。将lng/ml 的TGF-e加入培养基。微载体培养细胞扫描电镜观察，于培养7d在均匀的状态
下取细胞培养样品，扫描电子显微镜观察细胞生长情况并摄影。
三、 滑膜细胞微载体培养上清中透明质酸(HA)的提取
TGF-e刺激4天后换液，留取培养上清，1000g， 4°C离心10~30分钟，取25 ii L上清样品采用放射免疫抗原竞争法检测培养HA含量。取10mL上清样品经高 效液相色谱提取分子量大于100万的大分子HA。所提HA见附图1，图1中纵坐 标为用示差折光标测器测得的信号大小，横坐标表示时间，图中显示出峰时间为 5.868分钟。
四、 对提取了大分子透明质酸后的滑膜细胞微载体培养上清的处理
将10mL上清样品首先在密度1. 6g/cn^的氯化铯溶液中220, 000g离心10~54h, 沉集样品在密度1. 45g/cm3的氯化铯溶液中220, 000-420， 000g离心4 48 h，相 同条件下重复一次。沉集样品收集后用Amicon PM-10膜超滤浓縮作为润滑素。
五、 将从10mL上清中提取的大分子HA和经超滤浓縮后的沉集样品溶解于生 理盐水中，加生理盐水至总体积10mL，过滤除菌后-20。C低温保存。多次提取的 大分子HA和润滑素混合液经简便超滤器超滤后浓縮50倍，-20T低温保存。 实施例2:
一、人颞下颌关节滑膜细胞的分离、培养、鉴定
1、 取人一侧颞下颌关节关节盘双板区处的滑膜组织，组织块法培养。
2、 单细胞克隆法对滑膜细胞进行分型。
(1) 单细胞克隆
收集适应性培养基培养滑膜细胞至半汇合状态，吸出所有培养液离心，直径 0. 22um滤孔的滤膜过滤。取一瓶处于对数生长期的细胞常规消化、离心、计数。 细胞稀释成每100liL含45~50个细胞，打匀，点种。在倒置显微镜下观察96 孔板，将只有单个细胞的序号记录下来，然后仅给单个细胞孔加培养液 150~200uL，置C02培养箱培养。培养86 96小时后进行观察。挑选生长良好的 单细胞克隆孔，先吸除旧培养液，用Hanks洗1 2次，用少许胰蛋白酶消化。置 于倒置显微镜下观察，当细胞离开底物悬浮后， 一并吸入管中，移入另瓶中，再 补加一定量克隆培养液，置C02温箱中继续培养、增量，使之形成新的细胞群体。
(2) 滑膜细胞的鉴定
光镜观察常规HE染色，显微镜下观察细胞形态，倒置显微镜下观察细胞的
形态及生长状况。
细胞免疫化学1 : 100的鼠抗人Vimentin单克隆抗体、鼠抗人CD68单克隆 抗体免疫反应，显微镜下观察细胞形态。
透射电镜观察细胞2.5%戊二醛前固定，1.0%四氧化锇后固定，梯度脱水， 环氧树脂包埋,超薄切片，乙酸双氧铀和枸橼酸铅染，40kV透射电镜观察。
流式细胞仪检测细胞经FACS缓冲液重悬，离心，去上清，分别与鼠抗人 Fibronectin单克隆抗体、鼠抗人CD14单克隆抗体及对应的同型对照IgG(阴性 对照)，于4° C孵育45min，洗搽细胞，对应加入FITC标记的羊抗鼠IgG， 4° C 避光条件下孵育30mim洗涤细胞，加入2%多聚甲醛固定，流式细胞仪检测。
(3)于微载体中培养的滑膜细胞分泌的生物滑液中含有的HA的含量与牙 周膜细胞分泌的滑液中HA的含量的比较
由于牙周膜细胞为典型的成纤维细胞，而滑膜细胞为成纤维样细胞，故采用 放射免疫试剂法通过试剂盒检测将两者进行比较。
结果为于微载体中培养的滑膜细胞分泌的生物滑液的上清液中可以测得 HA的含量为1.(Tl.9ug/ml。
提取培养的牙周膜细胞分泌的滑液的上清液中可以测得HA的含量为 0.7—1.5 ug/ml
通过与典型的成纤维细胞的比较后，能够证明培养的滑膜细胞分泌HA的功 能较强。
二、 微载体培养
将100ml浓度为4X107L的细胞悬液，接种入含500mg微载体的搅拌培养瓶 中间歇搅拌培养12h后持续搅拌培养。微载体培养细胞l、 5、 7、 9天生长形态 观察、摄影及计数，每隔ld取样以结晶紫法计数细胞密度绘制生长曲线。将 10~50ng/ml的TNF-a (也可用EGF、 rhEGF或者HGF)加入培养基。微载体培 养细胞扫描电镜观察，于培养7d在均匀的状态下取细胞培养样品，扫描电子显 微镜观察细胞生长情况并摄影。
三、 滑膜细胞微载体培养上清中透明质酸(HA)的提取
TNF-a刺激7天后换液，留取培养上清，1000g， 4°C离心10-30分钟，取25 U L上清样品釆用放射免疫抗原竞争法检测培养HA含量。取10mL上清样品经高 效液相色谱提取分子量大于100万的大分子HA,所提HA见附图2，图2中纵坐 标为用示差折光标测器测得的信号大小，横坐标表示时间，图中显示出峰时间为 5.875分钟。
四、 对提取了大分子透明质酸后的滑膜细胞微载体培养上清的处理
将lOmL上清样品首先在密度1. 6g/cm3的氯化铯溶液中220, 000~420， 000g离 心4~48 h,沉集样品在密度1.45g/cn)3的氯化铯溶液中220， 000g离心48 h，相 同条件下重复一次。沉集样品收集后用Amicon PM-10膜超滤浓縮作为润滑素。
五、 将从10mL上清中提取的大分子HA和经超滤浓縮后的沉集样品溶解于生 理盐水中，加生理盐水至总体积lOmL，过滤除菌后-2(TC低温保存。
实施例3:
一、人膝关节滑膜细胞的分离、培养、鉴定
1、 取人膝关节关节盘双板区处的滑膜组织，组织块法培养。
2、 单细胞克隆法对滑膜细胞进行分型。
(1) 单细胞克隆
收集适应性培养基培养滑膜细胞至半汇合状态，吸出所有培养液离心,直径 0.22um滤孔的滤膜过滤。取一瓶处于对数生长期的细胞常规消化、离心、计数。 细胞稀释成每100uL约含45 55个细胞，打匀，点种。在倒置显微镜下观察96 孔板，将只有单个细胞的序号记录下来，然后仅给单个细胞孔加培养液 150~200uL，置C02培养箱培养。培养86 96小时后进行观察。挑选生长良好的 单细胞克隆孔，先吸除旧培养液，用平衡盐溶液Hanks洗1 2次，用需要量的胰 蛋白酶消化。置于倒置显微镜下观察，当细胞离开底物悬浮后， 一并吸入管中，
移入另一瓶中，再补加需要量克隆培养液，置C02温箱中继续培养、增量，使之
形成新的细胞群体。
(2) 滑膜细胞的鉴定
光镜观察常规HE染色，显微镜下观察细胞形态，倒置显微镜下观察细胞的 形态及生长状况。
细胞免疫化学1 : 100的鼠抗人Vimentin单克隆抗体、鼠抗人CD68单克隆 抗体免疫反应，显微镜下观察细胞形态。
透射电镜观察细胞2.5%戊二醛前固定，1.0%四氧化锇后固定，梯度脱水， 环氧树脂包埋,超薄切片，乙酸双氧铀和枸橼酸铅染，40kV透射电镜观察。
流式细胞仪检测细胞经FACS缓冲液重悬，离心，去上清，分别与鼠抗羊 Fibronectin单克隆抗体、鼠抗羊CD14单克隆抗体及对应的同型对照IgG(阴性 对照)，于4° C孵育45min，洗涤细胞，对应加入FITC标记的兔抗鼠IgG， 4° C 避光条件下孵育30min，洗涤细胞，加入2%多聚甲醛固定，流式细胞仪检测。
提取培养的牙周膜细胞分泌的滑液的上清液中可以测得HA的含量为 0.7~1.5ii g/ml
通过与典型的成纤维细胞的比较后，能够证明培养的滑膜细胞分泌HA的功 能较强。
二、 微载体培养
将100ml浓度为2~5X 107L的细胞悬液，接种入含500mg微载体的搅拌培养 瓶中间歇搅拌培养12h后持续搅拌培养。微载体培养细胞l、 5、 7、 9天生长形 态观察、摄影及计数，每隔ld取样以结晶紫法计数细胞密度绘制生长曲线。 TNF-a (10 50ng/ml)加入培养基。微载体培养细胞扫描电镜观察，于培养7d 在均匀的状态下取细胞培养样品，扫描电子显微镜观察细胞生长情况并摄影。
三、 滑膜细胞微载体培养上清中透明质酸(HA)的提取
TNF-a剌激4天后换液，留取培养上清，1000g, 4°C离心10~30分钟，取25 n L上清样品采用放射免疫抗原竞争法检测培养HA含量。取lOmL上清样品经高 效液相色谱提取分子量大于100万的大分子HA，所提HA见附图。
四、 对提取了大分子透明质酸后的滑膜细胞微载体培养上清的处理 离心后的10mL上清样品首先在密度1. 6g/cm3的氯化铯溶液中220, OOOg离心
54h，沉集样品在密度1. 45g/ ci^的氯化铯溶液中220， 000~420， OOOg离心4~48 h， 相同条件下重复一次。沉集样品收集后用AmiconPM-10膜超滤浓縮作为润滑素。
五、 将从10mL上清中提取的大分子HA和经超滤浓縮后的沉集样品溶解于生 理盐水中，加生理盐水至总体积10mL，过滤除菌后-2(TC低温保存。
权利要求
1、一种含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法，其特征在于首先培养动物或人的能够产生透明质酸的滑膜细胞，然后从培养液中提取滑膜细胞分泌的高分子透明质酸，并将提取了高分子透明质酸后的培养液经过超滤后浓缩得沉集物，将提取的高分子透明质酸与所得沉集物按药用量溶解于生理盐水中即制得含有高分子透明质酸的生物滑液。
2、 根据权利要求l所述的含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法中，其特 征在于包括下列具体步骤(1) 培养动物或人的能够产生透明质酸的滑膜细胞取需要量的滑膜组织， 用组织块法培养滑膜细胞，然后用单细胞克隆法对滑膜细胞进行分型，得单细胞 群体悬液；(2) 微载体培养将单细胞群体悬液接种入装有微载体的容器中培养；(3) 滑膜细胞微载体培养上清中透明质酸的提取将TGF- e 、 TNF- a 、 EGF、 rhEGF或者HGF加入培养基，刺激后换液，留取培养上清液，并对培养上清液进 行离心，收集离心后的上清液，取需要量的上清液，经高效液相色谱提取分子量 大于100万的大分子透明质酸；(4) 对提取了大分子透明质酸后的滑膜细胞微载体培养上清的处理对提 取后的上清液进行充分离心、沉集处理，收集沉集样品，然后将收集的沉集样品 超滤浓縮；(5) 按药用量将提取的大分子透明质酸和超滤浓縮的沉集样品溶解于生理 盐水中，低温保存，制得含有高分子透明质酸的生物滑液。
3、 根据权利要求2所述的含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法中，其特 征在于所用动物或人的滑膜组织为兔、羊、小鼠、小型猪或人的关节的滑膜组 织。
4、 根据权利要求2所述的含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法，其特征 是用单细胞克隆法对滑膜细胞进行分型的具体步骤为收集适应性培养基培养滑膜细胞至半汇合状态，吸出所有培养液离心,用直径0.22pm滤孔的滤膜过滤；取 一瓶处于对数生长期的细胞常规消化、离心、计数；将细胞稀释成每100pL含45 55个细胞，打匀，点种；在倒置显微镜下观察96孔板，将只有单个细胞的 序号记录下来，然后仅给单个细胞孔加培养液，置C02培养箱培养；培养86~96 小时后进行观察；挑选生长良好的单细胞克隆孔，先吸除旧培养液，用平衡盐溶 液洗1 2次，用需要量胰蛋白酶消化，置于倒置显微镜下观察，当细胞离开底物 悬浮后， 一并吸入管中，移入另一瓶中，再补加需要量克隆培养液，置C02温 箱中继续培养、增量，使之形成新的细胞群体。
5、 根据权利要求2所述的含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法，其特征 是微载体培养的具体步骤为将浓度为1X107--107L的50-200ral细胞悬液，接 种入含微载体的搅拌培养瓶中间歇搅拌培养8 24小时后持续搅拌培养。
6、 根据权利要求2所述的含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法，其特征 是滑膜细胞微载体培养上清中透明质酸的提取的具体步骤为将TGF-e、 TNF-a、 EGF、 rhEGF或者HGF加入培养基，刺激24 220小时后换液，留取需要量的 培养上清，4T离心10 30分钟，取需要量上清样品，釆用放射免疫抗原竞争法 检测透明质酸含量，再取需要量上清样品经高效液相色谱提取分子量大于100 万的大分子透明质酸。
7、 根据权利要求2所述的含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法，其特征 是对提取了大分子透明质酸后的滑膜细胞微载体培养上清的处理的具体步骤为 将提取后的上清样品首先在密度1. 6g/ cn)3的氯化铯溶液中220, 000g 420, 000g 离心力下离心10 54h,再将沉集样品在密度1.45g/ cm3的氯化铯溶液中 220，000 420,000g离心力下离心4 48 h，相同条件下重复一次，然后沉集样 品收集后用Amicon PM-10膜超滤浓縮。
全文摘要
本发明提供了一种含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法，该方法首先培养动物或人的能够产生透明质酸的滑膜细胞，然后从培养液中提取滑膜细胞分泌的高分子透明质酸，并将提取了高分子透明质酸后的培养液经过超滤后浓缩得沉集物，最后将提取的高分子透明质酸与所得沉集物按药用量溶解于生理盐水中即制得含有高分子透明质酸的生物滑液。本发明由于原料的来源与细胞的培养均为生理状态下，故制备的人工滑液的生物学活性、物理性状、流变学性能均与天然滑液极为接近。
文档编号A61L31/00GK101385874SQ20081019737
公开日2009年3月18日 申请日期2008年10月23日 优先权日2008年10月23日
发明者星 龙 申请人:武汉大学